硫酸盐还原菌杀菌实验 (瓶试法)

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《硫酸盐还原菌》课件

16S rRNA分析
通过分析硫酸盐还原菌的16S rRNA基因序列，进行系统发育学分析，确定其在微生物分类学中的位置。
qPCR技术
利用荧光定量PCR技术，对特定基因的表达量进行定量分析，了解硫酸盐还原菌在环境中的分布和丰度。
THANKS
感谢观看
06
研究方法与技术
培养方法
富集培养
通过提供适宜的厌氧条件和碳源、硫源等，促使硫酸盐还原菌生长繁殖。
纯培养
通过分离纯化，获得单一的硫酸盐还原菌种，进行深入研究。
恒化培养
在培养过程中保持恒定的生长条件，如温度、pH值、营养物质等，以研究硫酸盐还原菌的生长特性。
生理生化检测技术
氧化还原电位测定
01
通过测量培养液中氧化还原电位的变化，判断硫酸盐还原菌的
生长状况和活性。
硫化物测定
02
利用化学或生物方法测定培养液中硫化物的含量，了解硫酸盐
还原菌的还原能力。
细胞活性染色法
03
利用染色技术对活细胞进行染色，通过观察染色结果判断硫酸
盐还原菌的活性。
分子生物学技术
基因组测序
对硫酸盐还原菌的基因组进行测序，了解其基因组成和功能。
物理筛选法
利用硫酸盐还原菌的特殊物理性质，如大小、形状、比重等，通过过滤或离心等方法将其与其他微生物分离。
鉴定技术

水体中厌氧菌的检测

一实验构思
实验原理：在无氧条件下，硫酸盐还原菌可以将硫酸盐还原菌还原成H2S，而后与 +2价铁离子结合生成褐色沉淀，即污水中可以证明含有硫酸盐还原菌。
二实验意义
由于在无氧条件下，硫酸盐还原菌可以将硫酸盐还原菌还原成H2S，会对水体造成进一步的污染，所以对于硫酸盐还原菌的监控是非常有意义的。
三实验步骤
3.2 实验操作：
1.取1.5g牛肉膏，5g蛋白胨，2.5g氯化钠，6g琼脂和5000mL水比例混合加热，待里面固体全部溶解后分装到锥形瓶中。 2.配置50ML生理盐水，以每支4.5ML的量分装到6支洁净的试管中备用，并包30支洁净的试管塞上塞子，包若干支无菌吸管，和培养基一起灭菌。 3.将试管和锥形瓶一起放入灭菌锅灭菌20分钟。 4．将六只装有灭过菌的生理盐水的试管取出并编号2-7并将原菌液加入编号为2的试管，然后梯度稀释。 5.待锥形瓶内液体稍冷却后，再在无菌操作台上进行培养基的分装,30支试管中每支试管装4.5ML培养基。 6.将装有培养液的试管编号（1号1支，2号2支，3号3支，4号4支， 5、6、7号各五支） 7. 将装有梯度稀释的菌液的试管里的菌液分别加入到装有培养液的试管里（原液加入1号培养液试管、同编号的生理盐水菌液加入同编号的装有培养基试管），每支试管滴加0.5ML菌液并滴加3-5滴5%的硫酸亚铁溶液。 8.待上述所有加有菌液及硫酸亚铁溶液的试管内培养基凝固后，在每支试管中续加5ML第1步配置过的多余的培养基，使其封住加有菌液的培养基让其形成一个无氧环境。

硫酸盐还原菌杀菌剂的合成及机理探讨

一、还原硫酸盐杀菌剂的合成

1、首先，将硫酸盐与还原剂混合，加热至反应温度；

2、在混合液中添加酯代谢酶催化剂，在受热的情况下降解硫酸盐；

3、当反应温度升高时，硫酸盐以及还原剂经历水解反应，转化为具有催化性、亲水性和能够容忍中性浓度的硫酸还原杀菌剂；

4、最后，在反应结束后，加入适宜的表面活性剂，使其稳定，生成硫酸还原杀菌剂。

二、硫酸盐还原菌杀菌剂的机理探讨

1、由于硫酸还原菌杀菌剂具有亲水性，故可以有效抑制菌体表面化学水合作用以及细胞外碳酸酐酶酶，从而降低菌体能量水平；

2、硫酸还原菌杀菌剂经过受热后形成氧阴离子，影响细胞膜安全性，从而破坏菌种细胞壁；

3、在超过一定温度时，水溶液就会充满水分子释放的热，使得细菌在连续的温度变化中破坏，最终坏死；

4、此外，硫酸盐还原菌杀菌剂也可以结合细胞膜表面的一些受体，如金属离子、胞外多糖或蛋白质，干扰必需物质的运输，从而达到杀菌作用。

硫酸盐还原菌

硫酸盐还原菌(SRB)

