腺病毒表达系统PPT
合集下载
腺病毒相关知识PPT教案
6、强体魄：按时作息，补充营养，
第17页/共24页
合理膳食，提高自身免疫力
双手要勤洗， 喷嚏掩口鼻。 居室长通风 ，没事少聚集。 赃物勿触口 ，吐痰包纸里。 感冒带口罩 ，染疫要隔离。
第18页/共24页
疑似病例的诊断标准
1、发病前8天内与腺病毒感染 确诊病例有过密切接触史，并 出现发热、干咳等临床症状
疑2似、病发例需病进前行医8天学隔内离曾，隔到离期过一腺般为病一毒周 感染流行地区，并出现发热、 干咳等临床症状 第19页/共24页
发热、咳嗽不一定是腺病毒感染
发热、咳嗽是最常见的上呼 吸道感染症状，引起发热咳嗽 的病因有很多，如病毒、细菌、 支原体、衣原体、真菌等感染 均可导致发热、咳嗽，因此出 现这两种症状并非就是腺病毒
不会导致死亡。
第14页/共24页
个人预防
1.了解防控知识，正确认识疾 病，提高防范意识
2.尽量避免到人群聚集性场所， 避免接触流感症状的患者
3.注意日常个人卫生，养成良 好的卫生习惯
4.注意防寒保第暖15页/，共24页提高免疫力 5.一旦出现发热、咳嗽、咽痛
具体措施
1、避患者：由于腺病毒主要通过飞沫传播，与患者说话距离应 在1.8米以上，尽量避免触摸患者接触过的物体。如衣物、 门把手、钱币和扶手等
第20页/共24页
感染，不必草木皆兵
疫情发生期间的应对措施
（1）营区实施封闭式管理，严 格控制人员进出，减少营区内 人员流动
（2）停止大型集会，减少室内 集中活动
（3）实行错时就餐、洗漱、洗
澡等，就餐时采用同向就坐方
式
第21页/共24页
（4）科学设置训练科目，降低
训练强度
疫情发生期间的卫生措施
第17页/共24页
合理膳食，提高自身免疫力
双手要勤洗， 喷嚏掩口鼻。 居室长通风 ，没事少聚集。 赃物勿触口 ，吐痰包纸里。 感冒带口罩 ，染疫要隔离。
第18页/共24页
疑似病例的诊断标准
1、发病前8天内与腺病毒感染 确诊病例有过密切接触史，并 出现发热、干咳等临床症状
疑2似、病发例需病进前行医8天学隔内离曾，隔到离期过一腺般为病一毒周 感染流行地区，并出现发热、 干咳等临床症状 第19页/共24页
发热、咳嗽不一定是腺病毒感染
发热、咳嗽是最常见的上呼 吸道感染症状，引起发热咳嗽 的病因有很多，如病毒、细菌、 支原体、衣原体、真菌等感染 均可导致发热、咳嗽，因此出 现这两种症状并非就是腺病毒
不会导致死亡。
第14页/共24页
个人预防
1.了解防控知识，正确认识疾 病，提高防范意识
2.尽量避免到人群聚集性场所， 避免接触流感症状的患者
3.注意日常个人卫生，养成良 好的卫生习惯
4.注意防寒保第暖15页/，共24页提高免疫力 5.一旦出现发热、咳嗽、咽痛
具体措施
1、避患者：由于腺病毒主要通过飞沫传播，与患者说话距离应 在1.8米以上，尽量避免触摸患者接触过的物体。如衣物、 门把手、钱币和扶手等
第20页/共24页
感染，不必草木皆兵
疫情发生期间的应对措施
（1）营区实施封闭式管理，严 格控制人员进出，减少营区内 人员流动
（2）停止大型集会，减少室内 集中活动
（3）实行错时就餐、洗漱、洗
澡等，就餐时采用同向就坐方
式
第21页/共24页
（4）科学设置训练科目，降低
训练强度
疫情发生期间的卫生措施
知识分享：腺相关病毒（AAV）表达系统
知识分享：腺相关病毒（AAV）表达系统【维真⽣物】提供AAV现货和AAV包装服务，已助⼒多位客户在顶级期刊发表⽂章。
产品说明书【详见维真⽣物官⽹→（腺相关病毒包装+腺相关病毒制备+腺相关病毒案例分享+腺相关病毒技术⼿册），或联系官⽹在线客服索要相关内容的链接。
】本产品仅限⽤于研究，严禁⽤于疾病诊断。
本产品仅供购买⽅内部研究使⽤，未经维真⽣物公司书⾯许可，严禁转售。
产品有限责任担保维真⽣物保证您收到的产品符合产品⽬录上的规格。
