临床微生物学和微生物学检验

抗菌药物
青霉素 苯唑西林 万古霉素 庆大霉素 红霉素 克林霉素 磺胺药
纸片含药量
10U 1μg 30μg 10μg 15μg 2μg 1.25/23.75μg
耐药 ≤28 ≤10 — ≤12 ≤13 ≤14 ≤10
抑菌圈直径(mm)
中介
敏感
—
≥29
11～12
≥13
—
≥15
13～14
≥15
14～22
≥23
抗菌药物敏感性试验
南华大学预防医学与放射卫生实验教学中心
教学对象：高等医学院校卫生检验专业学生 实验课时：4学时 课程类型：专业实验课 课程要求：必修 每组人数：2人
实验目的和要求
掌握纸片扩散法（K－B法）的原理、操作 方法等、结果判断、意义及质量控制；
熟悉肉汤稀释法抗生素敏感性试验的原理、 操作方法、结果判断及意义等；
相信命运，让自己成长，慢慢的长大 。2020年12月17日星 期四7时 33分8秒Thurs day, December 17, 2020
爱情，亲情，友情，让人无法割舍。20.12.172020年 12月17日星期 四7时33分8秒 20.12.17
谢谢大家！
这些年的努力就为了得到相应的回报 。2020年12月17日星 期四7时 33分8秒07:33:0817 December 2020
科学，你是国力的灵魂；同时又是社 会发展 的标志 。上午7时33分 8秒上 午7时33分07:33:0820.12.17
每天都是美好的一天，新的一天开启 。20.12.1720.12.1707: 3307:33:0807: 33:08Dec-20
涂布接种：无菌棉拭蘸取菌液，在试管壁旋转挤去多 余菌液后在MH琼脂表面均匀涂布接种3次，每次旋转 平板60º，最后沿平板内缘涂抹1周；
贴含药纸片：平板在室温下干燥3-5min，用无菌镊子 将含药纸片紧贴于琼脂表面，各纸片中心相距应大于 24mm，纸片距平板内缘应大于15mm；
孵育：35ºC 16-18h，量取抑菌圈直径。
孵育：35ºC 24h观察结果。
结果：
测试菌（或质控菌）不出现肉眼可见生长的 最低药物浓度为该药对测试菌（质控菌）的 MIC。
注意事项：
培养基、接种细菌的菌量、抗菌药物纸片的质 量、孵育温度和观察时间、操作是否规范等均 能影响本试验的结果。
为保证结果的可靠性，需同时采用相应标准菌 株同时进行药敏试验作为质量控制的方式。
好的事情马上就会到来，一切都是最 好的安 排。上 午7时33分8秒 上午7时 33分07:33:0820.12.17
一马当先，全员举绩，梅开二度，业 绩保底 。20.12.1720.12.1707: 3307:33:0807: 33:08Dec-20
牢记安全之责，善谋安全之策，力务 安全之 实。2020年12月17日 星期四7时33分 8秒Thursday, December 17, 2020
加强交通建设管理，确保工程建设质 量。07: 33:0807:33:0807:33T hursday, December 17, 2020
安全在于心细，事故出在麻痹。20.12.1720.12.1707: 33:0807:33:08Decem ber 17, 2020
踏实肯干，努力奋斗。2020年12月17日上午7时33分 20.12.1720.12.17
加强自身建设，增强个人的休养。2020年12月17日 上午7时 33分20.12.1720.12.17
精益求精，追求卓越，因为相信而伟 大。2020年12月17日 星期四 上午7时 33分8秒07:33:0820.12.17
让自己更加强大，更加专业，这才能 让自己 更好。2020年12月上 午7时33分20.12.1707: 33December 17, 2020
耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）的检测 β-内酰胺酶、超广谱β-内酰胺酶检测等
二、纸片扩散法（K-B法）
原理：
含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上， 纸片所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后便不断向纸片周 围区域扩散，形成递减的梯度浓度。在纸片周围抑菌浓度 范围内的细菌生长被抑制，形成透明的抑菌圈。
