免疫常用小鼠

免疫常用小鼠
免疫常用小鼠

常用小鼠品系

1.BALB/c品系

(1)遗传背景及亚系:1913年Bagg获得的白化株(albino stock)小鼠。1923年以后由Mac Dowell进行了近亲繁殖,在1932年繁殖到26代,最后Snell将其育成。

亚系:BALB/c、BALB/ced、BALB/cJ、BALB/cAnN等。

(2)毛色基因标记:AA、bb、cc。

(3)主要遗传学特征:

a.免疫学特征:易患慢性肺炎。初生时摘除胸腺的动物58%可发生侏儒症。在6月龄时,多数个体非常明显地出现高血球蛋白血症。免疫球蛋白绝对量的多少又因饲养条件的不同而有差异。在BALB/c鼠腹腔注射矿物油,可产生多发骨髓瘤,其发生率可高达60%。其发生率可因亚系的不同或饲养条件的不同而有差异。

b.生理学特性:血压较高,可自发高血压症,大部分雄鼠在20月龄时发生脾的淀粉样边。对X线照射敏感性高,LD50为500R,与其它品系比较,缺乏毛的光泽,甚至有脱毛现象。

c.癌发生率:乳癌发生率低,为3%;肾上腺癌、肺癌时有发生。雌鼠的几种癌发生率为:肺癌2%,网状肉瘤8%,血管瘤6%,淋巴肉芽肿4.5%。

d.老化及寿命:老年鼠心脏有某些病变,两性小鼠均有动脉硬化,SPF级雌性小鼠寿命为561日,雄鼠为509日。

(4)饲养方面注意事项:雌鼠繁殖利用周期较长,约1年,是比较容易繁殖的品系。四周龄以后不同窝的雌鼠有相互咬架的现象,故不同窝的鼠不宜同笼饲养。繁殖室26℃-27℃为宜,由于易患肺炎,所以不要与其他品系动物同室饲养。在其他品系的常在菌,对于本品系则可引起发病。

(5)特性和用途:对慢性肺炎敏感,特别对放射线敏感。乳腺肿瘤发病率低,当用乳腺肿瘤病毒(MTV)诱发时发病率增高。对促性腺激素有超排卵反应。两性小鼠均有动脉硬化症。对弓形体易感。补体活性高,对矿物油诱发浆细胞瘤敏感。偶见甲状腺肿瘤。干扰素产量低,对百日咳组织胺易感因子敏感。对以下列病原体敏感:鼠伤寒沙门氏菌

C5、麻疹病毒(中等)、利氏曼原虫、斑点热、立克次氏体和曼氏血吸虫。常用于单克隆抗体研究和生产。

2.C57BL/6品系

(1)遗传背景及亚系:1921年Little用Abbg Lathrop的小鼠株雌鼠57号与雄鼠52号交配,而得C57BL/6。亚系:C57BL/6、C57BL/6J、C57BL/6N等。

(2)毛色基因标记:aa、BB、CC(黑色)。

(3)主要遗传学特征:

a.免疫学特征:一般饲养条件下免疫球蛋白的量随年龄而增加,而到生后20个月时则IgG 增长缓慢,无菌饲养的绝对量较低。IgM水平较高,出生12月以后,有的个体超过

80ug/mL。无菌饲养的动物IgM量比一般饲养的高。细胞免疫低下者少见,这可能与自发肿瘤少有关。

b.形态学特征:在新生鼠中,雌鼠为16.8%,雄鼠3%为小眼或无眼症。0.6%后肢可见多趾症,另外水头症占2%-4%,耳头症占0.4%,交合不全占3%。

c.生理学特性:有强嗜酒精性。对放射性照射为中等强度感应度,LD50为630+4R。将雄鼠皮肤移植到同系的雌鼠身上,约20日被排斥掉,这是因为在组织相容性抗原中的雄抗原在C57BL中非常显著。

d.癌发生率:乳癌发生率低,为0-1%,白血病为7%-16%,化学致癌成功率低,放射性照射较容易诱发肝癌。

e.寿命:寿命最长为1200日(雌鼠平均:692日,雄鼠平均:676日)。

(4)饲养方面注意事项:繁殖率稍低,如给予高脂肪饲料,繁殖率可提高,刚离乳的幼仔可有原因不名的脱毛现象。

(5)特性和用途:乳腺癌发病率低。对放射物质耐受力强。眼畸形、口唇裂发生率达20%。淋巴细胞白血病发生率为6%。对结核杆菌、百日咳组织胶易感因子敏感。嗜酒精性高。是肿瘤学、生理学、遗传学等方面研究常用的品系。

3.C3H品系

(1)遗传背景及亚系:1921年strong将Baff albino的雌鼠与DBA的雄鼠进行杂交而获得的新品种。亚系:C3H/Bi、C3H/He、C3H/HeJ、C3H/Lt等。

(2)基因标记基因:AA、BB、CC(野鼠色)。

(3)主要遗传学特征:

a.免疫学特性:随着一般饲养年龄的增加,IgG值随之增加,在生后3个月则开始下降,IgG2a则基本不变。

b.免疫耐受诱导比较容易,C3H/He 8-10周龄鼠对PVP反应敏感。

c.生理学特性:血红细胞均比正常值低。雄鼠接触氯仿死亡率高。

d.癌发生率:乳癌,用于繁殖的雌鼠占85%-100%,未妊娠的雌鼠占70%-100%;白血病雌鼠为0.5%以下,雄鼠为4%;肝癌雌鼠为0%。雄鼠为10%。

(4)特性和用途:乳腺癌发病率为97%(10月龄),对致肝癌因子敏感,对狂犬病毒敏感,补体活性高,干扰素产量低。主要用于肿瘤学、生理学、核医学、免疫学等方面的研究。

4.ICR小鼠

白色,为封闭群动物。又称Swiss Hanschka为美国Hanschka研究所饲养的瑞士种小鼠。后由美国肿瘤研究协会分送各地,取名ICR。我国1973年从日本国立肿瘤研究所引进。特征用途:体格健壮,繁殖力强,生长速度快,实验重复性较好。已广泛用于药理、毒理、肿瘤、放射性、食品、生物制品等的科研、生产和教学。

5.免疫缺陷小鼠

①裸小鼠-BALB/cAnN-malm-(BALBlc Nude):近交,在隔离器中维持。

起源:在Charles River Japan(CRJ)通过BALB/cABOIl-nu和BALB/cAnNCrj- nu交配和回交得到。具有严格家系记录的怀孕BALB/CArlNCrj-nu雌鼠在1985年引人CRJ,并在同年进行繁育。这种小鼠是近交的,遗传监测结果表明是BALB/c裸鼠。毛色:无毛,白化。

特性和用途:生长发育不良,繁殖力低下,易发生严重感染。胸腺缺失,为第11对染色体隐性遗传。由于无胸腺,仅有胸腺残迹或异常上皮,不能使T细胞正常分化,故T细胞免疫缺陷。B淋巴细胞正常,但功能缺陷,抗体主要为1gM,只有少量1gG。无接触敏感性。无移植排斥反应,因此可广泛用于兔疫学、肿瘤学和疾病发生机理的研究。