本担保规定了维真⽣物更换产品的责任。
维真⽣物不提供其他任何形式的对于产品商业或健康⽤途的保证。
维真⽣物不对任何由于使⽤或不正确使⽤本公司产品造成的直接、间接的、衍⽣的或偶然的损害所产⽣的后果负责。
腺相关病毒安全操作规范1. 请在BL2⽣物安全⼆级⽣物安全柜中操作病毒。
2. 操作病毒和转染细胞时，请务必穿着实验服，佩戴⼝罩和⼿套。
3. 请⼩⼼操作，避免产⽣⽓雾或飞溅。
被病毒污染的超净⼯作台，请⽴即⽤70%⼄醇加1% SDS溶液擦拭⼲净。
接触病毒的枪头、离⼼管、培养板、培养液请使⽤新鲜配制的10％漂⽩粉进⾏消毒操作后丢弃。
4. ⽤显微镜观察细胞感染情况时，请先拧紧培养瓶或盖紧培养板，⽤70%⼄醇擦拭培养瓶外壁后，显微镜下观察拍照。
观察完毕，请⽤70%⼄醇再次擦拭显微镜实验台。
5. 离⼼病毒时，应使⽤密封性好的离⼼管，或⽤封⼝膜封⼝后进⾏离⼼，请尽量使⽤组织培养室内的离⼼机。
6. 实验完毕脱掉⼿套后，请⽴即⽤肥皂和⽔清洗双⼿。
个⼈保护措施1. 使⽤⼀次性⼿套。
2. 在注射病毒或是其后的解剖时，使⽤⼀次性⼿术服或是相当的⾐物，如果是感染细胞时，可以穿着实验服。
3. 佩戴护⽬镜或是⾯罩。
4. 所有的操作应当是在 Class II ⽣物安全柜中进⾏。
如果实验条件不能满⾜，则应当在空⽓稳定的空间中操作，减少操作时间和病毒与外界接触的时间。
不慎接触病毒时的急救1. 病毒飞溅或是⽓溶胶与⼈体接触–眼，⽪肤或是粘膜⽤⼤量清⽔冲洗眼睛或是其他接触的部位⾄少15 分钟。
腺病毒感染科普讲座PPT课件
01
优先选择具有明确抗病毒效果的药物，如阿昔洛韦等，但需关
Hale Waihona Puke 注药物副作用。对症治疗药物
02
针对发热、咳嗽等症状选用合适的药物，如解热镇痛药、止咳
药等。
免疫调节药物
03
对于免疫低下患者，可适当使用免疫调节药物，但需遵医嘱。
康复期患者管理建议
定期随访
康复期患者应定期进行随访，以便及时发现并处 理潜在问题。
腺病毒感染科普讲座
汇报人：xxx 2023-1-26
contents
目录
• 腺病毒基本知识 • 腺病毒感染临床表现与诊断方法 • 腺病毒感染预防与控制措施 • 治疗方法与康复管理 • 心理干预与社会支持网络构建 • 总结回顾与展望未来进展方向
01 腺病毒基本知识
腺病毒定义与分类
腺病毒定义
腺病毒是一种无包膜的双链DNA病 毒，具有多种血清型，可引起人类和 动物感染。
生活调整
保持规律作息，合理饮食，适当锻炼，增强免疫 力。
心理疏导
关注患者心理状况，必要时进行心理疏导，帮助 患者积极面对康复过程。
05 心理干预与社会支持网络 构建
患者心理变化特点分析
焦虑和恐惧
患者可能对疾病的治疗和预后感到不确定，导致焦虑和恐惧情绪 。
抑郁和失落
腺病毒感染可能给患者带来身体和心理上的痛苦，导致抑郁和失 落情绪。
易感人群
儿童、老年人、免疫力低下人群等是腺病毒的易感人群。
危害程度
腺病毒感染可引起多种疾病，如呼吸道感染、结膜炎、胃肠 炎等，严重时可导致死亡。不同血清型腺病毒的致病力和危 害程度有所差异。
02 腺病毒感染临床表现与诊 断方法
临床表现及分型
腺病毒肺炎讲课PPT课件
病例选择：选择具有代表 性的腺病毒肺炎病例
临床表现：详细描述病例 的临床表现和症状
诊断过程：介绍病例的诊 断方法和过程
治疗结果：说明病例的治 疗效果和预后情况
腺病毒肺炎的预防措施
腺病毒肺炎的治疗方案
腺病毒肺炎的传播途径和 控制措施
腺病毒肺炎的案例分析和 经验教训
PART SIX
腺病毒肺炎与感染者接触，注意保暖和休息，遵医嘱治疗和护理 康复指导：加强营养，适当锻炼，保持良好的生活习惯和心态，定期复查
PART FIVE
病例来源：某医院收治的腺病毒肺炎患者 临床表现：发热、咳嗽、气促等症状 诊断依据：通过实验室检查和影像学检查确诊 治疗过程：采取抗病毒、抗炎等综合治疗措施
