硫酸盐还原菌杀菌实验 (瓶试法)
采油废水中硫酸盐还原菌Fe(VI)杀灭试验
（ 东北石油大学 ， 大庆 ，６ ３ ８ １３ １ ）
马 玲
（ 北林业大学） 东
摘 要 采油所产生的废水 中产生的硫酸盐还原菌（ ｒ ） Ｓｔ 可造成注水 系统的腐蚀 、 Ｂ 结垢和 阻塞 ， 严重 影响原 油 的开发与生产。以 Ｆ （ Ｉ作为氧化 型杀 菌剂杀灭 Ｓ Ｂ， ｅＶ ） Ｒ 试验结果表 明：ｅ Ｖ ） Ｓ Ｂ具有很强的灭菌能力； ｅ Ｖ ） Ｆ （ Ｉ对 Ｒ Ｆ （ Ｉ 投加量 Ｇ １ ／ ＞０ｍｇＬ时就 能满足回注水 的要 求； 适宜的接触反应时间为 ｔ１ ｉ； ＞ ０ｍｎ 相应地有 Ｃ＞ ０ ｇ・ｍｎ・ 一。 ．１０ｍ ｉ Ｌ 关键 词 采 油 废 水 ； 酸 盐还 原 茵 （ Ｒ ） Ｆ （ Ｉ ； 菌 ； 处 理 硫 Ｓ Ｂ ；ｅ Ｖ ） 灭 水 分 类 号 Ｘ ４ ７１
第４ ０卷 第 ６期
２１ ０ ２年 ６月
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采 油 废 水 中硫 酸 盐 还 原 菌 Ｆ （ Ｉ 杀 灭 试 验 ｅＶ ）
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硫酸盐还原菌的培养及检测方法的研究进展_王丹
收稿日期:2008-09-09作者简介:王丹(1983-),女(汉族),辽宁盖州人,硕士研究生,E -m ail w angdan0417@yaho o com cn ;游松(1963-),男(汉族),辽宁沈阳人,教授,博士,主要从事天然产物生物学与药学研究,T el .024-********,E -m ail y ousong206@y ahoo com cn 。
文章编号:1006-2858(2009)06-0502-05硫酸盐还原菌的培养及检测方法的研究进展王 丹,贾 贞,游 松(沈阳药科大学生命科学与生物制药学院,辽宁沈阳110016)摘要:目的综述硫酸盐还原菌的培养及其检测方法的研究进展。
方法在查阅国内外文献的基础上,以其中的26篇文献为依据,对硫酸盐还原菌的培养及检测方法进行分析和归纳。
结果与结论由于硫酸盐还原菌自身的特点,尤其在制药等行业废水治理方面的优势,硫酸盐还原菌的研究已引起人们的广泛关注。
通过综述硫酸盐还原菌的培养方法及其检测技术,为该菌的进一步研究打下了基础。
关键词:硫酸盐还原菌;培养;检测;废水处理中图分类号:Q 81 文献标志码:A硫酸盐还原菌(su lfate -reduc i n g bacteria ,SRB)是一类形态、营养多样化,利用硫酸盐作为有机物异化作用的电子受体的严格厌氧菌。
1895年首先由Be ij e rinck 发现,1903年De l d en 发表了有关海水中耐盐菌种的报道。
1925年E lion 发现了一种嗜热的SRB [1]。
SRB 生长能力顽强,生存环境广泛,是引起钢铁、金属等材料腐蚀的重要原因之一。
据估计,在美国,油井的腐蚀77%以上由SRB 造成[2]。
然而,由于SRB 可将硫酸盐异化还原生成硫化氢,硫化氢又能与废水中的许多重金属生成沉淀,使得SRB 在废水处理方面表现出很大的优越性和可行性[3-4]。
制药等行业排出的废水属于高硫酸盐有机废水,利用SRB 可有效去除废水中的硫酸盐,SRB 法得到了越来越多的重视。
