高中生物实验1大肠杆菌的培养和分离学案浙科版选修12

大肠杆菌的培养和分离

1. 微生物、细菌与大肠杆菌之间有怎样的关系? （1）概念内涵：其关系图解见下

（2）结构上：三者都是结构简单， 形体微小的生物，但是从细胞角度看其结构是不同的， 具体如下：

（「由直核谿胞构戚的宜核生樹〔既有|醉母爾 单细胞生物’也宥窑细胞生物）I 痘亀

「放线菌 由原核细胞枸戚的原核" 生物〔莉悬单细砲生物）［

»

细菌

、

I 无细胞站构的生物——病垂

2. 培养大肠杆菌的LB 培养基中有各种物质， 为什么选择这些物质， 这些物质有什么作 用呢？ （1）人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出了供其生长繁殖的营养基质一一培

养基。虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有五大营养要素，即水、无机盐、碳源

（提供碳元素）、氮源（提供氮元素）和生长因子（不同的细菌需要的各不相同，有物种差异，

它主要补充自身不能合成的或合成能力较弱的，但却是生长繁殖必需的物质

）。见下表：

微生物的营养要素

定义

功能

类型 化合物

类型

常用物质

碳源

凡可构成微生物细 胞和

代谢产物中碳 架来源的营养物质 称为碳源

构成细胞物质，供

给微生物生长发育

所需要的能量

无机 碳

（自

养型 微生 物 用） 无机物

CO 、 NaHCO CaCO 等

有机

蛋白 牛肉膏、蛋

'硝化细菌 肺炎规球菌 大肠杆菌 亂酸窗……

(2)大肠杆菌的LB培养基

此外配方中还要注意等。

3. 该实验中这些操作的原因

(1) 三角锥形瓶中的LB固体培养基灭菌后，需要冷却到60 C左右时，才用来转移和分

装，制成固体平面培养基，为什么？你用什么简易方法快速估计该温度？

因为三角锥形瓶中的LB固体培养基中有琼脂，它在98 C以上熔化，在44 C以下凝固，当冷却到60 C左右时，不会因温度过高烫手而不易操作；也不会因为温度过低而使三角锥形瓶中的培养基凝固，最终无法转移分装制成新的平面培养基。

简易估计温度的方法：可以用手触摸灭菌后的三角锥形瓶，感觉锥形瓶由烫手转为刚刚

不烫手时，则说明已经冷却到60 C左右了。

(2) 进行恒温培养时，为什么要将培养皿倒置？

恒温培养时，培养基中的水分会以水蒸气的形式蒸发，倒放培养皿则会使水蒸气凝结成

水滴留在盖子上；如果正放培养皿，则水分形成的水滴会落入培养基表面并且扩散开。如果

培养皿中已形成菌落，则菌落中的菌会随水扩散，菌落间相互影响，很难再分成单菌落，达

不到分离的目的，培养皿中的菌落还有可能被盖子上掉落的水给污染。

(3) 将大肠杆菌用接种环自斜面转移到液体培养基中培养时，为什么接种环必须先深入

到斜面冷却后，才能再取斜面上的菌体？

接种环在取菌体前曾在酒精灯火焰上灼烧灭菌，一直灼烧至红，温度很高，若不冷却就

直接用其取斜面上的菌体，菌体可能因为接触高温接种环而死亡，导致大肠杆菌的转移培养

失败。

(4) 用划线法分离大肠杆菌中，第一次和随后的几次划线前都要灼烧接种环，它们的原因一样吗？在划线结束后仍然要灼烧接种环这又是为什么呢？

虽然每次灼烧都是为了灭菌，但所灭的菌种和原因却不一样。

⑸ 用划线法分离大肠杆菌时，每次的划线是怎么样的？对随后的划线的起点有什么要

求？为什么这样要求呢?

4 •消毒与灭菌一样吗?

