免疫透射比浊法 透射免疫比浊法检测的原理是
黄疸因素对免疫透射比浊法检测血清白蛋白的影响
黄疸因素对免疫透射比浊法检测血清白蛋白的影响目的探讨免疫透射比浊法中黄疸对检测血清白蛋白结果的影响。
方法将双份已知白蛋白浓度（低、高值）的血清中分别加入胆红素纯品，制成含不同胆红素浓度梯度的黄疸血清，再用免疫透射比浊法测定其白蛋白含量，比较分析黄疸因素对血清白蛋白检测的影响。
结果普通黄疸（胆红素浓度低于400 umol/L）对白蛋白检测结果无显著性差异（P>0.05）。
结论选用免疫透射比浊法检测血清白蛋白对黄疸的抗干扰能力较强。
标签：黄疸；免疫透射比浊法；白蛋白；抗干扰在临床工作中，人血清中很多因素对生化检测结果存在干扰，其中标本黄疸是临床生化检验中最常见的一种干扰和影响因素[1]。
随着现代医学的快速发展，检验结果的准确性在诊疗中起着重要的作用，多数诊疗的决定是根据实验室检验结果做出的。
近来有公司推出血清白蛋白免疫透射比浊法的商品化试剂，该试剂基于抗原抗体结合反应开发出来的，具有特异性强，稳定性好的优点，但其抗干扰能力目前尚无权威性的报告，国内临床普遍担心由于标本因素会给检测结果带来影响，以致现在这种新型免疫透射比浊法的商品化试剂还没有在临床上大规模使用。
因此，本实验单就黄疸因素对免疫透射比浊法检测血清白蛋白的影响进行探讨。
现报道如下。
1 仪器与方法1.1 仪器与试剂1.1.1 仪器日立7180（日本）生化分析仪。
1.1.2 试剂及校准品采用芬兰Orion Diagnostica公司产品，批号为67748。
1.1.3 质控品低值、高值采用北京利德曼公司生产的质控液（低值208091G、高值205311E），中值采用北京豪迈公司生产的质控液（6872F）。
1.2 黄疸的血清标本的制备取含低、高浓度白蛋白双份新鲜血清，白蛋白含量分别为35.50 g/L（低值白蛋白组）及51.08 g/L（高值白蛋白组），将胆红素纯品与上述双份新鲜血清制成含不同胆红素浓度梯度的黄疸血清，黄疸浓度依次为34.5 μmol/L，99.0 μmol/L，189.0 μmol/L，378 μmol/L，756 μmol/L。
免疫比浊法检测免疫球蛋白
浊度产生与测量原理
浊度产生
浊度测量
当抗原与抗体发生特异性结合时，形 成的抗原-抗体复合物会在反应体系 中产生浊度，浊度的高低与复合物的 数量成正比。
通过测量反应体系的浊度变化，可以 间接推断出抗原或抗体的含量。常用 的浊度测量方法包括透射比浊法和散 射比浊法。其中，透射比浊法是通过 测量光线通过反应体系后的透射光强 度来计算浊度；散射比浊法则是通过 测量光线在反应体系中散射的光强度 来计算浊度。
作用机制
不同类型的免疫球蛋白在机体免疫应答中发挥不同作用。例如，IgG是血清中主要的免疫球蛋白，参与体液免疫 ；IgA主要分布于粘膜表面，参与粘膜免疫；IgM是分子量最大的免疫球蛋白，是早期体液免疫应答中产生的主 要抗体；IgD的生物学功能尚不完全清楚，可能与B细胞活化有关；IgE则与过敏反应相关。
疫苗接种效果评估
接种疫苗后，体内会产生相应的免疫球蛋白，通过检测可以评估 疫苗接种的效果。
健康状况评估
免疫球蛋白水平可以反映机体的免疫状态，通过检测可以评估个 体的健康状况。
个性化健康管理
根据免疫球蛋白的检测结果，可以为个体提供个性化的健康管理 建议，如饮食、运动等方面的调整。
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Chapter
在疾病诊断中的应用
01
02
03
感染性疾病
通过检测免疫球蛋白水平 ，可以辅助诊断各种感染 性疾病，如病毒、细菌和 寄生虫感染。
自身免疫性疾病
免疫球蛋白的异常表达与 多种自身免疫性疾病相关 ，如类风湿性关节炎、系 统性红斑狼疮等。
肿瘤
某些肿瘤会导致免疫球蛋 白水平异常，通过检测可 以辅助肿瘤的诊断和预后 评估。
试剂选择与配制
选择高质量的免疫比浊法检测试 剂盒，确保试剂的稳定性和准确
免疫检验考试辅导：免疫透射比浊分析简介
透射比浊法的基本原理是测定一定体积的溶液通过的光线量，当光线通过时，由于溶液中存在的抗原抗体复合物粒子对光线的反射和吸收，引起透射光的减少，测定的光通量和抗原抗体复合物的量成反比。
（一）原理
抗原抗体在一定缓冲液中形成免疫复合物（IC），当光线透过反应溶液时，由于溶液内复合物粒子对光线的反射和吸收，引起透射光减少，免疫复合物量越多，透射光越少，即光线吸收越多，可用吸光度表示。