水体中厌氧菌的检测
一 实验构思
实验原理：在无氧条件下，硫酸盐还原菌 可以将硫酸盐还原菌还原成H2S，而后与 +2价铁离子结合生成褐色沉淀，即污水中 可以证明含有硫酸盐还原菌。
二 实验意义
由于在无氧条件下，硫酸盐还原菌可以将 硫酸盐还原菌还原成H2S，会对水体造成进 一步的污染，所以对于硫酸盐还原菌的监 控是非常有意义的。
水体中厌氧菌的检测
——检测废水处理厂中硫酸盐还原菌是否存在
总纲
• 实验构思 • 实验意义 • 实验步骤 • 实验结果 • 实验展望
一 实验构思
污水厂中有废水池和无氧废水池，我们取无氧废水池 中的水来验证其中是否存在厌氧菌——硫酸盐还原菌 硫酸盐还原菌，是一种厌氧的微生物；广泛存在于土 壤、海水、河水、地下管道以及油气井等缺氧环境中。 在无氧条件下可以将硫酸盐还原成H2S。
三 实验步骤
3.2 实验操作：
1.取1.5g牛肉膏，5g蛋白胨，2.5g氯化钠，6g琼脂和5000mL水比例混合加热，待里面固体全部溶解后分装 到锥形瓶中。 2.配置50ML生理盐水，以每支4.5ML的量分装到6支洁净的试管中备用，并包30支洁净的试管塞上塞子， 包若干支无菌吸管，和培养基一起灭菌。 3.将试管和锥形瓶一起放入灭菌锅灭菌20分钟。 4． 将六只装有灭过菌的生理盐水的试管取出并编号2-7并将原菌液加入编号为2的试管，然后梯度稀释。 5.待锥形瓶内液体稍冷却后，再在无菌操作台上进行培养基的分装,30支试管中每支试管装4.5ML培养基。 6.将装有培养液的试管编号（1号1支，2号2支，3号3支，4号4支， 5、6、7号各五支） 7. 将装有梯度稀释的菌液的试管里的菌液分别加入到装有培养液的试管里（原液加入1号培养液试管、同 编号的生理盐水菌液加入同编号的装有培养基试管），每支试管滴加0.5ML菌液并滴加3-5滴5%的硫酸亚 铁溶液。 8.待上述所有加有菌液及硫酸亚铁溶液的试管内培养基凝固后，在每支试管中续加5ML第1步配置过的多 余的培养基，使其封住加有菌液的培养基让其形成一个无氧环境。
一种硫酸盐还原菌测试瓶的生产方法
一种硫酸盐还原菌测试瓶的生产方法摘要：本文介绍了一种硫酸盐还原菌测试瓶的生产方法。
该方法采用聚丙烯材料制造测试瓶的底部和盖子，瓶身采用玻璃材料制造，以确保瓶内细菌的正常生长和观察。
同时，对测试瓶进行了严密封装，以防止外界污染。
该方法制备的硫酸盐还原菌测试瓶具有结构坚固、封装性好的特点，有助于进行硫酸盐还原菌的检测。
关键词：硫酸盐还原菌；测试瓶；生产方法1.引言硫酸盐还原菌是一类菌群，具有重要的生态学意义。
测定硫酸盐还原菌含量是环境监测和地质勘探等领域的重要内容。
为了方便研究人员进行硫酸盐还原菌的检测，需要设计一种方便使用、结构坚固的测试瓶。
本文介绍了一种硫酸盐还原菌测试瓶的生产方法。
2.材料与仪器2.1材料（1）聚丙烯材料（2）玻璃材料（3）硫酸盐还原菌培养基2.2仪器（1）注塑机（2）玻璃吹塑机（3）灭菌器（4）电子天平（5）显微镜3.生产方法3.1制备测试瓶底部和盖子（1）准备聚丙烯材料和注塑机。
（2）将聚丙烯材料放入注塑机中进行熔化。
（3）将熔化的聚丙烯注入测试瓶模具中，待其凝固。
（4）取出测试瓶底部和盖子，进行修整和打磨，确保其平整。
3.2制备测试瓶瓶身（1）准备玻璃材料和玻璃吹塑机。
（2）将玻璃材料熔化，并吹制成测试瓶的瓶身。
（3）对测试瓶进行修整和打磨，确保其平整。
