构建载体心得和体会

合集下载

建构活动教研感悟

建构活动教研感悟

建构活动教研感悟
作为一名老师,一直以来我都非常关注于如何提高学生的研究效果和兴趣。

最近,我参与了一场建构活动教研,从中获得了许多宝贵的经验和感悟。

首先,建构活动是一种高度参与性的研究方式。

通过参与建构活动,学生能够更主动地参与到研究过程中,积极思考和合作解决问题。

这种研究方式能够激发学生的研究兴趣,提高他们的研究动力。

其次,建构活动能够促进学生的创造思维和解决问题的能力。

在建构活动中,学生需要根据自己的理解和想法,自主设计和创建产品。

这要求学生具备创新和解决问题的能力,培养了他们的创造力和自信心。

此外,建构活动还能够提高学生的团队合作和沟通能力。

在建构活动中,学生需要与其他同学一起合作,共同完成任务。

这种合作过程能够培养学生的团队合作和沟通技巧,提高他们的合作意识和能力。

通过参与建构活动教研,我深刻意识到建构活动对学生研究的积极影响。

作为一名老师,我将更加积极地运用建构活动教学法,帮助学生培养创新思维、解决问题的能力,促进他们的团队合作和沟通技巧。

总之,建构活动是一种高度参与性的研究方式,能够提高学生的研究效果和兴趣。

通过参与建构活动教研,我深刻体会到了其积极的影响,将会在今后的教学中更加广泛地应用这种教学方式。

以上是我在建构活动教研中的一些感悟和经验。

希望这些对于教学实践有所启示和帮助。

建构活动教研体会

建构活动教研体会

建构活动教研体会
在这次建构活动教研中,我认为学生们从中获益良多。

以下是我对此次教研的一些体会和总结。

首先,建构活动极大地激发了学生们的创造力和想象力。

通过参与建构活动,学生们有机会将自己的想法和概念转化为实际的作品。

这不仅加强了他们在空间感知和手眼协调方面的能力,还培养了他们的创新思维和解决问题的能力。

其次,建构活动鼓励学生们进行团队合作。

在建构过程中,学生们需要相互合作、协调和交流,以确保他们共同完成一个作品。

通过与同伴合作,学生们学会了倾听和尊重他人的意见,同时也学会了如何有效地与他人合作,这对他们今后的研究和工作中都非常重要。

此外,通过参与建构活动,学生们还能够锻炼他们的问题解决能力。

在建构过程中,学生们会遇到各种挑战和难题,需要运用他们的智力和创造力来解决。

这种锻炼能够提高他们的逻辑思维能力和独立解决问题的能力。

最后,建构活动还可以激发学生们对学科的兴趣和热情。

通过亲身参与到学科实践中,学生们可以更加深入地理解和体验学科的知识和技能。

这不仅能够提高学生们对学科的研究动力,还有助于他们将学科中的理论知识与实际应用相结合。

综上所述,建构活动教研对学生们的发展起到了积极的促进作用。

它不仅培养了学生们的创造力、合作能力和问题解决能力,还激发了学生们对学科的兴趣和热情。

希望在今后的教学中能够继续推广和开展建构活动,以促进学生们的全面发展。

[Word Count: 229]。

主题教育载体建设心得体会

主题教育载体建设心得体会

主题教育载体建设心得体会近年来,中国共产党高度重视主题教育工作,将其视为推动党员干部学思践悟、锤炼忠诚担当、提升工作能力的重要途径。

在推进主题教育过程中,构建有效的主题教育载体显得尤为重要。

本文旨在总结和分享在主题教育载体建设方面的心得体会。

I. 加强组织领导确保落地实施主题教育是全面从严治党的一项重大决策部署,在开展这一工作时,各级党委和纪委领导必须承担起责任并加强对主题教育的组织领导。

制定明确的任务分工和时间节点,并派出专门机构或团队负责具体执行和监督工作的进展。

只有坚持“集中统一领导,分级负责具体实施”的原则,才能确保主题教育取得真正成效。

II. 打造多样化的宣传平台引导广泛参与为了让更多党员干部参与到主题教育中来,我们应该打造各种多样化的宣传平台,以引导广泛参与。

可以通过党内刊物、电视台、广播以及网络等方式,发布党的主题教育相关政策文件和会议精神,并邀请专家学者撰写解读文章进行深入解析。

此外,还可开展线上线下互动交流活动,为党员干部提供学习交流的机会。

III. 打破原有思维模式创新载体形式在主题教育工作中,我们应该打破过去单一模式的思维定势,积极探索创新主题教育载体的形式。

可以根据不同领域、不同级别制定特色载体方案,在企事业单位设置调研基地或实践基地,为党员干部提供实践锻炼和交流学习的平台。

同时也可以通过组织巡回报告、征集心得等方式丰富主题教育形式。

IV. 推进网络化建设提高覆盖面随着信息技术的快速发展,网络已经成为我们获取信息和进行交流学习的重要渠道之一。

在主题教育中,推进网络化建设是必不可少的步骤。

构建一个覆盖全员、便于交流的网络平台,为党员干部提供海量学习资源和交流互动的机会。

同时,我们还应该注重培养党员干部正确使用网络的技能,以防止信息泄露和不良影响。

V. 加强评估与监督确保主题教育质量有效的评估与监督是主题教育工作中必不可少的环节。

通过设立专门委员会或者给各级纪检机关赋予更多权力来监督主题教育工作的实施情况。

主题教育活动载体设计心得体会

主题教育活动载体设计心得体会

主题教育活动载体设计心得体会在参与和组织主题教育活动过程中,设计合适的活动载体至关重要。

通过合理选择和设计活动载体,可以更好地促进学习、交流和反思,提高主题教育的效果。

以下是我对主题教育活动载体设计心得体会的分享。

一. 活动形式创新1. 主题讲座与研讨会相结合在主题教育活动中,举办专题讲座是常见的方式。

但单纯的传统讲座容易导致被动接受信息,缺乏互动性和实践性。

因此,在进行讲座形式的教育活动时,可以与研讨会相结合。

