生物分离工程考试每单元复习重点

1、请结合图示简述凝胶排阻色谱（分子筛）的分离原理

答：凝胶排阻色谱的分离介质（填料）具有均匀的网格结构，其分离原理是具有不同分子量的溶质分子，在流经柱床是，由于大分子难以进入凝胶内部，而从凝胶颗粒之间流出，保留时间短；而小分子溶质可以进入凝胶内部，由于凝胶多孔结构的阻滞作用，流经体积变大，保留时间延长。这样，分子量不同的溶质分子得以分离。

3、何谓亲和吸附，有何特点？

答：亲和吸附是吸附单元操作的一种，它是利用亲和吸附剂与目标物之间的特殊的化学作用实现的高效分离手段。亲和吸附剂的组成包括：惰性载体、手臂链、特异性亲和配基。

亲和吸附的特点是高效、简便、适用范围广、分离速度快、条件温和，但载体制备难度大，通用性差，成本较高。

5、比较常规聚丙稀酰胺凝胶电泳与SDS PAGE的分离原理答：常规聚丙烯酰胺凝胶电泳和SDS-PAGE均为凝胶电泳的一种。

聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质是依据其电荷（性质、荷电量）、分子形状和分子大小（分子量）差异实现分离的；

SDS-PAGE由于加入了SDS和强还原剂（DTT等），破坏了蛋白质分子的高级（二级、三级、四级）结构，并与蛋白质形成荷大量负电荷的聚合物，消除了不同蛋白质分子电荷及分子形状差异，而仅将分子量差异作为分离依据，常用于测定未知蛋白质的亚基分子量。

1. 生物产品的分离包括，，和。

2. 发酵液常用的固液分离方法有: 和等。

3. 离心设备从形式上可分为，，等型式。

4. 亲和吸附原理包括，和三步。

5. 多糖基离子交换剂包括和两大类。

6. 工业上常用的超滤装置有，，和。

7. 影响吸附的主要因素有，，，，和。

8. 离子交换树脂由，和组成。

9. 电泳用凝胶制备时，过硫酸铵的作用是；甲叉双丙烯酰胺的作用

是；TEMED的作用是； 10 影响盐析的因素有，，和；

11.根据分离机理的不同，色谱法可分为，，和。

12.盐析实验中用于关联溶质溶解度与盐浓度的Cohn方程为；当

称为Ks盐析法；当称为β盐析法。

13.过饱和溶液的形成方式有：，，，和。 14. 蛋白质分离常用的色谱法有，，和。

15. 离子交换树脂的合成方法有和两大类； 16.离子交换分离操作中常用的洗脱方法有和。

17. SDS PAGE电泳制胶时，加入十二烷基磺酸钠（SDS）的目的是消除各种待分离蛋白的和差

异，而将作为分离的依据。

18.工业上常用的起晶方法有，和。

19.高效液相色谱分离方法中，液-液色谱是以作为流动相；以作为固定相。 20. 常用的蛋白质沉析方法有，和。

4、 Removal of insolubles, Isolation, Purification, Polishing

5、离心，过滤

6、管式，套筒式，碟片式

7、吸附介质的制备，吸附，洗脱

8、葡聚糖离子交换剂，离子交换纤维素

9、板式，管式，螺旋卷式，中空纤维式 10、吸附剂的性质，吸附质的性质，温度，溶液pH值，盐浓度，吸附物浓度和吸附剂用量 11、载体，活性基团，可交换离子 12、引发剂，交联剂，增速剂 13、溶质种类，溶质浓度，pH值，温度， 14、吸附色谱，分配色谱，离子交换色

谱，凝胶色谱 15、 lgS＝β－KsI；保持体系温度、pH值不变，

仅改变溶液离子强度进行的盐析操作；保持离子强度不变，改变温度、pH值进行的盐析操作； 16、热饱和溶液冷却，蒸发溶剂，真空蒸发冷却，化学反应结晶，盐析 17、金属螯合色谱，共价色谱，离子交换色谱，疏水作用色谱 18、共聚（加聚），均聚（缩聚）

19、 pH梯度，离子强度（盐）梯度 20、电荷，分子形状，分子量 21、自然起晶法，刺激起晶法，晶种起晶法 22、液体，固定在固相载体表面的液体 23、盐析，等电点沉析，有机溶剂沉析

1、何谓超临界流体萃取，并简述其分离原理

答：超临界流体萃取是利用超临界流体具有的类似气体的扩散系数，以及类似液体的密度（溶解能力强）的特点，利用超临界流体为萃取剂进行的萃取单元操作。其特点是安全、无毒、产品分离简单，但设备投资较大。

2、何谓免疫亲和层析，简述亲和免疫层析介质的制备过程

答、免疫亲和层析是利用亲和技术和色谱分离集成产生的一种高效色谱分离技术，其分离原理是通过抗原-抗体之间特异性的相互作用，从而实现高效的分离。

层析介质的制备过程包括：抗体的制备、抗体提取、载体活化，手臂链的连接、抗体的连接等步骤。

3、简述SDS PAGE电泳测定未知蛋白分子量的方法

答：SDS-PAGE是凝胶电泳的一种，其分离原理是基于不同分子量的蛋白质（亚基）在电场中的迁移率不同，因此利用该技术测定未知蛋白质（亚基）的分子量是十分方便的，具体的方法是利用标准分子量MARK，与样品一同电泳，染色后根据标准分子MARK中已知分子量蛋白质的迁移率与其分子量的对数值作图，可得一标准曲线并拟合方程，再结合未知蛋白质的迁移率即可计算得到大致的分子量。

4、何谓等电点沉析法

答：蛋白质再等电点下的溶解度最低，根据这一性质，再溶液中加入一定比例的有机溶剂，破坏蛋白质表面的水化层和双电层，降低分子间斥力，加强了蛋白质分子间的疏水相互作用，使得蛋白质分子得以聚集成团沉淀下来。

一、填空题。（2*12）

1、萃取利用在两个互不相溶的液相中各种组分_____的不同，从而达到分离的目的。

2、液膜的膜相组成有_____________

3、超临界流体萃取的典型流程有______________。

4、细胞破碎是破坏_________和______。

5、在非机械法破碎细胞的方法中增溶法是利用__________溶解细胞壁。

6、蛋白质沉淀的屏障有______和________用盐析法来分级沉淀目标产物时进一步纯化时常用____________。蛋白质沉淀的屏障有_____和_______。

7、蛋白质的常用沉淀技术有__________；________；_______；______；______ 8、蛋白质沉淀的屏障有_____和_______ 9、阳离子交换树脂含____。（选填酸性基团或碱性基团）10、不对称膜表面为_____，起_____作用；下面是_______，起________作用。 11、表征膜性能的参数主要有______和_______。

12、吸附色谱，分配色谱，离子交换色谱，凝胶色谱和亲和色谱分别依据________，___，_______,_______物化原理进行分离的。二、选择题。（2*8）

1、反胶团是向有机溶剂中加入一定浓度（）形成的 A、水 B、盐溶液 C、有机溶液 D、表面活性剂

2、差速-区带离心中密度梯度液中最大介质密度必须()样品中粒子的最小密度。 A、小于 B、大于 C、等于 D、都可以

3、高压匀浆法适用于下列那种细胞的破碎（）