腺病毒可在水源、食物和空气 中存活数周，对紫外线敏感
传染源：腺病毒 肺炎患者和隐性 感染者
传播途径：飞沫 传播、接触传播 和消化道传播
易感人群：儿童、 老年人、身体虚弱 者和免疫功能低下 者
流行季节：全年均 可发病，但春季和 冬季更容易流行
临床表现：发热、咳嗽、呼吸困难等 诊断标准：根据临床表现、实验室检查和影像学检查结果综合判断 实验室检查：白细胞计数、血沉、C反应蛋白等指标升高 影像学检查：肺部X线或CT检查显示肺部炎症性病变
汇报人：
CONTENTS
汇报人员
腺病毒肺炎概 述
腺病毒肺炎的 病理生理学
腺病毒肺炎的 预防和治疗
腺病毒肺炎的 案例分析
腺病毒肺炎的 科研进展
PART ONE
PART TWO
腺病毒是一种无包膜的DNA 病毒，具有多样性
腺病毒肺炎是由腺病毒感染 引起的肺部炎症
腺病毒主要通过呼吸道飞沫传 播，引起上呼吸道感染和肺炎
腺病毒感染诊疗指南PPT课件
分型
根据病毒血清型和临床表现的不同， 腺病毒感染可分为多个类型，如呼吸 道型、胃肠道型、泌尿道型和眼型等 。
02 诊断方法与标准
实验室检测
01
02
03
病毒分离培养
通过细胞培养方法，从患 者标本中分离出腺病毒， 并进行病毒鉴定。
抗原检测
利用特异性抗体进行免疫 荧光或免疫酶染色，检测 患者标本中的腺病毒抗原 。
病毒颗粒呈二十面体对称，直径约为 70-90纳米。
传播途径及易感人群
传播途径
主要通过飞沫传播，也可通过接 触污染物体表面传播。
易感人群
人群普遍易感，但婴幼儿、老年 人及免疫功能低下者更易感染。
临床表现与分型
临床表现
腺病毒感染可引起呼吸道、胃肠道、 泌尿道及眼部等多种疾病，常见症状 包括发热、咳嗽、呼吸困难、腹泻、 呕吐、尿痛、结膜炎等。
未来发展趋势预测
加强腺病毒疫苗研发
发展新型抗病毒药物
随着疫苗技术的不断进步，未来将有更多 针对腺病毒的疫苗问世，提高人群的免疫 水平。
针对腺病毒的抗病毒药物研发将持续进行 ，未来可能出现更加高效、低毒的抗病毒 药物。
完善诊疗规范
加强国际合作与交流
随着临床经验的不断积累，腺病毒感染的 诊疗规范将更加完善，提高患者的治愈率 和生活质量。
腺病毒感染诊疗指南
汇报人：xxx
2024-01-27
目录
Contents
• 腺病毒概述 • 诊断方法与标准 • 治疗原则与策略 • 并发症预防与处理措施 • 患者教育与心理支持 • 总结回顾与展望未来发展趋势
01 腺病毒概述
腺病毒结构与特性
腺病毒是一种无包膜的双链DNA病毒 ，属于腺病毒科。
根据病毒血清型和临床表现的不同， 腺病毒感染可分为多个类型，如呼吸 道型、胃肠道型、泌尿道型和眼型等 。
02 诊断方法与标准
实验室检测
01
02
03
病毒分离培养
通过细胞培养方法，从患 者标本中分离出腺病毒， 并进行病毒鉴定。
抗原检测
利用特异性抗体进行免疫 荧光或免疫酶染色，检测 患者标本中的腺病毒抗原 。
病毒颗粒呈二十面体对称，直径约为 70-90纳米。
传播途径及易感人群
传播途径
主要通过飞沫传播，也可通过接 触污染物体表面传播。
易感人群
人群普遍易感，但婴幼儿、老年 人及免疫功能低下者更易感染。
临床表现与分型
临床表现
腺病毒感染可引起呼吸道、胃肠道、 泌尿道及眼部等多种疾病，常见症状 包括发热、咳嗽、呼吸困难、腹泻、 呕吐、尿痛、结膜炎等。
未来发展趋势预测
加强腺病毒疫苗研发
发展新型抗病毒药物
随着疫苗技术的不断进步，未来将有更多 针对腺病毒的疫苗问世，提高人群的免疫 水平。
针对腺病毒的抗病毒药物研发将持续进行 ，未来可能出现更加高效、低毒的抗病毒 药物。
完善诊疗规范
加强国际合作与交流
随着临床经验的不断积累，腺病毒感染的 诊疗规范将更加完善，提高患者的治愈率 和生活质量。
腺病毒感染诊疗指南
汇报人：xxx
2024-01-27
目录
