姜黄素对阿尔茨海默病模型小鼠病情效果的改善作用及相关机制研究

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ｓｙｎ印ｓｅｓ
ｉＩｌ ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ ｏｆ ＡＤ ｍｏｄｅｌ ｍｉｃｅ，
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【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】
Ｃｕｒｃｕｍｉｎ；
Ａｌ吐ｅｉｍｅｒＩｓ
ｄｉｓｅａｓｅ；
ＳｈａＩｌｋｌ；
ＰＳＤ９５
阿尔茨海默病（Ａｌ疝ｅｉｍｅｒ．ｓ ｄｉｓｅａｓｅ，ＡＤ）是一种 神经退行性疾病。以记忆损害和进行性认知功能障 碍为特征，即为老年性痴呆【”，主要表现为计算力、 记忆力、语言功能和抽象思维能力减退，出现行为和 情感的异常，导致失去工作能力和独立生活能力【２】。
ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎ
ｍｉｃｅ ａＩｌｄ ｉｔｓ ｒｅｌａｔｅｄ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｔｏ ｐｍｖｉｄｅ
ｍｅｏｒｅｔｉｃａｌ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｆｏｒ ｍｅ仃ｅａ仃Ｉｌｅｎｔ ｏｆ ＡＤ．
Ｍｅｔｌｌｏｄｓ
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【文章编号】
１６７１．８９２５（２０１３）１１．１１２８．０５
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ＰＳＤ９５（Ｆｌ＜０．０５）．Ｓｉ弘ｉｆｉｃａｎｔ ｄｉ髓ｒｃｌｌｃｅｓ
ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａｊ．ｉｓｓｎ．１６７１—８９２５．２０１３．１１．０１０ 作者单位：４５００１４郑州，郑州大学第二附属医院神经内科（张玉镇、娄季宇）；２５５３００淄博，解放军第一四八 中心医院神经内科（王运良、尹红蕾） 通信作者：王运良，Ｅｍａｉｌ：ｗｑｎａｏｉ蟾ｓ＠１６３．ｃｏｍ
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（Ｐ＜０．０５）．
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・基础研究・
姜黄素对阿尔茨海默病模型小鼠病情效果 的改善作用及相关机制研究
张玉镇娄季宇 王运良 尹红蕾
【摘要】
目的
探讨姜黄素改善阿尔茨海默病（ＡＤ）模型小鼠病情的效果以及相关机制，为ＡＤ 方法将４８只昆明种ＡＰＰ仍Ｓ，双转基因小鼠按随机数字表法分成４组，
小鼠面向池壁放入水中，记录小鼠找到平台的时间 （逃避潜伏期）。平台上休息１５ ｓ。如果６０ ｓ后小鼠仍
同龄正常小鼠１２只。购自中国医学科学院实验动物 研究所，雌雄各半，体质量（２１＋２）ｇ，饲养于通风、干 燥、安静的环境中，普通饲料喂养１个月。 二、实验试剂、设备 Ｍｏ玎ｉｓ水迷宫由上海移码数字有限公司研制， 多聚甲醛、水合氯醛、戊二醛、氯化钠、蔗糖、３０％过 氧化氢、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、甲醇、乙醇、盐酸 Ｔｒｉｔｏｌｌ】【一１００等均购自北京化学试剂公司，柠檬酸盐
万方数据
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仍不甚清楚。与ＡＤ认知功能下降关系最密切的神 经生物学因素是突触丢失，其中Ｓｈａｎｋｌ和ＰＳＤ９５
蛋白是新的突触后区域形成时最早出现的蛋白，与 突触和棘突的变化有关，是突触可塑性的结构基础。 本实验通过采用姜黄素对ＡＤ模型小鼠进行干预， 从ＡＤ的典型病理学变化人手分析突触Ｓｈａｎｋｌ、 ＰＳＤ９５蛋白的表达改变，研究姜黄素改善ＡＤ病情
