禽流感的实验室诊断.ppt
2024年度禽流感讲课PPT课件
禽流感讲课PPT课件•禽流感基本概念与背景•禽流感病毒特性及变异情况•临床表现、诊断与治疗措施•预防措施与控制策略•国内外研究进展及挑战•总结回顾与拓展思考contents目录01禽流感基本概念与背景禽流感定义及分类禽流感定义禽流感是由A型流感病毒引起的一种禽类传染病,也能感染人类,造成严重公共卫生问题。
分类根据病毒表面蛋白的不同,禽流感病毒可分为高致病性、低致病性和非致病性三类。
发病历史与现状历史回顾自20世纪初首次发现以来,禽流感已多次爆发,对全球禽业和人类健康构成威胁。
现状概述近年来,随着病毒变异和跨国传播,禽流感疫情呈现上升趋势,防控形势严峻。
传播途径及危害程度传播途径主要通过飞沫、接触传播和粪口途径传播,也可通过气溶胶传播。
危害程度禽流感病毒可引起禽类大量死亡,对人类可导致严重呼吸道疾病甚至死亡,对经济和社会造成巨大影响。
02禽流感病毒特性及变异情况禽流感病毒属于正粘病毒科,呈多形性,通常为球形或丝状。
病毒形态由核衣壳、包膜和刺突组成。
核衣壳包含病毒RNA 和蛋白质,包膜由脂质双层和病毒糖蛋白构成。
病毒结构刺突负责与宿主细胞受体结合,介导病毒进入细胞;病毒RNA 在宿主细胞内进行复制和转录,产生新的病毒粒子。
病毒功能病毒结构与功能变异机制及影响因素变异机制禽流感病毒的变异主要发生在病毒RNA复制过程中,由于病毒RNA聚合酶缺乏校对功能,导致病毒基因序列发生随机突变。
影响因素宿主免疫压力、病毒间基因重配、抗病毒药物使用等均可影响禽流感病毒的变异。
变异后果可能导致病毒毒力、传播能力和宿主范围发生变化,对公共卫生和畜牧业造成威胁。
广泛存在于禽类中,可引起禽类严重疾病和人类感染。
具有高变异性,可感染多种宿主。
A 型流感病毒B 型流感病毒C 型流感病毒主要感染人类,引起季节性流感。
与A 型流感病毒相比,变异率较低。
主要感染猪和狗等动物,也可感染人类,但症状较轻。
变异率较低,对公共卫生影响较小。
030201不同类型禽流感病毒比较03临床表现、诊断与治疗措施典型临床表现咳嗽肌肉酸痛干咳或伴有痰液的咳嗽,严重时可出现呼吸困难。
禽流感病毒标本采集及PPT课件
汇报人:可编辑 2024-01-11
目录
• 禽流感病毒概述 • 禽流感病毒标本采集方法 • PPT课件制作技巧 • 禽流感病毒防控措施 • 案例分析
禽流感病毒概述
01
定义与特性
定义
禽流感病毒是一种属于正粘病毒 科甲型流感病毒属的病毒,主要 感染鸟类,尤其是家禽和野生鸟 类。
成功案例三
介绍第三个成功的禽流感病毒防控案例,总结其 防控策略和效果。
疫苗研发与应用情况
疫苗研发进展
介绍当前禽流感病毒疫苗的研发情况,包括疫苗类型、研发进程 等。
疫苗应用情况
分析疫苗在本地区的应用情况,包括接种范围、接种效果等。
疫苗未来发展
展望未来疫苗研发和应用的趋势,提出相关建议和展望。
THANKS.
