6第六章 芳酸类非甾体抗炎药物的分析
《药物分析》杭太俊第8版 第6章 芳酸类非甾体抗炎药物的分析
第六章 芳酸类非甾体抗炎药物的分析
• 2）红外分光光度法 • 阿司匹林IR特征吸
收峰
COOH OCOCH3
峰位
3300 ～ 3200
1760,1690
1610,1570, 1480,1460
1310,1230, 1180, 775
归属 νO-H (羧基) νC-O(羧酸酯和羧基) νC=C(苯环)
第六章 芳酸类非甾体抗炎药物的分析
• 2）高效液相色谱法： • 方法：供试验品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰
的保留是将相同。 • 适用于：阿司匹林、吲哚美辛、对乙酰氨基酚、布洛芬、
萘普生等药物。
第六章 芳酸类非甾体抗炎药物的分析
药物名称 阿司匹林 双水杨酯
甲芬那酸
第三节 特殊杂质及检查方法
表6-3 典型非甾体抗炎药物的主要有关物质
第六章 芳酸类非甾体抗炎药物的分析
第三节 特殊杂质及检查方法 三、 二氟尼柳中有关物质的检查
(一) 合成工艺 多种苯或联苯类中间体及副产物
F
F
NH2 +
2,4-二氟苯胺,Ⅰ
偶联 Cu
F F
2,4-二氟联苯, Ⅱ
乙酰化 (CH3CO)2O,AlCl3
F
氧化
F
COCH3 H2O2
4-(2',4'-二氟苯基)苯乙酮, Ⅲ
遇醋酸铅生成硫化铅黑色沉淀，如美洛昔康。
第六章 芳酸类非甾体抗炎药物的分析
• 7、光谱法 • 1）紫外可见光光度法： • ①最大吸收波长法：如规定双氯芬酸钠水溶液在276nm有
最大吸收；吡罗昔康的水溶液在276nm波长处有最大吸收。
• ②最大与最小吸收波长法：如布洛芬0.4%的氢氧化钠溶液， 最大吸收：265nm和273nm的波长处；最小吸收： 245nm和 271nm的波长处。
六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析习题及答案
六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析一、基本要求1．掌握：芳酸类非甾体抗炎药物的结构和性质；主要芳酸类药物的鉴别、检查和含量测定的原理与特点。
2．熟悉：主要芳酸类非甾体抗炎药物杂质的结构、危害、检查方法与含量限度。
3．了解：影响芳酸类非甾体抗炎药物稳定性的主要因素，体内样品与临床监测。
二、基本内容非甾体抗炎药(Non-steroidal Anti-inflammatory Drugs , NSAIDs)是一类不含有甾体骨架的抗炎药，是目前临床使用最多的药物种类之一。
本类药物具有不同的化学结构，但多数具有芳酸基本结构，即芳基取代羧酸结构。
根据芳基在羧酸的取代位置及芳基上的取代基的不同，芳酸类药物可分为水杨酸(邻羟基苯甲酸) 、邻氨基苯甲酸、邻氨基苯乙酸、芳基丙酸、吲哚乙酸及苯并噻嗪甲酸等六类。
尼美舒利和对乙酰氨基酚在结构上不属于芳酸类，但作为较常用的非甾体抗炎药将在本章一并介绍。
本类药物的结构特点为同时具有游离羧基和苯环，其酸性特征可作为原料药的含量测定基础，即在中性乙醇或其他水溶性有机溶剂中，用氢氧化钠滴定液直接滴定；苯环的紫外光吸收特性常被用于本类药物的鉴别、定量检查及部分制剂的含量测定。
本类药物的酯类易子水解的特性决定了其特殊杂质检查的项目与方法，如阿司匹林中游离水杨酸的检查，ChP曾采用三价铁比色法检查。
但由于在供试品溶液制备过程中阿司匹林的继续水解使检查结果不稳定。
所以ChP2010 采用1%冰醋酸甲醇溶液制备供试品溶液，以增加阿司匹林的稳定性，同时采用高效液相色谱法( HPLC) 检查，以提高检查结果的可靠性。
基于药物结构中游离羧基的酸性和芳环的紫外吸收特性，本类药物原料药的含量测定主要采用酸碱滴定法，制剂的定量检查，如溶出度(释放度) 、含量均匀度等主要采用紫外一可见分光光度法，而制剂的含量测定则采用紫外一可见分光光度法和高效液相色谱法。
本类药物的分析方法见表6-1 。
第六章芳酸类非縉体抗炎药物的分析57« 64 CHP2010收載的部分芳酸类非宙体抗炎药输的原料药的分析方法药物名称鉴别特殊杂质检査含sm定水杨酸三氯化铁反应IR 有关物质:HPLC直接酸碱滴定法：中性乙律为溶刑；ftfttft指示剂；氧氧化钠滴定»(0. Imol/L)何司匹林三■化泱反应水解反应IR 游离水杨战:HPLC 有关物质:HPLC同水杨酸取水杨醋三氯化決反应游离水杨酸:UV同水杨酸二氛尼柳三氯化铁反应UVIR 有关物质A：TLC 冇关物质B：HPI.C直接酸碱滴定法：甲柠为溶剂；酚红指示刑；氢氧化钠滴定液(0. lmol/L)甲芬那酸荧光反应顔色反应UVIK 铜:原子吸收分光光度法2,3--甲基苯胺:GC 冇关物质:HPLC直接酸碱滴定法：无水中性乙醇为溶刑；的磺肚指示剂；氢敏化钠滴定液(0. lmol/L)取氯芬酸钠UV1R炽灼后氯化物反应炽灼后钠盐反应有关物质:HPLC非水滴定法：冰酪酸为溶刑；电位滴定法；高氯战満定液(0.Imol/L)布搐芬UV1K有关物质:TLC同水杨酸■洛芬二硝基乍勝反应IR冇艾物质:TLC同水杨酸卄生UV有关物质:HPLC直接酸碱滴定法：甲醇为溶剂；册蚊指示剂；氯氯化钠滴宦液(0. lmol/L)別噪美辛魚化反应1R 有关物质:HPLC葭接酸貧滴定快：乙醉为溶刑；酚fit指示剂；氢•化钠滴定液(0. lmol/L)毗罗tr康三氯化铁反应UVIR 冇关物质:“工非水滴定法：冰醋酸为溶制；结晶紫为指示剂；高氯酸滴定液(0. Imol/L)箋烙酋康H2S反应三氯化铁反应UVIR 有关物质:HPLC氏接战貧滴定法：中性乙静为博剂；漠事祚"酚蓝为指示刑；氢買化钠滴定液(0. linol/L)三、习题与解答（一）最佳选择题1 •阿司匹林与碳酸钠试液共热后，再加稀硫酸酸化，产生的白色沉淀是A .