高中生物实验1大肠杆菌的培养和分离学案浙科版选修12
实验一大肠杆菌的培养和分离
答：皿盖与皿底之间的培养基易滋生杂菌，因 此不宜用此皿继续培养。
连续划线法
2.为什么要研究微生物？
90%以上对人类有利的，少数能引起传染病。 1.利用微生物生产食品、药品，如酒类、抗生素等； 2.微生物治理环境污染； 3.利用微生物生产新能源。 4.用于基因工程
一、实验目的（教学要求）
1.进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌 培养的操作； 2.进行大肠杆菌的分离，用固体培养基进行细菌的 划线培养。 3.说明大肠杆菌培养的条件和实验原理。
稀释→涂布→培养
玻璃 三角 刮刀
划线分离法：简单。涂布分离法：单菌落更易 分开，但操作复杂些。
4.扩大培养过程和分离过程
（1）制备５０ml的LB（液体和固体）培养基
①配制：： 蛋白胨：０.５g 酵母提取物：０.２５g 氯化钠：０.５g 溶于热水并加水至５０ml，并调pH（７.６）
固体培养基： 上述物质中再加１g琼脂。
答：利用标记基因所对应的性状（如抗青霉素） 保留转基因大肠杆菌，杀死普通大肠杆菌。
６.本实验的目的是什么？
答：尝试培养微生物的基本技术；学习培养、 分离提纯大肠杆菌的方法。
７.本实验的实验原理是什么？
答：微生物能够利用培养基中的各种营养物质 进行生长和繁殖。划线或涂布可以使单个细菌 繁殖成单个菌落，从而分离。
②灭菌: 将50ml培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，
塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭
菌锅，在压力为1kg/cm2、温度为121℃，灭菌
15min。 ③倒平板:
待培养基冷却到６0 ℃左右时，在酒精灯附 近倒平板。（倒平板操作见课本）(试管斜面的 制作方法类似)
高中生物第一章实验一大肠杆菌的培养和分离教学案浙科版选修1(最新整理)
实验一大肠杆菌的培养和分离1。
培养基中需含有碳源、氮源、水和无机盐等营养物质.2..本实验用LB液体培养基扩大培养大肠杆菌,用LB固体培养基分离大肠杆菌。
3。
消毒是指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物;而灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
4.。
实验室常用煮沸消毒法、紫外线或化学药剂进行消毒；常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌和高一、微生物1．概念：微生物是结构简单、形体微小的单细胞、多细胞或没有细胞结构的低等生物。
2．利用：生产抗生素，制作发酵食品，治理环境污染等。
二、培养基1．概念人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质.2．营养构成各种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐及生长因子，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。
3．培养基的类型(1)按物理性质分：固体培养基、半固体培养基、液体培养基。
(2）按目的用途分:鉴别培养基、选择培养基。
4．微生物生长对特殊营养物质的要求（1)细菌培养基要用蛋白胨和酵母菌提取物来配置,细菌喜荤.（2)霉菌培养基一般用无机物配制或加蔗糖的豆芽汁即可,霉菌喜素。
5．微生物生长对pH的要求细菌要求在中性偏碱（6.5~7。
5)的环境中生长；真菌要求在中性偏酸（5。
0～6.0）的环境中生长。
三、无菌技术1．获取纯净培养物的方法获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，具体操作如下：(1）对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。
（2)将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。
(3）为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。
（4）实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触. 2．消毒和灭菌(1）概念：[填表］项目方法结果常用的方法消毒较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分微生物（不包括芽孢和孢子）煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外线或化学药物消毒法灭菌强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌、过滤灭菌（2）常用方法：[连线]四、分离细菌的两种方法比较项目划线分离法涂布分离法五、大肠杆菌的培养与分离1．大肠杆菌（1)特性：革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌.（2)繁殖:以分裂的方式繁殖,分裂速度很快。