地方建场。
养殖场布局
合理规划养殖区、生活 区和工作区,保持一定 距离,减少交叉污染。
养殖场消毒
定期对养殖场进行全面 消毒,包括禽舍、工具
、饲料和水源等。
养殖场管理
加强养殖场管理,保持 环境卫生,及时清理粪 便和废弃物,避免病毒
传播。
公众的日常防护措施
01
02
03
04
避免接触活禽
尽量避免在活禽市场和养殖场 逗留,不购买和食用未经检疫
按照标准操作规程进行采集,确保采 集过程中无菌操作,避免交叉感染。
采集后的处理与保存
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03ห้องสมุดไป่ตู้
标本标记与记录
对采集的标本进行详细标 记,记录相关信息,以便 后续分析。
标本保存
将采集的标本保存在适当 的介质中,如细胞培养液 或生理盐水中,并保持低 温状态,以便后续检测。
禽流感的诊断与治疗 ppt课件
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预防
管理传染源 加强禽类疾病的监测 受感染动物立即销毁,对疫源地进行封
锁并彻底消毒 患者隔离治疗,转运时带口罩
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预防
切断传播途径
接触患者及患者分泌物后应立即洗手
处理患者血液或分泌物时应戴手套
被患者血液或分泌物污染的医疗器械应消毒
2003年香港,1例儿童感染H9N2。
PPT课件
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PPT课件
最近禽流感疫情情况
1月27日,国家禽流感参考实验室最终确 诊发生在广西隆安县丁当镇的禽只死亡 为H5N1亚型高致病性禽流感。 1月26日,湖北省武穴市一林场养鸡专业 户和湖南省武冈市一养鸭户出现禽只死 亡,当地兽医部门初步诊断为疑似高致 病性禽流感。
PPT课件
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人间禽流感疫情历史概况
1997年8月20日WHO公布,从1例3岁香港儿 童体内首次分离到禽流感病毒A H5N1株。此 次疫情共确诊18例,死亡6例。
1999年香港,2例患者证实为H9N2感染。 2003年2名到过中国福建的香港人感染H5N1, 1人死亡。
2例0,031年人荷死兰亡发,生有H一7N些7感人染传疫人情的,症报据告。病例80
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治疗
实验室证实病例 症状发作48小时内 对高危人群的早治疗的预防治疗:慢性 基础疾病、下呼吸道累患者、未作防护 的禽流感接触者。
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治疗
对症治疗:休息,补液,儿童忌用阿斯匹林。
抗病毒治疗:
奥75司m他g,韦每(日达二菲次),:共至5今天H。5N1对其无耐药, 金刚烷胺:100mg,二次,共5天。儿童 5mg/kg/d,分二次,总量不超过150mg。 胸片有肺炎改变者使用合适的抗生素:β内酰 胺类、大环内酯类
关于禽流感的PPT课件
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预防指南
卫生习惯:
• 保持手部清洁,并用正确方法洗手。 • 避免手部接触眼睛、鼻及口。 • 打喷嚏或咳嗽时应遮掩口鼻。 • 不随地吐痰,如要吐痰应将分泌物包
好,弃置于有盖垃圾箱内。 • 有呼吸道感染症状或发烧时,应戴上
口罩,并尽早就医。
• 现阶段主要是从事禽类养殖、销售、宰杀、加工业者,以及在发病前1 周内接触过禽类者,需要比普通人更加注意预防。他们都是来自非人与 人之间的传染。
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病史图解
名词解释:
禽流感,全名鸟禽类流行性感冒,是由病毒引起的 动物传染病,通常只感染鸟类,但在特有情况下会跨越 物种障碍感染人。
最早发现:
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年龄分布图
最大年龄患者:上海84岁老人,患H7N9型禽流感医治无效死亡。 最小年龄患者:香港3岁儿童,患H5N1型禽流感医治无效死亡。
