无菌检查操作规程2015

无菌检查操作规程

1.目得

建立无菌检查标准操作规程，确保检查结果准确、可靠。

2.使用范围

本公司无菌产品得无菌检查

3.职责

质量部QＣ

4.依据

２０15版《中国药典》通则1101

GＢ／T 1９973、２－2005（ISO117３7—2：1998)ﻫ《疗器械得灭菌微生物学方法第2部分:确认灭菌过程得无菌试验》

GＢ/T １４233、2-2005

《医用输液、输血、注射器具检验方法第2部分:生物学试验方法》

5.内容

5.1.无菌检查环境保障

5.1.1.无菌检査得所有操作均需在严格控制微生物污染得环境下进行，即无菌检

査应在环境洁净度１0000级下得局部洁净度1００级得单向流空气区域内或隔离系统中进行。

5.1.2.操作环境得无菌保障程度将直接影响无菌检查结果,为了保证无菌检查用

洁净室(区)环境得稳定性,确保检查结果得可靠性,对洁净室(区)得环境定期监测并采取合理得措施保证洁净环境符合要求.

5.1.3.无菌检查全过程必须严格遵守无菌操作,防止微生物污染.

5.1.4.洁净区得温度、湿度等参数必须符合相应洁净级别得要求。

5.1.5.无菌检查操作还需要对检查环境进行监控，

5.2.培养基、稀释液、缓冲液

5.2.1.硫乙醇酸盐流体培养基,市售培养基干粉.除另有规定,接种后应置30～3

５℃培养．

5.2.2.胰酪大豆胨液体培养基,市售培养基干粉。接种后应置20~35℃培养。5.2.3.中与或灭活用培养基,按上述硫乙醇酸盐流体培养基或胰酪大豆胨液体培

养基得处方及制法，在培养基灭菌或使用前加入适宜得中与剂、灭活剂或表面活性剂，其用量同方法适用性试验。

5.2.4.胰酪大豆胨琼脂培养基，市售培养基干粉。

5.2.5.沙氏葡萄糖液体培养基，市售培养基干粉．

5.2.

6.沙式葡萄糖琼脂培养基,市售培养基干粉.

5.2.7.PH7、0氯化钠蛋白胨缓冲液,市售培养基干粉.

5.2.8.０、９％无菌氯化钠溶液。

5.2.9.培养基使用性检查

无菌检査用得硫乙醇酸盐流体培养基与胰酪大豆胨液体培养基等应符培养基得无菌性检査及灵敏度检査得要求.本检查可在供试品得无菌检査或与供试品得无菌检査同时进行。

5.2.9.1.无菌性检查:每批培养基随机取５支(瓶)，按各培养基规定得温度下培

养1４天，应无菌生长.

5.2.9.2.灵敏度检查

5.2.9.2.1.菌种:培养基灵敏度检查所用得菌株传代数不得超过５代(从菌种存中

心获得得干菌种第0代)，并采用适宜得菌种保藏技术进行保存，以证

试验菌株得生物学特性。

金黄色葡萄球菌[CMCC（B）２6003］

铜绿假单胞菌[CMCC（Ｂ)10 104］

枯草芽孢杆菌[CＭCC(B)63 501]

生孢梭菌［CMCC(B）６49４1]

白色念珠菌［CＭCＣ（F）９8 ００1]

黑曲霉［ＣＭCＣ（F)9800３］

5.2.9.2.2.菌液制备:接种金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌得培养物至

胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上,接种生孢梭菌

得培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中,３0〜35℃培养１8〜24小时；接

种白色念珠菌得培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂

培养基上,２0〜25℃培养24〜48小时,上述培养后得新鲜培养物用P

Ｈ7、0无菌化钠—蛋白胨缓冲液或0、9％无菌化钠溶液制成每lｍl菌

数小于10０cfｕ(菌落形成）得菌悬液。接种黑曲霉得培养物至沙氏葡

萄糖琼脂面培养基上，20〜25℃培养5〜7天,加人3〜5 ml ０、05％

（mｌ/ｍl) 聚山梨酯80得pＨ7、0无菌化钠—蛋白胨缓冲液或0、9%

无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱。然后，采用适宜得方法吸出孢子悬液至

无菌试管内,用０、05％(ml/ml)聚山梨醋8０得pＨ7、0无菌化钠-

蛋白胨缓冲液或０、9%无菌氯化钠溶液制成每lml孢子数量小于１

00cfu得孢子悬液。菌悬液若在室温下放置，应在2小时内使用;若保

存在2〜8℃在２4h 内使用。黑曲霉孢子悬液存在２〜8℃，在验证

过得贮存期内用。

5.2.9.2.3.培养基接种:取每管装量为12ｍl得硫乙醇酸盐流体培养基7支，分别

接种小于100cｆu得色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌各2支，另

1支不接种作为空白对照，培养3天；取每管装量为９mｌ得胰酪大豆

胨液体培养基7支,分别接种小于1０0ｃfu得草芽孢杆菌、白色念珠菌、

黑曲霉各2支,另1支不接种作为空白对照，培养5天。逐日观察结。

5.2.9.2.4.结果判定:空白管应无菌生长，加菌得管生长良好,说明该培养基灵敏度

符合规定。

5.3.方法试用性试验

进行产品无菌检查时，应进行方法适用性试验,以确认所采用得方法适合于产品得无菌检查。若检验程序或产品发生化可能影响检验结果时,应重新进行方法适用性试验。方法适用性试验按“5、４供试品得无菌检查”得规定及下列要求进行操作。对每一试验菌应逐一进行方法。

5.3.1.菌种及菌液得制备:大肠埃希菌[CMＣC(Ｂ)44 102]外,金黄色葡萄球菌、枯

草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉得菌株及菌液制同“５、2、

9、２培养基灵敏度检查"。大肠埃希菌得菌液制同金黄色葡萄球菌。

5.3.2.薄膜过滤法:每种培养基规定接种得供试品总量按薄膜过滤法过滤,冲洗,

在最后一次得冲洗液中加入小于100cfu试验菌,过滤。加硫乙醇酸盐流体培养基或胰酪大豆胨液体培养基至滤筒内.另取一装有同体积培养基得容器，加入等量试验菌,作为对照。置规定温度下培养,培养时间不得超过5天，各试验菌同法作。