量姜黄素组、ＡＤ模型＋中剂量姜黄素组、ＡＤ模型 ＋高剂量姜黄素组，每组各１２只，其中ＡＤ模型＋
低剂量姜黄素组、ＡＤ模型＋中剂量姜黄素组、ＡＤ 模型＋高剂量姜黄素组小鼠同时腹腔注射姜黄素， １次／ｄ，剂量分别为１００ ｍ∥（蚝・ｄ）、２００ ｍ∥（ｋｇ・ｄ）、
４００
ｍ∥（ｋｇ・ｄ）嗍，连续１４ ｄ。同龄正常小鼠１２只做
ｗｅｒｅ砌ｄｏｍｌｙ ｄｉＶｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｆｏｕｒ ｇｒｏｌｌｐｓ：ＡＤ ｍｏｄｅｌ
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ｍｏｄｅｌ＋ｌｏｗ—ｄｏｓｅ
ｇｒｏｕｐ，ＡＤ ｍｏｄｅｌ＋ｍｉｄｄｌｅ－ｄｏｓｅ ｉｎ ｔ１１ｅｓｅ ｌａｔｅｒ ｍｒｅｅ ｇｒｏｕｐｓ ｗｅｒｅ ４００
ｍｏｄｅｌ＋ｈｉｇｈ—ｄｏｓｅ
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的治疗提供实验依据。
即ＡＤ模型组、ＡＤ模型＋低剂量姜黄素组、，后３组同时腹腔注射剂量分别为１００ ｍ∥（ｋｇ・ｄ）、２００
ｍ∥他・ｄ）、４００ ｍ∥ｏ（ｇ・ｄ）姜
黄素（１次／ｄ，连续１４ ｄ）。另取正常小鼠１２只做为正常对照组，不做任何处理。应用牵引实验、Ｍｏｒｒｉｓ 水迷宫实验检测各组小鼠行为学改变，免疫组化染色检测各组小鼠脑组织ＳｈａＩｌｋｌ、ＰＳＤ９５阳性表
ＡＤ ｍｏｄｅｌ＋ｌｏｗ－ｄｏｓｅ ｃｕｒｃｕｍｉｎ ｇｒｏｕｐ ｉｎ ａｖｅｒａｇｅ ｏｒｉｇｉｎａｌ
ｅｓｃ印ｅ ｌａｔｅｎｃｙ
ａｎｄ舶ｑｕｅｎｃｙ ｔｌｌ：ｒｏｕ曲Ⅱ１ｅ
ｗｅｒｅ
ｐｌａｔｆ．ｏ肌ａｎｄ
ｄｗｅｎ ｔｉｍｅ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｏｒｉｇｉｎａｌ ｐｌａｔｆ．ｏｒｍ ｑｕａｄｒａｎｔ ｉｎ ｔｌｌｅ仃ａｃｔｉｏｎ ｅＸｐｅｒｉｍｅｎｔｓ，
缓冲液、ＰＢＳ磷酸盐缓冲液购自北京中杉金桥生物 技术有限公司，ＤＡＢ显色试剂盒、ＳＡＢＣ免疫组化 染色试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司。 三、动物分组及处理
将４８只昆明种Ａ料纪ｓ，双转基因小鼠按随机
数字表法分成４组，即ＡＤ模型组、ＡＤ模型＋低剂
治疗ＡＤ的传统药物副作用较强，难以维持长时间
服用．因此研究副作用小的治疗ＡＤ的药物成为目 前ＡＤ相关研究的热点。姜黄素是一种酚类色素，从 姜黄类植物根茎中分离得出【３】。近年来研究表明姜 黄素能够减轻ＡＤ转基因鼠大脑氧化应激水平、抑 制ｐ淀粉样蛋白（ＡＢ）聚集，从而减少老年斑形成， 但对姜黄素通过何种途径改善ＡＤ病情的具体机制
找不到平台，帮助小鼠上平台休息１５ ｓ。休息之后按 顺时针顺序到下一个象限进行实验。（２）空间探索实
验：第６天撤除平台，将小鼠从任一处放入水中．观 察６０ ｓ内小鼠通过原平台位置次数和在原平台所 在象限的停留时间百分比【４】。 五、免疫组化染色检测Ｓｈａｌｌｌ【１、ＰＳＤ９５阳性表
ｉ大
万方数据
・１１３０・
生堡塑经匿堂苤查呈Ｑ！！生！！旦箜１２鲞箜！！塑堡垒垫！丛！幽塑亟：丛塑地！１２Ｑ！！，ｙＱ！：！至：盥Ｑ』！
达，Ｗｅｓｔｅｍ ｂｌｏｔｔｉｎｇ法检测各组小鼠脑组织Ｓｈａｌｌｌ【１、ＰＳＤ９５蛋白表达。 结果ＡＤ模型组和ＡＤ
模型＋低剂量姜黄素组的牵引实验平均得分、逃避潜伏期、通过原平台次数、原平台所在象限停留 时间百分比以及Ｓｈａｎｋｌ、ＰＳＤ９５免疫组化染色阳性率与正常对照组比较差异均具有统计学意义 （Ｐ＜０．０５）；ＡＤ模型＋中剂量姜黄素组的牵引实验平均得分、逃避潜伏期、通过原平台次数、原平台所 在象限停留时间百分比以及ｓｈａｎｋｌ、ＰＳＤ９５免疫组化染色阳性率与ＡＤ模型组比较差异具有统计 学意义（Ｐ＜０．０５）；ＡＤ模型＋低剂量姜黄素组、ＡＤ模型＋中剂量姜黄素组和ＡＤ模型＋高剂量姜黄 素组Ｓｈａｎｋｌ、ＰＳＤ．９５蛋白表达与ＡＤ模型组比较差异具有统计学意义（Ｐ＜Ｏ．０５１。