苯酚B .乙酰水杨酸C .水杨酸D .醋酸E .水杨酰水杨酸2 .下列药物中，不能发生三氯化铁反应的是A .二氟尼柳B .阿司匹林C .吡罗昔康D .吲哚美辛E .对乙酰氨基酚3 .两步滴定法测定阿司匹林片剂的依据是A .剩余滴定法B .羧基的酸性C .酸水解定量消耗碱液D .其酯水解定量消耗碱液E .利用水解产物的酸碱性4 .芳酸类药物的酸碱滴定中，常采用中性乙醇作溶剂，所谓“中性”是指A . pH =7B .对所用指示剂显中性C .除去酸性杂质的乙醇D .对甲基橙显中性E .对甲基红显中性5 .柱分配色谱一紫外分光光度法测定阿司匹林胶囊含量时，以加有碳酸氢钠的硅藻土为固定相，用三氯甲烷洗脱的是A .阿司匹林B .水杨酸C .中性或碱性杂质D .水杨酸和阿司匹林E .酸性杂质6 .下列药物中，能采用重氮化一偶合反应进行鉴别的是A .阿司匹林B .美洛昔康C .尼美舒利D .对乙酰氨基酚E .吲哚美辛7 .直接酸碱滴定法测定双水杨酯原料含量时，若滴定过程中双水杨酯发生水解反应，对测定结果的影响是A .偏高B .偏低C .不确定D .无变化E .与所选指示剂有关8 .甲芬那酸中特殊杂质2, 3-=甲基苯胺的检查，ChP2010采用的方法是A . HPLCB . TLC C . GCD . UVE .滴定法9 .在试管中炽灼后生成的气体能使湿润的醋酸铅试纸显黑色的药物是A .阿司匹林B .美洛昔康C .尼美舒利D .对乙酰氨基酚E .吲哚美辛10.对乙酰氨基酚中有关物质的检查采用HPLC法进行，其流动相中加入四丁基氢氧化铵的作用是A ．调节pHB ．增加流动相的离子强度C.提高有关物质的保留行为 D .降低有关物质的保留行为E ．扫尾剂的作用二）配伍选择题[11 —12]A . 对氨基酚B .游离水杨酸C . 二聚体D . 氯化物E .以上均不是以下药物中存在的特殊杂质是11. 阿司匹林12. 对乙酰氨基酚[13 —16]A . 加酸水解，在酸性条件下，与亚硝酸钠、碱性B一奈酚反应，显红色B . 溶于硫酸后，与重铬酸钾反应显深蓝色，随即变为棕绿色C .与硝酸反虚显黄色D .与碳酸钠试液加热水解，再加过量稀硫酸酸化后生成白色沉淀，并发出醋酸的臭气E .加乙醇溶解后，加二硝基苯肼试液，加热至沸，放冷即产生橙色沉淀以下药物的鉴别反应是13. 甲芬那酸14. 酮洛芬15. 对乙酰氨基酚16. 阿司匹林[17 —19]A .高效液相色谱法C .原子吸收分光光度法E .薄层色谱法下列药物杂质的检查方法为B.气相色谱法D.紫外分光光度法17. 甲芬那酸中2，3-= 甲基苯胺的检查18. 二氟尼柳中有关物质A 的检查19. 萘普生中有关物质的检查[20 —22]A .用中性乙醇溶解，用氢氧化钠滴定液滴定，酚酞作指示剂B .用冰醋酸溶解，用高氯酸滴定液滴定C .高效液相色谱法测定D .紫外分光光度法测定E .在稀盐酸溶液中，用亚硝酸钠滴定液滴定，永停法指示终点下列药物的含量测定方法为20. 阿司匹林21. 吡罗昔康22. 二氟尼柳肢囊（三）多项选择题23. 能直接与三氯化铁试液反应生成有色配位化合物的药物有A .水杨酸B .阿司匹林C .吡罗昔康D ．美洛昔康E ．对乙酰氨基酚24. 下列关于直接滴定法测定阿司匹林含量的说法，正确的有A ．反应摩尔比为1：lB ．用氢氧化钠滴定液滴定C ．以pH 7 的乙醇溶液作为溶剂D ．以酚酞作为指示剂E ．滴定时应在不断振摇下稍快进行25. 两步滴定法测定阿司匹林片剂含量时，第一步消耗的氢氧化钠的作用有A ．中和游离水杨酸B ．中和阿司匹林分子中的羧基C ．中和酸性杂质D ．中和辅料中的酸E ．水解酯键26. 下列ChP2010收载的药物中，其有关物质的检查采用TLC法的有A ．二氟尼柳B ．布洛芬C ．阿司匹林D ．甲芬那酸E ．吡罗昔康(四)是非判断题27. 水杨酸可在碱性下与三氯化铁试液反应生成紫堇色配位化合物( )28. 双水杨酸中游离水杨酸的检查采用HPLC法()29. ChP2010 中，甲芬那酸的有关物质2，3-二甲基苯胺用气相色谱法检查( )30. 采用水解后剩余量滴定法测定阿司匹林含量时，需进行空白试验校正，其目的是消除空白溶剂中杂质有机酸的影响( )31 ．双氯芬酸钠的鉴别可以采用氯化物鉴别反应( )(五)简答题32. 简述阿司匹林片两步滴定法的原理与操作要点。
第六章芳酸类非甾体抗炎药物分析
OH
COOH
丙磺舒
SO2 N(C H2C H2C H3)2
6
（二）主要性质
