氨基酸含量的测定-茚三酮比色法
氨基酸含量测定和标准曲线制作(茚三酮法)
茚三酮比色法测定游离氨基酸含量原理：茚三酮与氨基酸的反应分两步进行，首先是氨基酸被氧化，产生二氧化碳､氨和醛，而水合茚三酮被还原成还原性茚三酮；第二步是所生成的还原性茚三酮与另一个水合茚三酮分子和氨缩合生成成为蓝紫色化合物，该化合物颜色的深浅与氨基酸的含量成正比｡磷酸缓冲液（pH.8.04）：称磷酸二氢钾4.5350 g，定容500 ml。
称NAH2PO4·12H2O11.9380 g分别溶解定容500 ml。
取磷酸二氢钾10 ml与磷酸氢二钠190ml混合即为pH8.04的缓冲液2％茚三酮溶液：称取水合茚三酮 2 g，加水溶解后定容至 100 mL。
储成于棕色瓶中，避光保存。
0.25%抗坏血酸溶液：称取抗坏血酸 0.1 g，加水溶解后定容至 100 mL，现配现用，或者密封，冻存于-20 o C。
茚三酮反应液：取50 ml 2% 茚三酮，加入5 ml 0.25%的Vc，使用蒸馏水稀释到100 ml，密封储存在棕色瓶中。
亮氨酸标准液:称取 100 mg 亮氨酸（纯度不低于 99%）溶于 100 mL 水中，作为母液，此时亮氨酸的浓度为1 mg/mL。
茚三酮标准曲线制作溶液中氨基酸的浓度如果低于20 μg/ml，茚三酮显色反应将不能发生，故先配制不同浓度的氨基酸标准液，取十支试管，标号为1，2，3……10，按照下表配制1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 120.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1 1.1 1.2 1.3 1.4 1.5 1000 μg/ml亮氨酸超纯水 ml 9.6 9.5 9.4 9.3 9.2 9.1 9 8.9 8.8 8.7 8.6 8.5 亮氨酸 终浓度μg/ml 405060708090100110120130140150使用螺旋盖（内垫）试管分别取上述浓度的氨基酸标准液1ml，空白对照使用1ml 超纯水替代氨基酸标准液，然后向各个试管中加入0.5 ml 的茚三酮反应液和0.5 ml 的磷酸缓冲液，盖好盖子悬紧，置于沸水浴中煮沸15 min，分别加入3 ml 的超纯水，斡旋混匀，测定吸光度，绘制标准曲线取一支中等程度显色的试管进行紫外和可见波段的全波长扫描，结果如下图所示3004005006007008000.00.10.20.30.40.50.60.7吸光度波长（nm ）403 nm565 nm选择565 nm 作为其最大吸收波长，测定各管的吸光度，弃去吸光度大于1的值 茚三酮终浓度（μg/mL） 565 nm 的吸光度 20 0.037 25 0.114 30 0.226 35 0.347 40 0.412 45 0.538 500.62155 0.692 60 0.754 65 0.834 700.968使用origin 8.5 绘制散点图并进行线性拟合，结果如下图所示0.00.20.40.60.81.0O D 565氨基酸浓度（μg/mL ）注意事项：1. 茚三酮比色受测定环境中的pH 影响很大，故每次测定前需要将样品溶液的pH 值调整到中性（pH7左右），2. 茚三酮不光可以与氨基酸反应，与蛋白质同样可以反应，因此需要在测定前去除溶液中的蛋白质，因此正确做法是：向样品溶液中加入等体积等0.6 mol/L 三氯乙酸，斡旋震荡，静置10 min 后，3000 rpm 离心10 min，取上清调整pH 值至中性pH7左右，再进行测定，3. 稀释倍数的确定：因为标准曲线的测定范围为20-70 μg/mL，即20-70 mg/L，所以在不清楚你所要检测样品中氨基酸的浓度时，最好取部分样品稀释10倍和100倍，分别检测原液、十倍稀释液和100倍稀释液的OD565，发现哪个水平下OD565落在标准曲线的范围内，从而判断需要对样品稀释多少倍4. 标准曲线测定时最好选择密封性较好的试管（螺旋盖硅胶内垫），同时需要检查气密性，防止水浴蒸发导致计量误差或者使用10 mL 具塞比色管，以方便在水浴之后可以准确补水。
氨基酸含量测定和标准曲线制作(茚三酮法)
茚三酮比色法测定游离氨基酸含量原理：茚三酮与氨基酸的反应分两步进行，首先是氨基酸被氧化，产生二氧化碳､氨和醛，而水合茚三酮被还原成还原性茚三酮；第二步是所生成的还原性茚三酮与另一个水合茚三酮分子和氨缩合生成成为蓝紫色化合物，该化合物颜色的深浅与氨基酸的含量成正比｡磷酸缓冲液（pH.8.04）：称磷酸二氢钾4.5350 g，定容500 ml。
称NAH2PO4·12H2O11.9380 g分别溶解定容500 ml。
取磷酸二氢钾10 ml与磷酸氢二钠190ml混合即为pH8.04的缓冲液2％茚三酮溶液：称取水合茚三酮 2 g，加水溶解后定容至 100 mL。
储成于棕色瓶中，避光保存。
0.25%抗坏血酸溶液：称取抗坏血酸 0.1 g，加水溶解后定容至 100 mL，现配现用，或者密封，冻存于-20 o C。
茚三酮反应液：取50 ml 2% 茚三酮，加入5 ml 0.25%的Vc，使用蒸馏水稀释到100 ml，密封储存在棕色瓶中。