1 SRB的分类

硫酸盐还原菌种类很多，广泛分布于土壤、海水、淡水和适宜的陆地环境中。据不完全统计，SRB己有15个属40多种，其中参与废水处理的有9个属。同时SRB也是一类代谢谱较宽的菌群，可作为其生长底物的物质有氢、甲醇、C1-C18的脂肪酸、芳香族化合物等。

2 SRB的生理特性

SRB的一个重要生理特征是生长力强。它广泛存在于水田、湖、沼泽、河川底泥、石油矿床、反当动物的第一胃等地方。SRB生长速度快，含有不受氧毒害的酶系，因此可以在各种各样的环境中生存，保证了SRB有较强的生存能力。

SRB的另一生理特性是硫酸盐的存在能促进其生长，但不是其生存和生长的必要条件。在缺乏硫酸盐的环境下，SRB通过进行无SO42-参与的代谢方式生存和生长:当环境中出现了足量的流酸盐后，SRB则以SO42-为电子受体氧化有机物，通过对有机物的异化作用，获得生存所需的能量，维持生命活动。

3 SRB的代谢机理

一般来说，硫酸故还原菌的代谢过程分为以下三个阶段:

(1)分解阶段在厌氧条件下，有机物被分解，并产生少量ATP。

(2)电子传递阶段前一阶段产生的高能电子通过SRB具有的电子传递链(如细胞色素C3等)逐级传递，产生较多的ATP。

(3)氧化阶段电子传递给氧化态的硫元素，将其还原为硫离子，同时消耗ATP提供能量。

4 SRB生长所需的碳源、氮源

SRB的不同菌属生长所利用的碳源是不同的，最普遍的是利用C3,C4脂肪酸，如乳酸盐、丙酮酸、苹果酸。近20余年来，由于选用不同碳源的培养基，SRB利用的有机碳源和电子供体的种类不断扩大，发现SRB还能利用乙酸、丙酸、丁酸和长链脂肪酸及苯甲酸等。SRB

细菌的生化试验—硝酸盐还原实验(微生物检验课件)

硝酸盐还原试验
原理：
使硝酸盐还原的细菌能从硝酸盐中获得氧，使其成为亚硝酸盐或其它还原物。培养基中的亚硝酸基能与α-萘氨和苯磺酸形成红色的N-α-萘氨偶氮苯磺酸。若出现红色现象则说明该菌还原硝酸盐。
硝酸盐还原试验方法
方法：
取一环待检菌接种到硝酸盐琼脂斜面上，35℃培养18~24小时，然后依次加入含α萘氨和对氨基苯磺酸的试剂各1mL，30s后观察结果。
应用：
有助于鉴别肠杆菌科、嗜血杆菌属、奈瑟菌属、布兰汉菌属、假单胞菌属等。
ห้องสมุดไป่ตู้ 硝酸盐还原试验结果
-+
红色为阳性无色为阴性
硝酸盐还原试验结果
+
-
无色+锌粉→无色：阳性无色+锌粉→红色：阴性