3.3封装硫酸盐还原菌培养基（1）准备好硫酸盐还原菌培养基。
（2）将硫酸盐还原菌培养基倒入测试瓶中。
（3）将测试瓶放入灭菌器中进行灭菌处理，以杀灭其中的细菌。
3.4细菌检测（1）将待测物样品接种到灭菌过的测试瓶中。
（2）将测试瓶放入恒温培养箱中进行培养。
（3）培养一定时间后，取出测试瓶进行观察。
使用显微镜观察瓶内的硫酸盐还原菌数量和形态。
4.结果与讨论通过本实验制备的硫酸盐还原菌测试瓶结构坚固，封装性好。
经过灭菌处理后，在测试瓶内培养硫酸盐还原菌，能正常生长和观察。
5.结论本实验制备的硫酸盐还原菌测试瓶具有结构坚固、封装性好的特点，可用于硫酸盐还原菌的检测。
硫酸盐还原菌甲基红实验
硫酸盐还原菌甲基红实验一、引言硫酸盐还原菌是一类可以利用硫酸盐作为电子受体进行呼吸代谢的微生物。
甲基红是一种常用的指示剂，可用于判断硫酸盐还原菌的存在与活性。
本实验旨在通过观察甲基红颜色的变化，验证硫酸盐还原菌的存在及其对硫酸盐的还原能力。
二、实验材料与方法1. 实验材料甲基红溶液、硫酸盐还原菌培养液、硫酸盐还原菌培养基、蒸馏水、试管、培养皿、移液管、无菌培养瓶等。
2. 实验方法（1）准备工作将硫酸盐还原菌培养液接种于含有硫酸盐还原菌培养基的无菌培养瓶中，放入恒温摇床中培养至细菌生长稳定。
（2）制备甲基红溶液将适量的甲基红溶解于蒸馏水中，制备出一定浓度的甲基红溶液。
（3）实验操作①取一部分硫酸盐还原菌培养液加入试管中，作为实验组。
②取一部分无菌培养基加入试管中，作为对照组。
③分别向实验组和对照组中加入适量的甲基红溶液。
④将试管置于恒温摇床中，培养一定时间（例如24小时）。
⑤观察实验组和对照组的甲基红颜色变化，并进行比较分析。
三、实验结果与讨论在实验进行的过程中，我们观察到了以下现象：在实验组中，甲基红溶液的颜色逐渐变为无色或淡黄色，表明硫酸盐被还原为硫化物，产生了还原反应。
而对照组中，甲基红溶液的颜色保持不变，维持了原本的红色。
根据实验结果，我们可以得出以下结论：硫酸盐还原菌具有对硫酸盐的还原能力，能够将硫酸盐还原为硫化物。
这是由于硫酸盐还原菌内部存在着一种特殊的酶，能够催化硫酸盐与电子供体之间的反应，从而实现硫酸盐的还原。
实验中选择甲基红作为指示剂的原因是，甲基红在酸性条件下呈现红色，在还原反应发生后，pH值升高导致颜色变为无色或淡黄色。
甲基红的变色可以直观地反映硫酸盐还原菌的活性和对硫酸盐的还原能力。
四、实验应用与展望硫酸盐还原菌的还原能力在环境工程、生物地球化学等领域有着重要的应用价值。
比如在环境修复中，可以利用硫酸盐还原菌还原污染物，达到净化土壤和水体的效果。
随着科学技术的不断发展，对硫酸盐还原菌的研究还有许多拓展空间。
SRB-HX-7型硫酸盐还原菌快速测试瓶的研制
SRB-HX-7型硫酸盐还原菌快速测试瓶的研制
赵梦云;瞿建华;张海宽;赵青;孟凡瑜
【期刊名称】《腐蚀与防护》
【年(卷),期】2006(27)10
【摘要】在原SRB-HX-14型硫酸盐还原菌测试瓶的基础上,对培养基配方和生产工艺进行了优化调节,研制了SRB-HX-7型硫酸盐还原菌快速测试瓶.采用该快速测试瓶测定水样中硫酸盐还原菌的含量仅需7天就能得到结果,比原测试瓶测试时间缩短了50%.使用大庆油田四个采油厂的34份水样进行对比试验表明:SRB-HX-7型测试瓶在大大加快SRB测试速度的基础上,具有与SRB-HX-14型测试瓶相同的适应性、准确度和可靠性.