亮氨酸标准液:称取 100 mg 亮氨酸（纯度不低于 99%）溶于 100 mL 水中，作为母液，此时亮氨酸的浓度为1 mg/mL。
茚三酮标准曲线制作溶液中氨基酸的浓度如果低于20 μg/ml，茚三酮显色反应将不能发生，故先配制不同浓度的氨基酸标准液，取十支试管，标号为1，2，3……10，按照下表配制1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 120.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1 1.1 1.2 1.3 1.4 1.5 1000 μg/ml亮氨酸超纯水 ml 9.6 9.5 9.4 9.3 9.2 9.1 9 8.9 8.8 8.7 8.6 8.5 亮氨酸 终浓度μg/ml 405060708090100110120130140150使用螺旋盖（内垫）试管分别取上述浓度的氨基酸标准液1ml，空白对照使用1ml 超纯水替代氨基酸标准液，然后向各个试管中加入0.5 ml 的茚三酮反应液和0.5 ml 的磷酸缓冲液，盖好盖子悬紧，置于沸水浴中煮沸15 min，分别加入3 ml 的超纯水，斡旋混匀，测定吸光度，绘制标准曲线取一支中等程度显色的试管进行紫外和可见波段的全波长扫描，结果如下图所示3004005006007008000.00.10.20.30.40.50.60.7吸光度波长（nm ）403 nm565 nm选择565 nm 作为其最大吸收波长，测定各管的吸光度，弃去吸光度大于1的值 茚三酮终浓度（μg/mL） 565 nm 的吸光度 20 0.037 25 0.114 30 0.226 35 0.347 40 0.412 45 0.538 500.62155 0.692 60 0.754 65 0.834 700.968使用origin 8.5 绘制散点图并进行线性拟合，结果如下图所示0.00.20.40.60.81.0O D 565氨基酸浓度（μg/mL ）注意事项：1. 茚三酮比色受测定环境中的pH 影响很大，故每次测定前需要将样品溶液的pH 值调整到中性（pH7左右），2. 茚三酮不光可以与氨基酸反应，与蛋白质同样可以反应，因此需要在测定前去除溶液中的蛋白质，因此正确做法是：向样品溶液中加入等体积等0.6 mol/L 三氯乙酸，斡旋震荡，静置10 min 后，3000 rpm 离心10 min，取上清调整pH 值至中性pH7左右，再进行测定，3. 稀释倍数的确定：因为标准曲线的测定范围为20-70 μg/mL，即20-70 mg/L，所以在不清楚你所要检测样品中氨基酸的浓度时，最好取部分样品稀释10倍和100倍，分别检测原液、十倍稀释液和100倍稀释液的OD565，发现哪个水平下OD565落在标准曲线的范围内，从而判断需要对样品稀释多少倍4. 标准曲线测定时最好选择密封性较好的试管（螺旋盖硅胶内垫），同时需要检查气密性，防止水浴蒸发导致计量误差或者使用10 mL 具塞比色管，以方便在水浴之后可以准确补水。
氨基酸显色反应茚三酮反应.ppt
氨基酸显色反应---茚三酮反应
茚三酮ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ应
实验原理
除脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应产生黄色物质外，所有α—氨基酸及一切蛋白质 都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质。 该反应十分灵敏，1：1 500 000浓度的氨基酸水溶液即能给出反应，是一种常用 的氨基酸定量测定方法。 茚三酮反应分为两步，第一步是氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛，水合茚三酮 被还原成还原型茚三酮；第二步是所形成的还原型茚三酮同另一个水合茚三酮分 于和氨缩合生成有色物质。
实验器材及试剂
器材： 试管、酒精灯、试管夹、试管架 试剂： (1)蛋白质溶液：2％卵清蛋白或新鲜鸡蛋清溶液(蛋清：水＝1：9) (2)0.5％甘氨酸溶液 (3)0.1％茚三酮水溶液 (4)0.1％茚三酮—乙醇溶液
实验步骤
(1)取2支试管分别加入蛋白质溶液和甘氨酸溶液1毫升，再各加0.5毫升0.1％茚 三酮水溶液，混匀，在沸水浴中加热1—2分钟，观察颜色由粉色变紫红色再变蓝。 (2)在一小块滤纸上滴一滴0.5％的甘氨酸溶液，风干后，再在原处滴上一滴0.1％ 的茚三酮乙醇溶液在微火旁烘干显色，观察紫红色斑点的出现。
茚三酮法测氨基酸
茚三酮法测氨基酸 Document number：NOCG-YUNOO-BUYTT-UU986-1986UT茚三酮显色法测定氨基酸的含量一．原理：凡含有自由氨基的化合物，如蛋白质、多肽、氨基酸的溶液与水合茚三酮共热时，能产生紫色化合物，可用比色法进行测定。
氨基酸与茚三酮的反应分两个步骤。
第一步是氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛、茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步是所形成的还原型茚三酮与另一个茚三酮分子和NH3缩合生成有色物质。