Contents
• 腺病毒概述 • 诊断方法与标准 • 治疗原则与策略 • 并发症预防与处理措施 • 患者教育与心理支持 • 总结回顾与展望未来发展趋势
01 腺病毒概述
腺病毒结构与特性
腺病毒是一种无包膜的双链DNA病毒 ，属于腺病毒科。
腺病毒感染科普讲座PPT课件
腺病毒特点
腺病毒具有较强的传染性和致病 性，可引起多种疾病，包括呼吸 道、消化道、眼部等感染。
腺病毒传播途径
01
02
03
空气传播
腺病毒可通过飞沫、气溶 胶等途径传播，如患者咳 嗽、打喷嚏时产生的飞沫 。
接触传播
接触被腺病毒污染的物品 ，如门把手、玩具等，再 触摸口、鼻、眼等黏膜部 位，也可导致感染。
02 腺病毒感染临床表现
潜伏期与症状
潜伏期
一般为2-14天，平均3-8天。潜伏期 内无明显症状，但具有传染性。
症状
常见症状包括发热、咳嗽、咽痛、鼻 塞、流涕等，部分患者可能出现腹泻 、呕吐等消化道症状。重症患者可出 现高热、呼吸困难、肺炎等表现。
典型病例分析
病例一
一名5岁儿童，出现发热、咳嗽等症状，经检查确诊为腺病毒感染。经过对症 治疗，症状逐渐缓解，预后良好。
本次讲座重点内容回顾
腺病毒基本知识
详细介绍了腺病毒的结构、传播方式、感染症状及预防措施。
感染途径与高危人群
分析了腺病毒感染的主要途径，包括呼吸道、消化道和眼结膜等， 并指出了高危人群，如儿童、老年人和免疫功能低下者。
诊断和治疗方法
总结了腺病毒感染的诊断方法和治疗手段，包括临床诊断、实验室 检测和抗病毒药物等。
诊疗技术不断提升
未来腺病毒感染的诊断和治疗手段将得到不断优化和提升，提高 患者治愈率和生活质量。
公众卫生意识提高
通过加强宣传教育，提高公众对腺病毒感染的认知度和防范意识 ，有助于减少病毒传播和疫情发生。
THANKS FOR WATCHING
感谢您的观看
05 日常护理与康复训练建议
患者日常护理注意事项
保持良好的生活习惯
腺病毒具有较强的传染性和致病 性，可引起多种疾病，包括呼吸 道、消化道、眼部等感染。
腺病毒传播途径
01
02
03
空气传播
腺病毒可通过飞沫、气溶 胶等途径传播，如患者咳 嗽、打喷嚏时产生的飞沫 。
接触传播
接触被腺病毒污染的物品 ，如门把手、玩具等，再 触摸口、鼻、眼等黏膜部 位，也可导致感染。
02 腺病毒感染临床表现
潜伏期与症状
潜伏期
一般为2-14天，平均3-8天。潜伏期 内无明显症状，但具有传染性。
症状
常见症状包括发热、咳嗽、咽痛、鼻 塞、流涕等，部分患者可能出现腹泻 、呕吐等消化道症状。重症患者可出 现高热、呼吸困难、肺炎等表现。
典型病例分析
病例一
一名5岁儿童，出现发热、咳嗽等症状，经检查确诊为腺病毒感染。经过对症 治疗，症状逐渐缓解，预后良好。
本次讲座重点内容回顾
腺病毒基本知识
详细介绍了腺病毒的结构、传播方式、感染症状及预防措施。
感染途径与高危人群
分析了腺病毒感染的主要途径，包括呼吸道、消化道和眼结膜等， 并指出了高危人群，如儿童、老年人和免疫功能低下者。
诊断和治疗方法
总结了腺病毒感染的诊断方法和治疗手段，包括临床诊断、实验室 检测和抗病毒药物等。
诊疗技术不断提升
未来腺病毒感染的诊断和治疗手段将得到不断优化和提升，提高 患者治愈率和生活质量。
公众卫生意识提高
通过加强宣传教育，提高公众对腺病毒感染的认知度和防范意识 ，有助于减少病毒传播和疫情发生。
THANKS FOR WATCHING
感谢您的观看
05 日常护理与康复训练建议
患者日常护理注意事项
保持良好的生活习惯
腺病毒载体构建(共10张PPT)
第二第页二页，，共共101页0。页。
பைடு நூலகம்
腺病毒 是一种大分子线性双链无包膜DNA病毒。它通过 受体介导的内吞作用进入(jìnrù)细胞内，然后腺病毒基 因组转移至细胞核内，保持在染色体外，不整合进入 (jìnrù)宿主细胞基因组中.