高二生物《大肠杆菌培养和分离》教案
高二生物《大肠杆菌培养和分离》教案一、教学目标•了解大肠杆菌的形态、生理功能和培养条件；•掌握培养大肠杆菌的方法；•学会分离与鉴定大肠杆菌。
二、教学重点•培养大肠杆菌的方法；•分离与鉴定大肠杆菌的技巧。
三、教学难点•有效分离和鉴定大肠杆菌。
四、教学内容1. 大肠杆菌基本介绍大肠杆菌（Escherichia coli）是一种革兰氏阴性、无芽孢的棒状细菌。
它是人类和其他动物的肠道中常见的微生物之一，也是生物学研究中最常用的细菌之一。
大肠杆菌具有以下特征：•形态：革兰氏阴性杆菌，单株长度大约为2-3微米，直径约为0.5微米；•生理功能：大肠杆菌是一种嗜氧菌，可以利用葡萄糖进行发酵，并产生酸性代谢产物；•培养条件：大肠杆菌在37℃下生长最佳，pH值在6.5-7.5之间。
2. 培养大肠杆菌的方法大肠杆菌的培养方法主要包括液体培养和固体培养两种。
2.1 液体培养液体培养是将大肠杆菌悬浮于含有营养物质的液体培养基中进行培养的方法。
步骤如下：1.准备培养基：选用适当的液体培养基，如LB培养基；2.取少量大肠杆菌菌液接种于培养基中；3.震荡培养：将接种好的培养基放置于恒温摇床中，在37℃条件下震荡培养一定时间。
2.2 固体培养固体培养是将大肠杆菌悬浮于含有琼脂的固体培养基中进行培养的方法。
步骤如下：1.准备培养基：选用适当的固体培养基，如LB琼脂培养基；2.取少量大肠杆菌菌液接种于培养基中；3.均匀涂布：将接种好的培养基倒入培养皿中，用棉签均匀涂布；4.孵育：将培养皿倒置放置于37℃恒温培养箱中孵育一定时间。
3. 分离与鉴定大肠杆菌的技巧为了分离与鉴定大肠杆菌，可以采用以下技巧：1.纯培养：将大肠杆菌培养于LB琼脂培养基上，筛选出纯种菌落；2.形态特征：观察菌落形态特征，如形状、颜色等；3.革兰氏染色：对菌液进行革兰氏染色，观察细菌颗粒的染色情况；4.代谢特征：利用生化试剂进行代谢特征测试，如产气性、产酸性等。
五、教学过程1. 导入（5分钟）教师简要介绍大肠杆菌的基本特征和在生物学研究中的重要性。
实验一大肠杆菌的分离和培养
细菌
2.微生物涉及五类 放线菌
真菌
原生动物
(二)培养基
• 1.分类(按物理形态分) • (1)液体培养基 • (2)固体培养基
①常用旳固体培养基: 琼脂固体培养基.
②微生物在固体培养基 表面生长,能够形成 肉眼可见旳菌落.
2.培养基内所含旳基本物质
• (1)水 • (2)碳源 • (3)氮源 • (4)无机盐
a.灼烧灭菌
注意合用范围
微生物旳接种工具 (接 种环、接种针)或其 他金属用具直接在火 焰旳充分燃烧层灼烧
b. 干热灭菌 160－170℃ ；1－2h
能耐高温旳需要保持干 燥旳物品( 玻璃器皿)
c.高压蒸汽灭菌 100kPa 121℃ 15-30min
一般用于培养基旳灭菌
二、试验操作 • （一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
• 计算－称量－溶化－灭菌－倒平板
• （二）分离纯化大肠杆菌
• 接种措施有：
• 划种未接 种旳培养基放入37℃恒温箱中培养12h 和24h后，观察并统计
三、课题延伸：菌种旳保藏
• 1、斜面保藏 • （临时保存） • 2、甘油保藏
（长久保 存）
试验1：大肠杆菌旳培养和分离
角烧瓶旳液体培养基中，三角烧瓶在37℃摇床振荡培养 12h。 • (4) 划线分离：将摇床上培养12h旳菌液在固体培养基旳 平板上连续划线，然后将盖好旳培养皿倒置，放在37℃ 恒温培养箱中进行培养。 • (5)单菌落接种培养：在无菌操作下将单菌落用接种环取 出，再用划线法接种在空白斜面上，在37℃下培养24h, 4℃冰箱保存。
设备及用具：
灭菌锅或高压锅、250ml旳三角瓶、封口膜和橡皮圈、 直径90mm旳培养皿、接种环和玻璃三角刮刀、恒温培 养箱、摇床、酒精灯和超净台、一次性塑料手套、装有 酒精棉球旳广口瓶、镊子、有棉塞旳试管 （15mm×120mm）5支
实验一大肠杆菌的培养和分离
操作时右手无名指和小指 夹住封口膜，另外三指持 三角瓶，左手拿培养皿并 打开上盖的一边，在酒精 灯火焰旁操作。
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（三）大肠杆菌的接种
将斜面上培养的大肠杆菌菌种用接种环接种到灭菌后的LB液 体培养基中，将三角瓶的封口膜和斜面的棉塞复原。
注意事项: 1.在火焰旁从斜面上用接种环取菌; 2.取菌前接种环要用酒精灯灼烧 灭菌，冷却后方能取菌； 3.接种时右手拿着接种环，右手 无名指和小指夹住斜面的棉塞和 三角瓶封口膜； 4.取菌后封口膜和棉塞复原.