在专家引导下,参与者可以分组进行讨论、交流和分享经验,从而深入探讨主题内容,并将知识应用于实践中。

2. 现场模拟演练针对某些特定主题(如危机管理、突发事件处置等),通过现场模拟演练能够更直观地感受到工作环境、压力和责任。

为此,可以邀请专业人士带领演练,设置真实情景,并利用角色扮演的方式,让参与者在模拟环境中进行应对。

通过实践操作和经验积累,参与者能够更好地掌握应对策略,提高应急处置水平。

二. 多元化媒体运用1. 制作主题教育微视频在传播信息和表达思想的过程中,视频是一种非常有效的媒介。

我们可以利用现代科技手段,制作主题教育微视频。

视频时间短小精悍,能够吸引受众注意力,突出主题要点,并融入生动有趣的形象、音乐等元素,使得学习过程更加愉快和高效。

2. 开展线上互动在主题教育活动中,线上互动成为了一种非常流行的形式。

可以通过电子邮件、社交媒体平台或在线论坛开辟专门的交流渠道,在线答疑解惑、集智共识。

除此之外还可以创建“云”学习群组或小组讨论等活动,提供多样交流方式促进成员之间的交流沟通和合作学习。

三. 注重体验式学习1. 实地考察与观摩学习实地考察和观摩学习可以帮助参与者更好地了解实际情况,并从中汲取经验和教训。

为此,可以选择对组织文化、生产流程等方面有代表性的企业、基层单位进行实地考察。

通过亲身感受和参与其中,参与者能够更加深入地理解主题内容,并将理论知识与实践相结合。

2. 情景体验式学习主题教育活动中,设立情景体验式学习环节是非常有必要的。

幼儿园构建活动感想

幼儿园构建活动感想

幼儿园构建活动感想作为幼儿园的一名老师,我深知孩子们的成长不仅仅是在教室里进行的,更需要在各种活动中去感受和体验。

因此,我非常重视幼儿园构建活动,认为这是孩子们在成长过程中需要参与和体验的一种重要活动。

我对幼儿园构建活动的意义有着深刻的理解。

首先,这种活动可以帮助孩子们培养动手能力和创造力。

在活动中,孩子们需要用手去搭建、组装一些简单的构件,这既能锻炼他们的动手能力,也能激发他们的创造力。

其次,构建活动可以培养孩子们的合作意识和团队精神。

孩子们要想完成一个构建任务,就需要相互合作,共同努力,这对于他们的合作意识和团队精神是一种很好的培养。

再次,构建活动可以帮助孩子们培养自信心和毅力。

在活动过程中,孩子们可能会遇到很多困难和挫折,但只要他们坚持下去,最终会将构建完成,这可以让他们更加了解到自己的潜力和坚强的意志。

最后,构建活动可以丰富孩子们的想象力和创造力。

在活动中,孩子们可以尽情地去发挥自己的想象力和创造力,构建出各种美丽的作品,从而激发他们对于美的追求和表达。

在参与幼儿园构建活动的过程中,我发现孩子们的成长和收获是非常显著的。

他们在活动中能够快乐地参与其中,充分地发挥自己的想象力和创造力,尽情地去探索和创造。

他们还能够培养出良好的合作意识和团队精神,互相帮助,共同努力,最终完成属于自己的作品。

而且,在构建活动中,我也能够看到孩子们变得更加自信和坚强,因为他们在不断的尝试和挑战中,不断地发现自己的优点和潜力,从而变得更加自信和坚强。

除此之外,构建活动还能够激发孩子们的学习兴趣,促进他们对于美的追求和表达,培养他们对于美的敏感和热爱。

然而,在幼儿园构建活动中,也存在一些问题和挑战。

例如,孩子们在构建活动中可能会出现一些意见分歧,导致合作困难;在搭建过程中,孩子们可能会受到一些安全隐患的影响。

因此,我们需要做好相关的准备工作和安全保障,确保孩子们在构建活动中能够安全、快乐地参与其中。

另外,构建活动还需要一些相关的教学资源和教学方法的支持,以便让孩子们在活动中能够得到更好的指导和帮助。

建构活动教研心得感受

建构活动教研心得感受

建构活动教研心得感受
在参与建构活动教研的过程中,我深深地感受到了它的重要性和价值。

建构活动教研是一种基于学生的主体性和探究性的教学方法,通过学生参与实际的建构活动,来促进他们的研究和发展。

首先,建构活动教研可以激发学生的研究兴趣和主动性。

传统的教学方法往往是老师讲,学生听,学生在被动接受知识的过程中缺乏主动性和积极性。

而通过建构活动教研,学生可以亲身参与到实际的建构活动中,主动探索和发现知识,这样的研究方式更加符合学生的天性和需求,从而激发他们的研究兴趣。

其次,建构活动教研可以培养学生的创新和解决问题的能力。

在建构活动中,学生需要运用已有的知识和技能,去解决实际的问题,这要求他们具备一定的创新思维和问题解决能力。

通过参与建构活动教研,学生可以不断锻炼和提升这些能力,培养他们的创造力和创新精神,为他们未来的发展打下坚实的基础。

此外,建构活动教研还可以促进学生的合作与交流能力。

在建构活动中,学生通常需要与他人合作完成任务,这可以帮助他们培
养合作精神和团队意识。

同时,学生还需要与他人进行交流和协商,以确保任务的完成。

通过这样的合作和交流,学生可以研究和借鉴
他人的经验和知识,提高自己的研究效果。

综上所述,建构活动教研是一种有益且有效的教学方法。

它可
以激发学生的学习兴趣和主动性,培养他们的创新和解决问题的能力,促进他们的合作与交流能力。

因此,我们应该积极推广建构活
动教研,让更多的学生受益于这种教学方法的优势。

教学构建模型心得体会

教学构建模型心得体会

作为一名教师,我在教学过程中不断探索、实践和总结,逐渐形成了一套自己的教学构建模型。

这个模型以学生为中心,注重培养学生的自主学习能力和创新能力,同时也关注教师的专业成长。

以下是我对教学构建模型的一些心得体会。

一、以学生为中心,关注学生个体差异在构建教学模型的过程中,我深刻认识到,学生是学习的主体,教师只是引导者和协助者。

因此,我在教学过程中始终以学生为中心,关注学生的个体差异,尊重学生的兴趣和需求。