本实验中还需要了解哪些基础知识才更便于掌握和理解呢？

⑴牛肉膏蛋白胨的知识

牛肉膏和蛋白胨来源于动物原料，含有糖、维生素和有机氮等营养物质。

1 000 mL牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成

（2）巴氏消毒法的知识

巴氏消毒法也称做低温消毒法。

日常生活中经常用到煮沸消毒法。在100 C煮沸5〜6 min可以杀死微生物的营养细

胞和一部分芽孢。对于一些不耐高温的液体，如牛奶，则使用巴氏消毒法，在70〜75 C煮30 min或在80 C煮15 min，可以杀死牛奶中的微生物，并且使牛奶的营养成分不被破坏。

题例领悟TILILINGWU

【例题1】下列操作属于灭菌的是（）

A. 用酒精擦拭实验人员的双手

B. 用氯气处理水源

C. 将接种环在酒精灯火焰上灼烧至红

D. 杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物

解析：此题考查对微生物实验中灭菌的理解。对微生物培养来说，灭菌操作十分重要，

其目的就是为了获得纯净的培养物，其关键是防止外来一切杂菌的入侵，不仅仅是对人体有害的微生物。灭菌操作一般使用强烈的物化因素（如：灼烧灭菌、高压蒸汽灭菌等）。而不是使用较为温和的物化方法。

答案：C

消毒与灭菌是不同的。两者除了在物化手段上是否强烈外，所消灭的微生物内容也是不同的。灭菌是消除一切杂菌，而消毒仅仅杀死对人体有害的微生物。消毒往往无法消灭微生物的芽孢和孢子。

【例题2】下列关于平板划线的操作及叙述，正确的是

（）

A. 灼烧接种环之后，为避免其他杂菌的干扰，应立即伸入菌液取菌种

B. 划线结束后，为避免实验菌污染环境和感染操作者，所以必须再次灼烧接种环

C. 在第一次划线前灼烧接种环和每次划线前灼烧接种环的目的相同

D. 划线时最后一区域一定要与第一区域相连，达到首尾相接

解析：此题考查对划线法分离大肠杆菌的掌握。这是本实验的一大重点和难点。A的操

作是错误的，灼烧接种环之后，要冷却后方能取菌种，以免温度太高杀死菌种。B的操作完

全正确。C的叙述是错误的，它们的灼烧目的完全不同，第一次划线前的灼烧是为了杀死其他杂菌，保证实验菌的纯净，而随后的灼烧却是为了杀死残留于接种环上的实验菌，保证实

验菌随划线次数的增加而减少，每次划线的菌种来自上一次划线的末端。D的操作也是不正

确的，不应该相连，这样才能使最后一次划线不受第一次划线的干扰。

答案：B

大肠杆菌的分离所采用的就是划线分离法。这一方法十分重要。

我们不仅要知其每一步

具体的操作，还要知其所以然，还要关注注意事项，避免踏入误区。

随堂训练SUITANGXUNLIAN

1细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理，这些方法

依次用于杀灭哪些部位的杂菌（）

A. 接种针、手、培养基

B.咼压锅、手、接种针

C.培养基、手、接种针D .接种针、手、咼压锅

答案：C解析：灭菌是微生物培养过程中的重要环节。其中高压蒸汽是为了杀灭培养

基中的杂菌；酒精擦拭双手，是灭手上的杂菌；而接种针在火焰上灼烧，就是为了灭接种针上的菌。故C选项是正确的。

2下列关于倒平板的操作姿势的叙述中，正确的是（）

A. 右手无名指及小指夹持含有固体培养基的二角瓶封口膜

B. 右手大拇指、食指拿着三角瓶

C. 左手拿着培养皿，盖子放于桌子上

D. 倒平板时，为防止温度过高，暂时熄灭酒精灯

答案：A解析：倒平板技术是微生物技术中的基本技术。只有A是正确的。B中手指

姿势错误。C错在培养皿盖放在桌上了。D中熄灭酒精灯不对，整个过程都需在酒精灯火焰

旁完成。