②SCID小鼠:近交,在隔离器中维持。

起源:该小鼠由Croy等在Guelph大学通过C.b-17sci 6bg/bg小鼠的杂交得到。毛色:白化。

特性和用途:该突变基因小鼠血清中缺乏免疫球蛋白,其细胞在活体外对测试B或T细胞功能的免疫学实验不发生反应,在组织病理反面表现为淋巴组织重度淋巴细胞减少。广泛应用于人类生理学、病理学、病毒学、免疫学和血液病学等方面的研究,它也在用于药物筛选和疫苗效应与安全性的试验。

③129小鼠

起源:该品系是杰克逊实验室的L.c-Stevens在研究工作中得到的。毛色:腹部为浅色的深浅坏纹。

特性和用途:肿瘤发生率高(主要为性腺肿瘤和辜丸畸胎瘤),多用于肿瘤学和生殖生理学等方面的研究。

大鼠系统解剖简述

大鼠系统解剖简述

第一章皮肤 一、皮肤由表皮、真皮和皮下组织构成。 二、皮肤腺有皮脂腺、汗腺和乳腺。 1、皮脂腺分布在毛囊周围。口角部、肛门、包皮 和乳头周围有特化的皮脂腺。 2、汗腺,大鼠的汗腺只局限于足垫的皮肤。 3、乳腺 数量大鼠的乳腺共有6对,胸部3对,腹部1对,鼠蹊部2对。个别的大 鼠有5对或者7对。 大小和形态随大鼠的年龄和性周期有明显的变化。 部位包埋在皮下组织中,由结缔组织隔与胸壁和腹壁松松地相连。 第 二章骨 一.脊柱大鼠的脊柱由57-61块脊椎骨组成,包括颈椎7、胸椎13、腰椎6、荐锥4、 尾锥27-31块。锥式C7T13L6S4Cy27 -31。骨性标志为第二胸椎,其棘突最 高,超过其它脊椎骨。 1、颈椎和其它哺乳动物一样,恒为7块,全无 肋骨相连,横突上具有横突孔,供锥动 脉通过。 2、胸椎13块,椎骨的长度由前向后逐渐增加(由 2毫米增加到4毫米),锥管的直径平 均为3.3毫米,较颈部的锥管为狭窄。 3、腰椎6块,每块锥体的长度比较一致,约6

-7毫米。锥管直径由前面的4毫米向 后逐渐缩小至2毫米。 二、胸骨 共分为6节,最前一节为胸骨柄,第二到第五 节称为胸骨体,最后一节为剑突,棒状 的剑突后面接一盘状的剑状软骨。胸骨 柄长约10毫米。 第三章肌 肉系统(省略) 第四章消 化系统 消化系统包括消化管及附属消化器官。消化管可 分为口腔、食管、胃、小肠和大肠等部。 附属消化器官有齿、舌、唾液腺、肝和 胰。 第一节消化管 一、口腔 1、舌全长约30毫米,不具有正中系带, 但是有两条侧系带。 一、食管 分为颈、胸、腹三部。成年大鼠食管的颈-胸段长度约75毫米,腹段通过膈的食管裂孔在膈后的长度约15毫米,食管外径约2毫米。 位置:食管主要是沿气管背侧走行,仅在颈部稍偏左侧。 一、胃 位置:横位于腹腔的左前部,其壁 面几乎完全为肝的左叶所覆盖。 大小:胃重为体重的0.5%,属单室 胃。

小鼠免疫细胞

免疫细胞的观察与小鼠脾脏淋巴细胞的提取 一、实验目的 1、明确各免疫器官分布与形态结构,能熟练找到各免疫器官,弄清中枢免疫器官与外周免疫器官的区别与联系。 2、掌握密度梯度离心法分离小鼠脾脏淋巴细胞的方法,熟悉脾脏淋巴细胞的形态与功能。 二、实验原理 脾脏是外周免疫器官之一,是人体最大的淋巴器官。它生在腹腔左上方,质地比较脆,容易外伤。一般来讲,脾脏有三大功能: 首先它是人体的“血库”,当人体休息、安静时,它贮存血液,当处于运动、失血、缺氧等应激状态时,它又将血液排送到血循环中,以增加血容量; 其次,脾脏犹如一台“过滤器”,当血液中出现病菌、抗原、异物、原虫时,脾脏中的巨噬细胞、淋巴细胞就会将其吃掉; 此外,脾脏还可以制造免疫球蛋白、补体等免疫物质,发挥免疫作用。脾是血循环中重要的滤过器,能清除血液中的异物、病菌以及衰老死亡的细胞,特别是红细胞和血小板。因此,脾功能亢进时可能会引起红细胞及血小板的减少。脾脏还有产生淋巴细胞的功能。 我们利用小鼠来观察脾脏的淋巴细胞。 小鼠淋巴细胞的比重为1.088,利用比重为1.088的淋巴细胞分离液,将脾细胞悬液置于分离液上层,通过梯度离心的方法,在分离液与脾细胞悬液交界液面处分离得到脾脏淋巴细胞。 三、实验器材 KM种小鼠,PBS缓冲液,淋巴细胞分离液,200目不锈钢网,解剖器械 四、实验步骤 1、杀死老鼠,取出小鼠的脾脏,在pbs缓冲液中冲洗干净。 2、将小鼠脾脏至于200目铜网中,铜网绑定在烧杯上面,剪碎、碾磨,边碾磨边加PBS 冲洗,制得脾细胞悬液。 3、将制得的脾细胞悬液转移到10ml的离心管中,1000r/min 5min离心洗涤,倒掉上清,加入5mlPBS再离心洗涤一次。 4、加入5mlPBS将洗涤的脾脏细胞吹散、悬浮,缓慢加入淋巴细胞分离液上层,细胞悬液与分离液体体积比为1:1。 5、2000r/min离心30min。 6、小心吸取中间层细胞,1000r/min 5min离心洗涤两次。 7、将制得的淋巴细胞滴于玻片,镜检。

人体免疫系统的免疫机理

人体免疫系统的免疫机理 院系:生命科学与工程学院 专业:08级生物科学 姓名:黄秀兰 学号:2 指导老师:吴小莉 【摘要】免疫系统是机体防卫病原体入侵最有效的武器,它能发现并清除异物、外来病原微生物等引起内环境波动的因素。免疫系统发挥生物学作用的三条途径分别是经典激活途径,旁路(替代)激活途径和凝集素(MBL)激活途径。人体的三道免疫防线(皮肤和黏膜,体液中的杀菌物质和吞噬细胞,免疫器官和免疫细胞)中由第三道防线所引起的免疫可分为体液免疫和细胞免疫。他们两者之间既存在着区别同时又相互协调发挥着作用,以协调机体保持一种相对稳定和谐的状态。