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死亡分布图
最早的人禽流感H5N1病例出现在 1997年 的香港,导致18人发病,6人死亡。 到了2009年,全球就有15个国家和地 区 393人感染,248人死亡,中国从03年 到09年 共有31人感染禽流感,21人死亡。
3.目前国内外尚无疫苗
因目前为止,国内尚未研发出有效的预防治疗控制疫情的药物,人们在恐慌 之余听信大多不法分子的谣言,声称某某中药可治疗禽流感,正是由于人们 对疫情的恐慌,不科学认知,给许多不法分子以可乘之机。
4.穴位按摩可治疗禽流感
同上一观点类似,人们不知如何发泄内心对于禽流感的恐慌,故听信他发 偏方,这样做不但不会有预防治疗的效果,反而还会错过最佳的治疗时期。
有关禽流感PPT课件
•
B(Influenza virus B)
•
C(Influenza virus C)
•
A型流感病毒可引起人、动物和禽类发生流感,常
以流行形式出现,引起世界性流感大流行,在动物中广
泛存在,也能引起动物大批死亡。
•
B型流感病毒主要引起人发生流感。
•
C型流感病毒主要引起人和猪发生流感。
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• 2.流感病毒的形态
• (3)病毒抗原检测 取病鸡组织制成切片或涂
片,用荧光抗体法或酶标组化法检测病料组织中 的病毒抗原。
• (4)分子生物学诊断方法 RT-PCR方法检测
禽流感病毒,4小时检出结果。H5型禽流感病毒
检测箱采用基因方法,5小时测出病毒基因。也
可核酸探针技术进行检测禽流感病毒。
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3. 农业部颁发的关于高致病性禽流感的诊断标准
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图11 病死鸡头部皮下水肿
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图12 病死鸡肌胃、腺胃黏膜面有出血、溃疡
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图13 病死鸡肠道淋巴滤泡出血、坏死
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图14 病死鸡卵子充血、出血
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图15 病死鸡肝脏出血、有白色坏死点
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图16 病死鸡胰腺出血
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• 2.传染源
病禽是主要的传染源,康复禽类和隐性感
染者,在一定时间内也可带毒排毒。禽流感病毒 可感染多种禽类。水禽(鸭、鹅)亦是禽流感病毒
的重要宿主,外观健康的鸭、鹅,可携带病毒并
排出体外,污染环境,一旦高致病性的毒株感染 鸡可引起暴发性流行。
禽流感_PPT幻灯片
▪ 3.慢性型: 神经症状 呼吸症状 恶病质 精神沉郁 眼睑肿胀,右眼完全闭合 冠和肉垂出血 脚鳞片下出血
禽流感
禽流感
禽流感
禽流感
禽流感
禽流感
禽流感
禽流感
禽流感病鸭具有神经症状
禽流感
禽流感
病理变化
▪ 禽流感(Avian Influenza, AI)是由A型流 感病毒引起的家禽和野禽的一种烈性传染病, 给养禽业造成巨大损失,我国农业部和国际 兽医局都将其定为A类传染病。
▪ 以往认为禽流感病毒(Avian Influenza Virus, AIV)对人群无致病力,但1997年香 港报道了首例因感染H5N1亚型AIV致死人事 件后,近年及最近又有多例人感染AIV发病, 甚至死亡的报道。
▪ 有效消毒药物如: 2%苯酚,1/万消毒灵,0.5%漂白粉,5/万新洁 尔灭,0.4%惠福星。
流行病学
▪ 1.自然宿主: ①火鸡,鸡,鸭,鹅,海豹 ②野生鸟,野生水禽,候鸟 ③其它动物
▪ 2.实验室宿主: 在人工感染的条件下,猪,雪貂,猫,水貂, 猴等均可受感染。
▪ 3.潜伏期: 几小时到14天,与下列因素有关: 毒力 剂量 感染途径 受感染家禽种类等
禽流感
