HIV抗原与抗体的检测
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HIV抗体检测
• 检测试剂 筛查试剂要求:注册批准；批批检合格； 评估优良；有效期内使用 采供血使用酶免试剂; 按要求使用快速试剂
HIV抗体检测
• 确认试剂 注册批准； 分类:WB LIA IFA
HIV抗体检测
检测要点
¾ 严格按照试剂说明书操作,不得擅自 更改 ¾ 注意防止交叉污染 ¾ 严格遵守实验操作规程
HIV-1 P24抗原检测
试剂 操作要求 结果报告和解释 ¾ 阳性须经中和实验证实 ¾ 阳性不能确诊 ¾ 阴性不能排除
谢谢！
省级卫生行政部门
每季首月20日前 报告上季检测情况
中国CDC性艾中心
HIV感染监测的检测策略
HIV感染报告疫情要求 ¾ 实验室条件 ¾ 试剂要求 ¾ 阳性判定条件
HIV-1 P24抗原检测
适用范围 ¾ 抗体不确定或窗口期的辅助诊断 ¾ 新生儿的辅助鉴别诊断 ¾ 第4代ELISA试剂阳性，WB阴性标本的 辅助诊断 ¾ 病程和疗效监测
HIV抗体检测情况的报告
艾滋病筛查实验室
每季首月5日前 报告上季检测情况 没有艾 滋病筛 查中心 实验室 的地区
艾滋病筛查中心实验室
每季首月10日前 报告上季检测情况
艾滋病确认实验室
每季首月5日前 报告上季检测情况
艾滋病确认中心实验室
每季首月15日前 报告上季检测情况
同级卫生行政部门
国家艾滋病参比实验室
ELISA方法
•
• •
间接法ELISA 竞争抑制法ELISA 夹心法ELISA 第一代 全病毒 第二代 基因工程抗原或合成肽 第三代 双抗原夹心 第四代 测抗体和抗原
每一代 HIV 试剂实验原理
每一代 HIV 试剂实验原理
第一代, 第二代
solid phase human sample conjugate
每一代 HIV 试剂实验原理
第一代 第二代 第三代
microwell HIV antigen
第四代
solid phase
Y Y
human sample conjugate
anti-human IgG enzyme human antibody mc anti-p24
ELISA方法检测影响因素
•
反应时间 • 温度 • 酶结合物的稳定性 • 加标本量
microwell HIV antigen anti-human IgG enzyme human antibody
每一代 HIV 试剂实验原理
第一代, 第二代 第三代
solid phase
microwell HIV antigen
Y
human sample conjugate
anti-human IgG enzyme human antibody
筛查试验流程
样品 筛查试剂 筛查检测 阳性反应 阴性反应
原有试剂另外一种筛查试剂 重复检测
均阳性反应 送确认实验室 进行确认
一阴一阳
均阴性反应 阴性报告
HIV抗体检测程序及流程
确认试验流程
确认试验流程
免疫印迹法(HIV/2混合型)
阴性反应
HIV-1阳性反应
不确定反应
出现HIV-2指示条带 免疫印迹法(HIV-2)
阴性报告
HIV-1阳性报告 阳性反应 阴性反应
报告HIV-2血清学阳性 不确定反应 阴性报告 必要时测核酸
每3个月随访一次,共2次,仍属可疑,则作阴性报告如随访期间出现阳性反应则报告阳性
HIV抗体确认结果的判定
¾HIV-1抗体阳性 ¾HIV-2抗体血清学阳性 ¾HIV抗体阴性 ¾HIV抗体不确定
检测结果的报告和处理
HIV抗体和抗原检测
重庆市疾病预防控制中心
HIV基因结构
HIV的蛋白质主要由三组基因编码 Gag P55 P17、P24、P15 Pol P64 P53 P31 P34 P31 Env gp160 gp120 gp41 P24 gp41抗体最具有诊断意义
艾滋病的病原学诊断方 法
• 筛查试验 阴性:出具HIV抗体阴性报告 阳性:出具HIV抗体待复查,不能出具HIV抗体阳 性报告; 同时: 填送检单; 采二次血; 标本上送; 上一级实验室复测 做好检测后咨询、保密
检测结果的报告和处理
• 确认试验 阴性:出具HIV抗体阴性确认报告 阳性:出具HIV抗体阳性确认报告 不确定：出具HIV抗体不确定确认报告，3个 月后复查 必要时HIV-1P24抗原或核酸检测 做好检测后咨询、保密
（一）HIV抗原检测方法 （二）HIV感染的血清学诊断方法
HIV抗原检测方法
•病毒分离： •逆转录酶测定 •ELISA法 •原位杂交（In Site Hybridization ） •PCR •病 毒 载 量 ： RT-PCR 、bDNA 、 NASBA
HIV感染的血清学诊断方法
• • • • • ELISA方法 凝集实验 免疫荧光法（IFA） 免疫印迹实验（Western Blot，WB） 放射免疫沉淀实验
