美国临床肿瘤学会 美国病理学医师学院乳腺癌ER PR免疫组织化学检测指南简介

美国临床肿瘤学会/美国病理学医师学院乳腺癌ER/PR免疫组织化学检测指南简介

傅静，刘裔莎，步宏

美国临床肿瘤学会（ASCO）/美国病理学医师学院（CAP）于2010年5月发布了乳腺癌ER/PR免疫组织化学（IHC）检测指南，目的在于改善ER/PR免疫组化检测的准确性，提高对内分泌治疗效果的预测价值【1】。

雌激素受体（ER）在乳腺癌的发生、发展过程起重要作用，是乳腺癌重要的生物学标记。孕激素受体（PR）编码基因由经ER介导的雌激素调控，PR阳性表达是ER功能的体现。大量临床试验证实ER和/或PR阳性表达的乳腺癌患者能获益于内分泌治疗，显著改善预后。为筛选合适的患者进行内分泌治疗，提高内分泌治疗的有效性，也使其他患者免受内分泌治疗可能导致的副作用及不必要的经济负担，准确的ER/PR检测结果至关重要。现常规使用IHC检测ER/PR 表达状态，但该检测方法尚未实现标准化，约有20%的ER和PR免疫组化检测结果不正确（假阳性或假阴性），主要的影响原因涉及到染色前因素，阳性界值及结果判读等方面。

一、检测时机

所有原发和复发的浸润性乳腺癌需行ER和PR检测。DCIS病例由患者和临床医师讨论决定是否进行ER和PR检测。

二、染色前

与我们已较熟悉的HER2检测一样【2】，用于ER/PR检测的标本离体后应尽快固定，从离体到固定的时间不能超过1h。标本固定选择至少10倍体积的10%中性缓冲福尔马林液，固定时间6-72h。肿瘤大体检查及边界确定后，标本需每间隔5mm切开，并用纱布或滤纸将相邻组织分开保证固定液充分渗透和固定。取材时如果肿瘤明确，应同时取一小块正常乳腺组织放入包埋盒，作为肿瘤的阳性对照。如果标本来源较远，运送前将肿瘤对剖开，放入足量固定液。记录标本离体时间，开始固定时间，固定持续时间及固定类型。用于ER/PR免疫组化检作者单位：610041 成都，四川大学华西医院病理科

通信作者：步宏（Email: hongbu@)

测的未染色切片保存也不能超过6周。

三、染色过程

1.抗体选择：用于ER检测的单克隆抗体可以是：1D5，6F11，SP1，1D5+ER-2-123（混合抗体）；用于PR检测的单克隆抗体应为：1294，312，1A6。

2.对照：每一轮ER/PR免疫组化检测均需设立阳性和阴性对照。可选择已知ER和PR表达的乳腺癌细胞株或宫内膜组织，要求同时包括高、低不同表达水平的对照组织。正常乳腺上皮细胞不同程度表达ER和PR，是理想的阳性内对照。如果检测标本没有正常乳腺上皮作为内对照，病理医师要结合肿瘤细胞ER 和/或PR表达水平，组织学类型，固定及外对照染色情况来准确判读。观察时，要记录内外对照染色情况。

四、ER/PR检测结果判读标准

1.ER和PR免疫组化检测结果判读需同时包括阳性比例和染色强度的评价。观察整张切片，估计或定量肿瘤细胞着色阳性比例，可采用人工计数或图像分析进行定量。染色强度根据程度不同分为弱、中等和强三个等级。

2.ER和PR免疫组化检测结果分为阳性、阴性和无法判读。以1%为阳性界值，≥1%的肿瘤细胞核阳性着色时即判为阳性；在有理想的内外阳性对照前提下，＜1%的肿瘤细胞着色时判为阴性；标本中正常乳腺上皮细胞和肿瘤细胞均无着色时，结果无法判读。

3.不符合指南检测标准的标本不能进行评估，要考虑另选标本或蜡块重复检测。排除标准为：（1）外对照染色结果出现异常；（2）肿瘤细胞及内外阳性对照均未着色；（3）标本曾用强酸脱钙；（4）染色结果为ER(-)/PR(+)时，需排除ER 假阴性或PR假阳性可能；（5）标本从离体到开始固定时间超过1h；（6）固定时间＜6h或＞72h；（7）采用非10%中性缓冲福尔马林液固定；（8）染色方法没有经过指南要求的验证过程；（9）没有使用指南推荐的ER和PR抗体。

4.指南还建议：（1）当肿瘤组织学类型为浸润性小管癌、小叶癌和黏液癌，组织学分级为1级（Nottingham 分级）时，如果ER和PR检测结果为阴性，应在报告中指出，因为这类肿瘤几乎均为ER和PR阳性表达。（2）可结合阳性比例和染色强度对染色结果评分，评分方法可采用Allred评分或H值评分等【3,4】。

五、报告

ER和PR免疫组化检测报告需标准化，报告内容包括患者信息，染色前固定和组织处理情况，如标本离体时间，开始固定时间，固定持续时间，固定类型；染色方法确认情况，抗体及其他试剂的选择，对照组织染色情况；染色强度和阳性比例，结果解释（阳性/阴性/无法判读，评分及无法判读原因）。

六、实验室认证和质量控制

ER和PR免疫组化检测无金标准，任何染色方法使用前必须进行确认，要求以文献报道的临床试验证实可靠的染色方法为标准进行验证，阳性和阴性检测结果的一致性需分别达到90%和95%。染色方法出现改变，如更换抗体克隆号，改变抗原修复方法或检测系统时，需重新进行方法确认。

实验室内部定期进行质量控制和设备维护，对实验人员和病理医师培训及资格认证，严格控制对照组织的质量。ER和PR免疫组化检测实验室每年至少必须参加两次外部质量控制程序，正确率至少达到90%，否则视为不合格实验室，取消检测资格，直到满足质量检测标准。

七、我们的体会

1.ASCO/CAP发布乳腺癌ER/PR免疫组化检测指南，提醒我们对于ER/PR 免疫组化检测标准化和准确性的关注和重视，促进我国ER/PR检测的标准化。

2. ASCO/CAP指南强调实验室资格认证和实验室内外质量控制，实验人员和病理医师的培训和资格认证，以促进我国对于病理实验室质量的不断提高。

参考文献

【1】Hammond MEH, Hayes DF, Dowsett M, et al. American Society of Clinical/College of American Pathologists guideline recommendations for immunohistochemical testing of estrogen and progesterone receptors in breast caner. Arch Pathol Lab Med,2010,134(6):1-25.

【2】Wolff AC, Hammond ME, Schwartz JN, et al: American Society of Clinical Oncology/College of American Pathologists guideline recommendations for

human epidermal growth factor receptor 2 testing in breast cancer. Arch Pathol Lab Med,2007,131:18-43.

【3】Harvey JM, Clark GM, Osborne CK, et al: Estrogen receptor status by immunohistochemistry is superior to the ligand-binding assay for predicting response to adjuvant endocrine therapy in breast cancer. J Clin Oncol,1999,17:1474-1481.

【4】Dowsett M, Allred C, Knox J, et al: Relationship between quantitative estrogen and progesterone receptor expression and human epidermal growth factor receptor 2 (HER-2) status with recurrence in the Arimidex, Tamoxifen, Alone or in Combination trial. J Clin Oncol,2008,26:1059-1065.