▪ 1.检测病毒 ② PCR ③荧光抗体 ④其它
▪ 2.检测抗体 比较感染早期与14天后对H5N1AIV的
血凝抑制抗体效价,上升4倍即为阳性病 例
(注意不同亚型之间的交叉反应的鉴 别) ▪ 3.其它方法
禽流感
预防与控制
▪ (一)对病禽的处理 1.我国列为A类传染病 2.扑杀疫区内所有家禽(疫点周围3公里半径 范围内) 3.受威胁区禽只观察或免疫(疫区顺延5公里 半径范围) 4.无害化处理,隔离,封锁,消毒 5.最后一个病例扑杀后一个月解除封锁
禽流感诊断与治疗PPT
病毒变异研究
禽流感病毒变异类型: H5N1、H7N9等
病毒变异原因:基因突变、 重组等
病毒变异影响:增加传染 性、致病性等
病毒变异监测:基因测序、 血清学检测等
新型诊断技术研究
核酸扩增技术:快速、灵敏、 特异性强
抗原检测技术:操作简便、快 速、成本低
抗体检测技术:灵敏度高、特 异性强
生物芯片技术:高通量、快速、 自动化
预防措施:勤洗手、 戴口罩、避免接触 禽类及其排泄物
禽流感的症状: 发热、咳嗽、呼 吸困难等
及时就医:出现 症状及时就医, 避免延误治疗
监测与预警
定期进行禽流感病毒检测,及时发现病毒变异情况 建立疫情监测系统,实时监控禽流感疫情动态 加强养殖场管理,确保禽类健康,减少疾病传播风险 提高公众健康意识,普及禽流感预防知识,提高自我防护能力
禽流感诊断与治疗
汇报人:
目录
禽流感的诊断
禽流感的治疗
01
02
禽流感的预防
禽流感的研究进展
03
04
禽流感的诊断
临床诊断
症状观察:观察禽 类是否有发热、咳 嗽、呼吸困难等症 状
实验室检测:进行 病毒分离、血清学 检测等实验室检查
影像学检查:进行 X光、CT等影像学 检查,观察肺部病 变情况
病理学检查:进行 组织病理学检查, 观察病变情况
观察症状:观察禽类是否有症治疗,如使用抗病毒药物、
支持治疗等
禽流感的治疗
抗病毒治疗
药物选择:选择有效的抗病毒药物, 如奥司他韦、扎那米韦等
联合用药:必要时,可以联合使用 抗病毒药物和抗生素
剂量和疗程:根据病情和患者情况, 确定合适的剂量和疗程
新型治疗方法研究
动物检疫学—高致病性禽流感ppt课件
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动物检疫学—高致病性禽流感
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动物检疫学—高致病性禽流感
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动物检疫学—高致病性禽流感
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动物检疫学—高致病性禽流感
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动物检疫学—高致病性禽流感
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动物检疫学—高致病性禽流感
பைடு நூலகம்
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动物检疫学—高致病性禽流感
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脚 鳞 出 血 ( 严 重 病 例 )
动物检疫学—高致病性禽流感
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流感病 鸡心冠 脂肪出 血
• 心包积水,心外膜有点状或条纹状坏死,心肌 软化;
• 病鸡胸部肌肉有出血点或出血斑。
• 消化道变化表现为腺胃乳头水肿、出血,肌胃 角质层下出血,肌胃与腺胃交界处呈带状或环 状出血;
• 肝、脾、肾瘀血肿大,有灰黄色小坏死灶;
动物检疫学—高致病性禽流感
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• 呼吸道有大量炎性分泌物或灰黄色干酪样坏死;
动物检疫学—高致病性禽流感
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近年来出现了禽流感病毒感染人的事例: • 1997年中国香港禽流感爆发,有12人感染H5N1