第三第页三页，，共共101页0。页。
腺病毒的基因(jīyīn)及其功能
二早期、表小达的的穿E梭1区质蛋粒腺白，（病其甚带至毒有包括基目E的2因区基蛋因组白的编）表是达码腺盒病数以毒及十基(因y个ǐ组jí)复表腺制达、病盒病两毒毒侧包的的装与和结大其构质他蛋粒和白上表功的达目能翻的译蛋基所因必白拟须，插的，入分但部其位为对同细早源胞序期毒列性表（(dú左达x右ìn和ɡ臂)也）晚是很期强表的。达。
二、小的穿梭质粒，其带有 目的基因的表达盒以及(yǐjí) 表达盒两侧的与大质粒上的 目的基因拟插入部位同源序 列（左右臂）
第第七七页页，，共共1100页页。。
第八第八页页，，共共110页0页。 。
AdEasy腺病毒载体(zàitǐ)系统
稳定性 高
腺病毒粒子相对稳定，插入外源基因的病毒基因组在 连续传代中保持不变，易于用重组DNA技术操作。
体内表达周期可早达期4表周。达的蛋白是功能蛋白，晚期表达的有功能蛋白也有结构蛋白，并且早期的功能蛋白能够调控晚期蛋白的 载体。 表达。
体内表达周期可达4周。
它 组 早期通中表.过达受的必体E须1介区早的导蛋期，的白表但（内达甚其吞的至作对包E用细1括进区胞E入2蛋毒区(j白性蛋ìnr白（(ùd)）ú甚细是x胞至ì腺n内包ɡ病)，括也毒然E基是后2因很区腺组强蛋病复的白制毒。、）基病因是毒组腺包转病装移毒和至其基细他因胞蛋组核白复内表制达，翻、保译病持所在毒必染包须色装的体和，外但其，其他不对蛋细整白胞合表毒进性达入(d(翻júìn译xrìùn所)ɡ宿)也主是细很胞强基的因。
பைடு நூலகம்
腺病毒 是一种大分子线性双链无包膜DNA病毒。它通过 受体介导的内吞作用进入(jìnrù)细胞内，然后腺病毒基 因组转移至细胞核内，保持在染色体外，不整合进入 (jìnrù)宿主细胞基因组中.
第三第页三页，，共共101页0。页。
腺病毒的基因(jīyīn)及其功能
二早期、表小达的的穿E梭1区质蛋粒腺白，（病其甚带至毒有包括基目E的2因区基蛋因组白的编）表是达码腺盒病数以毒及十基(因y个ǐ组jí)复表腺制达、病盒病两毒毒侧包的的装与和结大其构质他蛋粒和白上表功的达目能翻的译蛋基所因必白拟须，插的，入分但部其位为对同细早源胞序期毒列性表（(dú左达x右ìn和ɡ臂)也）晚是很期强表的。达。
二、小的穿梭质粒，其带有 目的基因的表达盒以及(yǐjí) 表达盒两侧的与大质粒上的 目的基因拟插入部位同源序 列（左右臂）
第第七七页页，，共共1100页页。。
第八第八页页，，共共110页0页。 。
AdEasy腺病毒载体(zàitǐ)系统
稳定性 高
腺病毒粒子相对稳定，插入外源基因的病毒基因组在 连续传代中保持不变，易于用重组DNA技术操作。
体内表达周期可早达期4表周。达的蛋白是功能蛋白，晚期表达的有功能蛋白也有结构蛋白，并且早期的功能蛋白能够调控晚期蛋白的 载体。 表达。
体内表达周期可达4周。
它 组 早期通中表.过达受的必体E须1介区早的导蛋期，的白表但（内达甚其吞的至作对包E用细1括进区胞E入2蛋毒区(j白性蛋ìnr白（(ùd)）ú甚细是x胞至ì腺n内包ɡ病)，括也毒然E基是后2因很区腺组强蛋病复的白制毒。、）基病因是毒组腺包转病装移毒和至其基细他因胞蛋组核白复内表制达，翻、保译病持所在毒必染包须色装的体和，外但其，其他不对蛋细整白胞合表毒进性达入(d(翻júìn译xrìùn所)ɡ宿)也主是细很胞强基的因。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
一系列腺病毒转换因素允许产生高水平的异种蛋 白。重组蛋白代表了整个细胞蛋白的最丰富的多 肽（20%-30%）。
在较好的条件下，表达系统在数升的293细胞悬浮 培养液中可以按比例地增加，产量可达90mg/L。
腺病毒表达系统
腺病毒的特性