LB（Luria-Bertani）液体培养基：蛋白胨10g/L，酵母提取液5g/L，
氯化钠10g/L。
（可用于大肠杆菌的扩大培养）
配制50mL的LB培养基：蛋白胨0.5g，酵母提取物0.25g，氯化钠 0.5g，加50mL水溶解。
LB（Luria-Bertani）固体培养基：50ml LB（Luria-Bertani）液 体培养基中再加入1g琼脂制得。（可用于大肠杆菌的划线分离） 固体培养基可根据需求制成平面或斜面。
培养基：一般 121℃灭菌15min 有葡萄糖：500g/cm2（90℃以上）灭菌30min 有尿素等不能加热的物质：G6玻璃砂漏斗（玻璃砂漏斗用
后需用1mol/L的HCl浸泡，抽滤去酸）
进行操作时，注意瓶口、壁上等不能沾有培养基，否则易发生污染。
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大肠杆菌的培养和分离实验操作步骤
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• 实验器材
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（四）大肠杆菌的扩大培养
三角瓶在37℃，每分钟200转的摇床上振荡培养12h。
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（五）大肠杆菌的划线分离
1、操作步骤 （1）灼烧接种环； （2）接种环冷却后，从在摇床上培养了12h的菌液中蘸取菌液； （3）在近火焰处，用带菌液接种环在固体培养基上划线。
浙科版高中生物选修1《大肠杆菌的培养和分离》导学案
实验1 大肠杆菌的培养和分离一、课标内容：进行微生物的分离和培养二、学习目标1.进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌培养的操作。
2.进行大肠杆菌的分离，用固体平面培养基进行细菌的化纤培养。
3.说明大肠杆菌培养的条件和操作要求的原理。
三、学习重点和难点1.学习重点大肠杆菌的划线分离；大肠杆菌的无菌操作和灭菌技术；大肠杆菌的特点及实验室应注意的安全事项。
2.学习难点大肠杆菌的划线分离；大肠杆菌实验的无菌操作技术及实验室安全事项的解读。
四、知识要点：1.微生物是指结构、形体的细胞、细胞或细胞结构的生物，如。
绝大多数微生物与传染病无关，对人类，有多种用途。
2.细菌是单细胞的生物，从形态上分为菌、菌、菌（弧菌）。
细菌结构上，有，无，只有一个环状。
有些细菌外有荚膜和鞭毛。
有些细菌在不良的环境条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做。
当环境适宜时，休眠体又可以萌发，形成一个细菌。
细菌繁殖方式: 繁殖，速度很快。
单个细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做。
他是的重要依据。
细菌在基因工程中应用广泛，可为其提供载体，也可作为细胞。
细菌用革兰氏染色法分为革兰氏菌和菌两大类，区别在的成分不同。
大肠杆菌是革兰氏、厌氧的肠道菌。
3.培养基按物理状态分：培养基、培养基、培养基。
其中液体培养基常用于，半固体培养基可观察微生物的，固体培养基用于。
细菌扩大培养要用培养基，细菌分离要用培养基。
细菌的分离方法有两种：和。
是消除的通用方法，也是用于高表达量菌株的最简便方法之一。
划线分离法，方法；涂布分离法，单菌落，但操作。
不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方，细菌，霉菌。
通常细菌培养基要用和提取物来配制，还要加入一定的，以维持一定的渗透压；霉菌培养基一般用配制或豆芽汁即可。
尽管培养基的配方各不相同，但一般都含有、、和等营养物质。
另外还需要满足微生物生长对、、等的要求。
如细菌需要环境，霉菌需要环境；厌氧生物需要控制含量。
实验1 大肠杆菌的培养和分离
()
A．属于单细胞的原核生物 B．在固体培养基表面可见其细胞
C．细胞壁成分与植物不同 D．细胞中含有DNA和RNA
2．微生物实验中分别采用了高压蒸气、酒精、火焰灼烧等几种不同的灭菌处理，这些方法依次
可以用于杀灭什么部位的杂菌
()
A．接种针、手、培养基 B．高压锅、手、接种环
C．培养基、手、接种环 D．接种针、手、高压锅