二．仪器：721型分光光度计台天平减压蒸馏器干燥容量瓶移液枪烧杯试管架试管水浴锅。
三．药品：（1）标准氨基酸溶液：配制成L 溶液（2），2mol/L 醋酸缓冲液：量取86mL 2mol/L 醋酸钠溶液，加入14mL 2mol/L 乙酸混合而成。
用pH 检查校正。
（3）茚三酮显色液：称取170mg 茚三酮和30mg 还原茚三酮，用20mL 乙二醇甲醚溶解（4）60％乙醇。
（5）样品液：每毫升含～50μg 氨基酸。
茚三酮若变为微红色，则需按下法重结晶：称取5g 茚三酮溶于15～25mL 热蒸馏水中，加入活性炭，轻轻搅拌。
加热30min 后趁热过滤，滤液放入冰箱过夜。
次日析出黄白色结晶，抽滤，用1mL 冷水洗涤结晶，置干燥器干燥后，装入棕色玻璃瓶保存。
还原型茚三酮按下法制备：称取茚三酮，用沸蒸馏水溶解，得黄色溶液。
将维生素C 用25mL 温蒸馏水溶解，一边搅拌一边将维生素C 溶液滴加到茚三酮溶液中，不断出现沉淀。
滴定后继续搅拌15min，然后在冰箱内冷却到4℃，过滤、沉淀用冷水洗涤3 次，置五氧化二磷真空干燥器中干燥保存，备用。
乙二醇甲醚若放置太久，需用下法除去过氧化物：在500mL 乙二醇甲醚中加入5g 硫酸亚铁，振荡1～2h，过滤除去硫酸亚铁，再经蒸馏，收集沸点为121～125℃的馏分，为无色透明的乙二醇甲醚。
四、操作步骤1．标准曲线的制作分别取L 的标准氨基酸溶液0，，，，，于试管中，用水补足至1mL。
茚三酮比色法测定冻干药膳鸡汤中氨基酸含量
茚三酮比色法测定冻干药膳鸡汤中氨基酸含量◎侯旭南杨妍林川犇刘徐青霞本文利用茚三酮反应产生特征颜色，改变溶液的吸光度，采用可见光分光光度法对药膳鸡汤及其冻干粉中的氨基酸含量进行分析，建立快速评价冻干药膳鸡汤的新方法。
测定结果表明，茚三酮法测定冻干粉中氨基酸含量具有良好的线性（R2=0.9996），准确性（回收率98.51%～101.61%）。
12种冻干药膳鸡汤中氨基酸含量介于540～2510μg/ml之间；冻干药膳鸡汤中氨基酸含量随其煎煮时长和食盐的增加而提高。
中医药膳学是在中医理论指导下研究食药两用食材的理论及应用的学科，是中医学的一个重要组成部分，是在长期实践中积累逐渐形成的经验学科。
由于食疗药膳的传统烹饪方式商品化程度过低，无法满足快节奏时代的需要，导致其在现代社会的推广受限。
随着真空冷冻干燥技术成本的降低，冻干药膳产品有望实现产业化。
药膳鸡汤作为受众人群最为广泛的食疗药膳，是以药食两用的中药与鸡肉及天然调料熬煮而成。
《内经》记载，药膳鸡汤有益气温中、填精补虚、健脾胃、益五脏、强筋壮骨的功效，适用于营养不良、畏寒肢冷、易疲劳、月经不调等症状。
鸡肉营养丰富，蛋白质含量高，含有多种人体必须氨基酸。
以鸡肉为基础开发药膳鸡汤，并以现代冻干技术制备方便快捷的药膳鸡汤冻干粉可以实现营养、功能和便捷性的高度融合。
药膳冻干鸡汤的开发有利于药膳的推广和工业化生产，是药膳鸡汤未来研究和发展的趋势。
谷氨酸是酸性氨基酸，分子内含两个羧基增加了其在极性溶剂中的溶解能力，因此微溶于水。
谷氨酸几乎不溶于乙醚等非极性溶剂，也不溶于甲醇和乙醇。
谷氨酸作为食品行业常见的呈鲜物质之一，对鸡汤鲜味具有重要的贡献。
L-谷氨酸可作为药品参与大脑的蛋白质代谢，促进氧化，是人脑中重要的兴奋性神经递质。
本实验以谷氨酸为研究目标，利用谷氨酸与茚三酮反应生成特征颜色的原理，采用可见光分光光度法测定570nm 波长下溶液的吸光度，根据朗伯-比尔定律计算其中的游离氨基酸的含量。
氨基酸含量的测定（茚三酮比色法）
氨基酸含量的测定（茚三酮比色法）原理凡含有自由氨基的化合物，如蛋白质、多肽、氨基酸的溶液与水合茚三酮共热时，能产生紫色化合物，可用比色法进行测定。
氨基酸与茚三酮的反应分两个步骤。
第一步是氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛、茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步是所形成的还原型茚三酮与另一个茚三酮分子和NH3缩合生成有色物质。
仪器药品721型分光光度计台天平减压蒸馏器干燥研钵容量瓶移液管烧杯试管架试管0.2mol/L柠檬酸缓冲液，pH5.0（见附表2）80%乙醇10mmol/L KCN：称取0.1638gKCN溶于蒸馏水中，稀释至250ml备用（注意：KCN剧毒！）KCN－乙二醇甲醚－茚三酮溶液*：称取1.25g重结晶茚三酮溶于25ml 经重蒸馏的乙二醇甲醚中使成5%溶液。
将2.5ml10mmol/L KCN溶液用乙二醇甲醚溶液稀释至125ml充分混合。
然后将125mlKCN—乙二醇甲醚溶与25ml茚三酮－乙二醇甲醚溶液相混合，置试剂瓶待用，正常情况下应为浅黄色。
标准氨基酸溶液：称取亮氨酸20mg溶于10ml蒸馏水中，则得浓度为200μg/ml的母液。
上述所有试剂必须放在草酸保护的干燥器中，以免被空气中的NH3所污染。
乙二醇甲醚(CH3OCH2CH2OH, methyl cellusolve)的处理：将5g硫酸亚铁加在500g乙二醇甲醚中，振摇1─2小时。
过滤除去硫酸亚铁（若滤液混浊没有关系），再在蒸馏瓶中蒸馏，收集沸点121─125℃部分，此时应为透明无色液体。