【总页数】3页(P526-528)
【作者】赵梦云;瞿建华;张海宽;赵青;孟凡瑜
【作者单位】北京华油科隆开发公司,北京,100011;新疆油田公司百口泉采油厂,克拉玛依,834011;中国石油大学化工学院,北京,102249;中国石油天然气集团公司环境监测总站,廊坊,065007;中国石油天然气集团公司环境监测总站,廊坊,065007【正文语种】中文
【中图分类】TG1
【相关文献】
1.硫酸盐还原菌新型测试瓶的研制 [J], 易绍金;张晓林;陈俏波
2.测试瓶法快速检测循环水中硫酸盐还原菌 [J], 何世梅;田剑临;余伟明;易绍金
3.硫酸盐还原菌新型测试瓶的研制 [J], 易绍金;张晓林
4.东胜砂岩型铀矿床中硫酸盐还原菌成矿作用模拟研究 [J], 耿海波;师明川;付世骞;安丽平
5.大肠菌群快速测试盒之研制 [J], 沈整鸣;周培君;韩孝平;姚伟民
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杀灭硫酸盐还原菌的药剂复配与杀菌效果研究
由表 5 可知 ,对于非耐药性的 SRB ,J H21 比 J H22
表 5 杀灭非耐药菌的效果的比较
各杀菌剂最低杀灭浓度 ( mg/ L)
SRB 类型
固着菌
游离菌
1227
1000
100
A
800
60
J H21
400
10
J H22
600
40
注 :初始菌量 ,固着型为 6. 5 ×105 个/ cm2 ,游离菌 5. 0 ×104 个/ mL
将 A 和 C 按照 ,1 ∶0 ,0 ∶1 , ∶1 ∶4 ,1 ∶1 ,3 ∶1 ,4 ∶1 ,5 ∶1 ,10 ∶1 ,20 ∶1 ,50 ∶1 ,200 ∶1 的比例配成复 配药剂 。按照 1. 3 的方法测定每种复配药剂和 1227 的最低杀菌浓度测定每种复配药剂和 1227 的最低杀 菌浓度 。实验结果见表 3 。
入经过灭菌处理的 A3 钢片 ,在 30 摄氏度培养 5～7d ,
待钢片上长出一层黑色的菌膜 (固着型 SRB) 后备用.
不同浓度的杀菌剂与等量游离型 SRB 接触 1h
后 ,用自制 SRB 测试瓶测定是否仍有 SRB 存活 ,以此
找到 1277 杀灭该游离菌的最低杀菌浓度 。实验结果
列于表 1 。
将待分析的试片放在盛有一定量的蒸馏水的烧杯中用刷子刷掉试片表面的全部srb菌再用少量的蒸馏水冲洗试片和刷子各三遍冲洗液倒入烧杯中搅拌均匀后立即按照游离型srb的检测方法检测水体中的srb数量计算水的体积再将所得数值换算成试片表面单位面积的srb数量
环 境 科 学 与 技 术 第 28 卷 增刊 2005 年 6 月
杀灭硫酸盐还原菌的药剂复配与杀菌效果研究
康群1 , 赵世玉2 , 郭永涛3 , 马玉峰3 , 罗永明4
硫酸盐还原菌
硫酸盐还原菌硫酸盐还原菌 (Sulfate-Reducing Bacteria，简称SRB) 是一种厌氧的微生物。
广泛存在于土壤、海水、河水、地下管道以及油气井等缺氧环境中。
它能利用金属表面的有机物作为碳源，并利用细菌生物膜内产生的氢，将硫酸盐还原成硫化氢。
在某些环境中，硫酸盐还原细菌（SRB）能够在管道壁上聚集，使管道可能发生局部点蚀。
硫酸盐还原菌与有机物质和硫酸盐反应生成硫化氢和二氧化碳会与管道壁中的铁反应，产生不同形式的硫化铁。
硫化铁和管道中其他形式的沉积物形成大量的黑色粉末，这些黑色粉末比管道碳钢硬度大，故会对管道部件造成严重的腐蚀危害。
仪器和控制阀的污染 - 结垢可能导致测量结果不良，腐蚀会导致的部件损；堵塞过滤系统 - 当管道系统中含有过量的黑色粉末时，可能会导致过滤器寿命缩短；管道 - 黑色粉末增加了管道内壁表面的粗糙度，可能会引起严重或不受控制的腐蚀以至于导致管道失效；对于SRB，水是其存在且发生代谢活动的主要因素，要减少SRB的腐蚀影响，就需要对管道中的水汽进行控制或消除，并用适当的生物杀灭剂进行控制。
硫酸盐还原菌的检测SRB的生物腐蚀带来的危害和损失是巨大的，然而在对SRB进行控制和消除之前，需要对相关可能会发生腐蚀的场合进行SRB检测，以判断SRB是否存在以及含量多少，从而制定适当的治理方案。
目前，国内外学者对硫酸盐还原菌的检测方法进行了许多探索和研究，发明了许多检测技术，从原理上讲，主要分为：（1）培养法；（2）免疫学法；（3）atp法；（4）代谢产物定量法。
1培养法培养法主要有测试瓶法、琼脂深层培养法和溶化琼脂管法。