1.了解学生:在授课前,我会通过各种方式了解学生的知识基础、兴趣爱好和学习风格,以便有针对性地设计教学活动。

2.激发兴趣:针对学生的兴趣爱好,设计富有创意的教学内容和方法,激发学生的学习兴趣。

3.分层教学:根据学生的个体差异,将学生分为不同层次,实施分层教学,使每个学生都能在原有基础上得到提高。

4.关注个体:在教学中,关注每个学生的表现,及时给予鼓励和表扬,帮助学生树立自信心。

二、注重自主学习,培养学生的创新能力在构建教学模型的过程中,我注重培养学生的自主学习能力,使他们成为学习的主人。

同时,通过激发学生的创新能力,为他们的未来发展奠定基础。

1.创设情境:通过创设生动、有趣的情境,激发学生的求知欲,让他们在轻松愉快的氛围中学习。

2.自主学习:引导学生学会独立思考、分析问题、解决问题,培养他们的自主学习能力。

3.合作学习:鼓励学生之间的合作与交流,让他们在互动中共同进步,培养团队协作精神。

4.创新实践:通过开展各种实践活动,激发学生的创新思维,培养他们的创新能力。

三、关注教师专业成长,提升教学质量在构建教学模型的过程中,我认识到教师的专业成长对于提高教学质量至关重要。

因此,我注重以下几个方面:1.不断学习:积极参加各类培训,不断更新自己的教育理念和教学方法。

2.反思总结:在教学过程中,认真反思自己的教学行为,总结经验教训,不断改进教学方法。

3.交流合作:与其他教师开展教学研讨,分享教学心得,共同提高教学质量。

整体建构感悟心得体会(3篇)

整体建构感悟心得体会(3篇)

第1篇在参加整体建构培训的过程中,我深刻体会到了整体建构的重要性以及它所带来的巨大影响。

整体建构不仅仅是一种教学方法,更是一种教育理念,它强调教育的全面性、系统性,旨在培养具有综合素质的人才。

以下是我对整体建构的一些感悟心得体会。

一、整体建构的内涵整体建构是指以学生为中心,关注学生的全面发展,将知识、能力、情感、价值观等方面有机融合的教育理念。

整体建构强调教育的整体性,要求教师在教学中做到以下四个方面:1. 知识建构:关注学生对知识的掌握程度,引导学生主动探索、发现和构建知识体系。

2. 能力建构:培养学生的思维、创新、实践等能力,使其具备适应社会发展所需的各种能力。

3. 情感建构:关注学生的情感需求,引导学生树立正确的人生观、价值观,培养良好的道德品质。

4. 价值观建构:培养学生的社会责任感、集体主义精神,使其成为有益于社会的人才。

二、整体建构的优势1. 提高教学质量:整体建构关注学生的全面发展,使学生在知识、能力、情感、价值观等方面得到全面提升,从而提高教学质量。

2. 培养创新人才:整体建构注重培养学生的创新思维和实践能力,使学生在面对问题时能够提出新颖的解决方案。

3. 促进学生全面发展:整体建构关注学生的个性发展,使学生在德、智、体、美等方面得到全面发展。

4. 增强教育公平:整体建构强调教育资源的均衡配置,使每个学生都能享受到优质的教育资源。

三、整体建构的实施策略1. 教师角色转变:教师应从传统的知识传授者转变为学生的引导者、合作者和参与者,关注学生的全面发展。

2. 教学内容整合:将知识、能力、情感、价值观等方面有机融合,设计具有挑战性和趣味性的教学活动。

3. 教学方法创新:采用多种教学方法,如探究式学习、合作学习、项目式学习等,激发学生的学习兴趣。

4. 评价方式改革:采用多元化的评价方式,关注学生的全面发展,鼓励学生展示自己的特长。

四、个人感悟通过参加整体建构培训,我深刻认识到整体建构的重要性。

强化载体,占领舆论阵地心得体会

强化载体,占领舆论阵地心得体会

强化载体,占领舆论阵地心得体会随着人民群众参与国家事务和社会管理的热情空前高涨,对知情权、参与权、表达权、监督权的诉求也更加强烈,互联网正好成为思想文化信息的集散地和社会舆论的放大器,网络舆情也已经成为影响社会变革的一支力量,强化载体,占领舆论阵地心得体会[专题]。

欢迎阅读本文,更多优质内容,欢迎关注。

强化载体,占领舆论阵地心得体会总书记明确提出,网信事业要发展,必须贯彻以人民为中心的发展思想。

各级党政机关和领导干部要学会通过网络走群众路线,善于运用网络了解民意、开展工作。

这是我们党对马克思主义群众观的重大创新和发展,是对宣传思想文化工作树立群众观点、坚持群众路线的新要求,是加强互联网舆论引导工作的根本遵循和行动指南。

1.深刻认识互联网发展的新形势。

当前,互联网发展已经成为势不可挡的世界潮流,全国网民已超过7亿,这股潮流不仅引发了生活方式、工作方式的巨大变革,而且对我们党的执政方式也带来了深远影响。

信息技术的快速发展使网络世界与现实世界深度交融,互联网的广泛传播力、社会影响力、舆论渗透力与日俱增,互联网已成为意识形态斗争的主战场、主阵地、最前沿。

无论是国际上发生的“ ”、西亚北非地区持续动荡,还是我国发生的香港违法占中、昆明暴恐等件,可以说都与网上意识形态和舆论引导有直接关系,都可以找到“网络推手”的影子。

特别是围绕一些重大历史事件的时间节点,意识形态领域的斗争就可能加剧,甚至会异常尖锐、异常复杂。

境内外一些别有用心的人,更是加紧利用网络炒作热点敏感问题和突发事件,扰乱人们思想、破坏社会安定。

如何尽快掌握互联网这个最大舆论战场上的主动权,使互联网成为明辨是非、讲清真相、解疑释惑、疏导情绪,以及助推改革发展、维护和谐稳定的重要阵地,是我们亟须解决的一个重大课题。

2.树立并强化互联网思维。

随着人民群众参与国家事务和社会管理的热情空前高涨,对知情权、参与权、表达权、监督权的诉求也更加强烈,互联网正好成为思想文化信息的集散地和社会舆论的放大器,网络舆情也已经成为影响社会变革的一支力量。