KCN－乙二醇甲醚－茚三酮溶液配制后必须隔夜才能应用。
配制后1星期内稳定，若超过1星期则灵敏度降低，不宜作定量。
茚三酮重结晶：即使AR级的茚三酮，由于保管不当，常带微红色，配成溶液后也带红色，影响比色测定，故需重结晶一次方可应用。
5g茚三酮溶于15ml热蒸馏水中，加入0.25g活性炭，轻轻摇动，若溶液太稠不易操作，可酌量加水5─10ml，30分钟后用滤纸过滤，滤液放冰箱中过液，次晨即见微黄色结晶出现，过滤，再以1ml冷水洗涤结晶，置于干燥器中干燥，最后装入棕色试剂瓶中保存。
游离氨基酸的测定实验报告
游离氨基酸的测定实验方案（茚三酮比色法）一、实验目的茚三酮比色法测定发酵液中游离氨基酸含量，利用氨基酸含量这个参数，控制发酵过程。
二、实验原理游离氨基酸的游离氨基可与水合茚三酮作用，产生蓝紫色的化台物二酮茚一二酮茚胺，产物的颜色深浅与游离氨基酸含量成正比，用分光光度计在570nm 下测其含量。
因蛋白质中的游离氨基酸也会产生同样反应，在测定前必须用蛋白质沉淀剂将其除掉。
三、实验材料发酵液样品；实验试剂：水合茚三酮；氨基酸标准液；0.1%抗坏血酸实验仪器：100ml容量瓶；漏斗；三角瓶；研钵；移液器；枪头；沸水浴；具塞刻度试管20 ml×10；分光光度计四、实验方法1.溶液配制（1）水合茚三酮称取0.6g重结晶的茚三酮放烧杯中，加入15ml 正丙醇、30ml正丁醇、60ml乙二醇及9 ml PH4.54的醋酸盐缓冲液混匀，棕色瓶中冰箱内保存，10天内有效。
（2）氨基酸标准液称取80℃烘干的亮氨酸23.4mg，以10%的异丙醇溶解定溶至50ml（含氮为50ug/ ml），取此液5ml，用水定容至50 ml，此为含氮量5ug/ ml工作液。
（3）0.1%抗坏血酸称取0.1g抗坏血酸定容100 ml，随用随配。
2.标准曲线绘制取6支20ml 试管，按下表加剂：试剂管号12 3 4 5 6 亮氨酸标准液(ml) 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 无氨蒸馏水(ml) 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 水合茚三酮(ml) 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 抗坏血酸(ml) 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 氨基氮量（ug/管 ）1.02.03.04.05.0将各管溶液混合均匀，封口，在沸水中加热15min ，取出后立即用冷水摇动冷却，用60%乙醇定容至20 ml ，摇匀。
λ=570nm 处测定吸光度0 0.025 0.055 0.099 0.146 0.186以吸光度为纵坐标，氨基氨ug 数为横坐标，绘标准曲线如图：茚三酮比色法测定游离氨基氮标准曲线-0.0500.050.10.150.2氨基氮（ug）吸光度A3.样品中游离氨基酸的测定取20ml 试管，取待测液1ml ，加蒸馏水l ml ，水合茚三酮3.0 ml ，坏血酸0.1ml ，混匀，封口。
游离氨基酸的测定方法
游离氨基酸的测定方法
游离氨基酸咋测定呢？其实有不少方法呢！比如说茚三酮比色法。
先准备好样品，把它处理成合适的状态。
然后加入茚三酮试剂，经过一系列反应后，通过比色来确定游离氨基酸的含量。
这过程中可得小心操作，要是弄错了一步，那结果可就不靠谱啦！那安全性咋样呢？只要按照正确的步骤来，一般没啥大问题。
稳定性嘛，只要试剂没问题，操作规范，结果还是挺稳定的。
这方法能用到好多地方呢！像食品检测领域，你想想，要是不知道食品里的游离氨基酸含量，咋能保证食品的质量和营养呢？优势也不少呢！操作相对简单，成本也不高。
咱举个实际案例哈。
有个食品加工厂，用这个方法检测产品中的游离氨基酸含量，及时调整了生产工艺，提高了产品质量。
这效果多棒啊！
游离氨基酸的测定方法真的超实用，能帮我们了解各种物质中的氨基酸情况，为我们的生活和生产带来很多好处。
咱可得好好利用这些方法，让它们发挥更大的作用。
植物生理生化实验
实验一植物组织游离氨基酸含量测定—茚三酮试剂显色法P199原理：游离氨基酸与茚三酮共热时能定量生成二酮茚-二酮茚胺，产物呈蓝紫色，称Rubemans紫。
其吸收峰在570nm，且在一定范围内吸光度与游离氨基酸浓度成正比，因此可用分光光度法测定其含量。
①微酸、90℃：氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛，茚三酮被还原成还原型茚三酮。
②脱水：还原型茚三酮与另一分子茚三酮和一分子氨进行缩合脱水，生成二酮茚-二酮茚胺。
材料：清水浸种吸涨的水稻、清水浸种萌发两天的水稻。
实验步骤：分别取1g萌发、未萌发水稻于研钵中，加入5ml醋酸（使蛋白质变性，沉淀），研磨成匀浆后，用无置于沸水中加热15min，取出用冷水迅速冷却并不时摇动，使之呈蓝紫色，用60%乙醇定容20ml，在570nm 波长下测定吸光度。