➢ 酸性：苯甲酸、丙磺舒和甲芬那酸有游离的 羧基 ，可用NaOH直接滴定测定其含量。
➢ 具有苯环和特征官能团,有UV和IR特征吸收。 ➢ 化学性质：苯甲酸（钠）的中性溶液与FeCl3
反应可生成赭色沉淀；丙磺舒受热可分解为 Na2SO3或SO2。
10
三、其他芳酸类药物
（一）典型药物
CH3
Cl
O C COOC2H5
氯贝丁酯
CH3
CH3 CHCH2
CH3
CH COOH 布洛芬
CH3
11
（二）主要性质
氯贝丁酯：油状液体，遇光不稳定；具有酯结构， 易水解。 布洛芬：酸性较弱；可用中性乙醇溶解，用NaOH滴定。 都有苯环和特征基团,具有UV和IR特征吸收光谱
14
▪芳酸碱金属盐易溶于水，水解，溶液呈碱性，但碱性太弱， 所以其含量测定方法为双相滴定法或非水碱量法。
▪芳酸酯可水解，利用其水解得到酸和醇的性质可进行鉴别； 利用芳酸酯水解定量消耗氢氧化钠的性质，芳酸酯类药物 可用水解后剩余滴定法测定含量；芳酸酯类药物还应检查 因水解而引入的特殊杂质。
15
▪取代芳酸类药物可利用其取代基的性质进行鉴别和含量测 定。如具有酚羟基的药物可用FeCl3反应鉴别；具芳伯氨基 的药物可用重氮化—偶合反应鉴别、亚硝酸钠滴定法测定含 量。 ▪UV ▪IR ▪色谱法—制剂分析
丙磺舒
C O O F e 3
米黄色↓
20
直接：水杨酸、对氨基水杨酸钠、双水杨酯、水 杨酸二乙胺、酚磺乙胺、对乙酰氨基酚
水杨酸
ChP（2000）
第六章 芳酸类非甾体抗炎药物的分析
2、阿司匹林
水解后能产生酚羟基的药物， 水解后能产生酚羟基的药物，可用FeCl 可用FeCl3反应鉴别
阿司匹林 → 水杨酸 → pH4～6 ↵ 紫堇色
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∆
FeCl 3
COOH OCOCH3
2 →
COOH
H O △
OH
+ CH 3COOH
pH4~6 FeCl3
COO
紫堇色
O
2 Fe 3 Fe
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3、酚羟基反应
反应试剂： 反应试剂：三氯化铁 反应现象： 反应现象：蓝紫色
阿司匹林： 阿司匹林：紫堇色 双水杨酯： 双水杨酯：紫色 二氟尼柳： 二氟尼柳：深紫色 均通过产生酚羟基与三氯化铁反应显色
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阿司匹林IR图谱
-COOH -OH
-COOH
Ph-C 邻位取代Ph
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N-H O-H
N-H Ph:C=C 芳胺 酚
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八、色谱法 （一） 薄层色谱法
制剂中药物鉴别时， 制剂中药物鉴别时，为了去除辅料干扰， 为了去除辅料干扰，采用 TLC法 TLC法。
美洛昔康
可水解，且快速，用过量定量的 NaOH水解后，盐酸回滴
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七、其他非甾体抗炎药
尼美舒利
O HN O 主要性质： 主要性质： 1. 无明显酸性； 无明显酸性； 2. 具有酰胺键， 具有酰胺键，易 水解， 水解，并用于鉴别 S O 甲磺酰胺结构
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νOH 羟基（ 羟基（羧基） 羧基） νC＝O 羰基 νC＝C苯环 γ＝CH苯(邻位取代苯环) 邻位取代苯环)
第六章 芳酸类非甾体抗炎药物的分析
蓝紫色
玫瑰红色
美洛昔康
三氯甲烷溶液
淡紫红色
二、缩合反应 酮洛芬
具有二苯甲酮结构， 酸性条件下与二硝基 苯肼缩合生成橙色偶 氮化合物
三、重氮化—偶合反应
分子结构中具芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物Fra bibliotekNH2R
临用新配
注意：在鉴别时，首先要使溶液成酸性，然后才 能滴加亚硝酸钠试液及碱性β一萘酚试剂。
对乙酰氨基酚的鉴别（间接）
测得量（ g）
（四）非水溶液滴定法
吡罗昔康
具有吡啶环，显弱碱性，采用冰醋酸做溶剂， 高氯酸为滴定液测定
二、紫外分光光度法
直接紫外分光光度法
适用于二氟尼柳、美洛昔康、尼美舒利制剂、 对乙酰氨基酚及部分制剂的含量测定
二氟尼柳胶囊含量测定： 对照品法
C
x
Ax AR
CR C D W C R AX D W A R W 标示量
＊阿司匹林泡腾片：3.0% ＊阿司匹林栓剂：3.0%
2.有关物质
①未反应完全的酚类 ②水杨酸精制时温度过高产生脱羧副反应的苯酚 ③合成工艺过程中由副反应生成的醋酸苯酯、水 杨酸苯酯和乙酰水杨酸苯酯等 10年版药典：反相色谱法，采用不加校正因子的 主成分自身对照法，所有杂质峰（要扣除水杨 酸峰）之和不得大于对照液主成分峰面积 05年版药典：以“溶液澄清度”检查碳酸钠试液 中不溶物（利用杂质和药物溶解行为的差异）