【关键词】免疫系统免疫免疫效应补体激活途径 在季节变迁之际,在南雁北飞之际,有人会被风一吹就凉了,有人却铁骨铜皮毫不介意天气冷暖。有些人感冒一两天就好,有些人却要折腾好久。众所周知,人体内的免疫系统有生理免疫、自身稳定和免疫监视的功能,到底是什么东西在悄悄导致作用效果的不一样呢,或者,在我们的身体里,那个叫做免疫系统的问题在如何工作呢?以下我们一起来做以下探究。 人体内有一个免疫系统,它是人体抵御病原菌侵犯最重要的保卫系统。这个系统由免疫器官(骨髓、胸腺、脾脏、淋巴结、扁桃体、小肠集合淋巴结、阑尾、胸腺等)、免疫细胞(淋巴细胞、单核吞噬细胞、中性粒细胞、嗜碱粒细胞、嗜酸粒细胞、肥大细胞、血小板(因为血小板里有IGG)等),以及免疫分子(补体、免疫球蛋白、干扰素、白细胞介素、肿瘤坏死因子等细胞因子等)组成。免疫系统分为固有免疫和适应免疫,其中适应免疫又分为体液免疫和细胞免疫。 那么什么又叫免疫?所谓“免疫”,是人体的一种生理功能,人体依靠这种功能识别“自己”和“非己”成分,从而破坏和排斥进入人体的抗原物质,或人体本身所产生的损伤细胞和肿瘤细胞等,以维持人体的健康。 人体共有三道免疫防线:第一道防线是由皮肤和黏膜构成的,他们不仅能够阻挡病原体侵入人体,而且它们的分泌物(如乳酸、脂肪

睡眠剥夺对大鼠免疫功能的影响

subtotal nephroectom y .Rats wer e randomized as three gr oups :Sham group ,chronic renal failure (CRF )group and treat -ment group .1,25(OH )2D 3was administrated by i .p .injection of 25pmol calcitriol once daily for ten days .After 31days ,ordinary parameters were measured ,and the expression of PCaR mRNA in all groups was investigated by semi -quantitative reverse transcription polymerase chain reaction (RT -PCR ).(1)The concentrations of serum creatinine (SCr ),PTH in CRF group were significantly higher than those in sha m gr oup (69.30±11.20vs 21.15±8.20μmol L ,P <0.05;256±72vs 41±7pg mL ,P <0.05),PTH levels in treatment group were significantly lower than that in CRF group (112±47vs 256±72pg mL ,P <0.05).(2)There was no difference in levels of PCaR mR NA between CRF group and sham group (1.100±0.153vs 1.074±0.119),and so did it between CRF group and treatment group (1.131±0.108vs 1.074±0.119).In this model ,2°HPT developed without change of expression of PCa mR NA .The treat -ment of 1,25(OH )2D 3in the 2°HPT induced by subtotal nephroectom y had no effect on the expression of PCaR mRNA . Key words : chronic renal failure ;parathyroid gland calciu m -sensing receptor ;secondary hyperparathyroidism 收稿日期:2000-11-06 修回日期:2001-04-25 文章编号:1001-6325(2001)05-0451-02 睡眠剥夺对大鼠免疫功能的影响 袁义强,乔 鹏,章 茜,王书春,张 朝,王雨若 (河南医科大学生理教研室,河南郑州450052) 中图分类号: Q428;R392 文献标识码:A 已有实验证明,睡眠剥夺或缺失可降低机体的防御能力。Brown [1]曾发现睡眠剥夺能使小鼠对流感病毒的抵抗力减弱,IL -1或胞壁肽可对抗这一改变。相继的研究显示白细胞介素与肿瘤坏死因子等细胞因子可不同程度地促进睡眠[2]。睡眠是否与免疫有关,本文拟通过对睡眠剥夺大鼠T 细胞和B 细胞增殖反应的变化,来探讨睡眠对免疫功能的影响。 1 材料与方法 1.1 主要仪器及药品:刀豆蛋白A (Con A ),北京中山生物公 司;脂多糖(LPS ),Sigma 产品;四甲基偶氮唑盐(MTT ),瑞士FLUKA 产品;十二烷基硫酸钠(SDS ),日本产品;二甲基甲酰胺(DMF ),上海试剂一厂;绵羊红细胞(SRB C )及豚鼠血清,由河南医科大学实验动物中心提供。酶联免疫检测仪,DG -3022型,华东电子管厂。 1.2 动物及分组:雄性SD 大鼠(河南医科大学实验动物中心提供)94只,体重200~263g 。实验分2部分:部分睡眠剥夺和持续性睡眠剥夺。每部分实验又分2阶段进行。部分睡眠剥夺的第一阶段(观察脾细胞增殖反应及脾细胞分泌抗体功能)用鼠22只,分成2组,即实验组与对照组,每组11 只;第二阶段(观察迟发型超敏反应和免疫器官的变化)动物22只亦分为实验组和对照组,各11只。持续睡眠剥夺的观察指标同上,第一阶段用鼠26只,实验组及对照组各13只;第二阶段24只,实验组与对照组各12只。1.3 动物模型的建立:参照Rechtschaffen 睡眠剥夺法加以改良。持续睡眠剥夺为剥夺24h 睡眠,连续4d 。部分睡眠剥夺为剥夺12h 睡眠,连续4d 。 1.4 Con A 诱导脾细胞增殖反应[3]:用20%SRBC 致敏实验组和对照组大鼠,继之对实验组大鼠剥夺睡眠,4d 后将两组动物同时处死,无菌操作快速取出脾脏,制备脾细胞悬液,细胞密度为 2.5×106cell mL 。96孔培养板每孔加细胞悬液0.1mL ,并加10mg L Con A 0.1mL 。37℃,5%CO 2培养箱中孵育66h 后,取出培养板,加5g L 的MTT 溶液10μL ,继续培养4h 后再次取出,从每孔中吸掉上清液0.1mL ,另加入0.1mL 的20%SDS ~50%D MF ,充分振动30min ,最后用酶联免疫检测仪测定其OD 值,检测波长570nm ,参考波长630nm ,以检测波长测出的OD 值减去参考波长测出的OD 值,这个OD 的差值来反应细胞的活性及其增殖能力。1.5 LPS 诱导脾细胞增殖反应[3]:按上述方法制备脾细胞悬

小鼠免疫组织及免疫细胞的观察

小鼠免疫组织及免疫细胞的观察 【实验原理】 免疫器官、组织及细胞是机体免疫系统的重要组成部分。中枢免疫器官包括胸腺和骨髓,是T淋巴细胞及其他各类免疫细胞发生、发育和分化的场所,外周免疫器官包括脾胀、淋巴结和粘膜相关淋巴组织是免疫应答的场所。各类免疫细胞直接参与免疫系统对抗原类物质的免疫应答,完善的免疫器官组织结构和正常的免疫细胞种类和数量是机体免疫功能发挥正常的基本条件。 【试剂和器材】 小鼠、棉签、解剖台、平皿、大头针、手术剪子、手术镊子、载玻片、瑞士染液、细胞筛 【操作方法】 1.取一只小鼠,采用颈部脱臼法处死,将小鼠放到解剖台上,沿腹中线剪开皮肤且不破坏腹膜和胸膜,剪开腹膜,打开腹腔和胸腔,观察胸腺所在的位置和形状。 2.分离脾细胞:取出脾胀,去除其周围的脂肪组织,用剪子剪碎脾脏,放入细胞筛中,用载玻片清研脾胀,滴加生理盐水,使脾细胞分散成细胞悬液。 3.脾细胞染色观察:取少量细胞悬液置于载玻片上,与室温晾干,加瑞士染色液甲染色1min,甩掉染液,用瑞士染色液乙染色5min,用自来水冲洗,让染液漂走,置于光学显微镜下观察染色脾细胞。 【结果观察】 小鼠脾细胞瑞士染色镜下观察 【注意事项】 1.正确抓取小鼠,防止被鼠咬伤。 2.脾脏分离完整,清研轻柔。 3.染色时间不宜过长或过短。. 【讨论】 脾脏具有多种重要的生理功能, 参与并调节血液、免疫、内分泌系统的运转, 绝非可有可无;脾脏功能在疾病的不同阶段扮演不同的角色,有时甚至完全相反, 即具有双向性、时向性的特点。 1.脾切除术后暴发性感染全脾切除术后 OPSI 的发生率约为 1 %~