样品氨基态含氮量（ug/100g鲜重）=CV T/V S W *100 ；C=A/k (k=0.103) ；V T=100/2 ；V S=1 ；W=1注意事项：1.测定前所用的玻璃仪器要干燥，所用的蒸馏水必须为无氨水；2.样品要磨匀，用无氨蒸馏水定容，并用干燥滤纸过滤；3.抗坏血酸易被还原；加入的量要严格控制，因为还原剂抗坏血酸会与茚三酮反应；4.水浴锅的液面要高于试管内的液面，使其加热均匀，并在加热后几秒再塞上塞子，水浴锅温度要高于90℃，15min后取出迅速冷却，再加入60%乙醇；5.稀释后要迅速比色；6. 谷物等蛋白质样品可用酸水解法讲蛋白质水解后，用本法测定氨基酸含量，可计算出样品蛋白质含量；7. 反应要在无水、有机、微酸的环境下进行。
最适PH为4.5，是乙醇-乙酸钠缓冲液和醋酸缓和后的PH。
思考题：1.茚三酮与所有氨基酸的反应产物都相同吗？为什么？不相同，因为有些氨基酸的结构不同，不含游离的氨基，如脯氨酸。
2.测定植物组织中游离氨基酸总量有何意义？可以测定植物对氮的根吸收，测定植物的病理和逆境状态和植物的营养、施肥指标等。
氨基酸测定方法
4。
1 光度分析法［5] ［6]β-氨基丙酸和茚三酮溶液在弱酸的条件下可以生成蓝紫色物质[7]，其颜色深浅主要与β-氨基丙酸的浓度有关。
因此可利用此显色反应采用比色法定量测量β—氨基丙酸。
我在实验中发现很多因素如浓度、pH 值、反应温度、以及反应时间等对此显色反应有很大的影响.如忽视这些因素会使实验产生很大的误差.就此显色反应的最佳条件我做了初步的探究.4.1。
1试剂的配制：缓冲液的配制:配制pH= 6。
00的NaAc －HAc 缓冲溶液β—氨基丙酸标准溶液的配制：用电子天平准确称取1。
020 g β-氨基丙酸（生化纯）,溶于250ml pH=6.00缓冲溶液中，得到C = 4.080 g/L 标准溶液.茚三酮试剂的配制：称取0.5g 茚三酮溶于100ml 蒸馏水中,得到5g/L 的茚三酮水溶液。
4.1。
2标准曲线的确定分别准确移取0.30ml 、0。
40ml 、0。
50ml 、0.60ml 、0.70ml 、0。
80ml 、0.90ml 、1。
00ml 标准液于8个比色管中，用pH=6.00的缓冲溶液稀释到5.00ml 再加入1ml 茚三酮水溶液充分摇匀，将其放在沸水浴中加热10min 。
冷却到室温，用7230型分光光度计在569nm 下测其吸光度.以吸光度和浓度作一个标准曲线。
4。
1。
3样品的测定稀释待测液于0.24mg/ml-0.73mg/ml,调pH 值到6.00，以相同的反应条件，测其吸光值并与上面的标准曲线对照查出稀释液的浓度，再乘以稀释倍数即为β-氨基丙酸的浓度。
4.1.4 标准曲线的测定结果β-氨基丙酸浓度在0.24mg/ml —0.73mg/ml 范围内与茚三酮水溶液反应，颜色表现出由浅蓝到深蓝的递增变化。
用茚三酮比色法测得的一组数据得到的标准曲线如图1：吸光度加入标液体积(ml)图 1 标准曲线的测定Fig 1 Determination of the standard curve注:在沸水中加热10min ，β—氨基丙酸标准溶液5ml 、茚三酮水溶液1ml 、缓冲溶液pH=6.004.1。
食品中氨基酸总量的测定实验报告
食品中氨基酸总量的测定实验报告一、实验目的本实验旨在测定食品中氨基酸的总量，了解食品中蛋白质的组成和营养价值，为食品质量控制和营养评估提供依据。
二、实验原理氨基酸是含有氨基和羧基的有机化合物，它们在一定条件下与某些试剂反应可以产生特定的颜色或荧光，通过比色或荧光检测可以定量测定氨基酸的含量。
本实验采用茚三酮显色法测定食品中氨基酸的总量。
茚三酮在弱酸性溶液中与氨基酸反应，生成蓝紫色化合物，其颜色的深浅与氨基酸的含量成正比。
在一定波长下测定溶液的吸光度，通过与标准曲线对比，可以计算出样品中氨基酸的总量。
三、实验材料与设备1、实验材料标准氨基酸溶液（已知浓度）待测食品样品（如肉类、豆类、谷物等）茚三酮试剂缓冲溶液（pH 值 50）乙醇蒸馏水2、实验设备分光光度计分析天平容量瓶（100 mL、50 mL、25 mL 等）移液管（1 mL、2 mL、5 mL 等）具塞刻度试管（25 mL）水浴锅离心机四、实验步骤1、标准曲线的绘制分别吸取 000 mL、020 mL、040 mL、060 mL、080 mL、100 mL 标准氨基酸溶液于 25 mL 具塞刻度试管中，用蒸馏水补足至 100 mL。
向各试管中加入 100 mL 缓冲溶液（pH 值 50）和 100 mL 茚三酮试剂，摇匀。
将试管置于沸水浴中加热 15 min，取出后立即用冷水冷却至室温。
向各试管中加入 500 mL 60%乙醇，摇匀。
使用分光光度计，在 570 nm 波长下，以蒸馏水为空白，测定各溶液的吸光度。
以氨基酸的含量（μg）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2、样品处理称取适量待测食品样品，精确至 0001 g，放入研钵中研碎。
将研碎的样品转移至离心管中，加入适量蒸馏水，在沸水浴中加热30 min，以提取氨基酸。
冷却后，离心（3000 rpm，10 min），取上清液备用。
3、样品测定吸取 100 mL 样品上清液于 25 mL 具塞刻度试管中，按照标准曲线绘制的步骤进行操作，测定样品溶液的吸光度。
测氨基酸含量的方法
测氨基酸含量的方法测氨基酸含量可不是一件简单的事儿呢。
有一种方法是茚三酮显色法。