平均菌落数÷涂布的稀释液体积×稀释倍数 （3）利用鉴别培养基确定细菌种类： 在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的脲酶将尿素分解成了 氨，氨会使培养基的碱性增强，pH升高 。因此，我们可以通过检测培 养基pH变化来判断该化学反应是否发生。在以尿素为唯一氮源的培养基 中加入酚红指示剂，培养某种细菌后，如果pH升高，指示剂将变红，说 明该细菌能够分解尿素。 3．思考题： （1）农作物不能直接吸收利用尿素，但尿素却是农业生产上的重 要氮肥。农作物如何利用尿素中的氮？
环温度较高，为避免烫死菌种，可将其接触
冷却后再取样和接种。
4．接种划线：在固体培养基的表面连续划线
条，将培养皿转动一定角度后，用接种
环通过第1次划线的
做第2次连续平行划线，然后再以同样方法依次操作。
划线时要轻，不可
，也不要使接种环碰到培养皿边缘。
划线后盖好培养皿，将培养皿
，将培养皿放入恒温培养箱中在
面。 待酒精挥发之后，再点燃酒精灯。 2．接种 （1）接种时的要求 接种过程要在酒精灯火焰附近完成，这是因为在火焰附近形成的上
升气流能避免空气中的微生物落入培养基中。 接种环灭菌：将接种环在酒精灯火焰的外焰灼烧灭菌。对金属丝与
柄部连接部位也要在火焰上穿梭1－2次。灼烧后的接种环温度较高，为 避免烫死菌种，可将其接触培养基或培养容器的内壁冷却后再取菌种。
生物浙科版学案：课堂探究实验大肠杆菌的培养和分离
课堂探究核心解读HEXINJIEDU1．微生物、细菌与大肠杆菌之间有怎样的关系？（1）概念内涵：其关系图解见下（2）结构上：三者都是结构简单，形体微小的生物,但是从细胞角度看其结构是不同的，具体如下:2．培养大肠杆菌的LB培养基中有各种物质，为什么选择这些物质,这些物质有什么作用呢？（1)人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出了供其生长繁殖的营养基质——培养基.虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有五大营养要素，即水、无机盐、碳源(提供碳元素)、氮源(提供氮元素)和生长因子(不同的细菌需要的各不相同，有物种差异，它主要补充自身不能合成的或合成能力较弱的，但却是生长繁殖必需的物质)。
见下表：(2）大肠杆菌的LB培养基3．该实验中这些操作的原因(1）三角锥形瓶中的LB固体培养基灭菌后，需要冷却到60 ℃左右时，才用来转移和分装，制成固体平面培养基，为什么？你用什么简易方法快速估计该温度?因为三角锥形瓶中的LB固体培养基中有琼脂，它在98 ℃以上熔化，在44 ℃以下凝固,当冷却到60 ℃左右时，不会因温度过高烫手而不易操作；也不会因为温度过低而使三角锥形瓶中的培养基凝固，最终无法转移分装制成新的平面培养基。
简易估计温度的方法:可以用手触摸灭菌后的三角锥形瓶,感觉锥形瓶由烫手转为刚刚不烫手时，则说明已经冷却到60 ℃左右了.(2)进行恒温培养时，为什么要将培养皿倒置？恒温培养时，培养基中的水分会以水蒸气的形式蒸发,倒放培养皿则会使水蒸气凝结成水滴留在盖子上;如果正放培养皿，则水分形成的水滴会落入培养基表面并且扩散开。
如果培养皿中已形成菌落,则菌落中的菌会随水扩散，菌落间相互影响，很难再分成单菌落，达不到分离的目的，培养皿中的菌落还有可能被盖子上掉落的水给污染。
（3）将大肠杆菌用接种环自斜面转移到液体培养基中培养时，为什么接种环必须先深入到斜面冷却后，才能再取斜面上的菌体？接种环在取菌体前曾在酒精灯火焰上灼烧灭菌，一直灼烧至红，温度很高，若不冷却就直接用其取斜面上的菌体，菌体可能因为接触高温接种环而死亡，导致大肠杆菌的转移培养失败。
高中生物选修1生物技术实践学案大肠杆菌的培养和分离
实验1大肠杆菌的培养和分离1．消毒和灭菌的常用方法举例？2．3．2．划线分离法和涂布分离法的优缺点？4．3．划线分离法中，第一次灼烧、之后每次划线前灼烧和划线结束后灼烧的目的？班级___________ 姓名___________·题组训练1．做“微生物的分离与培养”实验时，下列叙述正确的是（）A．高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖B．倒平板时，应将打开的皿盖放在一边，以免培养基溅到皿盖上C．为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落D．用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上2．为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌分离等工作。