2.4 %。虽然 OPSI的发生率不是很高,但脾脏切除后,在由肺炎球菌导致的感染中毒性休克中, 50 %患者的病情迅速进展, 并最终导致死亡。脾脏为全身最大的淋巴器官, 血循环相当丰富, 且脾脏具有延缓微循环的作用, 有利于清除和吞噬多种抗原, 减轻机体感染的发生。同时脾脏拥有大量重要的免疫细胞及免疫因子, 如 T 细胞、B 细胞、K 细胞、单核巨噬细胞、自然杀伤细胞、杀伤细胞、淋巴因子活化杀伤细胞(LAK 细胞)、树突状细胞。免疫因子包括 tufstin 因子、备解素即P因子、纤维结合蛋白免疫核糖核酸环磷酸鸟苷内源性细胞毒因子、调理素和补体等。而脾切除后,脾脏所产生的免疫因子及免疫细胞消失,血浆中免疫球蛋白IgM、IgG下降,巨噬细胞活性下降,补体旁路活性下降及自身抗体活性增强, 使免疫系统失衡,导致机体易感性增加,甚发生OPSI 。 2.关于tufstin是主要由脾脏产生的促吞噬激素, N ajjar 于 1970 年首先发现。是IgG分子Fc段的一种四肽(T hrLy s -P ro -A rg), 通过激活中性粒细胞发挥吞噬功能。需要在白细胞激肽酶及内羧基肽酶的共同作用下释放。脾切除、镰状红细胞贫血、特发性血小板减少性紫癜、A IDS 及一些腹部疾病可使其水平下降, 脾移植后可使 tufstin 的水平升高。虽然已发现其在免疫系统中的重要作用, 但具体机制仍不十分明了。理论上讲上述情况 tufstin 活性减低的原因包括低γ球蛋白血症、脾脏内中性粒细胞释放减少、白细胞激肽酶活性改变及 tufstin 分子异常。 3.脾脏的抗肿瘤功能机体发生肿瘤的主要原因为免疫系统监控失调, 而脾脏作为人体免疫系统的重要组成部分, 无疑与肿瘤的发生密切相关。临床观察发现, 脾脏不仅自身很少发生原发恶性肿瘤且少有转移瘤出现, 这也表明脾脏具有抗肿瘤的作用。目前大家较公认的观点为脾脏在肿瘤免疫中具有双向性、时向性的特点。表现为在肿瘤早期脾脏具有抗肿瘤作用, 而在晚期则表现为免疫抑制, 促进肿瘤生长。其抗肿瘤作用主要表现在:①可增强巨噬细胞的吞噬功能。②可增强巨噬细胞溶解瘤细胞及其过氧化酶作用。③通过增强 NK 细胞活性发挥抗肿瘤作用。④Chu 认为, tufstin 的抗肿瘤机制不仅通过增加巨噬细胞的肿瘤趋向性、吞噬能力和分泌能力, 更重要的是增加巨噬细胞产生氧自由基—超氧阴离子的能力, 对杀伤肿瘤细胞具有重要意义。关于脾脏边缘带淋巴瘤的研究表明, 肿瘤的发生也与脾脏免疫功能的下降有关。

免疫功能检测及临床意义

目录 免疫功能检测指标及临床意义 生化指标 1、免疫球蛋白G(IgG) 单位:克/升(g/L)。 单相免疫扩散或免疫比浊法:脐带血~克/升,新生儿~克/升,1~6个月~克/升,6个月~岁~克/升,6~12岁~克/升,12~16岁~克/升,成人~克/升。

增高:常见于免疫球蛋白G型多发性骨髓瘤、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、黑热病、慢性肝炎活动期及某些感染性疾病。 降低:常见于肾病综合征、自身免疫性疾病、原发性无丙种球蛋白血症、继发性免疫缺陷及某些肿瘤等。 2、免疫球蛋白A(IgA) 单位:毫克/升(mg/L)。 参考值:新生儿0~120毫克/升,1~6个月30~820毫克/升,6个月~2岁140~1 080毫克/2~6岁230~1900毫克/升,6~12岁290~2 700毫克/升,12~16岁500~3 000毫克/升,成人710~3 350毫克/升。 增高:常见于免疫球蛋白A(IgA)型多发性骨髓瘤、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、肝硬化、湿疹、血小板减少及某些感染。 降低:常见于自身免疫性疾病、输血反应、原发性无丙种球蛋白血症、继发性免疫缺陷及吸收不良综合征。 3、免疫球蛋白M(IgM) 单位:毫克/升(mg/L)。 单相免疫扩散法或免疫比浊法:新生儿50~200毫克/升,1~6个月150~700毫克/升,6个月~2岁250~1 300毫克升,2~6岁350~1 500毫克/升,6~12岁400~1 800毫克/升,12~16岁500~1 800毫克/升,成人700~2 000毫克/升。 增高:常见于类风湿性关节炎、巨球蛋白血症、系统性红斑狼疮、黑热病、肝病及某些感染性疾病。 降低:常见于原发性无丙种球蛋白血症、继发性免疫缺陷等。 4、免疫球蛋白D(IgD) 单位:毫克/升(mg/L)。 参考值:成人血清免疫球蛋白D(IgD)为0~80毫克/升。 增高:见于免疫球蛋白D型骨髓瘤、慢性感染、结缔组织病、某些肝病和少数葡萄球菌感染者。 降低:见于各种遗传性和获得性免疫缺陷病。 5、免疫球蛋白E(IgE) 单位:毫克/升(mg/L)。 EIA法:成人为~毫克/升。

复旦大学免疫实验小鼠脾脏单个核细胞分离及细胞计数

小鼠脾脏单个核细胞分离及细胞计数 实验时间:____________ 实验地点:_____________ 实验人:__________________ 1实验原理 小鼠脾脏位于上腹部左后侧,体积较大,长条形,属于外周免疫器官。 外周血中淋巴细胞可经再循环驻如脾脏等外周免疫器官的特定区域,所以富含各 类免疫细胞。 免疫细胞的分离:采用红细胞裂解法,是根据细胞对渗透压变化的敏感度。 红细胞由于细胞结构较为简单,仅有细胞膜结构,对于膨胀的耐受能力较差,因此绝大部分就会涨破,受到破坏。是一种比较温和的去除红细胞最简便易行的方法。 2实验材料: 1)健康小鼠 2)手术器械(剪刀、镊子)、解剖板 3)70汇醇 4)PBS缓冲液、红细胞裂解液(ACK 5)0.2%台盼蓝 6)细胞计数板、计数器 7)离心机 8)显微镜 3实验方法: 3.1取小鼠脾脏 将小鼠颈椎脱位处死,用酒精消毒。 用剪刀剪开背部皮肤,再找到脾脏,用镊子夹出脾脏并剪除周围组织。 3.2制备单个核细胞悬液