这就像是一场神奇的化学反应魔法。
茚三酮这种东西就像一个侦探，专门和氨基酸打交道。
当它遇到氨基酸的时候，就会发生反应，然后变色。
我们可以把含有氨基酸的样品和茚三酮放在一起，在一定的条件下，比如说合适的温度、酸碱度这些，让它们充分反应。
反应完了之后，就会出现颜色变化。
然后我们可以用一个仪器，就像一个专门看颜色深浅的眼睛，去测量颜色的深浅程度。
颜色越深，就说明氨基酸的含量越高。
这就好像颜色是氨基酸含量的信号，我们通过解读这个信号来知道氨基酸有多少。
还有高效液相色谱法。
想象一下高效液相色谱仪就像一个超级复杂的赛道。
氨基酸们就像一个个小小的运动员，在这个赛道上奔跑。
我们把样品注射到这个仪器里，然后通过各种设置，比如流动相的选择、流速的控制等等，让氨基酸在赛道上按照不同的速度前进。
最后它们会一个一个地到达终点，被检测出来。
不同的氨基酸在这个过程中会有不同的表现，我们可以根据这些表现来计算出每种氨基酸的含量。
这就像一场精确的赛跑比赛，我们通过观察运动员的成绩来统计数据。
再说说氨基酸自动分析仪法。
这个仪器就像一个专门处理氨基酸的小工厂。
我们把样品送进去，它就会自动地进行一系列的操作。
它里面有各种复杂的部件，就像工厂里的机器一样。
这些部件会把氨基酸分离出来，然后进行检测。
它能非常精确地测量出氨基酸的含量，就像一个经验丰富的工人，能够把工作做得又快又好。
我记得在一个实验室里，他们要检测一种植物里的氨基酸含量。
他们先用茚三酮显色法做了一个初步的检测。
把植物样品处理好之后，和茚三酮混合在一起，然后在特定的温度下反应了一段时间。
等反应结束后，他们用分光光度计去测量颜色的变化。
通过颜色的深浅，他们大概知道了氨基酸的含量范围。
然后他们又用高效液相色谱法进行了更精确的测量。
他们仔细地准备样品，调整仪器的各种参数，让氨基酸在色谱柱里好好地“跑”一趟。
氨基测定的实验报告
一、实验目的1. 掌握食品中氨基酸含量的测定方法。
2. 学习氨基酸提取、分离和检测的基本原理及操作技能。
3. 了解氨基酸在食品中的营养价值及对人体健康的重要性。
二、实验原理氨基酸是构成蛋白质的基本单元，对人体具有重要作用。
食品中氨基酸含量的测定方法有多种，本实验采用茚三酮比色法进行测定。
茚三酮比色法原理：氨基酸与茚三酮在碱性条件下发生反应，生成紫色复合物。
该复合物在特定波长下有最大吸收峰，其吸光度与氨基酸含量成正比。
通过测定吸光度，可以计算出食品中氨基酸的含量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：食品样品（如鸡蛋、牛奶、豆腐等）、茚三酮试剂、NaOH溶液、标准氨基酸溶液等。
2. 仪器：紫外-可见分光光度计、电子天平、离心机、恒温水浴锅、移液器、试管等。
四、实验步骤1. 样品处理（1）称取适量食品样品，用蒸馏水溶解，配制成一定浓度的溶液。
（2）将溶液离心，取上清液备用。
2. 标准曲线绘制（1）取6个试管，分别加入0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL的氨基酸标准溶液，加入1.0mL的NaOH溶液，混匀。
（2）向各试管中加入2.0mL的茚三酮试剂，混匀，置于恒温水浴锅中加热10分钟。
（3）取出试管，冷却至室温，用蒸馏水定容至10.0mL。
（4）以蒸馏水为空白，在570nm波长下测定各试管吸光度。
（5）以氨基酸浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
3. 样品测定（1）取6个试管，分别加入0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL的样品溶液，加入1.0mL的NaOH溶液，混匀。
（2）按照步骤2的操作，测定各试管吸光度。
（3）根据标准曲线，计算样品中氨基酸含量。
五、结果与分析1. 标准曲线绘制：以氨基酸浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，线性范围为0.0～1.0mg/mL。
2. 样品测定：根据标准曲线，计算样品中氨基酸含量，结果如下：（1）鸡蛋：氨基酸含量为2.5mg/g（2）牛奶：氨基酸含量为1.8mg/g（3）豆腐：氨基酸含量为3.0mg/g六、讨论与结论1. 实验结果表明，茚三酮比色法是一种简单、快速、准确的测定食品中氨基酸含量的方法。
氨基酸含量的测定
氨基酸含量的测定一、氨基酸含量测定的重要性氨基酸可是非常重要的家伙呢！它们就像是构建我们身体这个超级大厦的小砖块一样。
不管是我们的肌肉、毛发还是各种酶类，都离不开氨基酸的参与。
所以呀，知道一个东西里氨基酸的含量就特别有意义啦。
比如说在食品领域，测定食物中的氨基酸含量就能知道它的营养价值有多高。
在制药方面呢，也能帮助确定药物的成分是否准确。
二、氨基酸含量测定的常见方法1. 茚三酮显色法这个方法可有趣啦。
茚三酮就像是一个专门寻找氨基酸的小侦探。
当茚三酮和氨基酸相遇的时候，就会发生显色反应。
一般来说，不同的氨基酸会显示出不同深浅的颜色呢。
我们可以通过比色的方法，就是对比颜色的深浅，来大致判断氨基酸的含量。