◆—X、—NO2、—OH等吸电子取代基存在使酸性增强 ◆—CH3、—NH2等斥电子取代基存在使酸性减弱 ◆邻位取代酸性>间位、对位取代酸性。例：水杨酸邻 位游离羟基与羧基形成分子内氢健，酸性大为增强
（二）水解性
具有酯键：阿司匹林、双水杨酯
药物分析芳酸类非甾体抗炎药物的分析
39
优点：以供试品的稀溶液作为对照液，不 需要杂质对照品，简单、价廉，还可配成 几种限量的对照溶液；
缺点：不同物质，不同Rf值比较，准确度
差、直观性差。
40
2.有关物质B HPLC法 固定相：C18 流动相：水-甲醇-乙腈-冰醋酸 检测波长：254nm 要求：杂质峰面积和小于对照液主 峰面积
α β OH
21
直接：对氨基水杨酸钠、盐酸普鲁卡因、 苯佐卡因、盐酸普鲁卡因胺
间接：对乙酰氨基酚（扑热息痛）、醋 氨苯砜、贝诺酯
22
四、氧化反应 甲芬那酸+硫酸+重铬酸钾→深蓝色
→棕绿色 吲哚美辛+硫酸+重铬酸钾→紫色 吲哚美辛+盐酸+亚硝酸钠→绿色
→黄色
23
五、水解反应
阿司匹林 Na2CO3 水杨酸钠 醋酸钠 硫酸水杨酸（白色 ） 醋酸臭气
水杨酸苯酯
OCOCH3
COOH
OCOCH3
+
COO
乙酰水杨酸 苯酯
31
检查方法——HPLC法
固定相：ODS 流动相：A 乙腈-四氢呋喃-冰醋酸-水
B 乙腈 对照液：0.5%供试品溶液 要求：供试品溶液杂质峰面积和不得大 于对照液峰面积
32
（三）双水杨酸酯中游离水杨酸的检查 水杨酸+Fe3+→显色
5
水杨酸类
COOH
O R
R'
6
典型药物：
7
邻氨基苯甲酸类
COOH H N R
COOH H N
CH3 CH3
典型药物：甲芬那酸
8
邻氨基苯乙酸类
O R'
第六章 芳酸类非甾体抗炎药物的分析
O
HO
COOH [O] COOH
HPLC法
用1%冰醋酸甲醇 溶液制备供试品， 以防阿司匹林水 解
-O + O COOH COOH
O
2、有关物质的检查
HPLC法
醋酸苯酯
OCOCH 3
水杨酸苯酯
(CH3CO)2O
+
OCOCH3 COOH OH OCOCH3 COO
GC法
甲芬那酸
三、二氟尼柳中有关物质的检查
相同药物,不同浓度, 相互比较,主点限量 所谓物质A和物质B的检 查是采用自身对照法进 行检查的
F F F F F 水解 F OH/H + 羧化 OH F CO2,CH3ONa COCH3 氧化 H2O2 F F NH2 + Cu 偶联 F F OCOCH3 COOH OH F 乙酰化 (CH3CO)2O,AlCl3
显玫瑰红色
显淡紫色
二、缩合反应显色
二苯甲酮结构
O2N CH3 HO O 酮洛芬 + NO2 O NH NH2 NO2 H2SO4 -H2O O 橙红色 HO CH3 N N H NO2
• 三、重氮化-偶合反应 • 对乙酰氨基酚具有潜在的芳伯氨基，在酸 性条件下反应可生成对氨基酚，再与亚硝 酸钠进行重氮化反应，之后再与碱性β-萘 水解反应 酚偶合生成红色偶氮化合物。 产生芳伯
第六章 芳酸类非甾 体抗炎药物的分析
Contents
1
结构与性质
2
鉴别试验
3 4
特殊杂质与检查 含量测定
又称:解热镇痛抗炎药（NSAID），阿司 匹林类药物
芳酸类非甾体抗炎药物的分析
本类药物多数具有芳酸基本结构，即芳基取代羧 酸结构。根据芳基和羧酸的取代位置及芳基上的 取代基的不同，可分为水杨酸类、邻氨基苯甲酸、 邻氨基苯乙酸、芳基丙酸、吲哚乙酸及苯并噻嗪 甲酸等六类。
结构特点：游离羧基和苯环、酯基等。
第一节、典型芳酸类非甾体抗炎药物结构与性质
ChP2015收载的典型芳酸类非甾体抗炎药物制 剂大多采用离子抑制-反相HPLC法测定，外标法计 算含量。
一、典型药物与结构特点
COOH OH
COOH OCOCH3
Cl H N
O ONa
水杨酸
布洛芬
阿司匹林
M eO
Cl
Cl
双氯芬酸钠
OH
O CH 3 N O
NHCOCH3
吲哚美辛
OH
对乙酰氨基酚
二、主要性质 1、酸性：游离羧基pka=3～6，芳酸酸性强；脂
肪酸较弱 2、水解性：酯基、酰胺基 3、吸收光谱特性：含共轭体系 4、基团或元素特性
（二）、紫外-可见紫外分光光度法 1.直接紫外-可见紫外分光光度法 部分本类药物制剂采用此法。溶解过滤后对照法测
定。 2.柱分配－紫外分光光度法
适用：片剂、胶囊、栓剂 特点：能分离杂质，同时测定ASA、SA 固定相：碳酸氢钠；洗脱液：氯仿
λmax=280nm测定吸收度，计算含量
3、高效液相色谱法
NH-NH2
NO2
+
NO2
三、重氮化-偶合反应 对氨基水杨酸钠具芳伯氨基结构，在酸性溶液中，与亚 硝酸钠液进行重氮化反应，生成的重氮盐与碱性β-萘酚 偶合产生橙红色沉淀。
OH
Ar-NH2 NaNO2+HCl Ar-N2+Cl-
第06章芳酸类非甾体抗炎药物的分析
R COOH
COOH
－COOR
羧酸
芳酸
芳酸酯和盐
第一节 典型芳酸类非甾体抗炎药
物的结构与性质
一、典型药物与结构特点 见P199~201
水杨酸类
代表药物有：
COOH OCOCH3 COONa OH
阿斯匹林
COOH
+
H2O
OH
+
CH3COOH
４．布洛芬