吸光度和复合物的量成正比，当抗体量固定时，与待检抗原量成正比。
用抗原标准品建立标准曲线，可测出待检抗原含量。
附：免疫胶乳比浊法
原理：选择一种大小适中，均匀一致的胶乳颗粒，吸附抗体后，当遇到相应抗原时，则发生凝集，单个胶乳颗粒在入射光波长之内，光线可透过，当两个胶乳凝集时，则使透过光减少。
这种减少的程度与胶乳凝集成正比，与抗原量成正比。
该法敏感度高，试剂稳定，因反应液中无PEC沉淀剂的影响，个体IC对结果影响也小，所以结果稳定、可靠，特异性好；不需特殊仪器设备，一般分光光度计、自动化生化分析仪均可使用。
（二）实验要求
1.溶液中存在的抗原抗体复合物分子应足够大，分子太小则阻挡不了光线的通过。
2.溶液中抗原抗体复合物的数量要足够多，如果数量太少，溶液浊度变化不大，对光通量的影响不大。
3.透射比浊是依据溶液中颗粒形成或增加而使透射光减弱的原理来定量检测抗原，检测仍需抗原抗体反应的温育时问，检测时间较长。
4.检测用抗体一般应选择高亲和力的抗体，在检测中要保证抗体过量。
应制备标准曲线。
临床医学检验：临床检验仪器真题
临床医学检验：临床检验仪器真题1、问答题常用的离心方法分几类？正确答案：常用的离心方法大致可分为平衡离心法、等密度离心法、经典式沉降平衡离心法等三类。
2、问答题简述蛋白质测序仪的主要应用。
正确答案：蛋白质测序仪（江南博哥）获得的蛋白质序列信息主要应用在以下三个方面。
（1）新蛋白质的鉴定：在凝胶电泳中出现的未知条带可以利用蛋白质测序仪来测定其序列，为探索蛋白质的功能提供线索。
（2）分子克隆探针的设计：是蛋白质序列信息的基本用途之一。
用蛋白质序列信息设计PCR引物和寡核甘酸探针。
可以利用这些探针进行cDNA文库或基因组文库的筛选。
（3）抗原的人工多肽合成：由合成多肽免疫产生的抗体常用来证实和纯化新发现的蛋白质。
此外，合成的多肽类似物能够揭示蛋白质重要结构特征和提示蛋白质的功能特性。
3、问答题第三代自动血培养仪有哪些性能特点？正确答案：（1）培养基营养丰富；（2）以连续、恒温、振荡方式培养，细菌易于生长；（3）培养瓶多采用不易碎材料制成，提高了使用的安全性；（4）采用封闭式非侵入性的瓶外监测方式，避免标本交叉感染，且无放射性污染；（5）自动连续监测，缩短了检测时间，阳性标本检测可快速、准确；（6）结果报告及时，85%以上的阳性标本能在48小时内被检出；（7）培养瓶多采用双条形码技术，只需用电脑上的条码阅读器扫描报告单上的条码，就可直接查询到病人的结果及生长曲线；（8）培养瓶可随时放入培养系统，并进行追踪检测；（9）数据处理功能较强，数据管理系统随时监测感应器的读数，依据数据的变化来判定标本的阳性或阴性，并可进行流行病学的统计分析；（10）设有内部质控系统，可保证仪器的正常运转；（11）可进行血液及所有无菌体液的细菌培养检测。
4、单选库尔特原理中血细胞的电阻与电解质溶液电阻的关系是OoA.相等B.大于C.小于D.大于或等于E.小于或等于正确答案：B5、问答题电泳技术根据分离原理如何分类？正确答案：根据分离原理可分为移界电泳、区带电泳、等速电泳、等电聚焦、免疫电泳等。
免疫比浊法和免疫投射比浊法(修改版)
免疫比浊法和免疫投射比浊法1.定义：（1）免疫比浊法：在一定量的抗体中分别加入递增量的抗原，经一定时间后形成抗原抗体复合物，用浊度计测量反应液体的浊度，并由此推算样品中的抗原含量。
（2）免疫投射比浊法：当光线通过一个浑浊介质溶液时，由于溶液中存在混浊颗粒，光线被吸收一部分，吸收的多少与混浊颗粒的量成正比，这种测定光吸收量的方法称为透射比浊法。
一般采用抗体对抗原定量的透射比浊法，称为免疫透射比浊法。
2.原理（1）免疫比浊法是抗原抗体结合动态测定方法。
其基本原理是：当抗原与抗体在特殊稀释系统中反应而且比例合适(一般规定抗体过量)时，形成的可溶性免疫复合物在稀释系统中的促聚剂（聚乙二醇等）的作用下，自液相析出，形成微粒，使反应液出现浊度。
当抗体浓度固定时，形成的免疫复合物的量随着检样中抗原量的增加而增加，反应液的浊度也随之增加。
通过测定反应液的浊度与一系列标准品对照，即可计算出检样中抗原的含量。
（2）免疫透射比浊法是抗原抗体结合后，形成免疫复合物，在一定时间内复合物聚合出现浊度。
当光线通过溶液时，可被免疫复合物吸收。