将取出的脾脏置于盛有3mlPBS缓冲液的平皿中,然后再置于尼龙指套中,用 针芯轻轻碾压使得单个核细胞悬浮于平皿中。 吸取平皿中细胞悬液置于刻度离心管(15ml)中,以1500rpm离心10min, 弃去上清液,加入ASK至2-3ml,轻轻吹打混匀并放置2min,以破坏红细胞。然后加入PBS缓冲液至10ml,以1500rpm离心10min。 弃去上清液,用PBS缓冲液定容至2ml,吹打混匀即为小鼠脾脏单个核细胞悬液。3.3 计算细胞浓度 稀释十倍,随机选取一个大方格计数 细胞计数为324个,计算细胞浓度为324X 104X 10=3.24 X 107/ml 3.4 计算细胞活力 在总计为324个细胞中计数,死亡细胞有16 个,计算细胞活力为: 324- 16/324 X 100%=95.1% 在理论范围之内 4 实验结果 4.1 研磨脾脏得到细胞悬液 本实验中将小鼠的脾脏放入尼龙指套内,置于少量PBS液中缓慢研磨,获得细胞悬液。实验中,我们发现尼龙指套不能滤去所有结缔组织,操作中会有结为絮状团块的结缔组织。这些结缔组织在离心后会和细胞绞缠在一起,去除十分麻烦,而且会损失细胞。应该在离心之前尽早用吸管吹打后小心弃去(这样损失的细胞比较少,造成较小的误差)。 研磨脾脏时的力度、时间、温度都会影响细胞的活性。所以应置于冰上快速、轻柔地研磨,置于液体中避免干磨。我们在实验室室温下碾磨,造成细胞破碎较多,影响最终实验结果。 4.2 白细胞计数

人体的免疫功能知识点

第一节人体的免疫功能 1.第一道防线和第二道防线 第一道防线:皮肤、黏膜 作用:阻挡或杀死病原体,清除异物 第二道防线:体液中的杀菌物质和吞噬细胞 作用:溶解、吞噬病原体(溶解多指唾液和泪液中的溶菌酶,吞噬多指血液中的吞噬细胞) 2.非特异性免疫 第一道防线和第二道防线都是与生俱来的,对多种病原体都有防御功能,因此叫做非特异性免疫。 3.特异性免疫 (1)定义:人体通过淋巴细胞产生抗体的免疫功能是后天获得的,只针对某一种特定的病原体或异物起作用,因此叫做特异性免疫。 (2)抗体:病原体侵入人体以后,能够刺激淋巴细胞产生一种抵抗该病原体的特殊蛋白质。 (3)抗原:引起人体产生抗体的物质叫抗原。抗原包括病原体、异物。 (4)第三道防线的组成以及功能 组成:免疫细胞和免疫器官 功能:产生抗体,消灭抗原(某种抗体只与刺激它产生的那种抗原结合,促进吞噬细胞吞噬病原体,或使病原体失去致病性。) (5)抗原被清除后,抗体存留在体内,且人体在一定的时间内仍保持产生相应抗体的能力。 (6)淋巴结、脾脏等淋巴器官中的吞噬细胞属于第二道防线,而淋巴结、脾脏等淋巴器官本身则属于第三道防线 特别提醒:①抗体是人体自身产生的,具有保护自身的蛋白质,抗体产生后在体内存留时间不同,如天花病毒抗体会永久的存留,但感冒病毒抗体只能存留短暂的时间。②一种抗体只能抵抗一种抗原,而且一种抗体只能受相应的抗原刺激后形成。 免疫是人体的一种防御功能,人体依靠这种功能识别‘‘自己’’和‘‘非己’’成分,能破坏和排斥进入人体内的抗原物质,清除自身产生的损伤细胞和肿瘤细胞,维持人体内部环境的平衡和稳定。 6.免疫的功能常见病症 防御功能过强则易导致过敏,过低则容易发生反复感染 自我稳定功能异常时出现自身免疫疾病,如类风湿性关节炎 免疫监视功能缺乏或过低,容易导致肿瘤的形成 7.特异性免疫分为自然免疫和人工免疫 8.预防接种就是把预防某种传染病的疫苗接种到人体,刺激人体的免疫系统,使其在不发病的情况下产生抗体,获得免疫功能。 9.预防传染病最有效的方法是预防接种。 10.疫苗是一种减活的、死亡的或不完整的病原体。 11.卡介苗是预防结核病;百白破三联混合制剂是预防百日咳、白喉和破伤风;乙脑是指流行性乙型脑炎;流脑是指流行性脑脊髓膜炎。

大鼠系统解剖简述概要

第一章皮肤 一、皮肤由表皮、真皮和皮下组织构成。 二、皮肤腺有皮脂腺、汗腺和乳腺。 1、皮脂腺分布在毛囊周围。口角部、肛门、包皮和乳头周围有特化的皮脂腺。 2、汗腺,大鼠的汗腺只局限于足垫的皮肤。 3、乳腺 数量大鼠的乳腺共有6对,胸部3对,腹部1对,鼠蹊部2对。个别的大鼠有5对或者7对。 大小和形态随大鼠的年龄和性周期有明显的变化。 部位包埋在皮下组织中,由结缔组织隔与胸壁和腹壁松松地相连。 第二章骨 一.脊柱大鼠的脊柱由57-61块脊椎骨组成,包括颈椎7、胸椎13、腰椎6、荐锥4、尾锥27-31块。锥式C7T13L6S4Cy27-31。骨性标志为第二胸椎,其棘突最高,超过其它脊椎骨。 1、颈椎和其它哺乳动物一样,恒为7块,全无肋骨相连,横突上具有横突孔,供锥动脉通过。 2、胸椎13块,椎骨的长度由前向后逐渐增加(由2毫米增加到4毫米),锥管的直径平均为3.3毫米,较颈部的锥管为狭窄。 3、腰椎6块,每块锥体的长度比较一致,约6-7毫米。锥管直径由前面的4毫米向后逐渐缩小至2毫米。 二、胸骨 共分为6节,最前一节为胸骨柄,第二到第五节称为胸骨体,最后一节为剑

突,棒状的剑突后面接一盘状的剑状软骨。胸骨柄长约10毫米。 第三章肌肉系统(省略) 第四章消化系统 消化系统包括消化管及附属消化器官。消化管可分为口腔、食管、胃、小肠和大肠等部。附属消化器官有齿、舌、唾液腺、肝和胰。 第一节消化管 一、口腔 1、舌全长约30毫米,不具有正中系带,但是有两条侧系带。 一、食管 分为颈、胸、腹三部。成年大鼠食管的颈-胸段长度约75毫米,腹段通过膈的食管裂孔在膈后的长度约15毫米,食管外径约2毫米。 位置:食管主要是沿气管背侧走行,仅在颈部稍偏左侧。 一、胃 位置:横位于腹腔的左前部,其壁面几乎完全为肝的左叶所覆盖。 大小:胃重为体重的0.5%,属单室胃。 形态:胃小弯朝向背前方,食管在其中部入胃。胃大弯朝向腹后方,其边缘有双层的口袋状大网膜。贲门部外观呈半透明状,内壁有粘液腺。 三、小肠 1、十二指肠 长度:长约100毫米。 位置:从幽门发出向右后行,再折向前终于右侧。可分为降支(向右后行)、横支(水平部)、升支(向前行),它们构成一个不完全的环,包围着部分胰腺。

