第七章 含量测定-HPLC

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第七章 中药制剂的含量测定技术
高效液相色谱法
回答下列问题： 系统适用性试验参数__、___、___、____。 提取的方法是____________。 分离精制方法是____________。(如果有） 取样范围是____________。 计算：
• m= • V= • D=
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高效液相色谱法
实例：三黄片（小片）中大黄的测定
OH O OH
OH O OH
HO O
CH3
H O
CH3
大黄素
大黄酚
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第七章 中药制剂的含量测定技术
高效液相色谱法
实例：三黄片（小片）中大黄的测定 【含量测定】大黄 照高效液相色谱法（附录Ⅵ D）测定。 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填 充剂；甲醇-0.1%磷酸溶液（85:15）为流动相；检测波长为 254nm。理论板数按大黄素峰计算应不低于2000。 对照品溶液的制备 取大黄素对照品和大黄酚对照品适量， 精密称定，加无水乙醇-乙酸乙酯（2:1）混合溶液制成每 1ml含大黄素10μg、大黄酚25μg的混合液，即得。 供试品溶液的制备 测定法 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注 入液相色谱仪，测定，即得。 本品每片含大黄以大黄素（C15H10O5）和大黄酚（C15H10O4） 总量计，小片不得少于1.55mg；大片不得少于3.1mg。
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第七章 中药制剂的含量测定技术
高效液相色谱法
系统适用性试验 理论板数（n）
• 色谱柱的效能 • 一般为待测组分或内标物质的理论板数
分离度（R）
• 分离程度，衡量色谱系统效能 • 分离度应大于1.5。
重复性
• 连续进样后，色谱系统响应值的重复性能
–外标法：峰面积测量值的相对标准偏差（RSD）应不大于2.0% –内标法：校正因子的相对标准偏差应不大于2.0%。
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第七章 中药制剂的含量测定技术
讲授内容
高效液相色谱法
简述 方法 应用实例
气相色谱法
简述 方法 应用实例——川贝枇杷糖浆
薄层扫描法
简述 方法 应用实例
容量分析法
北豆根片中总生物碱的测定 克痢痧胶囊中雄黄的测定 万氏牛黄清心丸中朱砂的测定
高效液相色谱法
第七章 中药制剂的含量测定技术
高效液相色谱法
实例：双黄连口服液中黄芩的测定定
HO COOH OH OH OH O O OH O O
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第七章 中药制剂的含量测定技术
高效液相色谱法
实例：双黄连口服液中黄芩的测定 【含量测定】黄芩 照高效液相色谱法（附录Ⅵ D）测定。 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充 剂；以甲醇-水-冰醋酸（50:50:1)为流动相；检测波长为 274nm。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于1500。 对照品溶液的制备 取黄芩苷对照品适量，精密称定，加50% 甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。 供试品溶液的制备 精密量取本品1ml，置50ml量瓶中，加50% 甲醇适量，超声处理20分钟，放置至室温，加50%甲醇稀释至 刻度，摇匀，即得。 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入 液相色谱仪，测定，即得。 本品每1ml含黄芩以黄芩苷（C21H18O11）计，不得少于10.0mg。
简述 方法 应用实例
其他分析法
挥发油测定法 氮测定法
第七章 中药制剂的含量测定技术
《中国药典》一部含量测定方法汇总表
类别 分析方法 高效液相色谱法 气相色谱法 仪器分析法 薄层扫描法 品种数 850 50 29 项目数 956 52 29 新增项 709 24 12
高效液相色谱法
拖尾因子（T）
• 评价色谱峰的对称性 • 除另有规定外，T应在0.95～1.05之间
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第七章 中药制剂的含量测定技术
高效液相色谱法--外标法
供试品溶液和对照品溶液的制备
供试品溶液和对照品溶液均应制备2份 供试品溶液应用0.45µm的滤膜滤过
流动相的制备
试剂，一般用色谱纯；水应为新鲜配制的高纯水 凡规定PH值的流动相，应使用精密PH计进行调节，偏差 一般不超过±0.2PH单位 应通过0.45µm滤膜滤过 使用前须脱气 常用甲醇-水或乙腈-水为底剂的溶剂系统
6.191 10-3 25 10
25 10
m
25