回答下列问题。
（1）该小组采用涂布分离法检测水样中的细菌含量。
在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是；然后，将1 mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1 mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。
据此可得出每升水样中的活菌数为个。
（2）该小组采用划线分离法分离水样中的细菌，操作时，接种环通过灭菌。
在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线。
这样做的目的是 .。
（3）示意图A和B中，表示的是用涂布分离法接种培养后得到的结果。
（4）该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。
结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。
分析其原因是：振荡培养能提高培养液中的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高的利用率。
3．利用微生物分解玉米淀粉生产糖浆，具有广阔的应用前景。
但现有野生菌株对淀粉转化效率低，某同学尝试对其进行改造，以获得高效菌株。
（1）实验步骤：①配制含有玉米淀粉的（固体、液体）培养基。
②在上的酒精灯火焰旁，将接种至已灭菌的平板上。
③立即用适当剂量的紫外线照射，其目的是对野生菌株进行诱变。
大肠杆菌的分离与培养教案
大肠杆菌的分离与培养教案一、教学目标1. 理解大肠杆菌的形态、结构和生长条件。
2. 学会使用无菌技术进行大肠杆菌的分离与培养。
3. 掌握大肠杆菌的鉴别方法。
二、教学重点与难点1. 教学重点：大肠杆菌的形态、结构和生长条件，无菌技术的操作要点，大肠杆菌的鉴别方法。
2. 教学难点：无菌技术的操作要点，大肠杆菌的鉴别方法。
三、教学准备1. 实验室设备：显微镜、培养皿、接种环、试管、试剂等。
2. 实验材料：大肠杆菌菌株、培养基等。
3. 教学课件：大肠杆菌的形态、结构和生长条件，无菌技术操作流程，大肠杆菌鉴别方法。
四、教学过程1. 导入：介绍大肠杆菌的背景知识，激发学生兴趣。
2. 理论讲解：讲解大肠杆菌的形态、结构和生长条件，无菌技术的操作要点，大肠杆菌的鉴别方法。
3. 实验操作：引导学生分组进行大肠杆菌的分离与培养实验，讲解并演示无菌技术的操作流程，解答学生疑问。
4. 结果观察与分析：学生观察实验结果，分析大肠杆菌的生长特点，讨论鉴别方法的正确性。
5. 总结与评价：总结本节课的主要内容，对学生的实验操作进行评价，提出改进意见。
五、教学反思本节课通过讲解和实验操作，使学生掌握了大肠杆菌的分离与培养方法，无菌技术的操作要点和大肠杆菌的鉴别方法。
在实验过程中，学生积极参与，动手操作能力得到提高。
但部分学生在无菌技术操作中仍存在不足，需要在今后的教学中加强练习。
对实验结果的观察与分析能力也需要加强培养。
六、教学评价1. 知识掌握：评估学生对大肠杆菌的形态、结构和生长条件的理解程度。
2. 技能操作：评价学生无菌技术操作的准确性和熟练度。
3. 实验报告：评估学生的实验观察结果、分析能力和鉴别方法的掌握情况。
七、教学拓展1. 介绍其他常见细菌的分离与培养方法。
2. 探讨细菌在自然界中的作用和与人类生活的关系。
3. 简介大肠杆菌在生物技术中的应用，如基因工程、疫苗研发等。
八、教学实践活动1. 组织学生参观实验室，了解实验室设备和细菌培养的基本流程。
《大肠杆菌的培养和分离》 学历案
《大肠杆菌的培养和分离》学历案一、学习目标1、了解大肠杆菌的生物学特性和在生物技术中的重要性。
2、掌握大肠杆菌培养的基本原理和操作方法。
3、学会大肠杆菌分离的技术和方法。
4、培养无菌操作的意识和实验技能。
二、学习重难点1、重点（1）大肠杆菌培养的条件和培养基的制备。
（2）无菌操作技术在大肠杆菌培养和分离中的应用。
2、难点（1）大肠杆菌的分离和纯化方法。
（2）如何确保实验操作的无菌环境。
三、知识准备1、微生物的基本概念微生物是指肉眼难以看清，需要借助显微镜才能观察到的微小生物，包括细菌、真菌、病毒等。