免疫复合物量越多，光线吸收越多。
光线被吸收的量在一定范围内与免疫复合物的量成正比。
利用比浊计测定光密度值，复合物的含量与光密度值成正比，同样当抗体量一定时，光密度值也与抗原含量成正比。
本法较单向琼脂扩散试验和火箭电泳等一般免疫化学定量方法敏感、快速简便，但要求免疫复合物的数量和分子量达到一定高度，否则就难以测出。
3.关系4．免疫比浊法适用的仪器紫外可见分光光度计全自动生化仪全自动生化仪常见的检测方法终点法连续检测法比浊法均相酶免疫分析。
免疫比浊法名词解释
免疫比浊法名词解释
嘿，朋友们！今天咱来聊聊免疫比浊法。
这免疫比浊法啊，就好比是一场“战斗”！
想象一下，身体里有好多小“敌人”，也就是各种抗原啦。
而我们要怎么发现这些“敌人”呢？免疫比浊法就闪亮登场啦！它就像是一个超级厉害的“侦探”，能把这些抗原给揪出来。
它的原理呢，其实也不难理解。
就是让抗原和专门对付它的抗体相遇，然后它们俩一结合，就会形成一些复合物。
这些复合物可不是普通的东西哦，它们会让溶液变得浑浊起来。
就好像原本清澈的水里突然多了很多杂质，变得不那么透明了。
然后呢，我们就可以通过一些仪器，去测量这种浑浊度。
浑浊度越高，说明抗原越多呀！这是不是很神奇？
你说这免疫比浊法是不是很厉害？它能帮我们检测好多东西呢！比如说一些疾病的标志物，这样医生就能更快更准确地判断我们的身体状况啦。
而且啊，免疫比浊法还挺“聪明”的呢！它可以分为透射比浊法和散射比浊法。
这就像是有两个不同“性格”的侦探，各有各的本事。
透射比浊法呢，就像是一个老老实实一步一个脚印的侦探，它通过直接测量透过溶液的光的强度来判断。
而散射比浊法呢，就像是一个更机灵一点的侦探，它通过测量散射光的强度来发现线索。
你看，这免疫比浊法多有意思啊！它在医学领域可是发挥了大作用呢。
没有它，我们怎么能那么快那么准确地知道自己身体里的情况呢？
免疫比浊法真的是医学检测的好帮手啊！它就像是一道光，照亮了我们了解身体内部世界的道路。
它让我们对疾病有了更及时的发现和应对，难道不是吗？所以啊，可别小瞧了这免疫比浊法，它可是守护我们健康的重要一环呢！。
散射免疫比浊法
目
录
第一节 免疫比浊技术原理 第二节 自动化免疫比浊分析
第三节 小结
第一节
免疫比浊技术原理
免疫比浊技术分类：
透射免疫比浊法
（turbidimetric immunoassay）
散射免疫比浊法
（nephelometry immunoassay）
终点散射比浊法 速率散射比浊法
一、透射免疫比浊法
8 13 25 60 150 230 300 360 415 450 480 500 — 5 12 35 90 80 70 60 55 45 30 20
（二）技术要求
速率散射比浊法峰值出现的时间与抗体浓度及 纯度直接相关，需选用抗体纯度及亲和力交高的试 剂。此外，要保证待测样本血清的性状符合要求， 如严重脂血等即为不合格样本。
（三）方法学评也小，因此结果稳定、可靠， 特异性好，精确度高，且不需要特殊的仪器 设备，一般分光光度计、自动化生化分析仪 或散射比浊仪均可使用。
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第二节 自动化免疫比浊分析
一、主流免疫比浊设备概况
（一）BN特种蛋白分析测定系统 1.测定原理 该系统的测定方法是透射免疫比浊法的一种
（三）方法学评价
该法具有快速、敏感度及精密度高的特点， 其最大优点在于快速，检测不必等到抗原抗体 达到平衡，大大节省反应时间，每小时可检测 标本数十份；敏感度高，最小检出量达微克/ 升水平。
四、免疫胶乳比浊法
（一）基本原理 将抗体吸附在大小适中、均匀一致的胶乳颗粒 上，制成致敏的胶乳颗粒，当遇到相应抗原时， 发生交联反应，形成抗原抗体复合物，胶乳颗
抗原抗体反应曲线
二、散射免疫比浊法
（一）基本原理
散射比浊法是指一定波长的光沿水平轴照射，
临床检验仪器第十一章临床免疫检验仪器习题
第十一章临床免疫检验仪器一、名词解释1.酶免疫分析技术：利用酶的高效催化和放大作用与特异性免疫反应结合而建立的一种标记免疫技术。
2.均相酶免疫分析法：检测过程中抗原抗体反应后，无需分离结合和游离的酶标记物，直接根据反应前后酶活性的改变进行待检物质测定的分析方法。
3.非均相酶免疫分析法：在酶免疫测定中，抗原抗体反应达到平衡后，需分离游离的和与抗原(或抗体)结合形成复合物的酶标记物，然后对经酶催化的底物显色程度进行测定，再推算出样品中待测抗原(或抗体)含量的分析方法。