无水乙醇溶液，加入高氯酸羟胺
－无水乙醇试液及N,N’-双环己基羧二
亚胺（DCC）－无水乙醇溶液，混合
后，在温水中加热２０分钟．冷却后，
加高氯酸铁－无水乙醇溶液，即 呈紫色［JP(15)的方法］
具酚羟基或水解后能产生酚羟基
的药物～
R
OH
Ar OH FeCl3 紫堇色铁配位化合物
（二）化学性质 1.酸性：芳酸具游离羧基，呈酸性，其pKa
在3～6之间，属中等强度的酸或弱酸 影响酸性强弱的因素：
1）电效应：
a.－X、－NO2、－OH等吸电子取代基存在： 能使苯环电子云密度降低，O-H受共轭 效应的影响吸引力降低，H易解离，酸性增 强；
b. －CH3、－NH2等斥电子取代基存在：
通常，制剂不再检查原料药项下的有关杂质， 但ASA在制剂过程中易水解产生SA。
因此，Ch.P（2010）规定：
采用上述类同方法测定～
1）ASA片剂限量0.3％；肠溶片限量1.5％；
2）ASA肠溶胶囊、泡腾片及栓剂中游离SA 的检查～ 采用HPLC法，其限量为1.0%、3.0%、3.0％。
药物分析06芳酸类非甾体抗炎药物的分析
OH
红色偶氮化合物 Company Logo
第二节 鉴 别
重氮化-偶合反应
OCOCH3 COO
贝诺酯
NHCOCH3
HO
+3H2O HCl
+
NH2 HCl
OH COOH
HO
NaNO2,2HCl
OH
N2+Cl-
NaOH
OH
NN
OH
橙红色
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第二节 鉴 别
(三)氧化反应
甲芬那酸＋H2SO4
OCOCH3
乙醇作用：溶解ASA；防止ASA在水溶
液中滴定过程易水解
中性乙醇：对指示剂(酚酞)而言为中性，
可消除滴定误差
➢ pKa 3~6 的药物溶于中性醇,可直接用NaOH滴定 ➢ pKa 6~9 的药物要用非水溶液滴定法 ➢若SA不合格，不宜采用本法
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烯醇式结 构:酸性
第四节 含量测定
水解
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第二节: 鉴别试验
❖ 依据药物理化性质，可展开一系列鉴别方
一、法与三氯化铁反应显色
水杨醛反 应
阿司匹林：紫堇色 双水杨酯：紫色
二氟尼柳：深紫色 均通过产生水杨酸与三氯化铁反应显色
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❖ 对乙酰胺基酚与三氯化铁 显蓝紫色
第二节: 鉴别试验
酚羟基反 应
HPLC
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第六章 芳酸类非甾体抗炎药物的分析 萘普生的有关物质检查 色谱条件
杂质限量
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第三节: 特殊杂质及其检查法 二、对乙酰氨基酚中氨基酚和对氯苯乙酰胺
HPLC
第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析
Ar-N=N-Ar
对乙酰氨基酚 贝诺酯
重氮盐 偶合 红色
贝诺酯
水解 重氮化
偶合
四、氧化反应
甲芬那酸 H2SO4
黄色(绿色荧光)(JP13)
K2Cr2O7 深蓝色→棕绿色
吲哚美辛重铬酸钾 硫酸紫色 亚硝酸钠 盐酸绿色 黄色
五、水解反应
－－酯结构水解
1.阿司匹林
2.双水杨酯
双水杨酯 NaOH
煮沸
此时中和了存在的游离酸，阿司匹林也同时 成为钠盐。
水解和测定:
在中和后的供试品溶液中，精密加氢氧化 钠滴定液(0.1mol/L)40ml，置水浴上加热 15min并时时振摇，迅速放冷置室温，用硫 酸滴定液 (0.05mol/L)滴定，结果用空白试 验校正。每 1ml氢氧化钠滴定液 (0.1mol/L) 相当于18.02 mg的C9H8O4 。
讨论：（1）为何做空白试验？如何操作？
氢氧化钠在加热时易吸收CO2，生成碳酸盐。 使测定结果偏高。 不加入样品，其余操作步骤和加样一致。
（2）滴定度如何计算？
阿司匹林：氢氧化钠=1:2
T=0.5×180.16×1/2=45.04(mg/ml)
含量% （V0 V） F T× 100% W
F：硫酸滴定液的校正因子
美洛昔康
【含量测定】取本品约0.4g，精密称定，精 密加氢氧化钠滴定液（0. lmol/L)25ml，微 温溶解，放冷，加中性乙醇（对溴麝香草 酚蓝指示液显中性）100ml ，加溴麝香草酚 蓝指示液10滴，用盐酸滴定液（0.lmol/L) 滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。 每lml氢氧化钠滴定液（0.lmol/L)相当于 35.14mg的 C14H13N3O4S2。
3. 水解后剩余滴定法－－阿司匹林
六章-芳酸类非甾体抗炎药物的分析习题及答案
