血清甘油三酯的酶法测定

2
术语 和定 义 下列术 语 和定 义适 用 于本 文仵 。
2.1
分析 系统 ana1yticaI system 对某 检验项 目在规 定 浓 度 范 围 内 ,给 出分析 结果 的 一 组按 规定 条 件使 用 的仪 器 和装 置 ,包 括试 剂 和 物品。
E改 自 ISo/IEC导 则 99:2007,3.2测 量系统 measuHng system] 注 1:对 于临床生物化学检验 ,分 析系统主要由按规定条件使用的仪器 、 试剂和校准物组成。 ” 注 2:其 他标准(如 GB/T22576— 2008)中 的类似概念为“ 检验程序 ,但 检验程序包括更广泛内容 ,对 于本标准 ,分 析系统相当于检验程序的分析部分 。
6.2
测定 程序 及 测 定 结 果 的表 述 准备 或 开启 仪 器设 备 。按 商 品试 剂 盒说 明书规 定 的样 品-试 剂 比例 、 反应 温度 和 时 间及 光 度 测 定 条
件 ,自 动或手 工 进行 校 准 物 、 控 物或 样 品-试 剂 混 合 、 育 和 吸 光度测 定 。应 注 意 以下 事项 质 温 —— 尽 量选 择 能提 高测 定 特 异性 的空 白试 验 方 和测 式 定方 式 —— 校 准物 质 的重 复 测 定数 至少 为 2;
C50
ICs 11.020
中 华 人 民 共 和 国 卫 生 行 业 标 准
ˉ Ws/T355ˉ—2011
血 清 甘 油 三 酯 的酶 法测 定
GuideIines for enzy口 natiC measurements of seruⅡ l triglycerides
2011-12-14.发 布
2.2
验 证 verification 提 供 客 观 证 据 ,考 虑 任 何 测 量 不 确 定 度 ,说 明 给 定 事 物 满 足 规 定 要 求 。
[ISO/IEC导 则 99:2007,2.44]
注 1:本 标准主要是指分析系统的验证 ,即 某分析系统在本实验 室的性能是否与规定性能指 标或厂商提供的性能 指标一致。 ” “ 注 2:有 关概念是“ 确认 (validao° rl,,即 规定要求 ” 满足指定用途的验证 ,本 标准的验证包含确认的含义。
: ;
;
浓度呈 通过原 点 的直 线关 系 —— 试 剂溶 液在测 定 长 下 波 的吸光 度 小 于 0.05; —— 在规定 温度下 保 持 稳 定 1年 ——试 剂批 间差小 于 1%。
;
;
4,2
校 准物质 和质控 物 酶法 测定 甘油 三 酯 使 用 的校 准 物 和质控 物应 符合 如 下要求 —— 可使 用血清校 准 ,在 物 测 定 总甘 油 的方 法 中也 可使 用 甘油水 溶 液 校 准物 ˉ — 用校 准物 的甘 油 三 — 使 酯 浓 度 应 在 我 国人 血清 甘 油 三 酯水 平 高低 划 分 界 限 (见 附 录 A)附 近 ,在 所选 用 的试剂 、 器 条 件 下 能使 新 鲜 样 品测定结 果 可 溯 源 到 甘 油 三 酯参 考 系统 (见 附录 B); 仪 —— 使 用 时应将 校 准 物 的温度 升 至室温 并 充分 混匀 。 冰冻融 化 后 的血 清校 准物 质 可 于 2℃ ~8℃
:
— — 光度 分 析 系统 在
0.1~0.8(500nm)吸 光度 范 围 内的测 定 不精 密 度 (Cη 小 于 1%; — — 移液 系 统 的移 液 不 密度 (Cη 精 小 于 1%; — — 叵温 系统 在 25℃ ~37℃ 范 围 内温度 变异 小 于 1℃ 。
5
样 品采集 和 处 理 受试 者 准 备 受试 者 应 在 取 血前 2周 保 持平 时饮食 习惯 ;近 期 内无 急 性 病 、 伤 、 术 等 异 常 情 况 ;取 血 前 外 手
c样 品
;
式中
:
、 Vs/T 355-2011
Ws/T355— 2011
血 清 甘 油 三 酯 的酶 法 测定
1