4.发光免疫分析技术：利用化学发光现象，根据物质发光的不同特征，即辐射光波长、发光的光子数，与产生辐射的物质分子的结构常数、构型、数量等密切相关，通过受激分子发射的光谱、发光衰减常数、发光方向等来判断分子的属性及发光强度进而判断物质的量的免疫分析技术。
5.免疫浊度检测：将液相内的沉淀试验与现代光学仪器和自动分析技术相结合的一项分析技术。
6.放射免疫分析技术：以放射性核素为标记物的标记免疫分析技术。
7.非均相荧光免疫测定法：抗原抗体反应后，先把Ab*Ag 与Ab*分离，然后测定Ab*Ag 或A b*中的标记物的量，从而推算出标本中的A g 量的方法。
8.均相荧光免疫测定法：抗原抗体反应后，Ab*Ag 中的标记物失去荧光特性，不需进行A b*Ag 与A b*的分离直接测定游离的A b*量，从而推算出标本中的A g 量的方法。
9.闪烁体：是将核辐射能激发分子转化成可探测闪光的荧光物质。
常用的有有机闪烁体、无机闪烁体和特殊闪烁体等。
10.时间分辨荧光免疫分析：时间分辨荧光免疫测定是用镧系稀土元素及其螯合物(如 Eu3+螯合物) 作为示踪物标记抗原、抗体、核酸探针等物质，检测标本中的相应抗原或抗体的荧光免疫测定技术。
11.化学发光免疫技术：在检测化学反应中，某些化学基团被氧化后形成激发态，并在返回基态的同时发射一定波长的光子。
仪器利用这种化学基团标记在免疫分析的抗原或抗体上所建立起来的免疫分析为化学发光免疫分析。
免疫比浊检验技术原理与进展
新型免疫比浊法研究动态
纳米颗粒增强免疫比浊法
01
利用纳米颗粒的高比表面积和光学性质，提高抗原抗体复合物
的浊度变化，从而提高检测灵敏度。
均相免疫比浊法
02
在反应体系中直接加入抗原抗体复合物，通过浊度变化检测待
测物，无需分离步骤，简化实验操作。
多重免疫比浊法
03
同时检测多个目标物，提高检测通量和效率，满足临床多样化
需求。
存在问题与挑战分析
抗原抗体复合物稳定性
复合物在反应体系中的稳定性直接影响浊度变化的准确性和可重复性，需要优化复合物制备和保 存条件。
非特异性干扰
血清等样本中的非特异性物质可能干扰免疫比浊反应，导致结果误差，需要采取相应措施降低干 扰。
自动化与标准化
当前免疫比浊法操作仍较为繁琐，需要进一步提高自动化程度，同时推动标准化进程，以确保结 果的准确性和可比性。
肿瘤标志物检测中的应用
01
肝癌
通过检测甲胎蛋白（AFP）等肿 瘤标志物，可辅助诊断肝癌及判 断其预后。
卵巢癌
02
03
前列腺癌
免疫比浊法可检测癌抗原125 （CA125），用于卵巢癌的诊断 和病情监测。
通过检测前列腺特异性抗原 （PSA），有助于前列腺癌的早 期发现和诊断。
05 免疫比浊法研究进展及挑 战
探讨了免疫比浊检验技术在临床实验室中的应用，如特定蛋白的 测定、药物监测等，并强调了质量控制的重要性和实施方法。
对未来发展趋势的展望
自动化与智能化
多项目联合检测
随着科技的进步，未来免疫比浊检验技术 将更加自动化和智能化，提高检测效率和 准确性。
开发能够同时检测多个项目的免疫比浊试 剂盒，以满足临床实验室对于高通量、高 效率的检测需求。
免疫透射比浊法
免疫透射比浊法一、原理当光线通过一个浑浊介质溶液时，由于溶液中存在混浊颗粒，光线被吸收一部分，吸收的多少与混浊颗粒的量成正比，这种测定光吸收量的方法称为透射比浊法。
这一方法早于1959年Schultre和Schuick等报道应用于血浆蛋白与其抗体结合后形成复合物，导致浊度的改变，再进行透射比浊测定，一般采用抗体对抗原定量的透射比浊法，称为免疫透射比浊法。
其原理是，利用抗原和抗体的特异性结合形成复合物，通过测定复合物形成量的多少对抗原或抗体进行定量的方法。
在介质溶液中，抗原与特异性抗体在一定条件下才能形成复合物，一定的条件包括：①对抗体的要求，作为体液或组织中蛋白质种类很多，若要快速特异检测，要求有单价特异抗体才能与抗原形成复合物。
某一种蛋白质，有其特异抗体才能与该抗原结合，形成免疫复合物进行定量，若抗体不纯混杂有另一种或两种少量的抗体，这种免疫复合物就不是单一复合物而是大杂烩，结果偏高；②抗原抗体比例适当，因免疫复合物形成有三个阶段，第一阶段是复合物形成抗原抗体复合物；第二阶段是初步形成抗原抗体复合物，此阶段是复合物交联成大的网格状结构；第三阶段是复合物聚合产生絮状沉淀。