腺病毒属于无包膜病毒,外壳由240个六邻体和12个五邻体构成 二十面体结构,内部有约36kb的线性双链基因组,属于DNA病毒。 外壳的五邻体分别位于二十面体结构的顶角、均有一个纤突蛋 白(fiber)突起与其相连,腺病毒的组织亲合性与纤维蛋白头部 密切相关。
--
0-15天
14-21天 5-10天 26-45天
17-22天 0-5天 24-56天
体外连接法
2-3天 4天
4-7天 --
10-17天
Ad5腺病毒可感染的寄主
人体各类组织的细胞，除造血细胞外
多种哺乳动物细胞：
Species Chicken Dog Monkey Mouse Pig Rabbit Rat Sheep
样可以插入长约8kb的外源DNA。
去除Ｅ1区还有一个优势,就是阻止了依赖Ｅ1区和Ｅ2区功
能蛋白的转录和随后病毒DNA的复制及病毒外壳蛋白的产生。
Ｅ1区缺失的腺病毒可以在能够反式提供Ｅ1区基因蛋白的
293细胞中得到增殖。
腺病毒基因组结构与载体改造
HEK 293 cells have been engineered to include Adenovirus E1a/E1b genes
病毒载体疫苗
重组腺病毒的作用
在哺乳动物细胞中，AdV已被成功应用于表达各种病毒 和细胞的基因，腺病毒表达载体系统表达出蛋白的生 物化学特性，可用于商业价值的开发，它可用来生产 亚单位疫苗，和新型诊断试剂盒的开发。
AdV可以通过转染细胞来表达蛋白，除基因治疗的相关 实验外还可用做体内特性研究。
病毒的受体与入侵细胞的过程
腺病毒感染细胞的第一步是通过纤突蛋白与细胞表面柯萨奇 病毒和腺病毒受体(CAR)结合。腺病毒粘附后,五邻体蛋白 上的精氨酸-谷氨酸-天门冬氨酸（ＲＧＤ)与细胞表面的整 合素αｖβ3和αｖβ5结合并相互作用使病毒进入细胞。
第一代腺病毒载体
第一代腺病毒载体中,Ｅ1、Ｅ3基因表达盒已经去除了,这
重组腺病毒表达系统
腺病毒颗粒比较稳定,病毒基因组较少发生重排。插入外
源基因的病毒基因组在连续传代中一般保持不变。
腺病毒基因组较易操作。 制备大量的腺病毒较为容易。 可感染分裂细胞和非分裂细胞。rAds可转导肺细胞、肝细
胞、骨细胞、血管、肌肉、脑、中枢神经系统等。
重组腺病毒表达系统
通过对本体蛋白的同样的翻译后的修饰，在细胞 中表达真核蛋白。
插入loxP位点，然后将两个质粒共转染表达Cre重组酶的哺乳动物细胞， 通过Cre介导两个loxP位点之间的DNA发生重组，可获得重组腺病毒， 这种重组效率比一般的细胞内同源效率高30倍。 更为流行的方法采用了穿梭载体与腺病毒质粒转化一种特殊的菌株(BJ 5183)。然后从细菌中收集重组腺病毒，用其感染HEK 293细胞。
Reference Fisher & Watanable, 1996 Fang et al., 1996 Bout et al., 1994 Lee et al., 1996; Stratford-Perricaudet et al., 1990 French et al., 1994 Donahue, et al., 1998; Riew et al., 1998 Mastrangeil et al., 1993 Hoizinger et al., 1995
E1a/E1b genes (integrated into 293 genome) allow replication and transcription of Adenovirus
构建重组腺病毒
构建重组腺病毒的传统方法是以同源重组为基础的。 其一用修饰的腺病毒DNA与穿梭载体在HEK 293细胞中进行同源重组； 通过Cre-loxP系统构建重组腺病毒载体，在转移质粒和包装质粒中都
• 可适用的宿主细胞类型 • 选择标记 • 插入片段的大小 • 调控元件 • 报告基因
病毒表达载体的用途
基因治疗