免疫常用小鼠

常用小鼠品系 1.BALB/c品系 (1)遗传背景及亚系:1913年Bagg获得的白化株(albino stock)小鼠。1923年以后由Mac Dowell进行了近亲繁殖,在1932年繁殖到26代,最后Snell将其育成。 亚系:BALB/c、BALB/ced、BALB/cJ、BALB/cAnN等。 (2)毛色基因标记:AA、bb、cc。 (3)主要遗传学特征: a.免疫学特征:易患慢性肺炎。初生时摘除胸腺的动物58%可发生侏儒症。在6月龄时,多数个体非常明显地出现高血球蛋白血症。免疫球蛋白绝对量的多少又因饲养条件的不同而有差异。在BALB/c鼠腹腔注射矿物油,可产生多发骨髓瘤,其发生率可高达60%。其发生率可因亚系的不同或饲养条件的不同而有差异。 b.生理学特性:血压较高,可自发高血压症,大部分雄鼠在20月龄时发生脾的淀粉样边。对X线照射敏感性高,LD50为500R,与其它品系比较,缺乏毛的光泽,甚至有脱毛现象。 c.癌发生率:乳癌发生率低,为3%;肾上腺癌、肺癌时有发生。雌鼠的几种癌发生率为:肺癌2%,网状肉瘤8%,血管瘤6%,淋巴肉芽肿4.5%。 d.老化及寿命:老年鼠心脏有某些病变,两性小鼠均有动脉硬化,SPF级雌性小鼠寿命为561日,雄鼠为509日。 (4)饲养方面注意事项:雌鼠繁殖利用周期较长,约1年,是比较容易繁殖的品系。四周龄以后不同窝的雌鼠有相互咬架的现象,故不同窝的鼠不宜同笼饲养。繁殖室26℃-27℃为宜,由于易患肺炎,所以不要与其他品系动物同室饲养。在其他品系的常在菌,对于本品系则可引起发病。 (5)特性和用途:对慢性肺炎敏感,特别对放射线敏感。乳腺肿瘤发病率低,当用乳腺肿瘤病毒(MTV)诱发时发病率增高。对促性腺激素有超排卵反应。两性小鼠均有动脉硬化症。对弓形体易感。补体活性高,对矿物油诱发浆细胞瘤敏感。偶见甲状腺肿瘤。干扰素产量低,对百日咳组织胺易感因子敏感。对以下列病原体敏感:鼠伤寒沙门氏菌 C5、麻疹病毒(中等)、利氏曼原虫、斑点热、立克次氏体和曼氏血吸虫。常用于单克隆抗体研究和生产。 2.C57BL/6品系 (1)遗传背景及亚系:1921年Little用Abbg Lathrop的小鼠株雌鼠57号与雄鼠52号交配,而得C57BL/6。亚系:C57BL/6、C57BL/6J、C57BL/6N等。 (2)毛色基因标记:aa、BB、CC(黑色)。 (3)主要遗传学特征:

免疫功能检查参考值及临床意义

免疫功能检查参考值及临床意义 2010-09-24 15:32:56 作者:佚名来源:网络转载 1.免疫球蛋白G(IgG) 【单位】克/升(g/L)。 【正常值】单相免疫扩散或免疫比浊法:脐带血7.6~17.0克/升,新生儿7.0~14.8克/升,1~6个月3.0~10.O克/升,6个月~2岁5.0~12.O克/升,6~12岁7.0~15.0克/升,12 1.免疫球蛋白G(IgG) 【单位】克/升(g/L)。 【正常值】单相免疫扩散或免疫比浊法:脐带血7.6~17.0克/升,新生儿7.0~14.8克/升,1~6个月3.0~10.O克/升,6个月~2岁5.0~12.O克/升,6~12岁7.0~15.0克/升,12~16岁7.5~15.5克/升,成人7.6~16.6克/升。 【临床意义】 (1)增高:常见于免疫球蛋白G型多发性骨髓瘤、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、黑热病、慢性肝炎活动期及某些感染性疾病。 (2)降低:常见于肾病综合征、自身免疫性疾病、原发性无丙种球蛋白血症、继发性免疫缺陷及某些肿瘤等。 2.免疫球蛋白A(IgA) 【单位】毫克/升(mg/L)。 【正常值】单相免疫扩散法或免疫比浊法:新生儿0~120毫克/升,1~6个月30~820毫克/升,6个月~2岁140~1 080毫克/升,2~6岁230~1 900毫克/升,6~12岁290~2 700毫克/升,12~16岁500~3 000毫克/升,成人710~3 350毫克/升。 【临床意义】 (1)增高:常见于免疫球蛋白A(IgA)型多发性骨髓瘤、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、肝硬化、湿疹、血小板减少及某些感染性疾病。 (2)降低:常见于自身免疫性疾病、输血反应、原发性无丙种球蛋白血症、继发性免疫缺陷及吸收不良综合征。 3.免疫球蛋白M(IgM) 【单位】毫克/升(mg/L)。 【正常值】单相免疫扩散法或免疫比浊法:新生儿50~200毫克/升,1~6个月150~700毫克/升,6个月~2岁250~1 300毫克/升,2~6岁350~1 500毫克/升,6~12岁400~1 800毫克/升,12~16岁500~1 800毫克/升,成人700~2 000毫克/升。 【临床意义】

最新初中生物-人体的免疫功能 精品

第六章免疫与健康 第一节人体的免疫功能 学情分析: 本节内容介绍了人体的三道防线和免疫的相关知识,主要为儿童进行的计划免疫就是以这些知识作为基础的。本部分教学内容生僻艰深,学生不容易理解,涉及到了人的皮肤、呼吸系统、消化系统和循环系统等。针对这一情况,可从学生司空见惯的皮肤发炎和生病的实际经验入手,以激发学生的兴趣,进而寻求解决问题的方法。 教学目标: 1、概述人体免疫的概念、功能和作用。 2、举例说明人体的特异性免疫和非特异性免疫。 3、描述计划免疫,列举计划免疫的实例,认同计划免疫的意义。 教学重点: 1、特异性免疫和非特异性免疫的区别。 2、特异性免疫的免疫的概念。 3、计划免疫的意义。 教学难点: 1、特异性免疫的免疫的概念。 2、免疫的功能。 课时安排:一课时 教学程序: 一、引言: 日常生活中,同样是吃了鱼虾等食物,有的人会出现过敏现象,这是为什么?当有些病人需要器官移植时,为什么要找到与之相“匹配”的器官?在流感流行期间,为什么有的的人容易被传染,而有的人不易被感染?为什么患过腮腺炎的人一般不会再患第二次?这与人体的免疫功能有着密切的关系。 幻灯片: 第六章免疫与健康第一节人体的免疫功能