范围 本标 准规定 了血清 甘 油 三 酯 酶 法 测 定及 其质 量保 证 的基本 原则 。 本标 准适 用 于临床 实 验 室 和流行 病 学 及 营养调 查 中的血 清 甘 油 三 酯 测 定 。生 产 厂 商 制备 甘油 三 酯 酶 法 测定试 剂 盒 也 可参 照使 用 。
30min~45min使 凝 固 ,避 免 溶 血 ,1500r/mh~3ooo r/min(离 心力 1100g~1300g)离 心 10min后 及 时 吸 出血 清 ,置 试 管 中密 闭 。分 离 的血 清 可 于 2℃ ~8℃ 贮存 1周 。
— ⒛ ℃ 以下 可 贮 存 更 长 时 间 ,用 时融化并使 其 温 度 至 室 ,充 升 温 分 混 匀 。不可反 复冻 融 。 注:亦 可制备血浆用于甘油三酯测定 ,用 乙二胺四乙酸二钠作抗凝剂 ,血 液中抗凝剂浓度为 1g/L时 血浆甘油三酯 浓度比血清低约 3%。
,
温 育后测 定 ,由 于第 一 步 反应 系统 中不含 脂肪 酶及 ⒋氨基 安 替 比林 ,游 离 甘 油产 生 的过 氧 化氢 在过 氧化 物 酶 的作 用下 与另一 色原 (酚 类 化 合 物 )反 应 产 生 无 色 物 质 ,因 此 在 加 人 第 二 试剂 之前 不 需 测 定 吸 光 度 ;第 二 步 反 应 中 的 脂 肪 酶 可 有 效 消 除 乳 糜 样 品 的混 浊 ,且
TⅡ nder反 应 产 物 的最 大 吸 收波 长 多 在
上 ,可 只做 试 剂 空 白 ,样 品混 浊对 测 定 结果影 响较 小 。 内游 离 甘 油空 白法 不增 加样 品和试 剂 用 量 ,但 试 剂需 分两 步 加 人 ,也 不 能 获得样 品 的游 离 甘 油含 量 。
500nm以
4
4.1
5.1
24h
不 不饮酒 、 做 剧 烈 运 动 ;取 血前禁食
12h除 卧床 患者 外 ,取 血前 至少 静 坐
5min。
5.2
取血 方 法 取前 臂 静 脉 血 ,止 血 带 的使 用 不超过 1min,避 免 溶血 。
5.3
血样 品 的处 理 、 存 和 测定 前 准 备 贮 血液 样 品采 取 后 室 温 下 静 置
b)
;
内游离 甘油 空 白法 ,有 两 种 基本 模 式
:
1)
将 试剂 中 的脂 肪 酶 与其 他 试剂 成 分 分开 ,样 品先 与不 含 脂 肪 酶 的试 剂 混合 ,温 育后 测 定 吸 光 度 ,加 入 脂 肪 酶并 温 育后 再 测 定 吸光度 ,用 两 吸 光 度 之 差 计 算 甘 油 三 酯 浓 度 ,多 见 于 使 用
: ;
贮存 3d,不 可反 复 冻 融 — — 制备质控物应认 真选 择 原 料 和 工 艺 ,使 其具 有 与 样 品 相 同或 相 似 的 物 理 、 学 性 质 ,贮 存 于 化 —⒛ ℃ 以下 ;如 果 是 冰冻 或冻 干 血 清制 备 的质 控 物质 融 化 或 复溶 后 应 使 其 温 度 升 至室温 ,充
2.3
甘 油 三 酯 trigIyceride 甘 油 三 酯 是 指 甘 油 的 三 脂 肪 酸 酯 ,形 成 甘 油 三 酯 的脂 肪 酸 有 多 种 ,因 此 甘 油 三 酯 是 一 组 化 合 物 ,而 不 是 分 子 组 成 和 结 构 固定 的单 一 化 合 物 。此 外 ,血 中还 存 在 少 量 甘 油 二 酯 、 油 一 酯 和 游 离 甘 油 (正 常 甘 情 况 下 甘 油 二 酯 和 甘 油 一 酯 之 和 不 足 甘 油 三 酯 的 3%,游 离 甘 油 约 0.11mmo1/L)。 甘 油 三 酯 重 量 多 以 三 油 酸 甘 油 酯 (相 对 分 子 质 量 885.5)计 。
NAD/NADH氧
还 反 应 的方 法
;
2)
仅 限于使 用 Trinder反 应 的方 法 ,第 一 步试 剂 除 不 含 脂 肪 酶外 ,也 不 含 ⒋氨 基 安 替 比林 将 样 品与第 一 试 剂 混 合 并 温育 一 定 时 间后 ,加 人 含 脂 肪 酶 和 4-氨 基 安 替 比林 的第 二 试 剂
;
:
—— 保 留用 过 的酶 试 剂 、 准 物 、 校 质控物 和样 品至测 —— 按 式 (1)计 算 样 品和质控 物质 的甘 油 三
c样 品
定 质 量评 价 以后
^A空
;
酯浓度
白
:
=E(A样
品
~A空
)/(A校
浪
白 )彐 ×
c校 浪
…
…
…
…
…
…
…
¨
(1)
~~样 品或 质 控 物 质 的甘 油 三 酯浓 度 ,单 位 为毫 摩 尔 每 升 (mmol/L); ~~校 准 物 质 的甘油 三 酯浓 度 ,单 位 为毫 摩 尔 每 升 (mmol/L); c技 准 ~~样 品或 质控 物 质 的吸光度 A佯 品
;
分 均匀 ;融 化 后 的质 控 物 质 可 于 2℃
~8℃ 贮存 3d不 可 反 复 冻 融 。甘油 三 酯 浓 度在我 国人 血
清甘 油 三 酯水 平 高低 划 分 界 限 (见 附 录 A)附 近 。
、 Vs/T 355-ˉ 2011
4.3
要求
仪器 和 设 备 可选 用 自动生 化 分 析 仪 ,亦 可 选 用 光 度 计 配 合 移 液 和 恒 温 设 备 。所 选 用 的仪 器 设 备 应 满 足 以 下
6
测定 步 骤 安全 措 施 血清样 品和来 源 于 血 液 的参 考 物 质 、 质控 物 质 、 准 物 质 有 可 能含 致 病 微 生 物 ,须 避 免 吞 人 或 与皮 校
6.1
肤 接触 ;应 按 有潜 在 生 物传 染 性样 本 对待 ,使 用 时遵 循 生 物 安 全 规 则 ,并 根据 规 定对废 弃物进 行 处 理 。
3
方 法概 述 总甘 油测定 目前 ,临 床 实 验 室 普 遍 采 用 酶 法 测 定 血 清 甘 油 三 酯 。首 先 ,用 脂 肪 酶 水 解 甘 油 三 酯 为 甘 油 和 脂 肪
3.1
酸 ,然 后 ,以 多种 方 法 测 定 其 中 的 甘 油 部 分 。通 常 先 用 甘 油 激 酶 和 三 磷 酸 腺 苷 (ATP)将 甘 油 磷 酸 化 ,生 成 磷 酸 甘 油 或 二 磷 酸 腺 苷 (ADP),用 氧 化 酶 或 脱 氢 酶 检 测 磷 酸 甘 油 ,也 有 用 丙 酮 酸 激 酶 检 测 ADP。 多 数 情 况 下 测 定 的结 果 是 总 甘 油 ,即 包 括 甘 油 三 酯 、 油 二 酯 、 油 一 酯 和 游 离 甘 油 之 和 。 甘 甘
、 Vs/T 355-ˉ 2011
3.2
去 除游 离甘油 的方 法 需 要 除 去 游 离 甘 油 时 ,常 用 以 下 两 种 方 法
:
外游离 甘油 空 白法 :分 别 用含 脂 肪酶 和不 含脂 肪 酶 的试剂 分 析样 品 ,以 测 定样 品的总 甘油 和 游 离 甘油 ,自 总甘 油 中减去 游 离 甘 油得 甘 油 三 酯
2012-o6-o1 实 施中华 人Leabharlann 民共 和 国 卫 生 部发 布
Ws/T 355-ˉ 2011
目 刂
舀
本标 准按 照
GB/T1.⒈ 2009给 出 的规 则起 草 。
本 标 准参 考 中华 医学会 检 验 学会 《 血脂 测 定 推 荐 方 法 》 中华 医学 会 检 验 分会 血脂 专 家委 员会《 于 、 关 临床 血脂 测 定 的建议 》 制定 。 本标 准 由卫 生部 临床检验 标 准专 业 委员 会 提 出 。 本标 准起 草 单位 :卫 生部北京 老 年 医学研 究 所 。 本标 准起 草 人 :王 抒 、 董军 、 陈文祥 。
分 析 系统
酶试 剂 选用 的血清 甘油三 酯 酶 法 测 定 试 剂 盒 中的酶试 剂应 能符合 以下 质 量要 求 —— 能水解 99%以 上 的血清 甘 油 三 酯 —— 特异性 高 ,干 因素少 扰 — 在 37℃ — 与血 清 反 应 达 终 点 所 需 时 间小 于 5mh,终 点 时 吸光度 至少 能稳 定 60min; — 在血 —— 清甘油 三 酯 浓 度 Omm° l/L~11.29mmol/L(O mg/dL~1000mg/dL)范 围 内 ,吸 光度 与