相信相信得力量。20.12.172020年12月 17日星 期四7时33分8秒20.12.17
谢谢大家！
生活中的辛苦阻挠不了我对生活的热 爱。20.12.1720.12.17Thursday, December 17, 2020
人生得意须尽欢，莫使金樽空对月。07:33:0807:33: 0807:3312/17/2020 7:33:08 AM
源自文库
追求至善凭技术开拓市场，凭管理增 创效益 ，凭服 务树立 形象。2020年12月17日星期 四上午7时33分 8秒07: 33:0820.12.17
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作业标准记得牢，驾轻就熟除烦恼。2020年12月17日星期 四7时33分8秒07:33:0817 December 2020
方法：
试管编号：取26只试管排成两排（测试菌排， 质控菌排）每排13支编号。另取3支试管，分别 标记上“肉汤对照”、“测试菌生长对照”和 “质控菌生长对照”等对照。
抗菌药物稀释：用MH肉汤倍比稀释抗菌药物至 13管，稀释后使每管含抗菌药物稀释液2ml。
肉汤对照、测试菌生长对照、质控菌生长对照 管：分别加入MH肉汤2ml。
做一枚螺丝钉，那里需要那里上。20. 12.1707 :33:08 07:33D ec-201 7-Dec-2 0
日复一日的努力只为成就美好的明天 。07:33:0807: 33:0807:33Thursday, December 17, 2020
安全放在第一位，防微杜渐。20.12.1720.12.1707:33:0807: 33:08December 17, 2020
树立质量法制观念、提高全员质量意 识。20.12.1720.12.17Thursday, December 17, 2020
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安全象只弓，不拉它就松，要想保安 全，常 把弓弦 绷。20.12.1707:33:0807:33Dec-2017-Dec-20
结果判读：
用刻度尺量取抑菌圈直径，根据CLSI （Clinical and Laboratory Standards Institute）标准判读结果；
报告：细菌对该抗生素是 敏感（susceptible，S）； 耐药（resistant，R）； 还是中介（intermediate，I）。
表1 金黄色葡萄球菌抗菌药物敏感性试验评价结果
方法：
菌液制备：生理盐水校正测试菌和质控菌至 0.5麦氏比浊标准，再用MH肉汤稀释到 107CFU/ml；
加菌液：用微量加样器取0.1ml稀释菌液由低 到高加于各排试管中，其最终的接种量为 5×105 CFU/ml。测试菌排、测试菌生长对照 管加测试菌液；质控菌排、质控菌生长对照 管加质控菌液。
15～20
≥21
11～15
≥16
相应MIC值 (μg/ml)
耐药
敏感
β-内酰胺酶 ≤0.12
≥4
≤2
—
≤4
≥8
≤4
≥8
≤0.5
≥4
≤0.5
≥8/152 ≤2/38
三、肉汤稀释法
原理：
以水解酪蛋白（MH）液体培养基将抗生素 做不同浓度的稀释，然后种入待检细菌，定 量测定抗菌药物对被测菌的最低抑菌浓度 （MIC）或最低杀菌浓度（MBC）。
了解稀释法的质量控制。
实验内容
常用抗菌药物敏感性试验与耐药检测 方法介绍。
纸片扩散法。 肉汤稀释法。
一、常用抗菌药物敏感性试验与耐药 检测方法介绍
纸片扩散法（Kirby-Bauer test） 稀释法（dilution test） E试验法（E test） 联合药物敏感试验 特殊耐药菌及耐药酶的表型检测
抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该 药对测试菌的最低抑制浓度（minimal inhibitory concentration，MIC）呈负相关，即抑菌圈愈大，MIC愈小。
含药纸片 抑菌圈
方法：
菌液制备：挑取孵育16-24h的血平板上数个菌落置于 生理盐水管中，校正浓度至0.5麦氏标准；