只有在抗原与抗体等价时即无过剩抗体，此时，复合物的结合与解离处于平衡状态，其混浊程度达高峰。
在抗体过量时，随抗原量的增加而复合物形成也增加，其测定只能在反应曲线的左侧进行（见图18-4）；③一般要求溶液中有非离子性亲水多聚体促进免疫复合物的形成，如聚二乙醇6000等。
溶液pH为6.5～8.0之间为宜。
载脂蛋白有形成两性螺旋片（amphipathic helix）的特性，对脂质（特别是磷脂）有高度亲和力，与脂质结合后有时会掩盖抗原位点或构象改变，可以部分或完全丧失对抗血清的特异反应。
为此，载脂蛋白检测过程中有必要先暴露抗原位点，所用试剂有表面活性剂，尿素，盐酸胍和吐温等解离蛋白剂，或用四甲基脲脱脂或有机溶剂脱脂等暴露抗原决定簇等方法，血清脂蛋白颗粒中的载脂蛋白，能在短时间内形成抗原抗体复合物进行定量；④抗原不能过量，因为抗原过量，抗原抗体复合物形成不但不增加，反而会减少，光散射或光吸收减少，检测结果反而偏低。
吉林化工学院生物工程专业2018-2019学年生物化学复习题库
吉林化工学院生物工程专业2018-2019学年生物化学复习题库1. 下列哪项不属于临床生化实验室高新技术的发展（） [单选题] *A、高效液相色谱技术B、全自动电泳分析仪C、动力学法连续监测酶活性D、定时法测定酶活性(正确答案)E、国际化标准的商品试剂盒2. 临床生物化学检验对临床疾病诊断和治疗具有许多价值，但下列哪项不符合（） [单选题] *A、疾病诊断和早期诊断B、健康普查和咨询C、判断疾病的严重程度和预后D、治疗效果监测E、探讨药物作用的机制(正确答案)3. 1931年谁出版了第一本《临床化学》教科书（） [单选题] *A、 LichtuitzB、 Otto FolinC、 Van Slyke(正确答案)D、康格非E、吴宪4. 临床生物化学检验对临床疾病诊断和治疗具有许多价值，但下列哪项不符合。
（） [单选题] *A、疾病诊断和早期诊断B、健康普查和咨询C、判断疾病的严重程度和预后D、治疗效果监测E、探讨药物作用的机制(正确答案)5. 检验项目的临床应用包括（） [单选题] *A、诊断疾病B、筛检无症状疾病C、判断疾病的严重性D、评价患者对治疗的实际反应E、以上都是(正确答案)6. 标本最佳采集时间选择不正确的是（） [单选题] *A、症状稳定期(正确答案)B、具有代表性的时间C、检出阳性率最高的时间D、诊断最有价值的时间E、以清晨空腹为佳7. “危急值”是指（） [单选题] *A、危重患者的检测结果B、指某些检测结果出现了可能危及患者生命的数值(正确答案)C、急诊检验申请单中所需的检测数据D、超出医学决定水平的检测数据E、高于或低于参考范围上限的检测结果8. 为防止检验报告单填写的结果发生过失性错误，应采取下列哪种措施防止（）[单选题] *A、将标本复查B、观察当天的室内质控记录C、建立核查制度(正确答案)D、观察是否为正常结果E、以上皆不是9. 检测值达到临床上必须采取措施的检测水平称为（） [单选题] *A、参考区间上限B、参考区间下限C、正常参考均值D、危机值E、医学决定水平(正确答案)10. “咨询服务”不包括（） [单选题] *A、新检验项目的推荐B、检验项目合理选择C、检验结果的解释D、治疗方案的确定(正确答案)E、提出采集标本的要求11. 实验室工作进一步走向自动化、智能化和系统化，下列哪项不属于生化实验室工作自动化（） [单选题] *A、样品前处理自动化B、样品后处理自动化C、模组式自动化D、全实验室自动化E、血细胞计数自动化(正确答案)12. 哪一种方法不能防止血液标本的溶血? （） [单选题] *A、采血器盒容器必须干燥、洁净B、不用或短时间使用止血带C、采血后取下针头再将血液沿容器壁徐徐注入容器内D、用抗凝管做容器时，应用力振荡，使血液与抗凝试剂充分混匀(正确答案)E、尽量使用一次性采血器13. 分析前过程不包括（） [单选题] *A、检测项目的选择B、检验申请C、质控品的正确测定(正确答案)D、标本的采集E、标本的运送和保存14. 分析过程的质量保证不包括（） [单选题] *A、校准和校准验证B、室内质量控制和结果分析C、项目操作规程的建立D、质控标本的正确测定E、审核报告(正确答案)15. 分析后过程不包括（） [单选题] *A、室内质量控制和结果分析(正确答案)B、临床医生反馈C、病人投诉调查D、运送实验报告E、标本保存16. 