杀灭硫酸盐还原菌的药剂复配与杀菌效果研究

江汉油田是我国油田污水注水系统受 SRB 腐蚀最为严重的油田之一。SRB 引起的腐蚀问题和 SRB 抗药性问题一直没有彻底解决。目前油田注水中最常用的杀菌剂为 1227 ,属于季铵盐类杀菌剂 ,具有高效、低毒、不易受 p H 值变化影响、使用方便、对粘液层有较强的剥离作用、化学性能稳定、分散及缓蚀作用较好等优点。但是 ,1227 也存在着易起泡沫 ,矿化度较高时杀菌效力降低、容易吸附损失等缺点 ,而且如果长期单独使用 ,SRB 对 1227 易产生耐药性[2] 。
将 A 和 C 按照 ,1 ∶0 ,0 ∶1 , ∶1 ∶4 ,1 ∶1 ,3 ∶1 ,4 ∶1 ,5 ∶1 ,10 ∶1 ,20 ∶1 ,50 ∶1 ,200 ∶1 的比例配成复配药剂。按照 1. 3 的方法测定每种复配药剂和 1227 的最低杀菌浓度测定每种复配药剂和 1227 的最低杀菌浓度。实验结果见表 3 。
将待分析的试片放在盛有一定量的蒸馏水的烧杯中用刷子刷掉试片表面的全部srb菌再用少量的蒸馏水冲洗试片和刷子各三遍冲洗液倒入烧杯中搅拌均匀后立即按照游离型srb的检测方法检测水体中的srb数量计算水的体积再将所得数值换算成试片表面单位面积的srb数量
环境科学与技术第 28 卷增刊 2005 年 6 月
在培养基中用没有耐药性的 SRB 菌种做杀菌实
成药剂记为 J H22 杀菌剂。

硫酸盐还原菌 elisa

硫酸盐还原菌elisa

全文共四篇示例，供读者参考

第一篇示例：

硫酸盐还原菌是一类在缺氧条件下利用硫酸盐还原过程产生能量

的微生物。这些微生物可以在各种不同的环境中存在，包括深海泥沙，泥煤沼气等。硫酸盐还原菌的研究对于理解地球生物地球化学循环过程、深海沉积物中沉积物的物理化学和生物地球化学变化具有重要意义。由于硫酸盐还原菌具有较高的嗜盐性和耐酸性，以及其在生态系

统中的显著功能和重要性，因此引起了科学家们的极大兴趣。

在硫酸盐还原菌的研究中，常常需要对其进行定量检测，以便了

解其在不同环境条件下的分布和数量。ELISA（酶联免疫吸附测定法）是一种广泛应用的技术，可以用于定量检测硫酸盐还原菌的存在和数量。本文将介绍硫酸盐还原菌ELISA的原理、实验步骤和应用。

【硫酸盐还原菌ELISA的原理】

ELISA是一种利用特异性抗原和抗体相互作用的技术，通过将待检测的样品中的硫酸盐还原菌特异性抗原与已标记的抗硫酸盐还原菌抗

体结合，从而实现对硫酸盐还原菌进行定量检测。ELISA技术主要包括直接ELISA、间接ELISA、竞争ELISA和间接-竞争ELISA等多种形式，通常根据具体实验要求进行选择。

1. 样品处理：将待检样品（如土壤、水样等）进行适当处理，提取出硫酸盐还原菌特异性抗原，并进行适当稀释。

2. 捕获抗体：在ELISA板上吸附抗硫酸盐还原菌抗体，形成固定相。这些抗体具有高度的特异性，只能结合硫酸盐还原菌抗原。

4. 洗涤：洗涤去除未结合的物质，保留结合的复合物。

5. 检测：加入与硫酸盐还原菌抗原结合的标记抗体，形成抗原-抗体-标记抗体复合物。这种标记抗体通常是酶，如辣根过氧化物酶。

《硫酸盐还原菌》PPT课件 (2)

8
精选PPT
最有名的公害例子是发生在1953年，日本九洲水洖市出现了一种怪病，有个小女孩无缘无故地四肢麻木、神经功能减退、行为异常、步态不稳、听觉与视觉衰退等，此后8年间，陆续出现百余件病例；后来才发现是水洖市附近的一家工厂以有机汞为催化剂，排出的工业废水污染了水洖河，也流入了Yatsushiro海湾中，经由水中生物转化成剧毒的甲基汞，不仅破坏海洋生态，造成鱼类、海藻与海鸟的灭绝，而位于食物链最顶端的人类，也因而中毒，产生病变。
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精选PPT
硫酸盐还原菌处理的优势
可处理的重金属种类多
多数重金属硫化物的溶解度很小,因而本方法可用于处理多数常见的重金属废水。
处理潜力大
用于重金属废水处理的物质为SRB 的代谢产物,H2S 的消耗不会影响SRB 的代谢活性。因而只要控制处理的条件就可以使SRB 不断产生H2S ,用于废水中重金属的处理。
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精选PPT
生物处理方法根据其处理原理的不同可以分为两类: ①吸附法:利用一些微生物对重金属离子的特殊吸附能力去除废水中的重金属; ②沉淀法:利用微生物的代谢活动将废水中的重金属盐转化成不可溶的物质而从废水中去除。近年来发展起来的硫酸盐还原法处理工艺即属于沉淀法范畴。
11
精选PPT
SRB处理工艺根据其工艺流程的不同可以分为 5类： 1、分批沉淀工艺 2、SRB作为生物吸附剂用于废水处理 3、SRB和化学方法的混合工艺 4、SRB全混合反应器处理工艺 5、厌氧污泥床和厌氧流化床SRB处理工艺