1990年French等把腺嘌呤脱氨酶基因导入到一名4岁小女孩的T 淋巴细胞中治疗了腺嘌呤脱氨酶基因缺失病,开创了人类利用人 体基因治疗疾病的先例。 1992年复旦大学薛京伦等首次把人凝血因子Ⅸ基因成功用于治 疗血友病。 2005年第一个批准上市的基因治疗制品Adv-P53在中国上市。
纯化腺病毒的电子显微照片 被注射Ad5.CMV-LacZ的大鼠脊髓
被注射Ad5.CMV-GFP的大鼠纹状体的切片
用AdV转染基因的优点
速度快，简单，不需要任何特殊的装备。 相对其它方法，它非常容易被接受。事实上，这种感
染后细胞生存率几乎为100%。因此，AdV有向细胞内 转染遗传物质而忽视毒性作用的能力。 许多细胞类型均可被转染。 感染后的数小时，基因表达便可被分析。 刺激后，可有一种以上的基因被同时表达。
腺病毒的基因及其功能
腺病毒基因组编码数十个腺病毒的结构和功能蛋白,分为早 期表达和晚期表达。早期表达的蛋白是功能蛋白、晚期表达的有 功能蛋白和结构蛋白,并且早期的功能蛋白调控晚期蛋白的表达。 早期表达的Ｅ1区蛋白(甚至包括Ｅ2区蛋白)是腺病毒基因组复制、 病毒包装和其他蛋白表达翻译所必需的,但其对细胞的毒性也是 很强的。E2蛋白涉及AdDNA复制, E3蛋白对抗宿主的抗病毒防御 系统, E4调节有效的晚期基因转录。
Adeno-X Expression System
Adeno-X Expression System
构建重组腺病毒不同方法比较
制备穿梭载体和 腺病毒载体
目的基因从穿梭 载体克隆到腺病
毒iral DNA Plasmid-based
7-14天 7-14天
真核生物细胞常用的表达载体
质粒型表达载体
病毒型表达载体
• 腺病毒表达载体 • 逆转录病毒表达载体 • 昆虫杆状病毒表达载体
病毒表达系统的特点
高转染效率 高蛋白表达水平 对转染效率很低的细胞进行高效转染 (原
代细胞等) 稳定,可遗传的表达 (逆转录病毒) 可控制拷贝数
如何选择合适的病毒表达载体？
在较好的条件下，表达系统在数升的293细胞悬浮 培养液中可以按比例地增加，产量可达90mg/L。
腺病毒表达系统
腺病毒的特性
腺病毒属于无包膜病毒,外壳由240个六邻体和12个五邻体构成 二十面体结构,内部有约36kb的线性双链基因组,属于DNA病毒。 外壳的五邻体分别位于二十面体结构的顶角、均有一个纤突蛋 白(fiber)突起与其相连,腺病毒的组织亲合性与纤维蛋白头部 密切相关。
--
0-15天
14-21天 5-10天 26-45天
17-22天 0-5天 24-56天
体外连接法
2-3天 4天
4-7天 --
10-17天
Ad5腺病毒可感染的寄主
人体各类组织的细胞，除造血细胞外
多种哺乳动物细胞：
Species Chicken Dog Monkey Mouse Pig Rabbit Rat Sheep
样可以插入长约8kb的外源DNA。
去除Ｅ1区还有一个优势,就是阻止了依赖Ｅ1区和Ｅ2区功
能蛋白的转录和随后病毒DNA的复制及病毒外壳蛋白的产生。
Ｅ1区缺失的腺病毒可以在能够反式提供Ｅ1区基因蛋白的
293细胞中得到增殖。
腺病毒基因组结构与载体改造
HEK 293 cells have been engineered to include Adenovirus E1a/E1b genes
病毒载体疫苗
重组腺病毒的作用
在哺乳动物细胞中，AdV已被成功应用于表达各种病毒 和细胞的基因，腺病毒表达载体系统表达出蛋白的生 物化学特性，可用于商业价值的开发，它可用来生产 亚单位疫苗，和新型诊断试剂盒的开发。
AdV可以通过转染细胞来表达蛋白，除基因治疗的相关 实验外还可用做体内特性研究。
病毒的受体与入侵细胞的过程
腺病毒感染细胞的第一步是通过纤突蛋白与细胞表面柯萨奇 病毒和腺病毒受体(CAR)结合。腺病毒粘附后,五邻体蛋白 上的精氨酸-谷氨酸-天门冬氨酸（ＲＧＤ)与细胞表面的整 合素αｖβ3和αｖβ5结合并相互作用使病毒进入细胞。
第一代腺病毒载体
第一代腺病毒载体中,Ｅ1、Ｅ3基因表达盒已经去除了,这
重组腺病毒表达系统