急诊生物化学检验一般要求从接受标本开始至检验结果发出最长不得超过（）[单选题] *A、 4hB、 2h(正确答案)C、 30minD、 6hE、 3h电化学技术17. 下列各项中不是离子选择电极基本组成的有（） [单选题] *A、电极管B、内参比电极C、外参比电极(正确答案)D、内参比溶液E、敏感膜18. 离子选择电极膜电位产生的机制是（） [单选题] *A、离子吸附作用B、离子交换反应(正确答案)C、电子交换反应D、电子置换反应E、离子渗透作用19. 临床上大量使用的电解质分析仪，测量样本溶液中离子浓度的电极是（） [单选题] *A、离子选择电极(正确答案)B、金属电极C、氧化还原电极D、离子交换电极E、气敏电极20. 能够指示血液样本中pH值大小的电极是（） [单选题] *A、铂电极B、玻璃电极(正确答案)C、银-氯化银电极D、甘汞电极E、饱和甘汞电极21. pH玻璃电极对样本溶液pH的敏感程度取决于（） [单选题] *A、电极的内充液B、电极的内参比电极C、电极外部溶液D、电极的玻璃膜(正确答案)E、电极外部溶液的pH值22. 下列何者为含有层析法、吸光度、荧光等的仪器 (B) [单选题] *A、气相色谱仪B、高效液相色谱仪(正确答案)C、电泳仪D、超速离心机E、全自动生化分析仪23. 蛋白质电泳中为消除或减少电荷对蛋白质移动的影响常加入（） [单选题] *A、丽春红SB、考马斯亮篮R250C、溴化乙锭D、 SDS(正确答案)E、结晶紫24. 下列有关电泳时溶液的离子强度(I)的描述中，错误的是 (B) [单选题] *A、 I对带电粒子的泳动有影响(正确答案)B、 I越高、电泳速度越快C、 I太低，缓冲液的电流下降D、 I太低，缓冲容量可能不够E、 I太高，样品电流小，电泳速度较慢25. 一般来说，颗粒带净电荷量、直径和泳动速度的关系是（） [单选题] *A、颗粒带净电荷量越大或其直径越小，在电场中的泳动速度就越快(正确答案)B、颗粒带净电荷量越小或其直径越小，在电场中的泳动速度就越快C、颗粒带净电荷量越大或其直径越大，在电场中的泳动速度就越快D、颗粒带净电荷量越大或其直径越小，在电场中的泳动速度就越慢E、颗粒带净电荷量越小或其直径越大，在电场中的泳动速度就越快26. 基于元素所产生的原子蒸汽中待测元素的基态原子对所发射的特征谱线的吸收作用进行定量分析的技术是（） [单选题] *A、吸收光谱分析法B、散射光谱分析法C、原子吸收光度法(正确答案)D、散射光谱分析法E、荧光定量分析法27. 自动生化分析仪后分光方式的光路系统是（） [单选题] *A、光源®分光元件®单色光®反应液®检测器B、光源®反应液®分光元件®单色光®检测器(正确答案)C、分光元件®单色光®反应液®光源®检测器D、分光元件®单色光®光源®反应液®检测器E、反应液®分光元件®单色光®光源®检测器28. 在时间—吸光度曲线中，线性期是指该期中（） [单选题] *A、各测光点之间的吸光度值逐渐增大B、各测光点之间的吸光度差值逐渐减小C、各测光点之间的吸光度差值相等(正确答案)D、各测光点吸光度保持不变E、酶反应的一级反应期29. 自动生化分析仪的分析参数可分为基本分析参数和特殊分析参数，下列哪项属于特殊分析参数（） [单选题] *A、分析方法B、主波长、次波长C、样品量、R1量、R2量D、读数时间E、弹性速率(正确答案)30. 关于连续检测法方法设计，正确的是（） [单选题] *A、酶促反应中可以加入终止试剂B、一般不需要做样品空白(正确答案)C、只能使用人工合成色素原做底物D、反应体系可根据需要随时调整E、一般不用分光光度法31. 微量元素的通用检测方法有（） [单选题] *A、紫外可见光分光光度法B、酶活性分析法C、离子选择电极法D、高压液相色谱法E、原子吸收分光光度法(正确答案)32. 目前应用最广的自动生化分析仪是哪一种（） [单选题] *A、连续流动式B、分立式(正确答案)C、离心式D、干化学式E、全实验室自动化33. 分立式自动生化分析仪的特点是（） [单选题] *A、样品杯可放在样品盘或样品架上B、试剂室通常具有冷藏功能C、各检测项目有各自独立的反应杯，又兼做比色杯(正确答案)D、取样针和加试剂针具有防交叉污染的措施E、温浴方式有水浴、空气浴，或恒温液循环间接加热法34. 基于反射光度法的干化学试剂片的组成膜中不包括以下哪一层（） [单选题] *A、渗透扩散层B、反射层C、参比层(正确答案)D、试剂层E、支持层35. 在时间-吸光度曲线中，线性期是指该期中（） [单选题] *A、各相邻测光点之间的吸光度差值逐渐加大B、各相邻测光点之间的吸光度差值逐渐减小C、各测光点之间的吸光度差值相等(正确答案)D、各测光点吸光度保持不变E、以上都不是36. 自动生化分析仪的分析参数分为基本分析参数和特殊分析参数，没有后一类参数仪器也能正常测定标本并得出结果，请问下列哪项属于特殊参数。
