人类姐妹染色单体色差染色标本的制备和观察

原理：
当细胞在加有Brdu（5-溴脱氧尿核苷）培养基 中进行分裂时，Brdu能取代胸腺嘧啶核苷酸掺 入到新复制的DNA核苷酸链中。经过两个生长 周期后，这种细胞的同一染色体的两条姐妹染色 单体一条是由单股含Brdu的DNA链所组成，另 一条是由双股都含有Brdu的DNA链所组成，而 这种双股都含有Brdu的DNA链具有螺旋化程度 较低的特性，在热盐溶液中受光的照射后更易于 水解，从而影响了与Giemsa染料的亲和力，因 此染成较浅的颜色。而单股含Brdu的DNA链所 组成的染色单体则着色深。这样根据两条姐妹染 色单体所显示的深浅不同的颜色，可以区别中期 染色体的姐妹染色单体。即在普通显微镜下可见 到两条姐妹染色单体显出深浅不同的颜色。
实验准备
器械 ：恒温水浴箱、15W（24寸）紫 外灯、染色缸、刻度吸管、滴头
试剂：500μg/ ml Brdu溶液（5 mg BrdFra Baidu bibliotek溶于10 ml生理盐水），2×SSC溶 液
实验方法
每3 ml培养液中加入Brdu 60微升(10 μg/ml)，避光培养48小时，培养结束 前4小时加秋水仙素，其后步骤同传代 培养细胞染色体标本的制备。
常规方法制片，37℃，烤片1天以上。
标本片放在2×SSC溶液中，并置于 60℃水浴。
紫外灯照射30分钟（灯与玻片的距离 5cm）。
1：10 Giemsa染液染色8分钟。
蒸馏水冲洗后干燥、镜检。
分裂周期分析：
（1）染色体的两个单体均为深染的细胞记 为第一次分裂周期的细胞。
（2）染色体的两个单体一深一浅的细胞记 为第二次分裂周期的细胞。
（3）染色体的两个单体染色都为浅色的细 胞为第三次分裂周期的细胞。
SCE的计数
（1）凡是在染色单体端部出现互换记为1 次交换。
（2）在染色单体中间出现互换记为2次交 换。
（3）如果互换发生在着丝粒部位记为1次 交换。
人类姐妹染色单体色差染色标 本的制备和观察
姐妹染色单体交换（sister chromatid exchange，SCE）
在机体内外有害因素的作用下，染色体 的两条姐妹染色单体的片段会发生等位 点交换，称为姐妹染色单体交换。
由于SCE频率是DNA损伤的灵敏指标， 而且观察方便，故该技术已成为检测致 突变物对人染色体诱变效应大小的常用 手段。