六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析一、基本要求1．掌握：芳酸类非甾体抗炎药物的结构和性质；主要芳酸类药物的鉴别、检查和含量测定的原理与特点。
2．熟悉：主要芳酸类非甾体抗炎药物杂质的结构、危害、检查方法与含量限度.3．了解：影响芳酸类非甾体抗炎药物稳定性的主要因素，体内样品与临床监测。
二、基本内容非甾体抗炎药( Non—steroidal Anti—inflammatory Drugs，NSAIDs)是一类不含有甾体骨架的抗炎药,是目前临床使用最多的药物种类之一.本类药物具有不同的化学结构,但多数具有芳酸基本结构，即芳基取代羧酸结构。
根据芳基在羧酸的取代位置及芳基上的取代基的不同，芳酸类药物可分为水杨酸(邻羟基苯甲酸）、邻氨基苯甲酸、邻氨基苯乙酸、芳基丙酸、吲哚乙酸及苯并噻嗪甲酸等六类。
尼美舒利和对乙酰氨基酚在结构上不属于芳酸类，但作为较常用的非甾体抗炎药将在本章一并介绍。
本类药物的结构特点为同时具有游离羧基和苯环,其酸性特征可作为原料药的含量测定基础，即在中性乙醇或其他水溶性有机溶剂中，用氢氧化钠滴定液直接滴定；苯环的紫外光吸收特性常被用于本类药物的鉴别、定量检查及部分制剂的含量测定。
本类药物的酯类易子水解的特性决定了其特殊杂质检查的项目与方法，如阿司匹林中游离水杨酸的检查,ChP曾采用三价铁比色法检查。
但由于在供试品溶液制备过程中阿司匹林的继续水解使检查结果不稳定。
所以ChP2010采用1%冰醋酸甲醇溶液制备供试品溶液，以增加阿司匹林的稳定性，同时采用高效液相色谱法（HPLC)检查,以提高检查结果的可靠性。
基于药物结构中游离羧基的酸性和芳环的紫外吸收特性，本类药物原料药的含量测定主要采用酸碱滴定法，制剂的定量检查，如溶出度（释放度）、含量均匀度等主要采用紫外一可见分光光度法，而制剂的含量测定则采用紫外一可见分光光度法和高效液相色谱法。
本类药物的分析方法见表6-1。
三、习题与解答（一）最佳选择题1．阿司匹林与碳酸钠试液共热后，再加稀硫酸酸化，产生的白色沉淀是A．苯酚B．乙酰水杨酸C．水杨酸D．醋酸E．水杨酰水杨酸2．下列药物中，不能发生三氯化铁反应的是A．二氟尼柳B．阿司匹林C．吡罗昔康D．吲哚美辛E．对乙酰氨基酚3．两步滴定法测定阿司匹林片剂的依据是A．剩余滴定法B．羧基的酸性C．酸水解定量消耗碱液D．其酯水解定量消耗碱液E．利用水解产物的酸碱性4．芳酸类药物的酸碱滴定中,常采用中性乙醇作溶剂，所谓“中性”是指A．pH =7 B．对所用指示剂显中性C．除去酸性杂质的乙醇D．对甲基橙显中性E．对甲基红显中性5．柱分配色谱一紫外分光光度法测定阿司匹林胶囊含量时，以加有碳酸氢钠的硅藻土为固定相,用三氯甲烷洗脱的是A．阿司匹林B．水杨酸C．中性或碱性杂质D．水杨酸和阿司匹林E．酸性杂质6．下列药物中,能采用重氮化一偶合反应进行鉴别的是A．阿司匹林B．美洛昔康C．尼美舒利D．对乙酰氨基酚E．吲哚美辛7．直接酸碱滴定法测定双水杨酯原料含量时，若滴定过程中双水杨酯发生水解反应，对测定结果的影响是A．偏高B．偏低C．不确定D．无变化E．与所选指示剂有关8．甲芬那酸中特殊杂质2，3-=甲基苯胺的检查，ChP2010采用的方法是A．HPLC B．TLC C．GC D．UV E．滴定法9．在试管中炽灼后生成的气体能使湿润的醋酸铅试纸显黑色的药物是A．阿司匹林B．美洛昔康C．尼美舒利D．对乙酰氨基酚E．吲哚美辛10。
第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析
布
•
洛芬等由于羧基并未与苯环相连，结构上属于芳环取代
•
的脂肪酸，酸性较弱。多数有游离的羧基 ，可用NaOH
•
直接滴定测定其含量。
• 2ห้องสมุดไป่ตู้ 溶解性: 均为白色结晶粉末。除钠盐略溶于水，其余几乎不
•
溶或微溶。
• 3. UV和IR光谱特性：分子结构中具有苯环,有UV和IR特征吸收。
• 4. 邻羟基苯甲酸特性：与FeCl3生成紫色配合物。 • 5. 水解特性：酯键易水解。ASA、双水杨酯及其制剂应检查游
n 分离对象范围不同
ISC适用有机弱酸、弱碱、两性化合物； PIC适用更广泛些。
n ISC简便，比PIC经济，但重复性较差。
第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析
第三节 特殊杂质检查
•阿司匹林及水杨酯合成路线
第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析
一、ASA中特殊杂质的检查
1. 游离水杨酸检查 利用SA可与FeCl3呈色，用比色法检查。
1
•1610,1570 •1480,1440
•C=C
•水杨酸的红外吸收图谱
•775cm-
1
•Ar-
H
第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析
•阿司匹林的红外吸收图谱
•C=C
•1610,1570,1 480,1460cm-1
•3300~2300cm-1
•C=
O
•1760,169 0cm-1
•O-
H
•C-
•1310O,1230,