不同杀菌剂对硫酸盐还原菌杀菌能力评价

高建富;李进;敬超文

【摘要】采用静态培养法考察NaClO、1227和异噻唑啉酮3种杀菌剂对循环水中硫酸盐还原菌(SRB)的杀菌效果,并利用扫描电镜(SEM)观察SRB细胞形态结构变化和SS316L不锈钢试件的腐蚀形貌.结果表明,NaClO在投药12h时杀菌效果最佳,早于1227和异噻唑啉酮的24 h; NaClO抑菌持续时间较短,仅为24 h,抑制细菌生长时间最长的杀菌剂为1227,可持续1周左右;在最佳条件下,NaClO、1227、异噻唑啉酮的最大杀菌率分别为86.71％、89.70％、79.70％;随着杀菌时间的延长,SRB细胞结构由局部分解开始,7h后细胞完全解体.在接种SRB的循环冷却水中SS316L表面会生成一层分布不均的生物膜,其对SS316L的腐蚀以点蚀为主.

【期刊名称】《工业用水与废水》

【年(卷),期】2013(044)006

【总页数】4页(P53-56)

【关键词】硫酸盐还原菌;SS316L;扫描电镜;杀菌剂;杀菌率

【作者】高建富;李进;敬超文

【作者单位】北京交通大学土木建筑工程学院,北京 100044;北京交通大学土木建筑工程学院,北京 100044;北京交通大学土木建筑工程学院,北京 100044

【正文语种】中文

【中图分类】X703.5

循环冷却水中微生物成长和繁殖过程中产生的代谢产物对管材具有腐蚀作用，防止微生物对管材腐蚀的主要方法是杀菌灭藻。国内外常用水处理杀菌剂分为氧化型和非氧化型两类。氧化型杀菌剂［1］具有杀菌灭藻速度快、广谱性、处理费用较低、对环境污染相对较小、不易产生抗药性等优点，不足之处在于受水中有机物、还原性物质和pH值的影响较大，药效时间短，对沉积物或黏泥的分散渗透和剥离效果差等［2］。非氧化型杀菌剂是以致毒作用于微生物的特殊部位，受水质影响小，杀菌作用持久，对沉积物或黏泥有较强的渗透和剥离作用，但缺点是处理费用相对氧化型杀菌剂较高，容易引起环境污染，水中的微生物易产生抗药性［3］。