不过这个方法也有它的小缺点，就是容易受到一些杂质的干扰，就像一群捣乱的小怪兽，可能会让结果不太准确。
2. 高效液相色谱法（HPLC）这可是个很厉害的高科技方法哦。
它就像是给氨基酸们安排了一场超级精确的赛跑。
把样品注入到高效液相色谱仪里，不同的氨基酸在柱子里跑的速度不一样，就像运动员的速度有快有慢。
最后根据它们跑出来的时间和峰面积，就能很精确地计算出氨基酸的含量啦。
这个方法的好处就是超级精确，不过仪器比较昂贵，操作也有点复杂，就像开一架高级飞机，需要专业的训练才能做好。
3. 氨基酸分析仪法这种方法是专门为测定氨基酸而生的呢。
它能够自动地把氨基酸一个一个地分析出来，就像一个超级智能的分拣员。
它的优点是准确性也很高，而且可以同时测定多种氨基酸。
但是呢，仪器也不便宜，而且需要经常维护，就像照顾一个娇贵的小宠物一样。
三、实际操作中的注意事项1. 样品的预处理这一步可不能马虎哦。
如果样品里面有杂质，就像是在一锅好汤里混进了沙子，那测定结果肯定就不对啦。
对于固体样品，可能需要研磨得很细，就像把一块大石头磨成小沙子一样。
对于液体样品呢，可能需要过滤，把那些不该存在的小颗粒都去掉。
2. 试剂的选择和保存试剂就像是我们打仗的武器一样。
总氨基酸含量测定方法
总氨基酸含量测定方法咱今儿就来说说这总氨基酸含量测定方法。
你可别小瞧了这个，它就像是解开食物营养密码的一把钥匙呢！想象一下，氨基酸就像是一群小精灵，在各种食物里蹦跶。
我们要测定它们的含量，就得有巧妙的办法。
先来说说茚三酮比色法，这就好像是个神奇的魔法，能让氨基酸现形。
把样品处理好后，加上茚三酮试剂，然后就等着颜色变化。
这颜色一变，就好像小精灵们穿上了特定颜色的衣服，我们就能知道它们有多少啦！这多有趣呀，就跟变魔术似的。
还有个方法叫甲醛滴定法，这就像是一场和氨基酸的小游戏。
加入甲醛，然后通过滴定来确定氨基酸的量。
就好像我们在和氨基酸捉迷藏，一点点找到它们的踪迹。
咱再说说高效液相色谱法，这可是个厉害的角色呢！它就像是个超级侦探，能把不同的氨基酸一个一个地分辨出来，准确又可靠。
把样品放进去，它就能把各种氨基酸都给揪出来，让它们无所遁形。
那我们为啥要这么费劲去测定总氨基酸含量呢？这可重要啦！你想想，知道了食物里有多少氨基酸，我们就能更好地搭配饮食呀，让身体更健康。
就好比我们知道了前方的路该怎么走，才能走得更稳当。
而且呀，这对食品行业也很重要呢！厂家可以根据测定的结果来改进产品，让我们吃到更好的东西。
这不是很棒吗？测定总氨基酸含量的过程也不是一帆风顺的哟，有时候也会遇到些小麻烦。
比如样品处理不好啦，或者操作的时候不小心出了点差错。
但咱可不能被这些小困难打倒呀，要像勇士一样去克服它们！总之呢，总氨基酸含量测定方法是个很有意思又很有用的东西。
我们要好好去了解它，掌握它，让它为我们的生活服务。
咱可不能小瞧了这些方法，它们就像是隐藏在科学世界里的宝藏，等着我们去挖掘呢！你说是不是？。
化学纤维氨基酸含量试验方法
化学纤维氨基酸含量试验方法原理化学纤维中的蛋白质经盐酸水解成为游离氨基酸,经氨基酸分析仪的离子交换分离柱分离后,与茆三酮溶液产生衍生颜色反应,再通过比色测定氨基酸含量,外标法定量。
氨基酸反应及实验方法：1、茚三酮反应（ninhydrin reaction）试剂：茚三酮（弱酸环境加热）颜色：紫色（脯氨酸、羟脯氨酸为黄色）原理：检验α-氨基酸2、坂口反应（Sakaguchi reaction）试剂：α-萘酚+碱性次溴酸钠颜色：红色原理：检验胍基，精氨酸有此反应3、米隆反应（又称米伦氏反应）试剂：HgNO3+HNO3+（加热）颜色：红色原理：检验酚基，酪氨酸有此反应，未加热则为白色4、Folin-Ciocalteau反应（酚试剂反应）试剂：磷钨酸-磷钼酸颜色：蓝色原理：检验酚基，酪氨酸有此反应5、黄蛋白反应试剂：浓硝酸（煮沸）颜色：黄色原理：检验苯环，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸有此反应6、Hopkin-Cole反应（乙醛酸反应）试剂：乙醛酸，浓硫酸颜色：紫红色原理：检验吲哚基，色氨酸有此反应7、Ehrlich反应试剂：对二甲氨基苯甲醛、浓盐酸颜色：蓝色原理：检验吲哚基，色氨酸有此反应8、硝普盐试验试剂：Na2(NO)Fe(CN)2·2H2O、稀氨水颜色：红色原理：检验巯基，半胱氨酸有此反应9、Sulliwan反应试剂：1,2-萘醌-4-磺酸钠、Na2SO3 颜色：红色原理：检验巯基，半胱氨酸有此反应10、Folin反应试剂：1,2-萘醌-4-磺酸钠（碱性环境）颜色：深红色原理：检验α－氨基酸。
植物生理生化实验
实验一植物组织游离氨基酸含量测定—茚三酮试剂显色法P199原理：游离氨基酸与茚三酮共热时能定量生成二酮茚-二酮茚胺，产物呈蓝紫色，称Rubemans紫。
其吸收峰在570nm，且在一定范围内吸光度与游离氨基酸浓度成正比，因此可用分光光度法测定其含量。
①微酸、90℃：氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛，茚三酮被还原成还原型茚三酮。
②脱水：还原型茚三酮与另一分子茚三酮和一分子氨进行缩合脱水，生成二酮茚-二酮茚胺。
材料：清水浸种吸涨的水稻、清水浸种萌发两天的水稻。