••11889997年年，，阿霍司夫匹曼林研（制a了sp高ir纯in度）乙问酰世水。杨此酸， 后并被为广自泛己用父于亲解治热好、了镇多痛年及的抗风风湿湿病治。疗(艾。兴格 林)
第6章芳酸类非甾体抗炎药的分析
2. 测定法 本品约0.2g, 精密称定, 加冰醋酸20ml使溶解, 加 结晶紫指示液1滴, 用高氯酸滴定液 (0.1mol/L)滴定至溶液显蓝绿色, 并将滴定的 结果用空白试验校正 T=33.14 mg/ml
二、紫外-可见分光光度法
其它非甾体类抗炎药
OO S
HN CH3 O
光谱特性
NO2 尼美利舒 Nimesulide
水解
H N CH3
O HO 对乙酰胺基酚 Paracetamol
二、本类药物的主要理化性质
酸性 ：pKa 3～6
pKa 4.26
pKa 3.49
pKa 2.95
水解反应：酯 →酸 + 醇（酚） 光谱特性：含共轭体系，在一定波长处有UV吸收。
(一) 直接分光光度法
原料药 对照品法
百分含量
c对
A供 A对
n
100%
ms
制剂
标示量%
AS AR
CR D W W 标示量
100%
二氟尼柳,美洛昔康,尼美舒利制剂,对乙酰氨基酚及
部分制剂;
二氟尼柳胶囊含量测定:
2. 讨论
COOH OCOCH3
NaOH
中性乙醇 20℃以下
COONa OCOCH3
H2O
①乙醇：溶解Asp，防止Asp水解;
②中性乙醇：对酚酞指示液显中性，消除滴定误差
③滴定在不断振摇下稍快进行, 防阿司匹林水解
④受阿司匹林的水解产物水杨酸及醋酸的干扰
本法特点：简单
只能用于合格原料药的测定。
(二) 剩余量滴定法
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1900～1650
1670～1500 1300～1000 1000～650
强
中等～强 强 中等～强
C=O(醛,酮,羧酸及衍生物)
C=C、C=N、N-水杨酸的红外吸收图谱
C=O
3300~2300cm-1
1660cm1
O-H
1610,1570 1480,1440
第六章 芳酸类非甾体抗炎药物的分析
COOH
R
1
目的要求
1、掌握水扬酸类、苯甲酸类药物的结构 与性质、鉴别和含量测定的基本原理与方 法。 2 、熟悉芳酸类药物杂质结构、危害、检 查方法与含量限度。 3、了解本类药物的体内分析方法。
返 2回
内容提要
一、化学结构与性质 二、鉴别试验 三、特殊杂质检查 四、含量测定
CH3COO
COO OH
OH
COO OCOCH3
酚
乙酸苯酯
水杨酸苯酯
乙酰水杨酸苯酯
36
水杨酸
——为反应中间体和水解产物 乙酰化不完全、储藏过程中水解 原理——水杨酸有游离酚羟基，可与高铁离子反应， 产生紫堇色，而阿司匹林不含游离酚羟基，无此反 应。 方法——取一定量样品和水杨酸对照品与硫酸铁铵 反应，比较紫色深浅，规定样品液颜色不得较对照 品颜色深。 方法灵敏，可检出1μg水杨酸 应用范围——原料，片剂
41
方法2——离子对HPLC法USP(29)
色谱条件：
分析柱——C18；
流动相——磷酸盐缓冲液-甲醇-氢氧化四丁基铵 流速——1.5ml/min 检测波长——254nm 内标溶液——磺胺溶液（5g/ml）
杂质对照液——间氨基酚溶液（12g/ml）
供试品溶液——对氨基水杨酸钠样品液（6.9mg/ml）
苯 甲 酸 类 水 杨 酸 类 其 他 芳 酸 类
苯甲酸（钠） 丙磺舒 羟苯乙酯 甲芬那酸 阿司匹林
COOH
水杨酸 对氨基水杨酸钠 双水杨酯 贝诺酯
氯贝丁酯 布洛芬
Cl
COOH OH
CH3 O C CH3 COOC2H5
5
一、苯甲酸类药物
（一）典型药物
COOH (Na)
COOH NH CH3 CH3
于形成分子内氢健，酸性大为增强 。
14
芳酸碱金属盐易溶于水，水解，溶液呈碱性，但碱性太弱， 所以其含量测定方法为双相滴定法或非水碱量法。 芳酸酯可水解，利用其水解得到酸和醇的性质可进行鉴别； 利用芳酸酯水解定量消耗氢氧化钠的性质，芳酸酯类药物
可用水解后剩余滴定法测定含量；芳酸酯类药物还应检查
因水解而引入的特殊杂质。
NH2
OH
乙醚相
水相
OH COONa
40
双相滴定法〔ChP（2010年版）〕
取本品，研细，称取3.0g，置50ml烧杯中 加入用熔融氯化钙脱水的乙醚25ml，用玻璃棒 搅拌1分钟，注意将乙醚溶液滤入分液漏斗中， 不溶物再用脱水的乙醚提取2次，每次25ml，乙 醚溶液滤入同一分液漏斗中，加水10ml与甲基 橙指示液1滴，振摇后，用盐酸滴定液 （0.02mol/L）滴定，并将滴定的结果用空白实 验校正，消耗盐酸滴定液（0.02mol/L）不得超 过0.3ml。
苯甲酸及其盐
甲芬那酸
COOC2H5
COOH
羟苯乙酯
OH
SO2
丙磺舒
N(CH2CH2CH3)2
6
（二）主要性质
酸性：苯甲酸、丙磺舒和甲芬那酸有游离的 羧基 ，可用NaOH直接滴定测定其含量。 具有苯环和特征官能团,有UV和IR特征吸收。 化学性质：苯甲酸（钠）的中性溶液与 FeCl3 反应可生成赭色沉淀；丙磺舒受热可分解为 Na2SO3或SO2。
药物 贝诺酯
氯贝丁酯 甲醇(0.001%) (0.01%)
羟苯乙酯 乙醇(5 g/ml) 丙磺舒 盐酸-乙醇 (20g/ml)