2、细菌的结构和生理特点细菌通常具有细胞壁、细胞膜、细胞质和核质等结构。
其生理活动包括营养摄取、代谢、生长和繁殖等。
3、培养基的类型和作用培养基是人工配制的、适合微生物生长繁殖或产生代谢产物的营养基质。
常见的培养基类型有固体培养基、液体培养基和半固体培养基等，它们分别适用于不同的实验目的。
四、学习过程1、大肠杆菌的培养（1）培养基的制备首先，准备LB培养基（LuriaBertani培养基）的成分，包括胰蛋白胨、酵母提取物、氯化钠等。
按照一定的比例将这些成分溶解在蒸馏水中，调节pH值至适当范围。
然后，将培养基进行高压蒸汽灭菌，以杀灭其中的微生物和芽孢。
（2）接种在无菌环境下，使用无菌接种环或移液器，从保存的大肠杆菌菌种中吸取少量菌液，接入已灭菌的液体培养基中。
接种过程要迅速，避免杂菌污染。
（3）培养条件将接种后的培养基置于恒温培养箱中，在37℃下进行振荡培养。
振荡培养可以增加培养基中的氧气含量，促进大肠杆菌的生长。
2、大肠杆菌的分离（1）平板划线法在无菌操作台上，将已灭菌的固体培养基倒入培养皿中，待其冷却凝固。
用接种环蘸取少量大肠杆菌培养液，在固体培养基表面进行连续划线。
通过多次划线，将细菌逐步稀释，最终在培养基表面形成单个菌落。
（2）稀释涂布平板法首先，将大肠杆菌培养液进行一系列梯度稀释。
然后，取适量不同稀释度的菌液，分别涂布在固体培养基表面。
《大肠杆菌的培养和分离》 学历案
《大肠杆菌的培养和分离》学历案一、学习目标1、了解大肠杆菌的生物学特性和培养要求。
2、掌握大肠杆菌培养和分离的基本方法和操作技能。
3、理解无菌操作的重要性，并能在实验中正确执行。
二、学习重难点1、重点（1）大肠杆菌的培养方法，包括培养基的制备、灭菌和接种。
（2）大肠杆菌的分离方法，如平板划线法和稀释涂布平板法。
2、难点（1）无菌操作技术的规范执行。
（2）对大肠杆菌培养和分离结果的分析与判断。
三、知识准备1、微生物的特点微生物通常具有个体微小、结构简单、生长繁殖快等特点。
大肠杆菌作为一种常见的原核微生物，具有典型的细菌结构。
2、培养基的类型（1）按物理性质可分为固体培养基、液体培养基和半固体培养基。
（2）按化学成分可分为天然培养基和合成培养基。
3、无菌技术（1）消毒：使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包括芽孢和孢子）。
（2）灭菌：使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
四、学习过程（一）培养基的制备1、配方确定根据实验目的和大肠杆菌的生长需求，确定培养基的配方。
通常使用LB培养基，其成分包括蛋白胨、酵母提取物、氯化钠等。
2、称量按照配方准确称量所需的各种成分。
3、溶解将称量好的成分加入适量的蒸馏水中，搅拌溶解。
4、调节 pH使用 pH 试纸或 pH 计测定溶液的 pH，并使用盐酸或氢氧化钠溶液调节至合适的 pH（通常为 70 72）。
5、分装将配制好的培养基分装到不同的容器中，如三角瓶、培养皿等。
6、灭菌（1）高压蒸汽灭菌：将分装好的培养基放入高压蒸汽灭菌锅中，在 121℃、105 kg/cm²的压力下灭菌 15 20 分钟。
（2）干热灭菌：对于一些不能进行高压蒸汽灭菌的物品，如玻璃器皿、金属用具等，可采用干热灭菌法，在 160 170℃下灭菌 1 2 小时。
（二）大肠杆菌的接种1、接种工具的准备常用的接种工具包括接种环和接种针，在使用前需要进行灭菌处理。
大肠杆菌的分离与培养教案
大肠杆菌的分离与培养教案第一章：引言教学目标：1. 了解大肠杆菌的概念和重要性。
2. 理解大肠杆菌在微生物学中的研究意义。
3. 掌握大肠杆菌的分离与培养的基本原理。
教学内容：1. 大肠杆菌的定义和特点。
2. 大肠杆菌在人类生活中的作用和影响。
3. 大肠杆菌的分离与培养的意义和应用。
教学活动：1. 引入大肠杆菌的概念，引导学生思考大肠杆菌的重要性。
2. 讲解大肠杆菌的特点和作用，引导学生了解其在微生物学中的研究意义。
3. 引导学生掌握大肠杆菌的分离与培养的基本原理。
第二章：大肠杆菌的形态与结构教学目标：1. 掌握大肠杆菌的形态特征。
2. 理解大肠杆菌的结构组成。
3. 了解大肠杆菌的生理特性。
教学内容：1. 大肠杆菌的形态特征：杆状、革兰氏阴性等。
2. 大肠杆菌的结构组成：细胞壁、细胞膜、细胞质等。
3. 大肠杆菌的生理特性：发酵、产酸、产生气体等。