二、新授: 在我们生活的环境中有许多病原体,人之所以能健康的生活,是因为人体有保护自身的三道防线。 幻灯片: 人体的三道防线: 第一道:皮肤和黏膜 第二道:体液中的杀菌物质和吞噬细胞 第三道:免疫细胞和免疫器官 (一)、生来就有的免疫力: 幻灯片:P102图3.6-1人体的先天性免疫: (1)皮肤的表皮细胞排列紧密:保护和杀菌作用 (2)呼吸道黏膜上有许多纤毛:阻挡和清除异物 学生观察图片,分析讨论: 1、皮肤和呼吸道黏膜上的纤毛,在防御病原体入侵时分别起到了什么作用? 2、什么样的皮肤会让病原体容易侵入? 3、皮肤的完整性对人体有什么重要意义? 幻灯片:动画 (3) 血液、唾液和泪液中的溶菌酶:破坏病菌的细胞壁,使病菌溶解 (4)血液中的吞噬细胞:吞噬和消化各种病原体 由此总结得出:上述两道藩防线是针对多种病原体的防御功能,使人人生来就有的,因此叫做非特异性免疫,也叫做先天性免疫。病原体一旦侵入人体,人体首先调动非特异性免疫进行防御。 (二)后天获得的免疫力: 提问学生是有否患过腮腺炎,这种病是由什么引起的,得过的同学又没有患第二次等问题,说明患过流行性腮腺炎的人一般不会患第二次,他们能够抵抗腮腺炎病毒的侵袭。这是为什么呢? 分析与讨论: 幻灯片:课本第118页图3.6-2 特异性免疫部分过程示意图 回答下列问题: (1)腮腺炎病毒与抗原之间是什么关系?

常见免疫学指标的临床意义

一、抗核抗体谱(ANA谱) 1、ANA定义:抗核酸(Nucleic acid)和核蛋白(Nucleoprotein)抗体的总称。 2、ANA分类: 抗DNA抗体:抗单链(ds)-DNA抗体抗双链(ds)-DNA抗体抗左旋-DNA抗体 抗组蛋白抗体:抗总组蛋白抗体(AHA) 抗H1、H2A、H2B、H3、H4 和H2A-H2B抗体 抗非组蛋白抗体: 抗核可溶性成分(ENA):抗PM-1、rRNP、Sm、RNP 、SSA 、SSB、Scl-70、Jo-1、PCNA等 抗着丝点抗体(ACA) 抗核仁抗体 抗其他细胞成分: 指抗细胞浆成分的抗体(ANCA) 3、ANA阳性的定义:一般将超过95%正常人群ANA水平的数值定义为ANA阳性,对大多数实验室而言,通常认为IFANA滴度1:80为阳性。 4、ANA阳性的临床意义:可见于多种临床情况,除了风湿病外,也可见于正常人或非风湿病: (1)健康人:年龄越大,阳性率越高(>60岁的阳性率为20%~25%),但为低滴度,均质型或弥漫型; (2)有SLE、SS或SSc 家族史的一级亲属,有近50%为阳性; (3)肺疾病:原发肺纤维化、原发肺动脉 高压或石棉所致的肺纤维化;(4)肝病和血液病:活动性肝炎、原发胆汁性肝硬化、酒精性肝病、白血病、骨髓瘤、淋巴瘤、ITP或自身免疫性溶血性 贫血等; (5)慢性感染: 寄生虫、结核杆菌、麻风杆菌、沙门菌或克雷伯杆菌感染等; (6)其他:Ⅰ型糖尿病, 多发性硬化,终末期肾病,器官移植后等。注意在正常人中一般ANA滴度较低。ANA阳性的意义需结合临床资料综合分析,ANA阳性并不能确立某种临床诊断,反之,ANA阴性也不能排除自身免疫性病。 附正常人% ≧1:40 20-30,≧1:80 10-12 ,≧1:160 5 ,≧1:320 3 临床上如果ANA滴度≥1:1000肯定可以考虑为结缔组织病或者自身免疫性疾病。具体是哪一种疾病,要结合其他临床病史、症状体征和实验室结果综合考虑来下结论。如果对初发患者ANA(+)≤1:320不能肯定,但也能排除结缔组织病或者自身免疫性疾病可能,也要结合临床病史、症状体征和实验室结果综合考虑来下结论。一般ANA=(+1:100)时,临床意义也不大。因为除对标本稀释处理之外,实验室在对Hep细胞和肝片质控板免疫荧光吸收值是以1:100为定标。如血管炎ANA可阳性,但多为低滴度。借用一句话总结。“不怕做不到,就怕想不到”。 5、ANA阴性的意义,除了上述的阳性、假阳性意义外,也要注意阴性的意义,抗核抗体阴性的原因:正常人或非结缔组织病患者,其体内不存在ANA ;疾病初期,ANA含量不足以被测出或临床治疗有效,病情缓解,ANA确实转阴;其他实验室误差,特别是试剂,有时试剂有问题会让你很郁闷,有的病人出现ANA 谱三阳,而且是一段时间内多个病人,或明显的SLE,但抗体就是阴性,让你很郁闷,这时除排除其他情况外,注意一下实验试剂盒,是否是同一批试剂检测的。 6、抗ds-DNA 抗体:对SLE诊断有高度特异性,目前公认为SLE的特异性抗体,并与疾病活动有关,可用于监测SLE病情变化和观察药物疗效。 7、抗Sm:是SLE标记抗体,帮助前瞻性和回顾性诊断,常与nRNP抗体共存。 8、抗nRNP在多种结缔组织病中存在,高滴度有利于MCTD的诊断。nRNP抗原与rRNP不同,前者是含尿嘧啶的核糖核蛋白,主要在核内,而rRNP是主要在胞浆内的磷酸蛋白,抗rRNP抗体与SLE 有关,尤其有精神神经症状的SLE阳性率较高 9、其他ANA谱,抗SSA和抗SSB与Sjogren?s Syndr ome相关,并可造成新生儿狼疮和先天性心脏传导阻滞;抗ScL-70为SSC的标记抗体,抗组蛋白抗体与多种结缔组织病有关,有助于药物性狼疮的诊断,抗核仁型抗体常与SSC有关;抗Jo-1是PM/DM的标记抗体;PCNA为SLE的特异性抗体,但ANA阳性且呈斑点型,对荧光法判断PCNA有干扰,因此首先注意排除实验室误差,PCNA在LE患者中阳性率约3-5%,且有报道其与狼疮患者发生弥散性增殖性肾小球肾炎相关,其他结缔组织病人中常为阴性。

小鼠免疫

小鼠免疫 免疫是单抗制备过程中的重要环节之一。即用目的抗原免疫小鼠,抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官,刺激相应B淋巴细胞克隆,使其活化、增殖,并分化成为致敏B 淋巴细胞。 一、血清效价的影响因素 小鼠免疫效价的高低直接影响单抗的制备。单抗免疫程序不同,包括免疫用的动物,抗原的性质、抗原量、免疫途径、免疫间隔时间、是否应用佐剂均会影响免疫效果。 二、免疫材料 1.免疫用的动物 抗原与免疫动物种属差异越远越好,小鼠、大鼠、亚美尼亚仓鼠和兔中分离的淋巴细胞的杂交瘤技术已经很成熟。小鼠是极好的免疫接种对象,原因是:1)小鼠易操作;2)多个纯系株易得到且价格合理;3)有很多试剂可用以检测鼠源免疫球蛋白;4)小鼠对外来蛋白质能产生良好的免疫应答;5)小鼠淋巴细胞能够和多种鼠源骨髓瘤细胞系发生有效融合。 2.免疫原(抗原) 颗粒性抗原:颗粒性抗原免疫原性强,如肿瘤细胞、淋巴细胞、?细菌等可作为抗原,不加佐剂直接进行免疫,就可获得较好的免疫效果。 可溶性抗原:因其免疫原性较弱,一般要加佐剂,如系半抗原,?应先制备成人工免疫原,再加佐剂。 免疫原的形式会影响宿主体液免疫产生的抗体谱,因此选择免疫原制备抗体时应该考虑到所制备抗体的最终用途,并应该根据其用途决定何种方法筛选抗体