型禽流感病毒,6人死亡,这是世界上首次证 实禽流感感染人类; • 2003年4月荷兰发生H7N7型禽流感,人类感染 者达89人,并出现了死亡病例; • 2003年11月27日,香港一男童感染禽流感;
发病鸡胸肌出血
产蛋鸡输卵管中的粘液渗 出物
动物检疫学—高致病性禽流感
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动物检疫学—高致病性禽流感
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动物检疫学—高致病性禽流感
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禽流感病鸭胰腺白坏死点
动物检疫学—高致病性禽流感
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鹅流感胰
动物检疫学—高致病性禽流感
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实验室检疫
• 诊断技术:我国已建立琼脂扩散(AGP)技术、亚 型分型技术、病毒分子诊断与检测技术。
禽流感的诊断与治疗 ppt课件
中医治疗
中药治疗
中医治疗禽流感的方法包括使用中药方剂、中药制剂等。中 药治疗可以起到清热解毒、益气养阴、祛湿化痰等作用,有 助于缓解症状和促进康复。
针灸与按摩
中医的针灸和按摩疗法也可以用于治疗禽流感。这些疗法可 以调节人体的气血流通,缓解肌肉疼痛和疲劳,提高身体的 免疫力。
04
禽流感的预防和控制
细菌性上呼吸道感染
细菌性上呼吸道感染通常有脓性鼻涕 、痰液等症状,而禽流感则较少出现 这些症状。
03
禽流感的治疗
抗病毒治疗
抗病毒药物
使用抗病毒药物是治疗禽流感的关键措施之一。常见的抗病毒药物包括奥司他 韦(Tamiflu)和扎那米韦(Relenza),这些药物可以抑制病毒的复制,从而 减轻症状和缩短病程。
禽流感的诊断与治疗
汇报人:可编辑 2024-01-10
• 禽流感概述 • 禽流感的诊断 • 禽流感的治疗 • 禽流感的预防和控制 • 禽流感的研究进展
01
禽流感概述
定义与特点
定义
禽流感是由A型流感病毒引起的一 种高度传染性疾病,主要在鸟类 中传播。
特点
禽流感病毒有多种亚型,其中某 些亚型可以感染人类,引发严重 的疾病。
个人防护
教育公众在接触禽类时采取必要的个人防护措施 ,如佩戴口罩、手套等。
健康生活方式
倡导健康的生活方式,如保持良好的个人卫生习 惯、增强体质等,以提高身体对病毒的抵抗力。
Байду номын сангаас
05
禽流感的研究进展
新药研发
针对禽流感病毒的抗病毒药物
随着对禽流感病毒的深入了解,研究者正在开发针对病毒特定靶点的抗病毒药物,以减少病毒复制和疾病进展。
抗病毒药物的使用时机
禽流感诊断与鉴别诊断ppt课件
疾病概况
禽流感名称于1955年出现,最早 叫鸡瘟; 1878年首次报道于意大利; 1901年其病原为“滤过性”病原 体;
疾病概况
1955年证实其病原为甲型流感病毒 一员; 长期生存在禽中的流感病毒,基因 组属禽流感病毒的,称为禽流感病 毒; 禽流感是由禽流感病毒引起的一种 急性传染病,可发生在禽、哺乳动 物和人。
胸部影像学检查
H5N1亚型病毒感染者可出现肺部浸润。 胸部影像学检查可表现为肺内片状影。 重症患者肺内病变进展迅速,呈大片状 毛玻璃样影及肺实变影像,病变后期为 双肺弥漫性实变影,可合并胸腔积液。
诊 断
1. 流行病学接触史 (1) 发病前1周内曾到过疫点,有感 染禽流感病毒的可能。 (2) 与被感染的家禽及其分泌物、排 泄物等有密切接触史者。 (3) 与禽流感患者有密切接触史者有 患病的可能。
流行病学
(一)传染源 主要为患禽流感或携带禽流感病毒的鸡、 鸭、鹅等禽类,特别是鸡; 野禽在禽流感的自然传播中扮演了重要 角色。
????
携带禽流感病毒的鸡、鸭、鹅等 禽类,特别是鸡?? 野禽传播? 当地的禽类疫情?当地的野禽?
(二)传播途径
经呼吸道传播, 可通过密切接触感染的家禽分泌物和排 泄物、受病毒污染的水等被感染, 直接接触病毒毒株也可被感染。 目前尚无人与人之间传播的确切证据。
人间禽流感疫Biblioteka 历史概况1997年8月20日WHO公布,从1例3岁香港儿 童体内首次分离到禽流感病毒A H5N1株。此 次疫情共确诊18例,死亡6例。 1999年香港,2例患者证实为H9N2感染。 2003年2名到过中国福建的香港人感染H5N1, 1人死亡。 2003年荷兰发生H7N7感染疫情,报告病例80 例,1人死亡,有一些人传人的症据。 2003年香港,1例儿童感染H9N2。