1.2免疫浊度法
1.2免疫浊度法比浊法中文名称：比浊法英文名称：turbidimetry定义：悬浮颗粒在液体中造成透射光的减弱，减弱的程度与悬浮颗粒的量相关，据此可定量测定物质在溶液中呈悬浮状态时浓度的方法。
定义又称浊度测定法。
为测量透过悬浮质点介质的光强度来确定悬浮物质浓度的方法，这是一种光散射测量技术。
运用本法主要是用于测定能形成悬浮体的沉淀物质,例如微量磷、硫、氯和钙等的测定,生物碱沉淀试剂形成的混浊也可用此法测定。
这是根据悬浮体的透射光或散射光的强度以测定物质组分含量的一种分析方法。
当光线通过一混浊溶液时,因悬浮体选择地吸收了一部分光能,并且悬浮体向各个方面散射了另一部分光线,减弱了透过光线的强度。
在水质监测和管理过程中，比浊法常用于测量饮用水、工业用水、废水的透明度；也用于测量空气及其他各种气体中悬浮固体的含量，是空气和水污染研究的一种工具。
在酿造工业中，比浊法常用于各种饮料澄清过程的控制和过滤过程的监控。
在分析化学上，可通过生成悬浮沉淀的反应产物来测定某些元素的浓度,例如,通过生成硫酸钡悬浮物来测定Ba2+ 或SO2-,以及在煤、焦炭、油、橡胶中的总硫量；通过生成硫化银和氯化银悬浮物来测定Ag+或Cl-；在容量分析中,浊度测量也可用于确定滴定终点，如用钙盐滴定氟化物、用银盐滴定溴化物、用钡盐滴定硫酸盐等。
在生物化学中，比浊法广泛用于测定液体食品中细菌的生长量及氨基酸、维生素和抗生素等。
根据悬浮体系中粒子的沉降速度与其半径的平方成正比的原理，比浊法可用于不同大小粒子沉降速度的监测和粒子大小的分类。
分析过程当光束通过一含有悬浮质点的介质时，由于悬浮质点对光的散射作用和选择性的吸收，使透射光的强度减弱。
在比浊法中，透光度和悬浮物质浓度的关系类似于朗伯－比尔定律（见紫外-可见分光光度法）的数学式：数学式式中s为浊光度（或浊率）,表示由于悬浮物的散射作用而引起的光强度衰减;I0和I分别为入射光强度（通过纯溶剂）和透射光强度(通过混浊样品)；b为光程长度；c为悬浮质点的浓度；K为常数，有时又叫浊度系数,其值与粒子的大小、形状、入射光的波长、悬浮物和介质的折射率有关。
免疫比浊分析
（三）技术要求
• 待测的抗原抗体复合物分子量足够大。
• 抗原抗体复合物数量足够多。 • 具有充分的反应时间，只能测定抗原抗 体反应的第二阶段。 • 高亲和力的抗体，并保证抗体过量。
（四）方法评价
优点: 灵敏度高，稳定性好，操作简便，结果准确 不足: ①抗体用量较大； ②溶液中存在的抗原－抗体复合物分子应足够大 ③透射比浊测定在抗原－抗体反应的第二阶段，检 测需在抗原抗体反应达到平衡后进行，耗时较长。
1．抗原抗体比例 抗原抗体比例要适当。 诊断试剂应尽可能 溶液中免
颗粒上的抗体与抗原特异结合，引起胶乳颗粒凝
聚 ，使透射光和散射光即出现显著变化。
三、免疫胶乳比浊法
（一）原理：
第二节 自动化免疫比浊分析
一、主流免疫比浊设备概况
（一）BN特种蛋白分析测定系统 1.测定原理 该系统的测定方法是透射免疫比浊法的 一种改良。以发光二极管作为光源，检测前
向角13～24度的散射光，然后利用硅化光电
二、免疫散射比浊法
(一) 原理 粒子对光线的散射作用是溶液中的微粒子受到 光线照射后，微粒子对光线产生反射和折射而形成 散射光。 悬浮微粒对光散射形成的散射光强度与微粒的 大小、数量、入射光的波长和强度、测量角度等因 素密切相关。
不同大小的微粒形成的散射光分布不同。
当微粒直径小于入射光的波长的十分之一时，
(二) 技术要求 应选择适当的光源强度、反应时间、测量角 度及光源的波长。 另外，要注意保证抗原浓度合适。 此外，还要选择适宜的离子强度、pH值等。
(三)速率散射比浊法（rate nephelometry） 速率散射比浊法是抗原抗体结合反应的一种动 态测定方法。
所谓速率是指抗原抗体反应在单位时间内形成免
透射免疫比浊的原理
透射免疫比浊的原理