HIV抗体检测
• 检测试剂 筛查试剂要求:注册批准；批批检合格； 评估优良；有效期内使用 采供血使用酶免试剂; 按要求使用快速试剂
HIV抗体检测
• 确认试剂 注册批准； 分类:WB LIA IFA
HIV抗体检测
检测要点
¾ 严格按照试剂说明书操作,不得擅自 更改 ¾ 注意防止交叉污染 ¾ 严格遵守实验操作规程
HIV-1 P24抗原检测
试剂 操作要求 结果报告和解释 ¾ 阳性须经中和实验证实 ¾ 阳性不能确诊 ¾ 阴性不能排除
谢谢！
省级卫生行政部门
每季首月20日前 报告上季检测情况
中国CDC性艾中心
HIV感染监测的检测策略
HIV感染报告疫情要求 ¾ 实验室条件 ¾ 试剂要求 ¾ 阳性判定条件
HIV-1 P24抗原检测
适用范围 ¾ 抗体不确定或窗口期的辅助诊断 ¾ 新生儿的辅助鉴别诊断 ¾ 第4代ELISA试剂阳性，WB阴性标本的 辅助诊断 ¾ 病程和疗效监测
HIV抗体检测情况的报告
艾滋病筛查实验室
每季首月5日前 报告上季检测情况 没有艾 滋病筛 查中心 实验室 的地区
艾滋病筛查中心实验室
每季首月10日前 报告上季检测情况
艾滋病确认实验室
每季首月5日前 报告上季检测情况
艾滋病确认中心实验室
每季首月15日前 报告上季检测情况
同级卫生行政部门
国家艾滋病参比实验室
ELISA方法
•
• •
间接法ELISA 竞争抑制法ELISA 夹心法ELISA 第一代 全病毒 第二代 基因工程抗原或合成肽 第三代 双抗原夹心 第四代 测抗体和抗原
每一代 HIV 试剂实验原理
每一代 HIV 试剂实验原理
第一代, 第二代
solid phase human sample conjugate
每一代 HIV 试剂实验原理
第一代 第二代 第三代
microwell HIV antigen
第四代
solid phase
Y Y
human sample conjugate
anti-human IgG enzyme human antibody mc anti-p24
ELISA方法检测影响因素
•
反应时间 • 温度 • 酶结合物的稳定性 • 加标本量
microwell HIV antigen anti-human IgG enzyme human antibody
每一代 HIV 试剂实验原理
第一代, 第二代 第三代
solid phase
microwell HIV antigen
Y
human sample conjugate
anti-human IgG enzyme human antibody
筛查试验流程
样品 筛查试剂 筛查检测 阳性反应 阴性反应
原有试剂另外一种筛查试剂 重复检测
均阳性反应 送确认实验室 进行确认
一阴一阳
均阴性反应 阴性报告
HIV抗体检测程序及流程
确认试验流程
确认试验流程
免疫印迹法(HIV/2混合型)
阴性反应
HIV-1阳性反应
不确定反应
出现HIV-2指示条带 免疫印迹法(HIV-2)
阴性报告
HIV-1阳性报告 阳性反应 阴性反应
报告HIV-2血清学阳性 不确定反应 阴性报告 必要时测核酸
每3个月随访一次,共2次,仍属可疑,则作阴性报告如随访期间出现阳性反应则报告阳性
HIV抗体确认结果的判定
¾HIV-1抗体阳性 ¾HIV-2抗体血清学阳性 ¾HIV抗体阴性 ¾HIV抗体不确定
检测结果的报告和处理
HIV抗体和抗原检测
重庆市疾病预防控制中心
HIV基因结构
HIV的蛋白质主要由三组基因编码 Gag P55 P17、P24、P15 Pol P64 P53 P31 P34 P31 Env gp160 gp120 gp41 P24 gp41抗体最具有诊断意义
艾滋病的病原学诊断方 法
• 筛查试验 阴性:出具HIV抗体阴性报告 阳性:出具HIV抗体待复查,不能出具HIV抗体阳 性报告; 同时: 填送检单; 采二次血; 标本上送; 上一级实验室复测 做好检测后咨询、保密
检测结果的报告和处理
• 确认试验 阴性:出具HIV抗体阴性确认报告 阳性:出具HIV抗体阳性确认报告 不确定：出具HIV抗体不确定确认报告，3个 月后复查 必要时HIV-1P24抗原或核酸检测 做好检测后咨询、保密
（一）HIV抗原检测方法 （二）HIV感染的血清学诊断方法
HIV抗原检测方法
•病毒分离： •逆转录酶测定 •ELISA法 •原位杂交（In Site Hybridization ） •PCR •病 毒 载 量 ： RT-PCR 、bDNA 、 NASBA
HIV感染的血清学诊断方法
• • • • • ELISA方法 凝集实验 免疫荧光法（IFA） 免疫印迹实验（Western Blot，WB） 放射免疫沉淀实验