禽流感监测课件
下面详细说一下Hபைடு நூலகம்AI监测样品的采集、保存与运输技术要求
1、采样范围:活禽交易市场、农贸市场、家禽及生猪屠 宰场(点)、家禽养殖场(村)等,尽可能覆盖多种家 禽(特别是水禽)和多个摊位。 2、采样前的准备 1)采样要求:根据采样目的,采集不同类型和不同数量 的样品,采样人员必须是兽医技术人员,熟悉采样器具 的使用,掌握正确采样方法。 2)采样器具:动物检疫器械箱,保温箱或保温瓶,剪刀, 镊子,酒精棉,碘酒棉,棉签,注射器、针头、动物保 定器等。 3)样品容器:1.5mL离心管,10mL离心管及易封口样品 袋,塑料包装袋等。 4)保存和运输用品:塑料盒(1.5mL小离心管专用),铝饭 盒,瓶塞,无菌棉拭子,胶布,封口膜,封条,冰袋。 采样刀剪等器具和样品容器须经无菌处理。
5)试剂:禽流感病毒抗原快速检测卡和加有抗生索 的PH7.4等渗磷酸盐缓冲液(PBS) A、PH7.4的等渗磷酸盐缓冲液配制方法 : NaCI(氯化钠) 8.0g NaH2PO4 (磷酸二氢钠) 1.561g Na2HP04( 磷酸氢二钠 ) 3.582g
将上列试剂按次序加入定量容器中,加适量蒸馏水 溶解后,再定容至1000mL,调PH值至7.4,高压 消毒灭菌20分钟,冷却后,保存于4℃冰箱中备用。
6、AIV的抵抗力: AIV存在于病禽的所有组织器官、体液、 分泌物和排泄物中,大量的病毒可通过粪便 排出。AIV对外界环境的抵抗力不强,对高 温、紫外线、各种消毒药敏感(对碘制剂特 别敏感,目前我县使用的是消毒正典,有效 成份是聚维酮碘溶液),易被杀死。56℃30 分钟、60℃10分钟可灭活病毒。但对低温和 干燥环境较适应(0-4℃可存活数月,-70℃ 稳定,冻干可存活数年)。
• 7)粪便样品: 小家禽采泄殖腔拭子容易造成伤害,可只采集每个样品 1g-2g新鲜粪便样品,置于内含有抗生素PBS(加lmL~ 1.5mL PBS)的离心管中,封好口,贴好标签。保存粪便 和泄殖腔拭子的PBS中抗生素浓度提高5倍。 8)病料样品 • 应采集组织样品。取死亡不久的病死禽采样。 • 每只禽采集肠管及肠内容物1份;肺和气管样品1份;肝、 脾、肾、脑等各l份并分别采集。上述每个样品取样重量 为15g~20g,放于样品袋或平皿中,如果重量不够可取 全部脏器(如脾脏)。 不同禽只脏器不能混样,同一禽只不同脏器不应混 样。样品采集完后将样品封口,贴好标签。
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的禽鸟体内产生病毒抗体。
禽流感病毒图解
• 由A型流感病毒引起的禽流感,其临床症状因感染
禽的年龄、种类、饲养管理水平、并发感染情况 及新感染毒株的毒力等不同而表现不一致。其病 理变化因感染病毒株毒力的高低、病程的长短及 种类不同也不尽相同。因此,禽流感的诊断一直 依赖于病原的分离鉴定,OIE也一直采取的是进行 病毒分离鉴定这个黄金标准。随着血清学实验技 术和生物工程技术的飞速发展,禽流感诊断技术 的研究也取得了新的进展。
1.样品采集
• 样品采集的质量是进行禽流感检测的关
键。应从死禽和处于急性发病期的病禽采 集样品,样品要具有典型性。采样过程要 注意无菌操作,同时避免污染环境。采样 人员要按NY/丁7(38要求加强个人防护。 样品的保存和运输也要按照有关的规定和 要求进行。
• (1)病料样品 至少从5只病禽和病死禽中采集病料样品
• ②如果致死l一5只易感鸡,而且又不是H5或H7亚型,则将
其接种鸡胚成纤维细胞(CEF)或MDCK细胞,在没有胰酶的 情况下观察是否产生细胞病理变化,如不产生病理变化, 该流感病毒就不是HPAIV;
• ③对于所有的低致病性H5和H7亚型病毒和其他流感病毒,
如果在没有胰酶的条件下在细胞培养能生长,则必须测定 血凝素裂解部位的氨基酸顺序,如果相似于其他的HPAIV, 存在多个碱性氨基酸序列,则该受检病毒被视为高致病性。
禽流感的实验室诊断
第八组
什么是禽流感?
禽流感是禽流行性感冒的简称,它是一 种甲型流感病毒的一种亚型(也称禽流感 病毒) 引起的传染性疾病,被国际兽疫局 定为甲类传染病.
• 高致病性禽流感H5N1:最严重,发病率高,
死亡率高.
• 低致病性禽流感H9N2/H7N7 :呼吸道症
状轻,食量减少,产蛋量下降,零星死亡.