腺病毒颗粒比较稳定,病毒基因组较少发生重排。插入外
源基因的病毒基因组在连续传代中一般保持不变。
腺病毒基因组较易操作。 制备大量的腺病毒较为容易。 可感染分裂细胞和非分裂细胞。rAds可转导肺细胞、肝细
胞、骨细胞、血管、肌肉、脑、中枢神经系统等。
重组腺病毒表达系统
通过对本体蛋白的同样的翻译后的修饰，在细胞 中表达真核蛋白。
插入loxP位点，然后将两个质粒共转染表达Cre重组酶的哺乳动物细胞， 通过Cre介导两个loxP位点之间的DNA发生重组，可获得重组腺病毒， 这种重组效率比一般的细胞内同源效率高30倍。 更为流行的方法采用了穿梭载体与腺病毒质粒转化一种特殊的菌株(BJ 5183)。然后从细菌中收集重组腺病毒，用其感染HEK 293细胞。
Reference Fisher & Watanable, 1996 Fang et al., 1996 Bout et al., 1994 Lee et al., 1996; Stratford-Perricaudet et al., 1990 French et al., 1994 Donahue, et al., 1998; Riew et al., 1998 Mastrangeil et al., 1993 Hoizinger et al., 1995
E1a/E1b genes (integrated into 293 genome) allow replication and transcription of Adenovirus
构建重组腺病毒
构建重组腺病毒的传统方法是以同源重组为基础的。 其一用修饰的腺病毒DNA与穿梭载体在HEK 293细胞中进行同源重组； 通过Cre-loxP系统构建重组腺病毒载体，在转移质粒和包装质粒中都
• 可适用的宿主细胞类型 • 选择标记 • 插入片段的大小 • 调控元件 • 报告基因
病毒表达载体的用途
基因治疗
1990年French等把腺嘌呤脱氨酶基因导入到一名4岁小女孩的T 淋巴细胞中治疗了腺嘌呤脱氨酶基因缺失病,开创了人类利用人 体基因治疗疾病的先例。 1992年复旦大学薛京伦等首次把人凝血因子Ⅸ基因成功用于治 疗血友病。 2005年第一个批准上市的基因治疗制品Adv-P53在中国上市。
纯化腺病毒的电子显微照片 被注射Ad5.CMV-LacZ的大鼠脊髓
被注射Ad5.CMV-GFP的大鼠纹状体的切片
用AdV转染基因的优点
速度快，简单，不需要任何特殊的装备。 相对其它方法，它非常容易被接受。事实上，这种感
染后细胞生存率几乎为100%。因此，AdV有向细胞内 转染遗传物质而忽视毒性作用的能力。 许多细胞类型均可被转染。 感染后的数小时，基因表达便可被分析。 刺激后，可有一种以上的基因被同时表达。
腺病毒的基因及其功能
腺病毒基因组编码数十个腺病毒的结构和功能蛋白,分为早 期表达和晚期表达。早期表达的蛋白是功能蛋白、晚期表达的有 功能蛋白和结构蛋白,并且早期的功能蛋白调控晚期蛋白的表达。 早期表达的Ｅ1区蛋白(甚至包括Ｅ2区蛋白)是腺病毒基因组复制、 病毒包装和其他蛋白表达翻译所必需的,但其对细胞的毒性也是 很强的。E2蛋白涉及AdDNA复制, E3蛋白对抗宿主的抗病毒防御 系统, E4调节有效的晚期基因转录。
Adeno-X Expression System
Adeno-X Expression System
构建重组腺病毒不同方法比较
制备穿梭载体和 腺病毒载体
目的基因从穿梭 载体克隆到腺病
毒iral DNA Plasmid-based
7-14天 7-14天
真核生物细胞常用的表达载体
质粒型表达载体
病毒型表达载体
• 腺病毒表达载体 • 逆转录病毒表达载体 • 昆虫杆状病毒表达载体
病毒表达系统的特点
高转染效率 高蛋白表达水平 对转染效率很低的细胞进行高效转染 (原
代细胞等) 稳定,可遗传的表达 (逆转录病毒) 可控制拷贝数
如何选择合适的病毒表达载体？