细菌个数的测定

对返排液杀菌效果的测试方法

实验原理：推测返排液主要的细菌为硫酸盐还原菌、铁细菌和腐生菌。通过加入不同杀菌剂，测量加入前后细菌含量，得出不同杀菌剂的杀菌率，优选效果最好的杀菌剂。

实验仪器：

1)硫酸盐还原菌（SRB）测试瓶；

2)铁细菌（IB）测试瓶；

3)腐生菌（TGB）测试瓶；

4)注射器：1ml；

5)恒温培养箱；

6)电热消毒器。

实验步骤：

1)将测试瓶排成两组，并编号；这是二次重复法，三次重复法方法类似，不过要把测试瓶

分为三组。

2)用120℃消毒20min的无菌注射器取1.0ml水样注入第一组1号瓶内，充分震荡；

3)用另一只无菌注射器从第一组1号瓶中取1.0ml水样注入第一组2号瓶；

4)再更换无菌注射器从第一组2号瓶取1.0ml水样注入第一组3号瓶；

5)以此类推一只稀释到最后一瓶为止。根据细菌含量决定稀释瓶数，一般稀释到7号瓶；

6)将杀菌剂加入到所测试的水样，用无菌注射器去1.0ml杀菌后的水样注入到第二组1

号瓶内；

7)用另外一只无菌注射器从第二组1号瓶去1.0ml水样注入第二组2号瓶；

8)以此类推。根据细菌含量决定稀释瓶数，一般稀释到7号瓶；

9)将上述测试瓶放入放入恒温培养箱中培养，温度控制在37℃，7d后读数；

10)用下列公式计算杀菌率：

×100%

Y=B1−B2

Y——杀菌剂的杀菌率，%；

B1——加杀菌剂前水样中细菌含量，个/ml;

B2——加杀菌剂后水样中细菌含量，个/ml。

备注：

一、注意事项

1)SRB测试瓶变黑或者有黑色沉淀，表示有硫酸盐还原菌；TGB测试瓶由红变为黄或浑浊，

表示有腐生菌；IB测试瓶出现棕红色沉淀，表示有铁细菌。

硫酸盐还原菌培养具体流程

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硫酸盐还原菌检测方法

1试样经高温通氧燃烧，使硫转化成二氧化硫，经吸收后可用多种方法进行测定，如

碘量法、电导法、红外吸收光谱法等。

2 将试样中的硫转化成硫酸盐并经过分离除去干扰组分后以硫酸钡重量法进行测定。

3 试样溶水解性酸溶液中进上氧化剂并使硫转化成硫酸盐，然后重新加入还原剂并使

硫酸盐还原成为硫化氢。经稀释后用光度法或电位滴定法展开测量。

4 目前，在我国各钢铁企业检测普碳钢、高中低合金钢、不锈钢、生铸铁、球墨铸铁、合金铸铁、锰铁等多种金属材料最常用的方法是用碳硫分析仪检测金属硫的含量，金属成

分用最先进的光谱仪检测法，两者结合使金属材料检测更精确，也是保证产品质量的最有

利“法宝”

1.乙酸锌结晶-过滤法

当水样中只含有少量硫代硫酸盐、亚硫酸盐等干扰物质时，可将现场采集并已固定的

水样，用中速定量滤纸或玻璃纤维滤膜进行过滤，然后按含量高低选择适当方法，直接测

定沉淀中的硫化物。

2.酸化—吹气法

若水样中存在悬浮物或浑浊度高、色度深时，可将现场采集固定后的水样加入一定量

的磷酸，使水样中的硫化锌转变为硫化氢气体，利用载气将硫化氢吹出，用乙酸锌—乙酸

钠溶液或2%氢氧化钠溶液吸收，再行测定。

3.过滤器—酸化—吹气分离法

若水样污染严重，不仅含有不溶性物质及影响测定的还原性物质，并且浊度和色度都

高时，宜用此法。即将现场采集且固定的水样，用中速定量滤纸或玻璃纤维滤膜过滤后，

按酸化吹气法进行预处理。预处理操作是测定硫化物的一个关健性步骤，应注意既消除

干扰物的影响，又不致造成硫化物的损失。

工业市场需求

硫在工业中很重要，比如作为电池中或溶液中的硫酸。硫被用来制造火药。在橡胶工

硫酸盐还原菌杀菌实验 (瓶试法)

硫酸盐还原菌杀菌实验

一、方法提要

MPN法-测试瓶法，在35℃（或实际水养环境温度下）培养7天。

二、硫酸盐还原菌生长显示特征

硫酸盐还原菌测试瓶中的液体变黑、有黑色沉淀或铁钉变黑，均表示有硫酸盐还原菌生长。

三、试验仪器和设备

1、生化培养箱

2、无菌注射器：1mL

3、SRB—HX测试瓶（七天）

4、100mL试剂瓶。

四、实验前的准备

1.准备好所需无菌注射器和测菌瓶；

2.待检测的现场水样（或驯化好的SRB富集液—其获得见“五-1-菌种的制备”）。

五、测定步骤

1、菌种的制备

一般采用现场取得含菌水样作为待用的菌悬液。当没有现场水样或水样不足时，可采用以下方法进行SRB的富集液培养：

（1）向SRB测试瓶（9mL规格，如北京华兴化学试剂厂产的SRB-HX型细菌测试瓶）中注入1ml含SRB菌种的水样，可根据需要量做多个平行瓶；

（2）将注菌的SRB测试瓶于恒温培养箱中合适温度（最好与现场待测水样温度一致，误差可为±5℃）下培养4～7天；如果测试瓶发黑则表明培养成功；然后放入冰箱（4℃）内，作为菌种保存备用。