创新载体开展主题教育心得体会

创新载体开展主题教育心得体会

创新载体开展主题教育心得体会随着社会的发展和进步,教育也需要不断创新与改革。

在中国,推动主题教育已成为一项重要工作。

为了更好地贯彻党的中央决策部署,各级政府和教育机构积极探索创新载体来开展主题教育。

本文将从个人经验出发,分享我在创新载体开展主题教育中的心得体会。

首先,创新载体如何帮助深入实施主题教育是一个关键问题。

我们可以从以下几个方面进行思考和分析。

一、优化组织结构,提高学习效果在开展主题教育过程中,建立良好的组织结构是非常重要的。

通过创新载体,可以形成有效的工作机制和管理模式。

例如,在企事业单位可以设立专门的学习小组或工作组来研究和讨论相关问题;在学校中可以利用班级或学生社团等形式进行集中学习和交流。

这样能够使参与者按照规定时间和步骤进行学习,并及时纠正错误认识。

二、多元化活动形式,激发创新思维为了激发学习者的积极性和主动性,必须创造多样化、丰富多彩的活动形式。

例如,可以通过座谈会、讲座、研究报告等形式进行知识传递;通过实地考察、体验活动等方式加深对主题教育内容的理解和掌握。

同时,还要充分利用互联网和信息技术手段,在线学习平台、社交媒体等工具,使得学习过程更加便捷高效。

三、落实指导与监督机制,确保有效实施在推动主题教育过程中需要明确指导并建立相应的监督机制。

通过创新载体,可以更好地进行前期工作准备,如设定目标、确定任务、分配责任等。

同时,在实施过程中及时收集反馈信息,对参与者进行督促检查,并将成果汇总上报。

只有建立科学合理的指导与监督机制才能保证主题教育有效而顺利地开展。

总之,在创新载体开展主题教育中的心得体会得以总结为以下几点:一、注重统筹规划和组织管理在创新载体开展主题教育时,必须重视统筹规划和组织管理。

要有明确的目标和任务,确保各项工作的协调衔接;要建立科学有效的管理机制,以提高学习者参与度和学习效果。

二、多样化活动形式与方法手段多样化的活动形式和方法手段是创新载体的核心特点之一。

通过开设讲座、举办座谈会、进行实地考察等方式,可以使主题教育内容更贴近实际,并激发起学习者的思考和探索。

建构教研活动感想

建构教研活动感想

建构教研活动感想在过去的一段时间里,我参与了一场关于建构主义教研活动。

通过此次活动,我对建构主义理论有了更深入的了解,并且在教学实践中也获得了一些新的启发与思考。

首先,建构主义教研活动使我对于教学理论有了新的认识。

在传统的教学理论中,教师通常扮演着知识的传递者和权威。

而建构主义理论则认为学生是自己知识的建构者,教师的角色是引导者和促进者。

通过学习建构主义理论,我明白了教师应该为学生提供多元的学习资源和情境,引导学生积极参与、思辨和合作,从而促进他们的知识建构和认知发展。

这种全新的观点与传统的教学理念有着很大的不同,让我重新审视了自己在课堂教学中的角色与行为。

其次,通过建构主义教研活动,我意识到了学生的差异性与个体性。

在传统教学中,教师通常会以相同的方式对待所有学生,忽视了学生的差异性。

而建构主义理论强调学生的个体性与多样性,主张以学生为中心,关注每个学生的个体差异,根据学生的兴趣、能力和特点来设计教学,以满足他们的需要和发展。

在教学实践中,我开始更多地关注学生的学习差异,尝试采用不同的教学策略和方法来满足学生的个性化需求。

我发现,这种个性化教学不仅能够激发学生的学习兴趣,还能够提高他们的学习动机和效果。

另外,建构主义教研活动也引发了我对教学方式、教材选择和评价方式的思考与反思。

在建构主义理论中,教学方式强调学生的主体地位,强调学生在具体的情境中参与、合作和建构知识。

因此,我开始关注课堂教学中情境的设计和学生参与的程度,尝试打破传统的教学模式,创设多元的学习情境,从而增加学生的学习参与度和有效性。

在教材选择上,我也开始更多地注重多样性,追求多元的学习资源和材料,以满足学生的多元需求。

同时,建构主义理论也给了我新的评价方式启发,我意识到了传统评价方式的局限性,开始思考和尝试更多元、全面的评价方式,以更准确反映学生的实际学习水平和能力。

最后,通过建构主义教研活动,我对于教育的本质与意义有了更加深刻的认识。

主题教育载体活动心得体会

主题教育载体活动心得体会

主题教育载体活动心得体会在当前社会发展的背景下,主题教育成为了一种重要的教育形式。

作为一种倡导主题化学习和实践的方法,主题教育载体活动在学生们中间逐渐引起了广泛关注。

通过参与各种不同的载体活动,学生能够培养自己的个性特点,增加对世界和人性问题的思考,并获得更全面的发展。

本文将以我的亲身经历为例,分享我在主题教育载体活动中所获得的心得体会。

第一部分:参与才艺比赛培养个性特点才艺比赛是一项很好地展现个人才华和个性特点的活动。

通过参与其中,我深刻意识到每一个人独一无二的才能和个性魅力都值得被尊重和发现。

在这项比赛中,我选择了表演类别,并收到了舞台上最大限度地调动自己积极向上精神状态同时也需要注意并管控人际之间互助与理解方面付出过程61483许多表演技巧23333训练应采取从基本运动开始逐步提高。

通过这种方式,我逐渐发掘到了自己的潜能,在舞台上展现出不同寻常的表现力。

第二部分:参观博物馆增加对人性问题的思考主题教育载体活动中,参观博物馆是一种非常受欢迎的方式。

在博物馆之旅中,我经历了很多震撼和启发。

例如,在历史类展览中,我认识到人性固有的复杂性以及战争给人们带来的深重伤害;在科技类展览中,我感受到技术对社会进步和改变所起到的关键作用。

所有这些都引发了我的思考:我们应该如何面对人性的缺陷?我们如何利用科技促进社会稳定和富裕?第三部分:沟通交流活动促进个人全面发展主题教育载体活动也包括各种沟通交流活动。

通过与他人进行讨论、辩论或者合作项目,我意识到沟通能力在现代社会中至关重要。

当两个或更多个个体能够真正理解并尊重彼此时,创造力得以释放并产生更为积极的结果。

这些沟通交流活动也让我学会了如何与人建立良好的合作关系,尊重他人的不同观点,并在团队中贡献自己最大的力量。

结语:通过参与主题教育载体活动,我获得了很多收获和心得体会。

首先,在才艺比赛中,我的个性特点能够充分展现并受到认可。

其次,博物馆参观加深了我对人性问题和科技发展的理解。

构建载体-个人总结

构建载体-个人总结

构建载体抽质粒载体→酶切载体与外源DNA→载体的去磷酸化→连接载体与外源DNA→制备感受态细胞→连接子转化感受态细胞→重组子筛选及鉴定(PCR检测,酶切检测,测序检测)。