这些方法都是根据API RP-38美国石油学会推荐的地下注入水分析方法中的3管平行绝迹稀释法（Disappearing Dilution Method）进行的。
其中测试瓶法是利用瓶装的含乳酸盐、硫酸盐和fe2+（或金属铁）的培养基对待测水样进行接种培养，当待测样品中存在SRB时，经过培养瓶底会出现黑色的沉淀（FeS），以此作为SRB生长指示，从而确定水样中srb的含量。
油田污水中硫酸盐还原菌杀菌剂的研究
第50卷第2期当代化工V〇1.50, No.2 2021 年 2 月_______________________________Contemporary Chemical Industry____________________________February, 2021油田污水中硫酸盐还原菌杀菌剂的研究徐安国，陈缘博，王超群，党海锋(中海油田服务股份有限公司油W化学事业部，（河065201 )摘要：硫酸盐还原菌（SRB)是石油生产过程中常见的有害菌，其主要危害是引起生物腐蚀和注水水质 沿程恶化油田常用的杀菌方法为操作简单、杀菌效果明显的化学杀菌法，其技术关键是高效杀菌剂的开发及 杀菌条件的优化设计：研究了 3种杀菌剂CA-SJ01 ,CA-SJ02和CA-SJ03在不同条件下对南海Z油田采出污水 中SRB的抑制作用通过单因素法，得到了单一菌剂的最低杀菌温度、最低使用质量浓度、最短杀菌时间在 此基础匕通过杀菌时间、杀菌温度、杀菌剂质量浓度3因素3水平L (33)正交实验，考察了不同杀菌剂的 最佳使用条件。
结果表明：CA-S川I的最佳使用条件为温度35尤、质量浓度10 m g l1、处理时间30 min;CA-S_I02的最佳使用条件为温度35丈、质量浓度Smg'L—'、处理时间6h;CA-SJ03的最佳使用条件为温度25 t、质量浓度50 、处理时间1h最后结合海t平台高效开发时效性，优选CA-SJ01作为硫酸盐细菌杀菌剂关键词：硫酸盐还原菌（SKB);杀菌剂；油田污水；抑制性中图分类号：TQ455.4 文献标识码： A 文章编号：1671-0460(2021)02-0366-04Study on the Inhibition Effect of Three Kinds of Bactericideson Sulfate Reducing Bacteria in Oilfield WastewaterX U A n-guo,WANG Chao-qun,CHEN Yuan-bo,DANG Hai-feng(China Oilfield Chemicals Services Limited, Sanhe 065201, China)Abstract: Sulfate reducing bacteria (SRB) is a common harmful bacterium in the process of oil production, whichmainly caused biological corrosion and water quality deterioration. Chemical sterilization method with thecharacteristics of simple and effective is considered as the commonly sterilization method. The key of the technologyis the development of high effective bactericide and the optimal design of sterilization conditions. In the paper,inhibition effect of three kings of bactericides (CA-SJ01, CA-SJ02 and CA-SJ03) on SRB in Nanhai Z oilfieldwastewater under different conditions was studied. The minimum bactericidal temperature, the lowest massconcentration and the shortest sterilization time were obtained by the single factor experiment. On the basis of