226; 280,288
259 225,249
460; 44,31
0.48 0.67
布洛芬
0.4%NaOH
265,273; 245,271
279, 350 265, 299 0.69-0.74, 1.150.59-0.60 1.30 1.501.56
3
共性：既有苯环，又有羧基，或另有取代基 分类：
羧基直接与苯环相连
------苯甲酸类和水杨酸类
羧基为磺酸基或通过烃氧基与苯环相连
------其他芳酸及其酯类 本类药物多为固体，有一定熔点，难溶于水，
易溶于乙醇、乙醚等有机溶剂，但其钠盐易溶 于水,含游离羧基的药物可溶于NaOH。
4
第 一 节 分 类
NH2
降解
HO O [O] O HO
OH
OH
OH O OH
NH2
氧化成联苯醌
红棕色
39
间氨基酚
——为反应中间体和降解产物 方法1——双相滴定法ChP(2010) 原理——利用杂质易溶于乙醚，用乙醚 提取，使两者分离，再用盐酸滴定，以 甲基橙为指示剂。
NH2 + HCl OH
NH2 . HCl
7
二、水杨酸类药物
（一）典型药物
COONa OH
COOH OCOCH3
COONa OH
水杨酸钠
COOH O O C OH
乙酰水杨酸
OCOCH3 COO
NH2
对氨基水杨酸钠
NHCOCH3
双水杨酯
贝诺酯
8
水杨酸类药物
F F COOH OH
二氟尼柳 diflunisal
9
（二）主要性质
酸性：基本结构为邻羟基苯甲酸，具有酸性。 水杨酸＞阿司匹林＞苯甲酸。可用酸碱滴定法测 定含量。 芳伯氨基特性 酚羟基特性：与FeCl3生成紫色配合物 水解特性：ASA、贝诺酯、双水杨酯及其制剂应 检查水杨酸；水杨酸、对氨基水杨酸钠和贝诺酯 分别检查苯酚、间氨基酚和对氨基酚
37
限量
原料：0.1%； 阿司匹林片：0.3%； 阿司匹林肠溶片：1.5%； 阿司匹林栓、肠溶胶囊、泡腾片：3.0%（HPLC法）
38
二、对氨基水杨酸钠中特殊杂质的检查
合成工艺与降解反应
NH2 NH2 NH2 - CO2 H2O OH COONa
HO [O] OH O H2N
合成
OH
12
本类药物的性质小结
溶解度： 游离酸不溶于水，溶于有机溶剂 碱金属盐溶于水，不溶于有机溶剂 酸性： pKa 3～ 6 无机强酸﹥芳酸﹥碳酸 ﹥酚 pKa 6.3 pKa 10
酸 + 碱 盐 酸 + 醇 酯
13
—X、—NO2、—OH等吸电子取代基存在使酸性增强
—CH3、—NH2等斥电子取代基存在使酸性减弱 邻位取代 >间位、对位取代，尤其是邻位取代了酚羟基，由
15
取代芳酸类药物可利用其取代基的性质进行鉴别和含量测 定。如具有酚羟基的药物可用 FeCl3 反应鉴别；具芳伯氨基 的药物可用重氮化—偶合反应鉴别、亚硝酸钠滴定法测定含 量。 UV IR 色谱法—制剂分析
16
第二节 鉴别试验
与铁盐的反应 重氮化-偶合反应 水解反应 分解产物的反应 紫外吸收光谱 红外吸收光谱
水杨酸 [鉴别] ChP（2000） （1）取本品的水溶液，加三氯化铁试液1滴，即显紫
堇色。
间接：阿司匹林、贝诺酯
阿司匹林 [鉴别] ChP（2000） （1）取本品约0.1g，加水10ml，煮沸，放冷，加三
氯化铁试液1滴，即显紫堇色。
21
与羟胺、铁盐反应（其他芳酸类）：
氯贝丁酯（布洛芬）
CH3 Cl O C COOC2H5 + NH2OH HCl + 2KOH CH3 CH3 O Cl O C CH3 CH3 Cl O C CH3 C NH O O Fe/3 C NHOK + Fe3+
计算tR内/tR杂，应为0.66
间氨基酚的含量%=10（C对/C样）（R样/R对） 限量0.25%
43
44
为何采用ion-pair HPLC法？
对氨基水杨酸钠具碱性，在水溶液中易离解；离子型化 合物或能解离的化合物用常规HPLC分离时，常会出现色谱 峰拖尾和保留值不稳定等问题，用离子对色谱则能解决以上 问题。离子对色谱是将离子对提取与色谱技术相结合，适用 于pKa在2-8的弱酸和弱碱性化合物的分离，其机理尚在研 究发展中。通常使用反相ion-pair 色谱，因离子对试剂在极 性流动相中易于溶解，并易于调整控制反离子的浓度和流动 相的pH值。
甲芬那酸 盐酸-乙醇 对氨基水 磷酸盐缓冲液 杨酸钠
七、红外吸收光谱法
典型化学键的红外特征吸收峰
峰位（cm-1） 3750～3000
峰强度 强
归属基团或化学键 O-H、N-H (胺基,羟基)
3000～2700
3300～3000 2400～2100
弱～强
弱～中等 弱～中等
C-H（烷基）、-CHO
≡CH、=CH、Ar-H C≡N
九、HPLC法
34
第三节 特殊杂质检查
一、阿司匹林中特殊杂质检查
COONa ONa CO2 COOH H+ OH
合成工艺
ONa
COOH （CH3CO）2O OCOCH3 + CH3COOH
35
COOH
溶液的澄清度
OCOCH 3
检查——酚、苯酯类杂质。
原理——根据这些杂质与阿司匹林的酸性强弱，利用 它们在碳酸钠溶液中的溶解度差异，规定一定量样品 在碳酸钠溶液中应澄清。
COOH OH
COOOFe 2 Fe 3