实验步骤：分别取1g萌发、未萌发水稻于研钵中，加入5ml醋酸（使蛋白质变性，沉淀），研磨成匀浆后，用无置于沸水中加热15min，取出用冷水迅速冷却并不时摇动，使之呈蓝紫色，用60%乙醇定容20ml，在570nm 波长下测定吸光度。
样品氨基态含氮量（ug/100g鲜重）=CV T/V S W *100 ；C=A/k (k=0.103) ；V T=100/2 ；V S=1 ；W=1注意事项：1.测定前所用的玻璃仪器要干燥，所用的蒸馏水必须为无氨水；2.样品要磨匀，用无氨蒸馏水定容，并用干燥滤纸过滤；3.抗坏血酸易被还原；加入的量要严格控制，因为还原剂抗坏血酸会与茚三酮反应；4.水浴锅的液面要高于试管内的液面，使其加热均匀，并在加热后几秒再塞上塞子，水浴锅温度要高于90℃，15min后取出迅速冷却，再加入60%乙醇；5.稀释后要迅速比色；6. 谷物等蛋白质样品可用酸水解法讲蛋白质水解后，用本法测定氨基酸含量，可计算出样品蛋白质含量；7. 反应要在无水、有机、微酸的环境下进行。
最适PH为4.5，是乙醇-乙酸钠缓冲液和醋酸缓和后的PH。
思考题：1.茚三酮与所有氨基酸的反应产物都相同吗？为什么？不相同，因为有些氨基酸的结构不同，不含游离的氨基，如脯氨酸。
2.测定植物组织中游离氨基酸总量有何意义？可以测定植物对氮的根吸收，测定植物的病理和逆境状态和植物的营养、施肥指标等。
茚三酮比色法 氨基酸含量的测定
茚三酮显色法测定氨基酸含量原理茚三酮溶液与氨基酸共热，生成氨。
氨与茚三酮和还原性茚三酮反应，生成紫色化合物。
该化合物颜色的深浅与氨基酸的含量成正比，可通过测定570nm 处的光密度，测定氨基酸的含量。
试剂与材料1.标准氨基酸溶液：配制成0.3mmol/L溶液。
2.pH5.4，2mol/L醋酸缓冲液：量取86mL 2mol/L醋酸钠溶液，加入14mL 2mol/L乙酸混合而成。
用pH检查校正。
3.茚三酮显色液：称取85mg茚三酮和15mg还原茚三酮，用10mL乙二醇甲醚溶解。
茚三酮若变为微红色，则需按下法重结晶：称取5g茚三酮溶于15～25mL热蒸馏水中，加入0.25g活性炭，轻轻搅拌。
加热30min后趁热过滤，滤液放入冰箱过夜。
次日析出黄白色结晶，抽滤，用1mL冷水洗涤结晶，置干燥器干燥后，装入棕色玻璃瓶保存。
还原型茚三酮按下法制备：称取5g茚三酮，用125mL沸蒸馏水溶解，得黄色溶液。
将5g维生素C用250mL温蒸馏水溶解，一边搅拌一边将维生素C溶液滴加到茚三酮溶液中，不断出现沉淀。
滴定后继续搅拌15min，然后在冰箱内冷却到4℃，过滤、沉淀用冷水洗涤3次，置五氧化二磷真空干燥器中干燥保存，备用。
乙二醇甲醚若放置太久，需用下法除去过氧化物：在500mL乙二醇甲醚中加入5g硫酸亚铁，振荡1～2h，过滤除去硫酸亚铁，再经蒸馏，收集沸点为121～125℃的馏分，为无色透明的乙二醇甲醚。
4.60％乙醇。
5.样品液：每毫升含0.5～50μg氨基酸。
6.分光光度计。
7.水浴锅。
操作步骤1．标准曲线的制作分别取0.3mmol/L的标准氨基酸溶液0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0mL于试管中，用水补足至1mL。
各加入1mL pH5.4，2mol/L醋酸缓冲液；再加入1mL茚三酮显色液，充分混匀后，盖住试管口，在100℃水浴中加热15min，用自来水冷却。
放置5min后，加入3mL 60％乙醇稀释，充分摇匀，用分光光度计测定OD570nm。
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实验九 氨基酸含量的测定 （茚三酮比色法）
1. 实验原理
凡含有自由氨基的化合物，如蛋白质、多肽、 氨基酸（脯氨酸除外）在碱性溶液中与水合茚三 酮共热时，产生紫色化合物，最大吸收波长在 570nm处，在一定浓度范围内，颜色深浅与氨基 酸含量成正比，可用比色法进行测定。
氨基酸与茚三酮的反应分两个步骤：
（3）通常采用的样品处理方法为：准确称取粉碎 后的样品5g～10g或吸取液体样品5mL～10mL， 置于烧杯中，加入50mL蒸馏水和5g左右的活性炭， 加热煮沸，过滤。用30mL～40mL热水洗涤活性 炭，收集滤液于100mL容量瓶中，加水至刻度线， 摇匀备用。
6. 思考题 （1）茚三酮法测定氨基酸的原理是什么？ （2）试比较三种方法测定氨基酸含量的优缺点
2. 实验材料、仪器与试剂 材料：酱油 仪器：可见分光光度计，分析天平，容量 瓶，移液管，具塞刻度试管。 试剂：茚三酮、氯化亚锡、磷酸二氢钾、 磷酸氢二钠、标准氨基酸（异亮氨酸）。
（3）样品测定
管号
8 9 10 11
样品溶液/mL 0 0.5 0.5 0.5
水/mL
1.6 1.1 1.1 1.1
磷酸盐缓冲液/mL 0.4 0.4 0.4 0.4
茚三酮/mL
0.4 0.4 0.4 0.4
按上表加样后混匀，按标准曲线的步骤进行 实验，在相同条件下测定样品的吸光度，并在标 准曲线上查（1）该法是微量法，对氨基酸的最低检出量可 达0.5μg，其其灵敏度高，重现性好。 （2）脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应呈黄色， 最大吸收波长在440nm处。