• 鸡胚培养法的优点 鸡胚的组织分化程度低,
可选择适当途径接种,病毒易复制,感染 病毒的膜和液体含大量病毒;鸡胚是个整 体,有神经血管的分布及脏器的构造;来 源充足,操作简单,通常是无菌的,对接 种的病毒不产生抗体。3天可报告结果。病 毒分离鉴定对AI的诊断比较确实,但操作 程序繁杂,费用高,耗时费力。
• 对于禽流感传统的病原学诊断方法是用鸡
胚或者狗肾细胞(MDCK)、鸡胚成纤维细胞 (CEF)等进行病毒分离,采用血凝和血凝抑 制进行鉴定,血清学的诊断方法则包括疫学和分子生物学技术的
飞速发展,禽流感的诊断技术也越来越完
善,现在已经有免疫印迹、免疫荧光、 ELISA、墓因芯片、RT-PCR技术、荧光RTPCR技术、NASBA技术等。
免疫荧光技术(IFT)诊断禽流感
• 免疫荧光技术就是荧光抗体技术(FAT)。IFT
最早用于病毒的鉴定和定位病毒感染细胞 中特异性抗原,主要是核内荧光。用M1抗 原的荧光抗体主要出现胞质荧光,核内也 有部分荧光。
• IFT早在1961年就开始用于人类流感的快速诊断,1984年
宾夕法尼亚州暴发禽流感时Skeeles将IFT首次用于AIV的 检测。用于禽流感病毒的诊断常用直接荧光抗体法,即在 组织触片上直接染色、以荧光显微镜检查荧光。一种AIV 的荧光抗体可用来检测不同亚型的其他病毒。IFT用于禽 流感的诊断具有快速、简便和敏感性好的特点,而且检测 成本费用相对较低,其敏感度与病毒的分离鉴定相当,有 时高于用鸡胚进行的病毒分离。但是需要注意的是如何避 免和降低标本中出现的假阳性(即非特异性荧光)问题。
• 对一株杂交瘤细胞分泌的流感病毒的单克隆抗体
进行检测时,发现间接固相免疫荧光技术的敏感 性比HI高40~150倍。间接免疫荧光技术也可以 用来检测核蛋白(N尸)和基质蛋白(M1)抗原与抗体 的反应,其敏感性很高。该反应对抗原制备要求 较高,需用非离子型去污剂对纯化的病毒粒进行 裂解。
• 由于单克隆抗体的问世,大大提高了免疫荧光测
• 如果要检验是否是高致病性禽流感病毒,
在进行HA亚型鉴定之后,还需要进行细胞 培养、动物试验或进行裂解位点的序列分
析等进行判断。
OIE判断HPAIV的标准是:
• ①含流感病毒尿囊液,做l:10稀释,静脉内接种8只4~8
周龄易感鸡,每只0.2ml,如在10天内死亡6只以上,则 该流感病毒为HPAIV~
(发病群不足5只则全部采样)。样品应包括:泄殖腔(新 鲜粪尿样)棉拭子和气管棉拭子(置于缓冲液中);气管和 肺的混样;肠管及内容物的混样;肝、脾、肾和脑等其 他组织样品(不能混样)。
• 组织样品、气管棉拭子单独放人容器,容器中盛放
含有抗生素(pH值为7.0~7.4)的PBS液。抗生素的选 择应视当地情况而定,组织和气管拭子悬液中加入青霉 素(20001U/ml)、链霉素(2mg/ml)或庆大霉素(50t~g /m1)。肠管及内容物、粪便样品和泄殖腔棉拭子所用 的抗生素浓度应提高5倍(加入抗生素后PBS液的pH值应 调至7.0-7.4)。
定的效果。免疫荧光用于禽流感的诊断具有快速 (2h之内)、特异和敏感性高的特点,但是其不能 鉴别HA和NA亚型,而且需要特殊的设备(荧光显 微镜),且工作人员需具有一定的经验,所以在基 层检测单位推广应用具有一定的局限性。
• 2)血样 分别采集至少10个病禽的(急性发
病期血清,如发病群不足10只则全部采样), 并要求单独存放,不能混合。
2.病毒的分离鉴定
• 以无菌拭子采集气管或泄殖腔病料或病变组织,研磨制
成10%悬液,经处理后接种9-11日龄SPF鸡胚,收获尿囊 液测定血凝活性,若为阴性则应继续盲传2~3代。对具有 血凝活性的尿囊液需先用ND抗血清做HI试验,以排除新 城疫的可能,即使ND阳性也应采用中和法继续传代,看 是否为ND与AIV混合感染。然后用免疫扩散等方法来检测 特异性核心抗原NP或MP,然后用血凝抑制试验和神经氨 酸酶抑制试验鉴定A型流感病毒亚型。分离鉴定的同时, 进行致病力试验,确定毒力的强弱。