0.2610
28.25 10-3


5.310 0.394（mg / 片） 20
5.310 1.796（mg / 片） 20
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25
大黄酚含量
0.2610
含量 大黄素含量 大黄酚含量 0.394 1.796 2.190 2.19（mg/片）
第七章 中药制剂的含量测定技术
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第七章 中药制剂的含量测定技术
【学习目标】
知识目标 掌握高效液相色谱法、薄层扫描法、高效液相色谱法、气 相色谱法测定中药制剂含量的原理和方法 熟悉紫外-可见分光光度计、薄层扫描仪、液相色谱仪、气 相色谱仪的工作原理、使用方法及操作注意事项 了解容量分析法和挥发油测定法的原理和方法 技能目标 熟练掌握高效液相色谱法、薄层扫描法、高效液相色谱法 、气相色谱法的测定中药制剂含量的基本操作和技能 学会正确查阅《中国药典》，学会正确选取仪器、试药， 学会配制试液，学会计量器具和检验仪器的操作，规范操 作，并学会正确计算、处理各种数据、判定检测结果
原子吸收分光光度法 滴定分析 氮测定法 化学分析法 挥发油测定法 重量法 鞣质测定法
4
17
2 27 11 4 3 1
பைடு நூலகம்
17
2 27 11 4 3 1
8
1 9 9 1 0 1
第七章 中药制剂的含量测定技术
高效液相色谱法
HPLC的特点和应用 “三高” “一快” “一宽” 高柱效——n=104片/米，柱效高（LC） 高灵敏度 高选择性 分析速度快 应用范围广泛（可分析80%有机化合物）
第七章 中药制剂的含量测定技术
高效液相色谱法
实例：三黄片（小片）中大黄的测定 供试品溶液的制备 取本品20片，除去包衣，精密
称定，研细（过三号筛），取约0.26g，精密称定，置 锥形瓶中，精密加乙醇25ml，称定重量，加热回流1小 时，放冷，用乙醇补足减失的重量，滤过，精密量取 续滤液10ml，置烧瓶中，蒸干，加30%乙醇-盐酸 （10:1）混合溶液15ml，置水浴中加热水解1小时，立 即冷却，用三氯甲烷强力振摇提取4次，每次15ml，合 并三氯甲烷液，蒸干，残渣用无水乙醇-乙酸乙酯 （2:1）的混合溶液溶解，转移至25ml量瓶中，并稀释 至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得
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第七章 中药制剂的含量测定技术
高效液相色谱法
实例：三黄片（小片）中大黄的测定
C 对（大黄素）
0.02509 25 1 100 106 10.04（ g/ml）
C 对（大黄酚）=
0.06286 25

1 100
106 25.14（ g/ml）
C 供(大黄素) C 对（大黄素）
• 溶解后能制成溶液的样品 • 不受样品挥发性和热稳定性的限制 • 分子量大、难气化、热稳定性差及高分子和离子型 样品均可检测 5 • 用途广泛，占有机物的80%
第七章 中药制剂的含量测定技术
高效液相色谱法
含量测定方法：外标法、内标法、 外标法结果准确，精密度高，但要求进样量必 须准确，仪器必须有良好的稳定性。 外标法的定量依据是待测组分色谱峰的峰面积 或峰高与其浓度或质量在一定范围内成线性关 系，按药品标准方法制备供试品溶液和对照品 溶液，分别将供试品溶液和对照品溶液注入液 相色谱仪，测定供试品和对照品中待测组分色 谱峰的峰面积或峰高，按正比关系计算供试品 溶液的浓度。
色谱柱的选择和保存
反相键合相色谱：十八烷基硅烷键合硅胶（ODS或C18）
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第七章 中药制剂的含量测定技术
高效液相色谱法
含量测定—外标法
C供 C对
A供 A对
C供：供试品溶液的浓度；
A供：供试品的峰面积或峰高；
A对：对照品的峰面积或峰高；
C对：对照品溶液的浓度。
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第七章 中药制剂的含量测定技术
C 供(大黄酚) C 对（大黄酚）
A供（大黄素） A对（大黄素） A供（大黄酚）
A对（大黄酚）
10.04 25.14
285721 463379 538079 478910
6.191（ g/ml） 28.25（ g/ml）
大黄素含量
C 供（大黄素） D V mS
第七章 中药制剂的含量测定技术
高效液相色谱法
实例：双黄连口服液中黄芩的测定
C对
0.02510 25 1 10 103 0.1004（mg/ml）
含量 C 供 D C 对 0.1004
A供 A对

D 50 1 11.64（mg/ml）
38001.8 16981.7