免疫组化小知识点(较好-Jane-2014.01.15)

1.封闭血清作用
二抗来源的动物血清封闭的是组织上带电荷基团。因为组织中非抗原抗体反应出现的非特异性背景染色，最常见的原因是蛋白吸附于高电荷的胶元和结缔组织成分上。这并不影响接下来一抗的结合，因为这种结合是特异的，亲和力远远高于因电荷作用的结合，因此会竞争胜出。
过氧化氢的作用是去除组织中的内源性过氧化物酶。不能代替封闭血清。如果你用的是HRP(辣根过氧化物酶)标记的抗体，过多内源性过氧化物酶会影响显色

2.SP检测试剂盒
Streptavidin链霉亲和素；链霉素抗生物素蛋白 Peroxidase过氧化物酶
SP法：链霉卵白素-过氧化物酶(streptavidin-horseradish peroxidase,SP)免疫组织化学法，我们常用的是HRP标记。
S-abc法：抗生物素蛋白-生物素-辣根过氧化物酶复合物（ABC）
又称免疫组织化学抗生物素蛋白-生物素复合物(ABC)法。
streptavidin-biotin-peroxidase complex [医]生物素-亲和素-过氧化物酶复合物
总结：
SP和ABC法均属于亲和连接法，另外还有抗原-抗体结合法(例如：PAP法即过氧化物酶-抗过氧化物酶法)

AP：碱性磷酸酶
[Streptavidin-Alkaline Phosphatase] 链霉亲和素-碱性磷酸酶结合物
链霉亲和素，从链霉菌分离的细菌蛋白，蛋清在其强大的抗生物素蛋白生物素的亲和力是相似的。因为它更有利的化学性质，所以它是用来作为蛋白的抗生物素蛋白的替代品。 与蛋清亲和素具有净正电荷在中性pH值和包含大约7%的碳水化合物,链霉抗生物素蛋白具有在中性pH值几乎没有净电荷，不含有碳水化合物，并显示出较低的非特异性背景。
所有的链霉抗生物素蛋白的结合物被推荐用于与生物素-SP-共轭的亲和纯化的第二抗体和生物素-SP-的共轭ChromPure蛋白质 。与抗生物素蛋白-生物素-辣根过氧化物酶复合物（ABC），HRP标记的链霉抗生物素蛋白相比更稳定，提供了更少的背??景，并且是更敏感的。
对敏感性的增加可能是由于增强组织的渗透和更少的空间障碍，因为共轭的链霉抗生物素蛋白系统的所有组件都是标称分子量小于200,000，这大大低于的ABC。

3.免疫组化结果如何分析？
（1）阳性着色细胞计数法。在40*光镜下，随机选择不重叠的10个视野，人工或机器计数阳性着色细胞，每组3-6张不同动物组织切片，然后进行组间比较即可。
（2）灰密度分析法。通过在不同组别和不同动物组织切片上选择相同区域、相同条件下用image j进行灰密度分析，然后进行统计分析即可。
（3）评分法。通过在光学显微镜下对组织切片分别按染色程度（0-3分为阴性着色、淡黄色、浅褐色、深褐色）、阳性范围进行评分（1-4分为

0-25%、26-50%、51-75%、76-100%），最终可以分数相加，再进行比较。