(二)具体步骤及相应原理A.质粒抽提1)原理细菌培养物的生长(从平板上挑取单菌落接种于含相应抗生素的培养基中,培养至对数生长后期即可)→细菌的收集(离心)及裂解(离子型或非离子型去污剂、有机溶剂、碱处理或加热处理等方法,方法取决于质粒的大小、大肠杆菌菌株及裂解后纯化质粒的方法)→质粒DNA的分离和纯化(1)碱裂解法solution I :重悬细菌solution II:其中的SDS破坏细胞壁、膜,使细胞内容物释放出来,NaOH 使DNA变性、碱基对打开,使宿主染色体DNA双链分开,而闭合环状的质粒DNA处于拓扑缠绕状态,两个环并不分开solution III:中和作用,宿主DNA由于很大,碱基还未来得及配就在冰冷的条件下与SDS、蛋白质、高分子量的RNA等缠绕在一起沉淀下来,而质粒DNA由于很小且双链未分开,能够迅速配对重新形成超螺旋,处于溶解状态。

Solution I: Tris.HCl (pH 7.5)50 mMEDTA 10 mM螯合Mg2+、Ca2+等金属离子,抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用(DNase作用时需要一定的金属离子作辅基\;EDTA的存在,有利于溶菌酶的作用,因为溶菌酶的反应要求有较低的离子强度的环境RNase A 100 µg/ml建议:检查配送的RNAse A是否完全加入到Buffer A1中,加入RNAse A后,Buffer A1/RNAse A应该存放在4度,如果存放时间过长,或者没有正确存放,请重新加入RNAse A;Solution II: NaOH 0.2 M(促使染色体DNA与质粒DNA的变性)SDS 1 %(变性沉淀蛋白质,但SDS抑制核糖核酸酶,所以在以后的提取过程中,必须把它去除干净,防止在下一步操作中(用RNase去除RNA时)受到干扰。

创新载体开展主题教育心得体会

创新载体开展主题教育心得体会

创新载体开展主题教育心得体会一、背景介绍主题教育是以习近平新时代中国特色社会主义思想为指导,贯彻落实党的十九届四中全会精神,经过深入调查研究,查摆问题,找准根源,以解决问题为重点的一次全覆盖、多层次、立体化的教育活动。

创新载体作为主题教育的重要手段和支撑保障,在推进主题教育中发挥着重要作用。

在参与创新载体开展主题教育过程中,我深刻领悟到了以下几个方面。

二、提高学习质量与效果1. 拓宽学习内容通过参与创新载体开展的主题教育,我意识到学习内容不仅仅局限于书本知识,还包括了现实生活中的各种经验和实践案例。

这样的多元化资源丰富了我们的学习内容,使我们更容易将理论应用于实际,并提高了学习效果。

2. 创造良好学习氛围在创新载体开展的主题教育中,我们可以与其他同学共同学习、讨论和交流。

这种合作学习的方式能够激发集体智慧,促进思想碰撞与碰撞,形成良好的学习氛围。

在这样的环境下,我不仅提高了自己的学习能力,还从他人身上吸取了一些宝贵经验和观点。

三、增强创新意识与实践能力1. 挖掘问题意识通过参与创新载体开展的主题教育过程,我有机会深入研究了一个具体的社会问题,并通过调查研究找出问题根源。

这个过程让我逐渐培养起挖掘问题意识的能力,使我在日常生活中更加敏锐地察觉到各种问题存在。

2. 提升解决问题的能力除了挖掘问题之外,在创新载体开展的主题教育过程中,我们还必须思考如何解决这些问题。

这要求我们具备创新思维和实践能力。

通过不断尝试和实践,我学会了多种解决问题的方法,并且在其中获得了一定的成果。

3.鼓励创新创业创新载体作为教育平台,为学生提供了一个广阔的舞台展示自己的创新和实践能力。

我在这个过程中有机会与其他同学一起合作,并通过比赛等形式将自己的成果公开展示。

这种机会不仅激发了我的创新意识,还增强了我在未来工作中的竞争力。

四、促进思想转变与价值观升华1. 推动追求真理创新载体开展主题教育让我看到了各种各样不同的思想观点和价值观。

植物基因克隆、表达载体构建及遗传转化实验心得

植物基因克隆、表达载体构建及遗传转化实验心得

植物基因克隆、表达载体构建及遗传转化实验心得
植物基因克隆、表达载体构建及遗传转化实验心得实习生:李宇皓,实习时间为2017年11月27日-12月25日。

这次实习是去农学院,具体是一个专业—园艺科学。

这是我第三次参加此类型的实习了。

前两次都是上课的形式,今天终于亲自动手操作了!还不错吧!这也算是我实践性比较强的一门课了。

实习内容包括有:《植物基因组文库构建》、《植物多样性》、《植物基因组工程与应用》、《植物抗病虫害》。

最后进行分组讨论会,向指导老师汇报成果,感觉很棒啊!从10月30号到12月13号,五天时间里,我们几个同学根据实际情况,做好各项准备,完成了毕业设计的前期任务,并在第六周开始正式着手整个课题的研究工作,可谓万事俱备只欠东风了!
实验目的和要求:1.掌握植物基因组文库构建方法2.掌握外源基因在大肠杆菌中表达的方法3.掌握基因组文库构建与高密度筛选4.熟悉多克隆抗体技术5.理解基因工程原理6.通过外源基因表达产物对花卉新品种的选育作用以及利用反义技术实现基因定位和标记
等相关问题。

实习步骤(含内容):实习一:了解植物基因组文库构建概念及意义;制定实验方案;进行文库构建;并利用文库分析植物进化史。

实习二:分离转录间隔区序列;目的基因与其他基因的分离纯化;目的基因的克隆及转化载体构建;目的基因的 PCR 扩增、测序与分析;目的基因片段的克隆;基因片段的连接;基因文库构建及质量检查。

- 1 -。

主题教育载体活动心得体会总结

主题教育载体活动心得体会总结

主题教育载体活动心得体会总结近年来,随着中国社会的不断发展和进步,主题教育在党的中央提出并被广泛实施。

作为一种重要的学习方法和思维方式,主题教育以其独特的魅力吸引了越来越多的人参与其中。

通过各类主题教育活动,参与者可以深入了解自身情况、明确自己的方向,并在实践中取得成长。

本文将从个人角度出发,结合自我参与的一些主题教育载体活动经历,对其心得体会进行总结。

I. 活动背景介绍在回顾一段时间以来所参与的主题教育载体活动之前,首先需要了解这些活动背后的背景。

近年来,在国内外形势愈加复杂多变、竞争日益激烈的环境下,中国共产党面临着领导力素质提升、组织建设完善等方面的挑战。

为此,中央号召全党深入开展主题教育活动,并特别强调要紧密团结员工群众实现“三个高度”目标。

因此,各级组织纷纷开展了丰富多样的主题教育载体活动。

II.参与经历及收获作为一名基层党员,我有幸参与了几个不同的主题教育载体活动,通过这些活动的学习和实践,我加深了对党的理论和实践的认识,并在成长中发现了自身存在的问题和不足。