（3）在实验的前一天需在使用原培养温度下活化培养3-5小时，作为制备菌悬液之用。

当然，SRB富集液的培养也可采用更为复杂的自制培养基进行驯化培养，但由于相对测菌瓶而言比较费时复杂，一般情况下采用以上方法即可。

2、菌悬液的制备

取现场水样为试验用菌悬液。如果现场水样菌数不足或因存放过久没有细菌可如下操作获得菌悬液：将冰箱内驯化的富集液在使用原培养温度下活化培养3-5小时，然后用滤纸过滤，按照菌种：现场水样=1：20～200比例（根据需要

硫酸盐还原菌落活性的研究

第21卷第3期2008年6月污染防治技术P OLLUTI O N C ONTROL TECHNOLOGY Vol .21,No .3

Jun.,2008

硫酸盐还原菌落活性的研究

周　彪,　谭志琼

(海南大学环境与植物保护学院,海南儋州　571737)

摘　要:从广州某污水处理厂采取含硫酸盐还原菌(SRB )的污泥,经富集培养、驯化,研究该硫酸盐还原菌(SRB )在pH 值为7.5、30℃的完全厌氧环境中,使硫酸盐转化的效率。试验证明,经过富集、驯化后的硫酸盐还原菌,在1～2h 内生长最快,硫酸盐还原效率最高,经过3h 左右,硫酸盐还原率可达到93.8%。

关键词:硫酸盐还原菌;厌氧微生物;活性中图分类号:X172 文献标识码:A

Study on the Acti v ity of Sulfa te Reducti on Bacter i a l Colony

Z HOU B iao,　T AN Zhi 2qi ong

(Hainan U n iversity Environm en t and P lant P rotection Institu te,D anzhou,Ha inan 571737,China )

Abstract:The sludge that contains the sulfate reducti on bacterial col ony was sa mp led fr om the Guangzhou se wage treat m ent p lant .Thr ough enrich ment culture and accli m atizati on of the sulfate reducti on bacteria,the efficiency of sulfate reducti on at pH 7.5and 30℃was studied .The results indicated that the highest reducti on efficiency was reached bet w een 1h and 2h,and sulfate was reduced 93.8%after 3h .

硫酸盐还原菌甘油保菌条件

硫酸盐还原菌是一类能够利用硫酸盐作为电子受体进行呼吸作

用的微生物。它们通常生活在缺氧或微氧环境中，因此在实验室中

进行培养时需要提供适当的保菌条件。而甘油是一种常用的碳源和

能源供应物质，可以被一些硫酸盐还原菌利用。因此，为了提供适

合硫酸盐还原菌生长的条件，需要考虑以下几个方面：

1. 缺氧环境，硫酸盐还原菌通常生长于缺氧环境中，因此在培

养硫酸盐还原菌时，需要使用密闭的培养瓶或培养皿，并采取适当

的气体置换措施，如用氮气或氩气替换空气，以确保培养环境中氧

气含量较低。

2. 无菌操作，在培养硫酸盐还原菌时，需要严格遵守无菌操作

规范，包括消毒培养器皿、培养基和实验室工作台面等，以防止外

源微生物的污染。

3. 适当的培养基，对于硫酸盐还原菌的培养，通常会选择含有

硫酸盐和其他必需营养成分的培养基，同时添加甘油作为碳源。培

养基的配制需要根据具体的硫酸盐还原菌种类和生长要求进行调整。

4. pH和温度控制，硫酸盐还原菌对环境的pH和温度敏感，因此在培养过程中需要控制培养基的pH值和培养温度，以提供适宜的生长条件。

总的来说，为了成功培养硫酸盐还原菌并利用甘油作为碳源，需要提供无氧、无菌的培养环境，选择适当的培养基配方，并严格控制pH和温度等因素，以促进硫酸盐还原菌的生长和代谢活动。希望这些信息能够帮助你更好地了解硫酸盐还原菌的培养条件。