singlefactor experiment, the best conditions for the use of different fungicides were investigated by L9(33) orthogonalexperiment, including sterilization time, sterilization temperature and mass concentration of bactericides . The resultsshowed that the optimal working conditions for CA-SJ01 was as follows: temperature 35 °C,mass concentration10 mg-L 1, treating time 30 min; the optimal working conditions for CA-SJ02 was as follows: temperature 35 °C, massconcentration 5 mg-L treating time 6 h; the optimal working conditions for CA-SJ03 was as follows: temperature25 °C, mass concentration 50 mg-L treating time 1h. Combined with the high efficiency development demand ofoffshore platfonn, CA-SJ01 was selected as the bactericide.Key words: Sulfate reducing bacteria (SRB); Fungicide; Oil field wastewater; Inhibition我国大多油田已进人注水开发或三次采油阶段，污水排放或污水回注量日益增大。
硫酸盐还原菌培养具体流程
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测试瓶法快速检测循环水中硫酸盐还原菌
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操作繁琐 + 费时 & 需 %! 6$!月初的样到月末才能出结 果!不能及时反映现场出现的问题 ’培养 L 镜检法 ,’-虽 然快速但因微生物形态干扰 ! 检测结果受主观影响 很大 ! 不适用于循环水 ()* 检测 % 测试瓶法
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方法精密度考查 为了充分考查该法的精密度 ! 我们进行了考查
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测试瓶法与 -# " .’*/*0)1 !$%20 的对照及不同 重复瓶的选择 为了进一步考查测试瓶法检测 !"# 的可靠性 $
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含氮高浓度有机废水处理 % 对于同时需要氧化和硝 化的高含氮高浓度有机废水处理 % 采用以 #%$ 法作 为处理工艺主体的 G8#%$ ! %HI$ ! 7JK$ 三段生物 处理工艺是行之有效的方法 &
硫酸盐还原菌检测方法
硫酸盐还原菌检测方法1试样经高温通氧燃烧，使硫转化成二氧化硫，经吸收后可用多种方法进行测定，如碘量法、电导法、红外吸收光谱法等。
2 将试样中的硫转化成硫酸盐并经过分离除去干扰组分后以硫酸钡重量法进行测定。
3 试样溶水解性酸溶液中进上氧化剂并使硫转化成硫酸盐，然后重新加入还原剂并使硫酸盐还原成为硫化氢。
经稀释后用光度法或电位滴定法展开测量。
4 目前，在我国各钢铁企业检测普碳钢、高中低合金钢、不锈钢、生铸铁、球墨铸铁、合金铸铁、锰铁等多种金属材料最常用的方法是用碳硫分析仪检测金属硫的含量，金属成分用最先进的光谱仪检测法，两者结合使金属材料检测更精确，也是保证产品质量的最有利“法宝”1.乙酸锌结晶-过滤法当水样中只含有少量硫代硫酸盐、亚硫酸盐等干扰物质时，可将现场采集并已固定的水样，用中速定量滤纸或玻璃纤维滤膜进行过滤，然后按含量高低选择适当方法，直接测定沉淀中的硫化物。