首先,通过观看并参与“微课堂”系列活动,我更全面地了解到党史、新中国史以及改革开放等重要阶段所取得的伟大成就。

同时,这些活动也提醒我每个人都应该为国家和社会发展做出自己应有的贡献。

其次,在部门组织的专题讲座中,我学到了很多有关发展战略、创新管理等方面的知识,并通过与其他单位进行交流分享心得。

这使我意识到只有不断学习才能走在时代前沿,并在实际工作中运用所学知识来提升自身能力。

再次,在定期组织的主题培训班中,我们被要求制定并执行学习计划表。

通过这种方式,我进一步对自己的目标进行了明确,提供了一个有序、系统的学习路径。

这不仅使我的学习更加高效和规律,还培养了良好的时间管理能力。

III. 心得体会参与主题教育载体活动后,我深刻地认识到要取得持续发展和进步,个人需要无止境地提升自身素质和技能。

以下是我在活动中积累的心得体会:1. 坚定信念与理想信条作为一名共产党员,在现实生活中面临各种诱惑和挑战时,需要时刻保持对马列主义、毛泽东思想等基本原则的坚守,并以此为指导进行行动。

建构单元课程心得体会(2篇)

建构单元课程心得体会(2篇)

第1篇一、引言随着我国教育改革的不断深入,建构主义教育理念逐渐被广大教育工作者所认可。

建构单元课程作为一种新型教学模式,将学生视为学习的主体,强调学生的自主探索和合作学习,旨在培养学生的创新精神和实践能力。

作为一名教育工作者,我有幸参与了建构单元课程的实践与研究,以下是我对建构单元课程的一些心得体会。

二、建构单元课程的特点1. 以学生为中心建构单元课程将学生置于学习的核心地位,关注学生的个体差异,充分尊重学生的主体地位。

在课程设计中,教师不再是知识的传递者,而是引导学生主动探究、合作交流的引导者。

2. 注重学生的自主探索建构单元课程鼓励学生自主探索,通过观察、实验、调查、讨论等多种方式,让学生在实践中发现问题、分析问题、解决问题。

这种教学模式有助于培养学生的创新精神和实践能力。

3. 强调合作学习建构单元课程倡导学生之间的合作学习,通过小组讨论、共同完成任务等形式,让学生在互动中交流思想、分享经验,提高学习效果。

这种教学模式有助于培养学生的团队协作能力和沟通能力。

4. 关注学生的情感体验建构单元课程注重学生的情感体验,关注学生在学习过程中的心理需求。

通过创设情境、激发兴趣、调动情感,使学生在愉悦的氛围中学习,提高学习效率。

三、建构单元课程的实施策略1. 精心设计课程内容教师在设计建构单元课程时,应充分考虑学生的认知水平和兴趣爱好,将知识、技能、情感态度等有机结合起来。

同时,注重课程内容的趣味性、实践性和挑战性,激发学生的学习兴趣。

2. 创设情境,激发学习兴趣教师应创设与教学内容相关的情境,让学生在真实、生动、有趣的环境中学习。

通过情境教学,激发学生的学习兴趣,提高学生的学习积极性。

3. 引导学生自主探索在建构单元课程中,教师应引导学生自主探索,鼓励学生提出问题、分析问题、解决问题。

教师可以通过提问、讨论、实验等方式,引导学生积极参与学习过程。

4. 培养学生的合作能力教师应鼓励学生进行小组合作,通过共同完成任务、交流心得等形式,培养学生的团队协作能力和沟通能力。

载体建设工作汇报言

载体建设工作汇报言

载体建设工作汇报言【知识文章】载体建设工作汇报言:深度挖掘文化内涵,拓展传播渠道导语:在当前全球信息交流高度频繁的时代,载体建设成为推动文化传播和传承的重要方式之一。

为了提高创作品质并扩大传播影响,我们需要进行深度挖掘文化内涵,并拓展传播渠道。

本文将从这两个方面展开,为您分析和解读载体建设工作,并探讨其意义和挑战。

一、深度挖掘文化内涵1.文化内涵的定义和重要性文化内涵指的是文化载体所传递的思想、观念和价值观念。

它不仅仅是表面的文化符号,更包含了深层次的历史、传统和哲学思想。

深度挖掘文化内涵是提升载体价值的关键,它使得创作更具有独特性和思想深度,能够更好地引发读者的共鸣和思考。

2.如何深度挖掘文化内涵2.1 研究和理解传统文化传统文化是深度挖掘文化内涵的基础,我们可以通过研究传统文化经典著作、名人事迹和民俗传说,了解其中蕴含的思想和价值观念。

通过研读《弟子规》和《论语》,我们能够理解孔子的仁爱之道,这样的内涵可以融入到我们的创作中,丰富作品的文化内蕴。

2.2 发掘地域文化特色不同地域的文化有着独特的内涵,挖掘和展示地域文化特色是载体建设工作的重要一环。

我们可以通过深入当地的风土人情、传统节日和非物质文化遗产,挖掘地域特色,将其融入创作中。

通过介绍婺源的绿水青山和徽派建筑,我们能够让读者感受到中国江南的古韵和诗意,提升作品的艺术性和文化价值。

二、拓展传播渠道1.传统媒体的优势和不足传统媒体如报纸、电台和电视,曾经是主要的传播载体。

它们的优势在于受众广泛,能够以全方位和多维度方式传播信息。

然而,随着新媒体的兴起,传统媒体面临着传播速度慢、互动性差的问题。

2.新媒体的崛起与应用随着互联网技术的发展,新媒体如微信、微博和短视频平台成为了重要的传播工具。

它们具有传播速度快、互动性强和覆盖面广的特点。

我们可以通过建立专业的公众号、个人博客和在线平台,推广我们的作品,并与读者进行互动和交流。

可以结合新媒体和传统媒体的优势,进行跨媒体传播,扩大作品的影响力。

新载体新感观新提升--E校园学习心得体会

新载体新感观新提升--E校园学习心得体会

新载体新感观新提升--E校园学习心得体会新载体新感观新提升--E校园学习心得体会载于《交行之窗》2010年第24期(总第270期)第四版《观察与思考》新载体新感观新提升全新的载体换来时间与空间众所周知,当今是信息时代,更是"知识爆炸"和知识迅速更新换代的时代,本行也迈入了跨越式发展的快车道。