ｄｉ哪
ｃｏｎｓｅｃｕｔｉｖｅ １４
ｄ）．一Ａｎｏｔｈｅｒ
ｔｅｓｔ
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ｎｏｍａｌ ｃｏｎ仃ｏｌ
ｃｈａｎｇｅｓ
ｇｒｏｕｐ．一Ｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｓｔ ａｎｄ ｉｎ ｅａｃｈ罂ｏｕｐ；
Ｍｏｒｒｉｓ ｗａｔｅｒ ｍａｚｅ
ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ
ｍｅ ｂｅｈａｖｉｏｍｌ
ｏｆ ＩＩｌｉｃｅ
ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｓｔａｉｎｉｎｇ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｍｅ Ｓｈ缸止１ ａｎｄ ＰＳＤ９５ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｉｎ ｂｒａｉｎ ｔｉｓｓｕｅｓ ｏｆ ｍｉｃｅ ｉｎ ｅａｃｈ ｇｒｏｕｐ； Ｒｅｓｌｌｌｔｓ Ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ａｎｄ
动位置的平台和一个圆形水池组成。将水池平均分 为４个象限，平台放置于任选的一个象限中央。测 试内容包括：（１）定位航行实验：历时５ ｄ，每天上下
的效果并分析其作用机制，以便为ＡＤ的治疗提供
新的参考方案。 材料与方法 一、实验动物 ８月龄昆明种Ａ
午各１次，每个象限１次，共４次。选择任一象限将
Ｐ船Ｓ，双转基因小鼠４８只及
ｓｃｏｒｅｓ，
ｅｓｃ印ｅ
ｌａｔｅｎｃｙ ａｎｄ丘ｅｑｕｅｎｃｙ ｔｌｌｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｏｒｉｇｉＩｌａｌ
ｔｉｍｅ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｓ ｉｎ ｍｅ ｏｒｉｇｉｎａｌ
ｐｌａｔｆｏｍ
ＡＤ
ｑｕａｄｒａｎｔ ｉｎ仃ａｃｔｉｏｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ，ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｅＵ ｃｏｕｎｔｓ ａ１１ｄ ａＶｅｒａｇｅ乒ａｙ ｓｃａｌｅ ｏｆ Ｓｈａｎｋｌ ａＩｌｄ
为正常对照组小鼠，不做任何处理。实验过程中所
有中途死亡或弃用的大鼠再行补充入组。
四、行为学检测 １．牵引实验：将小鼠的前爪悬挂在一条水平电 线上。若小鼠能够自行将两只后肢都抓住电线记为 ３分，只有一只后肢能抓住电线记为２分，两只后肢
都无法抓住电线记为１分。共检测４次，取平均值。 ２．Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫实验：水迷宫主要由一个可移
Ｗｅｓｔｅｍ
ｂｌｏｔｔｉｎｇ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｔｈｅ Ｓｈａｌｌｌ【１ ａｎｄ ＰＳＤ９５ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅＸｐｒｅｓｓｉｏｎ．
ｓｉ印ｉｆｉｃ锄ｔ
ｄｉ行ｅｒｅｎｃｅｓ
ｂｅ铆ｅｅｎ ｎｏｍａｌ
ｓｃｏｒｅｓ，
ｃｏｎ仃ｏｌ ｇｒｏｕｐ ａｎｄｂｏｔｈ ＡＤ ｍｏｄｅｌ ｇｍｕｐ ａｎｄ
结论 应用中
剂量姜黄素可更好地改善ＡＤ模型小鼠的运动能力、学习能力及记忆能力，其机制可能是通过改善 突触相关蛋白ＳｈａＩｌｋｌ、ＰＳＤ９５表达及突触结构，提高ＡＤ模型小鼠海马突触数量，进而改善突触的
可塑性。
【关键词】
姜黄素；
阿尔茨海默病；
Ｓｈａｎｋｌ；
ＰｓＤ９５
【中图分类号】Ｒ７４９．１幅
【文献标志码】Ａ