教学活动：1. 展示大肠杆菌的形态特征，引导学生掌握其外观特点。
2. 讲解大肠杆菌的结构组成，引导学生了解其内部结构。
3. 介绍大肠杆菌的生理特性，引导学生了解其代谢特点。
第三章：大肠杆菌的分离教学目标：1. 掌握大肠杆菌的分离方法。
2. 了解大肠杆菌的分离原理。
3. 学会使用相应的实验操作技巧。
教学内容：1. 大肠杆菌的分离方法：平板划线法、涂抹法等。
2. 大肠杆菌的分离原理：选择性培养基、抑菌剂等。
3. 实验操作技巧：无菌操作、接种工具的使用等。
教学活动：1. 讲解大肠杆菌的分离方法，引导学生了解不同分离方法的优缺点。
2. 介绍大肠杆菌的分离原理，引导学生理解其选择性培养基的作用。
3. 演示实验操作技巧，引导学生学会无菌操作和接种工具的使用。
第四章：大肠杆菌的培养教学目标：1. 掌握大肠杆菌的培养条件。
2. 了解大肠杆菌的培养方法。
3. 学会观察和记录大肠杆菌的生长情况。
教学内容：1. 大肠杆菌的培养条件：温度、pH、氧气等。
2. 大肠杆菌的培养方法：液体培养、固体培养等。
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大肠杆菌的培养和分离
1. 微生物、细菌与大肠杆菌之间有怎样的关系? （1）概念内涵：其关系图解见下
（2）结构上：三者都是结构简单， 形体微小的生物，但是从细胞角度看其结构是不同的， 具体如下：
（「由直核谿胞构戚的宜核生樹〔既有|醉母爾 单细胞生物’也宥窑细胞生物）I 痘亀
「放线菌 由原核细胞枸戚的原核" 生物〔莉悬单细砲生物）［
»
细菌
、
I 无细胞站构的生物——病垂
2. 培养大肠杆菌的LB 培养基中有各种物质， 为什么选择这些物质， 这些物质有什么作 用呢？ （1）人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出了供其生长繁殖的营养基质一一培
养基。
虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有五大营养要素，即水、无机盐、碳源
（提供碳元素）、氮源（提供氮元素）和生长因子（不同的细菌需要的各不相同，有物种差异，
它主要补充自身不能合成的或合成能力较弱的，但却是生长繁殖必需的物质
）。
见下表：
微生物的营养要素
定义
功能
类型 化合物
类型
常用物质
碳源
凡可构成微生物细 胞和
代谢产物中碳 架来源的营养物质 称为碳源
构成细胞物质，供
给微生物生长发育
所需要的能量
无机 碳
（自
养型 微生 物 用） 无机物
CO 、 NaHCO CaCO 等
有机
蛋白 牛肉膏、蛋
'硝化细菌 肺炎规球菌 大肠杆菌 亂酸窗……
(2)大肠杆菌的LB培养基
此外配方中还要注意等。
3. 该实验中这些操作的原因
(1) 三角锥形瓶中的LB固体培养基灭菌后，需要冷却到60 C左右时，才用来转移和分
装，制成固体平面培养基，为什么？你用什么简易方法快速估计该温度？
因为三角锥形瓶中的LB固体培养基中有琼脂，它在98 C以上熔化，在44 C以下凝固，当冷却到60 C左右时，不会因温度过高烫手而不易操作；也不会因为温度过低而使三角锥形瓶中的培养基凝固，最终无法转移分装制成新的平面培养基。
简易估计温度的方法：可以用手触摸灭菌后的三角锥形瓶，感觉锥形瓶由烫手转为刚刚
不烫手时，则说明已经冷却到60 C左右了。
(2) 进行恒温培养时，为什么要将培养皿倒置？
恒温培养时，培养基中的水分会以水蒸气的形式蒸发，倒放培养皿则会使水蒸气凝结成
水滴留在盖子上；如果正放培养皿，则水分形成的水滴会落入培养基表面并且扩散开。
如果
培养皿中已形成菌落，则菌落中的菌会随水扩散，菌落间相互影响，很难再分成单菌落，达
不到分离的目的，培养皿中的菌落还有可能被盖子上掉落的水给污染。
(3) 将大肠杆菌用接种环自斜面转移到液体培养基中培养时，为什么接种环必须先深入
到斜面冷却后，才能再取斜面上的菌体？
接种环在取菌体前曾在酒精灯火焰上灼烧灭菌，一直灼烧至红，温度很高，若不冷却就
直接用其取斜面上的菌体，菌体可能因为接触高温接种环而死亡，导致大肠杆菌的转移培养
失败。
(4) 用划线法分离大肠杆菌中，第一次和随后的几次划线前都要灼烧接种环，它们的原因一样吗？在划线结束后仍然要灼烧接种环这又是为什么呢？
虽然每次灼烧都是为了灭菌，但所灭的菌种和原因却不一样。
⑸ 用划线法分离大肠杆菌时，每次的划线是怎么样的？对随后的划线的起点有什么要
求？为什么这样要求呢?