更合适。一般认为,影响免疫血清中lg亚类谱的因素主要包括免疫原、接种途径、佐剂和动物遗传背景等。且主要由初次基础免疫所决定,加强免疫的作用主要是提高特异性抗体的滴度。 3.佐剂 目的:1)增强抗原对机体的免疫原性;2)增强抗体的产生能力;3)为制备出高效价的免疫血清;4)增强可溶性抗原的免疫原性;5)在某种情况下,改变Ag免疫应答类型;6)延长抗原在免疫动物的时间;7)改变抗原的分布;8)增强共刺激信号和激活免疫系统而刺激淋巴细胞增殖。 种类:氢氧化铝佐剂、明矾佐剂(常用于肌肉、皮下注射)、弗氏佐剂。 弗氏佐剂是最主要的免疫佐剂,热处理杀死的分歧杆菌可以引起炎症反应,募集淋巴细胞到抗原沉积部位,但若重复刺激可导致肉芽肿的形成,故不能重复使用。 三、免疫策略 1.免疫途径 途径的选择取决于抗原的生物学特性和理化特性。有静脉注射、腹腔注射、肌肉注射、皮内注射、脾内注射、皮下注射、淋巴结注射等。 脾内免疫会产生IgM 类抗体,分泌该类抗体的杂交瘤细胞株相对IgG 类较不稳定,且IgM 类抗体的一些性质测定会有困难,一般不建议使用。脾内免疫操作困难,实验动物极易死亡,所以也不常用此种方法。 一般常用皮下或背部多点皮内注射,每点注射0.1ml左右。 2.免疫方案 典型的免疫策略依赖于抗原的反复刺激,以增强特异性免疫应答并使其成熟。

黄芪多糖对小鼠免疫功能的影响

黄芪多糖对小鼠免疫功能的影响 发表时间:2013-12-10T10:07:32.950Z 来源:《医药前沿》2013年11月第31期供稿作者:朱永俸1 石高星1 吴剑平1 李珊珊1 袁婧1 黄立师1 刘 [导读] 长期以来,人类生活在一个充满危险的环境,得以存续的同时,也获得了非凡的免疫力。朱永俸1 石高星1 吴剑平1 李珊珊1 袁婧1 黄立师1 刘佳2(通讯作者) (1长沙医学院2010级生物技术专业湖南长沙 410219) (2长沙医学院生物学教研室湖南长沙 410219) 【摘要】目的探讨黄芪多糖对小鼠的免疫功能的影响。方法连续28天黄芪多糖以4.0,1.0,0.25g/kg浓度给予小鼠灌胃,检测小鼠的胸腺,脾脏指数及小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力。结果低浓度组的胸腺指数高于空白组(P=0.017),中浓度组的脾脏指数高于空白组(P=0.002),其他各组差别无统计学意义。各组小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬率、吞噬指数无显著差别(F=2.088,P=0.140)。结论黄芪多糖可能通过提高胸腺和脾脏的功能从而增强免疫力,但对参与非特异免疫的巨噬细胞影响不明显。【关键词】胸腺脾脏指数吞噬能力 【中图分类号】R965 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752(2013)31-0254-02 长期以来,人类生活在一个充满危险的环境,得以存续的同时,也获得了非凡的免疫力。免疫力低下的机体易于感染、易于生病;如引发过敏反应、自身免疫病等,因此优化免疫力已经成为了医学研究的热点之一。中药黄芪的使用迄今已有2000多年的历史,有利尿、抗疲劳、抗衰老、抗应激、降压等多方面作用,关于黄芪是否能够增强机体免疫能力尚需研究。黄芪的主要活性成分是黄芪多糖,因此,本实验通过给小鼠连续灌胃黄芪多糖,研究黄芪多糖对小鼠免疫力是否具有提升作用。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 主要试剂和仪器 黄芪多糖(纯度70%,批号:20130310);电子恒温不锈钢水浴锅(上海市南阳仪器有限公司);光学显微镜(MOTIC公司);1%鸡红细胞悬液;6%淀粉肉汤(含0.3%台盼蓝));吉姆萨染液;其他试剂为分析纯。 1.1.2 动物 40只SPF级昆明小鼠,雄性,体重(22±2)g,由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供,批号43004700000750,长沙医学院湖南省重点建设学科标准动物室饲养。 1.2 方法 1.2.1 动物处置 实验以4.0,1.0,0.25g/kg浓度设3个剂量组,另设1个对照组,每组10只小鼠,采用灌胃法,对照组给予等量蒸馏水,每天一次,连灌28天,第27、28天向小鼠腹腔注射6%淀粉肉汤1ml。第29天,称重后腹腔注射20%鸡红细胞悬液0.5-1ml,轻柔小鼠腹部。30min后,再向腹部内注射0.5ml小鼠生理盐水,轻柔小鼠腹部。3min后,将小鼠以颈部脱位法处死。小鼠剪开腹腔,用不装针头的注射器吸取腹腔液涂片,吉姆萨染色后,检测巨噬细胞吞噬能力。分离脾脏和胸腺,洗净吸干水分,称重。 1.2.2 胸腺和脾脏指数的测定 摘取小鼠的胸腺和脾脏,用滤纸吸干残血后,称重(mg),按公式计算胸腺指数和脾脏指数,即:胸腺指数=胸腺重量/(小鼠体重×10) 脾脏指数=脾脏重量/(小鼠体重×10)(每10 g小鼠体重含有的胸腺或脾mg重量,mg/10 g)1.2.3 巨噬细胞吞噬能力的测定 剪开腹部皮肤,将注射器伸入小鼠腹腔中,吸取腹腔液,把腹腔液滴加在洁净的载玻片上,然后将载玻片置于电子恒温不锈钢水浴锅中,在37℃恒温孵育30分钟。将载玻片取出,用水轻轻的冲洗,去除上清和未粘附在玻片上的细胞在室温下晾干。再用甲醛固定3分钟,晾干后用吉姆萨染色,冲洗多余的染液晾干。在油镜下观察计数100个巨噬细胞,计算出吞噬百分率(吞噬了鸡红细胞的巨噬细胞所占比率)和吞噬指数(每100个巨噬细胞中吞噬了红细胞个数)。 1.2.4 统计学方法 采用SPSS 19软件进行数据分析处理,数据以`x±s表示。多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较方法采用LSD法,P<0.05有统计学意义。 2 结果 2.1黄芪多糖对胸腺指数,脾脏指数的影响 经过28天不同浓度的黄芪多糖灌胃,各组的胸腺指数存在区别(F=3.588,P=0.036),其中低浓度组的胸腺指数高于空白组(P=0.017),其他各组差别无统计学意义。各组的脾脏指数存在区别(F=4.914,P=0.012),其中中浓度组的胸腺指数高于空白组(P=0.002)。 表1 黄芪多糖对小鼠胸腺指数与脾脏指数的影响(x-±s,n=10)

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