加强学习,不断提高自身的素质,是作为交行的一员适应新形势的必然要求。

而日常的工作事务又如影相随,好像永远也有做不完的工作,能静下心来认认真真地研究文件和规章制度几乎是一件奢侈的事。

总行建设的E校园恰恰为我们解决了时间和空间的问题。

网络教育这一全新的载体,让我们随时随地不受时间、空间的限制最大限度吸取新的知识。

专家研制的课件,"以人为本"深入浅出讲解要点,每个课件之后又有练习题以巩固知识。

全新的载体和学习模式,让人耳目一新,教学质量与教学效率都是传统意义的培训所无法企及的。

思想转变为从消极应对到积极探索当我看到方案上56门必学的核心课程表时,头一下子就大了,如何安排整个部门在工余时间完成这个"任务"是个很现实的难题,如果没有找到突破口,不说同事,恐怕自己也会消极应对。

"没有实践就没有发言权",必须先动手自己体验。

结果一开始我就被这新颖的方式所吸引。

之前自我感觉对本条线的规章制度已掌握,通过了国家司法考试对法律相当熟悉。

结果发现课件所展现的知识是自己视野所未能涉及到的,不禁对自己知识局限性感到汗颜,于是一发不可收拾,一度成了办公室里的"老赖",晚晚赖在电脑前舍不得离开。

几个月来在E校园的挖掘,至少达到:1.全方位的业务技能的提升。

从合规政策到反洗钱操作与管理、授权、证照、诉讼管理等,核心课程几乎涵盖了本条线相关的方方面面。

通过学习全面梳理了本条线的规章制度,章节的练习与课程的测试又可达到温故而知新的效果,为"以合规促发展"奠定了基础,提升了管理水平。

  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。

转载一篇别人的载体构建的心得与体会这两年在美帝净做克隆实验了,以前读PHD时候还觉得自己分子克隆挺牛X的,来这边之后做了各种各样的构建才知道以前是坐井观天,刚才粗粗统计了一下,在美帝一年零八个月,我构建的质粒的超过四百个,其中有很简单从PCR构建到拿WB结果的一共不到一周,也有巨难的花了四个月时间换了几次strategy才弄好激动得我半夜給老板发信的品种;有单片段酶切插入这种不用脑型的,也有九个片段逐一插入正反向还不同的。

专家不敢说,但是熟能生巧,确实积累了不少经验,现在系里从POSTDOC到PHD学生到TECH构建前很多人都跟我商量(做博后结果成了技术员的人生真悲哀啊)。

我老板甚至开玩笑说,我们将来开个公司,我专门负责构建(这话听得我想揍他大家同意不?)想了想还是把经验写下来,一来做个记录,二来博同行一笑,能让大家少绕点弯路则更好。

1. 准备工作俗话说用欲善其事,必先利其器。

我强烈建议大家在做构建之前先找好工具,这样起的效果事半功倍。

这里说个笑话,我们系有个新PHD学生,是个印度女孩,很聪明很刻苦,她所在的实验室也很好,不过除了她之外包括老板在内都是生物物理背景的,以前一个生物POSTDOC在的时候还好,这个POSTDOC一走,整个实验室对分生就只有一个粗浅的概念,这个女孩就想把一个质粒上的基因插到另一个质粒上去,要是我就先查查有没有合适的酶切位点,要没有就改造一下质粒一切搞定,这女孩她不懂啊(要命的是她老板固然牛,对这方面也不懂),自己辛辛苦苦设计了PCR引物去做PCR,P了将近5K的产物去测序,结果测的结果中间有个MUTATION,要懂行的就找找酶切位点,从原来的替换上去,然后测这下这段就行。

她呢,又送去了若干了质粒一个接一个的测,一个测序反应这边是8刀,一个质粒测下来就是40刀,她光测序就要花好几百刀(你得佩服老美实验室真有钱呀)。

这件事教育我们准备工作是多么重要。

这里推荐大家两个工具,一个都知道,PRIMER5.0。

另一个工具极强大,也不知道国内流行不,叫lasergene,包括设计引物到构建图谱一应俱全,图谱非常漂亮,而且分析酶切位点等等就超NB,如果感兴趣的话我可以給大家传一个图谱看看。

2. PCR如果没有现成的质粒可供酶切,PCR是最理想也是最方便的策略。

关于PCR具体技术坛子内帖很多,我不多说了,这里仅在构建方面谈一谈。

(1)如何设计引物?首先,看懂质粒图谱!拿大家比较熟悉的PEGFP-C1和PEGFP-N1做例子。

想用N1质粒,设计引物就得把下游引物上的中止密码子去掉,不要辛辛苦苦的一路做下来结果根本不表达融合蛋白,你就死了;C1质粒,注意frame,要是移码了,你也死了。

而且PEGFP系列有1.2.3,要弄清楚别弄窜了。

一句话,要看懂你的图谱!再多一句,PEGFP的XBA1和Bcl1位点不能用。

注意在设计酶切位点的时候要加保护碱基(大家要用T载体就当我没说)。

酶切位点设计也有一定的讲究,我的原则是,能用粘端就用粘端,实在不能用的就用只好用一些常用的平端酶,如ECORV和SNAB1之类,要是以后还有别的用处就多加点酶切位点,我曾一口气在引物上加了五个酶切位点以防以后要用到,注意计算TM的时候要减去这些不match的序列,或者选用touch-up策略。

除了酶切位点,还要注意KOZAK序列的问题,很多质粒没有提供KOZAK序列,这要在设计的时候直接在引物上加好。

GENE OVERLAP也比较有用,比方说加个FLAG片段,HIS片段,2A序列之类的,直接设计三引物OVERLAP一下就可以,省得还要再多构建一步,这些都是设计引物时候就要考虑好的。

引物长一点不要紧(我最喜欢两步法了),尤其是对GC比高的序列,有时候引物不长PCR根本不出结果,注意如果GC比较高,这个时候GENE OVERLAP就不要做了,很麻烦,克隆很难挑。

(2)没有合适的酶切位点?很简单,用同尾酶策略,比方说Bgl2和BamH1,Nhe1和spe1,Xho1和Sal1(注意连上了切不下来),实在不行就平端吧,只要不超过4KB,平端酶连接也不那么难。