2.酸化—吹气法若水样中存在悬浮物或浑浊度高、色度深时，可将现场采集固定后的水样加入一定量的磷酸，使水样中的硫化锌转变为硫化氢气体，利用载气将硫化氢吹出，用乙酸锌—乙酸钠溶液或2%氢氧化钠溶液吸收，再行测定。
3.过滤器—酸化—吹气分离法若水样污染严重，不仅含有不溶性物质及影响测定的还原性物质，并且浊度和色度都高时，宜用此法。
即将现场采集且固定的水样，用中速定量滤纸或玻璃纤维滤膜过滤后，按酸化吹气法进行预处理。
预处理操作是测定硫化物的一个关健性步骤，应注意既消除干扰物的影响，又不致造成硫化物的损失。
工业市场需求硫在工业中很重要，比如作为电池中或溶液中的硫酸。
硫被用来制造火药。
在橡胶工业中做硫化剂。
硫还被用来杀真菌，用做化肥。
硫化物在造纸业中用来漂白。
硫酸盐在烟火中也有用途。
硫代硫酸钠和硫代硫酸氨在照相中做定影剂。
肥料。
生产硫酸、亚硫酸盐、杀虫剂、塑料、搪瓷、合成染料。
橡胶硫化。
染料。
药物。
油漆。
硫矿物最主要的用途是生产硫酸和硫磺。
硫酸是耗硫大户，中国约有70%以上的硫用于硫酸生产。
硫酸盐还原菌杀菌实验 (瓶试法)
硫酸盐还原菌杀菌实验一、方法提要MPN法-测试瓶法，在35℃（或实际水养环境温度下）培养7天。
二、硫酸盐还原菌生长显示特征硫酸盐还原菌测试瓶中的液体变黑、有黑色沉淀或铁钉变黑，均表示有硫酸盐还原菌生长。
三、试验仪器和设备1、生化培养箱2、无菌注射器：1mL3、SRB—HX测试瓶（七天）4、100mL试剂瓶。
四、实验前的准备1.准备好所需无菌注射器和测菌瓶；2.待检测的现场水样（或驯化好的SRB富集液—其获得见“五-1-菌种的制备”）。
五、测定步骤1、菌种的制备一般采用现场取得含菌水样作为待用的菌悬液。
当没有现场水样或水样不足时，可采用以下方法进行SRB的富集液培养：（1）向SRB测试瓶（9mL规格，如北京华兴化学试剂厂产的SRB-HX型细菌测试瓶）中注入1ml含SRB菌种的水样，可根据需要量做多个平行瓶；（2）将注菌的SRB测试瓶于恒温培养箱中合适温度（最好与现场待测水样温度一致，误差可为±5℃）下培养4～7天；如果测试瓶发黑则表明培养成功；然后放入冰箱（4℃）内，作为菌种保存备用。
（3）在实验的前一天需在使用原培养温度下活化培养3-5小时，作为制备菌悬液之用。
当然，SRB富集液的培养也可采用更为复杂的自制培养基进行驯化培养，但由于相对测菌瓶而言比较费时复杂，一般情况下采用以上方法即可。
2、菌悬液的制备取现场水样为试验用菌悬液。
如果现场水样菌数不足或因存放过久没有细菌可如下操作获得菌悬液：将冰箱内驯化的富集液在使用原培养温度下活化培养3-5小时，然后用滤纸过滤，按照菌种：现场水样=1：20～200比例（根据需要的空白菌数选择相应的稀释），加入至现场水样中，搅匀后即可作为菌悬液使用。
3、药剂的配制将被检测药剂配成10mg/mL（1%）水溶液。
（可根据具体的检测要求具体配制药剂浓度）4、7、试样菌药接触培养取100mL菌悬液加入试剂瓶中，再加入规定浓度药剂后，密封放入生化培养箱中35℃（或实际水养环境温度下）培养接触4h（可根据具体实验规定接触培养时间），待测。
硫酸盐还原菌的检测
自主实验论文探究污水处理厂中硫酸盐还原菌是否存在班级：生物技术一班成员：目录1 背景 (3)1.1 关于污水 (3)1.2 污水中的厌氧菌 (3)2 实验原理、实验材料与仪器 (4)2.1实验原理 (4)2.2 实验材料与仪器 (4)2.2.1 实验材料 (4)2.2.2 实验仪器 (4)3 试验方法 (5)4 结果与结论 (6)4.1 结果 (6)4.2 结论 (7)5 展望 (7)1 背景1.1 关于污水水污染是由有害化学物质造成水的使用价值降低或丧失，污染环境的水。
污水中的酸、碱、氧化剂，以及铜、镉、汞、砷等化合物，苯、二氯乙烷、乙二醇等有机毒物，会毒死水生生物，影响饮用水源、风景区景观。
污水中的有机物被微生物分解时消耗水中的氧，影响水生生物的生命，水中溶解氧耗尽后，有机物进行厌氧分解，产生硫化氢、硫醇等难闻气体，使水质进一步恶化。
1.2 污水中的厌氧菌厌氧菌是一类在无氧条件下比在有氧环境中生长好的细菌，且不能在空气（18%氧气）和（或）10%二氧化碳浓度下的固体培养基表面生长的细菌。
这类细菌缺乏完整的代谢酶体系，其能量代谢以无氧发酵的方式进行。
厌氧菌在污水中会分解其中的有机物，产生的产物会进一步破坏水体。
因此，了解污水中的厌氧菌的存在非常有意义。