4 •消毒与灭菌一样吗?
本实验中还需要了解哪些基础知识才更便于掌握和理解呢？
⑴牛肉膏蛋白胨的知识
牛肉膏和蛋白胨来源于动物原料，含有糖、维生素和有机氮等营养物质。
1 000 mL牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成
（2）巴氏消毒法的知识
巴氏消毒法也称做低温消毒法。
日常生活中经常用到煮沸消毒法。
在100 C煮沸5〜6 min可以杀死微生物的营养细
胞和一部分芽孢。
对于一些不耐高温的液体，如牛奶，则使用巴氏消毒法，在70〜75 C煮30 min或在80 C煮15 min，可以杀死牛奶中的微生物，并且使牛奶的营养成分不被破坏。
题例领悟TILILINGWU
【例题1】下列操作属于灭菌的是（）
A. 用酒精擦拭实验人员的双手
B. 用氯气处理水源
C. 将接种环在酒精灯火焰上灼烧至红
D. 杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物
解析：此题考查对微生物实验中灭菌的理解。
对微生物培养来说，灭菌操作十分重要，
其目的就是为了获得纯净的培养物，其关键是防止外来一切杂菌的入侵，不仅仅是对人体有害的微生物。
灭菌操作一般使用强烈的物化因素（如：灼烧灭菌、高压蒸汽灭菌等）。
而不是使用较为温和的物化方法。
答案：C
消毒与灭菌是不同的。
两者除了在物化手段上是否强烈外，所消灭的微生物内容也是不同的。
灭菌是消除一切杂菌，而消毒仅仅杀死对人体有害的微生物。
消毒往往无法消灭微生物的芽孢和孢子。
【例题2】下列关于平板划线的操作及叙述，正确的是
（）
A. 灼烧接种环之后，为避免其他杂菌的干扰，应立即伸入菌液取菌种
B. 划线结束后，为避免实验菌污染环境和感染操作者，所以必须再次灼烧接种环
C. 在第一次划线前灼烧接种环和每次划线前灼烧接种环的目的相同
D. 划线时最后一区域一定要与第一区域相连，达到首尾相接
解析：此题考查对划线法分离大肠杆菌的掌握。
这是本实验的一大重点和难点。
A的操
作是错误的，灼烧接种环之后，要冷却后方能取菌种，以免温度太高杀死菌种。
B的操作完
全正确。
C的叙述是错误的，它们的灼烧目的完全不同，第一次划线前的灼烧是为了杀死其他杂菌，保证实验菌的纯净，而随后的灼烧却是为了杀死残留于接种环上的实验菌，保证实
验菌随划线次数的增加而减少，每次划线的菌种来自上一次划线的末端。
D的操作也是不正
确的，不应该相连，这样才能使最后一次划线不受第一次划线的干扰。
答案：B
大肠杆菌的分离所采用的就是划线分离法。
这一方法十分重要。
我们不仅要知其每一步
具体的操作，还要知其所以然，还要关注注意事项，避免踏入误区。
随堂训练SUITANGXUNLIAN
1细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理，这些方法
依次用于杀灭哪些部位的杂菌（）
A. 接种针、手、培养基
B.咼压锅、手、接种针
C.培养基、手、接种针D .接种针、手、咼压锅
答案：C解析：灭菌是微生物培养过程中的重要环节。
其中高压蒸汽是为了杀灭培养
基中的杂菌；酒精擦拭双手，是灭手上的杂菌；而接种针在火焰上灼烧，就是为了灭接种针上的菌。
故C选项是正确的。
2下列关于倒平板的操作姿势的叙述中，正确的是（）
A. 右手无名指及小指夹持含有固体培养基的二角瓶封口膜
B. 右手大拇指、食指拿着三角瓶
C. 左手拿着培养皿，盖子放于桌子上
D. 倒平板时，为防止温度过高，暂时熄灭酒精灯
答案：A解析：倒平板技术是微生物技术中的基本技术。
只有A是正确的。
B中手指
姿势错误。
C错在培养皿盖放在桌上了。
D中熄灭酒精灯不对，整个过程都需在酒精灯火焰
旁完成。