(3)如何选择Taq酶?选择Taq酶也很关键,首先,高保真(High fidelity)这是必须的,我在国内常用LA KIT,可这边忑贵,只好用美国货。

常用的PFU,PHUSION和PFX。

PFX50是invitrogen公司的,一度曾卖到脱销,保真性应该是目前最高的,是普通Taq的50倍,对一般基因绝无问题(我同事4.5K PCR产物,居然一个突变都没有),但是对比较难PCR的高GC或者位点比较难做PCR 的基因(基因组为模板)就明显不行了;PFU(安捷伦)保真性没有PFX50高,但是能力很强,略贵点; phusion是NEB公司的,不贵,但是这个酶很怪异,每次用都要把annealing温度调高好几度,否则就出杂带,个人觉得NEB内切酶绝对是NO.1,但是Taq就不如Invitrogen了,如果实验室有钱,直接买invitrogen的spuermix,什么都混好了,连ddH 2O都搞定,只要直接向里加模版和引物就OK,每次我要拿漂亮的结果都用supermix。

还是那句话,读说明书。

同是高保真Taq酶,iproof 要求98度起始1min,pfx就要求95起始2min ,延伸有的是72,有的是68,有的要加1uL,有的加0.5,有的TM要低五度,有的高三度,这些必须要读说明书,读且仔细读,这是拿到任何试剂都要做的第一步。

(4)如果基因太难PCR,怎么办?首先,DMSO是好物,好到甚至FISHER的Phusion就直接写上了DMSO这项,注意3%-6%,太高Taq酶活性就不行了。

如果GC太高而且片段过长的话,DMSO也不行,GC低的不推荐。

我做个过一个2.8 k, GC比高达92%的基因PCR,一共做了两周,从保真性最强的PFX50到普通的promega 2xGO Taq都试过,什么DMSO,甘油,Biorad的iproof with high GC Buffer, NEB one Taq 2x Taq High GC(还带Enhancer的),TAKARA 的LA都试过,都不行,要么不出带,要么就是乱七八糟的带一起来,头晕脑涨的我都打算抹平策略了,后来从别的实验室弄来一个clontech的2 GC rich kit,一次搞定! 强烈推荐这个KIT,太牛了,在别家都缴械的时候,它一锤定音,不过价格也比别家都牛,10次反应就130刀,其实实验室大可以备一个,就是防备超高GC又长的片段。

不过这个KIT非高保真,送了三个克隆测序,各在不同部位有突变,于是我就从A克隆切一段接到B克隆上,又从C克隆切一段接B克隆上。

注意的问题是GC比太高测序也很困难,正常GC能测1K左右,到了High GC就能测个五六百,这时要多准备些引物。

(5)PCR产物的纯化如果带很单一,又强,直接PCR产物纯化就可以,如果有杂带,但目的带也很强,跑胶,目的带切胶回收。

回收这里也有个瓶颈,就是回收率的问题,我试过很多家的KIT,promega的GEL回收试剂盒效率和价格都很合适,推荐这个。

关于T载体,我在国内的时候是必用的,到了美帝反倒一次没用过,这边比较流行直接用PCR产物切,就是回收完了直接切上,回收后然后连接,这又回到了最开始设计,要加保护碱基。

这个策略好处就是免除了T载体这步,直接插入目的载体,存在的问题就是处于盲做状态,还要加保护碱基。

3. 酶切我的原则一向是:尽量避免PCR,能酶切的多酶切,实在没办法才去PCR。

这里强烈推荐NEB的内切酶,还记得在有一次用别家的酶切过夜,结果质粒都被切碎了(当然当时质粒浓度也不高),而用NEB的酶,切个七十二小时仍旧一切OK,尤其现在NEB还推出了HF的内切酶,没有星活性而且统一都用Buffer4,很好用,在国内我都用TAKARA的酶,基本上还可以。

注意要读说明书,选用什么buffer,多少度,用不用加BSA,这些都要仔细读。

酶切的起始量,PCR产物没甚么可说的,全都切上,如果是从质粒上切片段,要根据你片段大小,片段适中,比如说7 kb质粒,有2 KB是目的片段,这时切个3-4 ug就足够了,如果只有0.2 KB,那最好多切点,6 ug-7 ug内切酶也没问题。

4. 连接最常用的是NEB的T4和Promega的T4,都很好用,但是注意Buffer里有ATP,反复冻融ATP失活得很快,这时有两种办法,一种是象我们chair实验室,每次连接都统统朝里面加1uL ATP;另一种是我们实验室的策略,拿到buffer就分装,10 uL/管,一次性使用,哪怕就用1uL,剩下的直接扔掉。

连接最重要的注意事项:(1)载体总量;(2)载体和插入片段比例;(3)载体和插入片段质量。

我在回收之后都要测载体浓度,一般来说,载体浓度在20-100 ng/uL很好,太低的话碰撞几率低,太高的话又会产生很多非目的克隆,总量从50-100 ng就可以,太低失败几率很高,太高克隆太多,挑克隆会很麻烦,反应总体积也有讲究,体积太大载体和目的片段碰撞几率太低,而且对感受态细胞也是个挑战,通用10-15 uL,我试过25 uL没有问题,40 uL就不行了。

载体和插入片段比例一般是1:3,如果很难连接,比如说平端连接,要适当提高载体浓度,同时加大比例1:10,我试过一端平一端粘连接,4 kb片段,4KB载体,连接成功率相当高,10个克隆里8个都是阳性的,但是7 KB片段,5 KB载体的平端连接就连试两周都失败,最后换策略分两段先后克隆进去的,这也給了我很深教训,隔了一阵又做类似的实验,这回我干脆连试都没试,继续分成两段分别连进去的。

3片段连接同理,如果片段不太大,比方说小于3 K,3片段连接成功几率很高,但是如果你片段太大,就不行了,我试过4 K载体,4 K片段A,2 K片段B连接,失败四五次,最后还是绕路走了。

5. 转化这个简单遵循基本的准则就行,话说实验室原来从sigma买感受态(competent cell),后来发现还是自己做的效率高,尤其在使用XL-10细菌的时比DH5a效率要高,需要的话我可以发protocol上来。

要注意的是LB必须无菌而且没有抗生素,实验室原来有个volunteer,做一次失败一次,我就奇怪了,后来才发现他用的居然是加了KANA的LB,直接晕过去了。

还有就是氯化钙的问题。

氯化钙吸水性很强,吸水后就完蛋了,我一般把它放在干燥罐里(反正我也不知道啥名字,就那种玻璃罐,干燥用的),大家要不放心,用之前可以把氯化钙放在烘箱里烤一烤。

6. 鉴定普通实验做酶切鉴定,阳性率非常高,大多数情况下四个中起码有三个是正确的,很多时候都是百分百正确,这里推荐一种叫fast digest的酶,切个十几分钟跑胶就行了。

相关文档
最新文档