实验2 实验原理、实验材料与仪器2.1实验原理硫酸盐还原菌在无氧条件下产生H2S，可以与+2价铁离子结合形成FeS黑色沉淀2.2 实验材料与仪器2.2.1 实验材料取来自“好来西”工厂无氧废水池的废水半试管；牛肉膏；蛋白胨；氯化钠；琼脂；5%硫酸亚铁溶液；50ML生理盐水；2.2.2 实验仪器500ML锥形瓶；搪瓷杯；无菌吸管（1ml和10ml若干）电炉；高压灭菌锅；40支洁净试管；无菌操作台；3 试验方法1.取1.5g牛肉膏，5g蛋白胨，2.5g氯化钠，6g琼脂和5000mL水比例混合加热，待里面固体全部溶解后分装到锥形瓶中。
2.配置50ML生理盐水，以每支4.5ML的量分装到6支洁净的试管中备用，并包30支洁净的试管塞上塞子，包若干支无菌吸管，和培养基一起灭菌。
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硫酸盐还原菌杀菌实验
一、方法提要
MPN法-测试瓶法，在35℃（或实际水养环境温度下）培养7天。
二、硫酸盐还原菌生长显示特征
硫酸盐还原菌测试瓶中的液体变黑、有黑色沉淀或铁钉变黑，均表示有硫酸盐还原菌生长。
三、试验仪器和设备
1、生化培养箱
2、无菌注射器：1mL
3、SRB—HX测试瓶（七天）
4、100mL试剂瓶。
四、实验前的准备
1.准备好所需无菌注射器和测菌瓶；
2.待检测的现场水样（或驯化好的SRB富集液—其获得见“五-1-菌种的制备”）。
五、测定步骤
1、菌种的制备
一般采用现场取得含菌水样作为待用的菌悬液。
当没有现场水样或水样不足时，可采用以下方法进行SRB的富集液培养：
（1）向SRB测试瓶（9mL规格，如北京华兴化学试剂厂产的SRB-HX型细菌测试瓶）中注入1ml含SRB菌种的水样，可根据需要量做多个平行瓶；
（2）将注菌的SRB测试瓶于恒温培养箱中合适温度（最好与现场待测水样温度一致，误差可为±5℃）下培养4～7天；如果测试瓶发黑则表明培养成功；然后放入冰箱（4℃）内，作为菌种保存备用。
（3）在实验的前一天需在使用原培养温度下活化培养3-5小时，作为制备菌悬液之用。
当然，SRB富集液的培养也可采用更为复杂的自制培养基进行驯化培养，但由于相对测菌瓶而言比较费时复杂，一般情况下采用以上方法即可。
2、菌悬液的制备
取现场水样为试验用菌悬液。
如果现场水样菌数不足或因存放过久没有细菌可如下操作获得菌悬液：将冰箱内驯化的富集液在使用原培养温度下活化培养3-5小时，然后用滤纸过滤，按照菌种：现场水样=1：20～200比例（根据需要
的空白菌数选择相应的稀释），加入至现场水样中，搅匀后即可作为菌悬液使用。
3、药剂的配制
将被检测药剂配成10mg/mL（1%）水溶液。
（可根据具体的检测要求具体配制药剂浓度）
4、
7、试样菌药接触培养
取100mL菌悬液加入试剂瓶中，再加入规定浓度药剂后，密封放入生化培养箱中35℃（或实际水养环境温度下）培养接触4h（可根据具体实验规定接触培养时间），待测。
同时做空白对照样。
8、试样的稀释和接种
（1）用10倍稀释法稀释水样，即用无菌注射器取1mL待测样注入SRB-HX测试瓶中，充分摇匀，此时稀释度为10-1。
（2）另取一支无菌注射器取稀释度为10-1的水样1mL注入到第二个SRB-HX 测试瓶中，充分摇匀，此时稀释度为10-2，以此类推，直至需要的稀释度为止。
（3）每个稀释度作2-5个平行测试瓶。
每接种一个稀释度更换一支无菌注射器针管。
（4）加药试样的操作相同，最后的稀释度可以比空白试样少1-2次方。
9、培养
将稀释好的SRB-HX测试瓶充分摇匀，置于生化培养箱中在规定温度下培养7天。
六、计数与报告
（1）凡测试瓶中的液体变黑、有黑色沉淀或铁钉变黑，均表示有硫酸盐还原菌存在，以“+”（阳性）表示，其余测试瓶以“-”（阴性）表示。
（2）算出10进位稀释测试瓶中阳性试剂瓶数，以阳性组合指数记录下来。
（3）在10进位稀释中多于三个稀释度时，阳性组合的指数只需要用其中依次的三个稀释度，对这三个稀释度的决定是先选出5瓶全部阳性反应的最大稀释度，然后选出其次相连的两个更高的稀释度，算出阳性组合指数。
（见表格1例1、2、4）
（4）若按照上条规定的原则选出三个稀释度后，有更高的稀释仍然产生一个阳性试剂瓶，就应将这一阳性试剂瓶并入所选择的最高稀释的阳性结果中。
（5）根据阳性组合的指数，查阳性组合指数与菌数的对应关系表计算出对应菌数。
七、分析结果表述
以百分数表达杀菌率X按照公式（1）计算：
式中：A—空白对照样的菌数；
B—加药试样存活菌数。