透射免疫比浊是一种常用的免疫学实验技术，用于定量测定溶液中含有的抗原或抗体的浓度。
该技术基于光的散射原理。
当溶液中存在大分子抗原或抗体时，它们会与光发生相互作用，散射光的方向和强度发生改变。
透射免疫比浊实验中，首先制备一系列已知浓度的抗原或抗体溶液，称为标准曲线。
然后，将未知浓度的溶液加入比浊槽中，并在透射比浊仪中测量其散射光的强度。
根据已知浓度的标准曲线，可以得出未知浓度溶液的光强值。
通过比较标准曲线和未知浓度溶液的光强值可以计算出未知溶液的抗原或抗体浓度。
透射免疫比浊的原理可以简单概括为：根据抗原或抗体溶液对光的散射特性进行测量，从而定量分析溶液中的抗原或抗体浓度。
血清载脂蛋白A1免疫透射比浊法测定法
血清载脂蛋白A1免疫透射比浊法测定法1. 实验原理免疫透射比浊终点测定法。
使用抗Apo A1抗体和样品中的Apo A1进行抗原-抗体反应。
反应完成后，用透射比浊法检测吸光度的变化反映Apo A1浓度。
2. 标本：2.1 病人准备：12小时禁食。
2.2 类型：血清、肝素或EDTA血浆。
3. 标本存放：稳定性：15～25℃保存可稳定5天；2～8℃保存可稳定2周；-20℃保存可稳定3个月；标本不可反复冻融。
4. 标本运输：常温条件下保存运输。
5. 标本拒收标准：标本细菌污染的标本。
6. 实验材料6.1 试剂申能APOA1测定试剂盒（货号：25171002101 试剂 1 5×25ml；试剂2 1×25ml）6.1.1 试剂组成试剂1（R1）：Tris缓冲液pH7.5 100mmol/L聚乙二醇（PEG）表面活性剂，稳定剂适量试剂2（R2）：Tris缓冲液pH7.5 100mmol/L羊抗人ApoA1抗体（含稳定剂）适量6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
6.1.3 试剂稳定性与贮存试剂保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂不可冰冻。
开盖后放于仪器的冰箱中可以稳定30天。
6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
6.1.5 注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防腐剂。
不可入口！避免接触皮肤及粘膜。
应采取必要的预防措施使用试剂6.2 校准品：建议使用DiaSys公司提供的TruCal Apo A1校准品对自动分析仪进行校准，校准稳定期：4周。
具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。
6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。
7. 仪器：贝克曼AU680生化分析仪8. 操作步骤8.1 项目基本参数：参见AU680生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2仪器操作步骤：参见AU680生化分析仪操作规程.SOP文件9. 检验结果的判断与分析10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
06第六章 免疫比浊分析
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第六章
免疫比浊分析
第二节 自动化免疫比浊分析
一、主流免疫比浊设备概况
（一）BN特种蛋白分析测定系统 1.测定原理 该系统的测定方法是透射免疫比浊法的一种
改良。以发光二极管作为光源，检测前向角
13～24度的散射光，然后利用硅化光电二极 管接收散射光信号，经过微电脑处理，与标 准曲线进行比较，最后转换成待检物质的浓 度。
复合物产 产生速率 生总量
8 13 25 60 150 230 300 360 415 450 480 500 — 5 12 35 90 80 70 60 55 45 30 20
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第六章
免疫比浊分析
（二）技术要求 速率散射比浊法峰值出现的时间与抗体浓 度及纯度直接相关，需选用抗体纯度及亲和力 交高的试剂。此外，要保证待测样本血清的性 状符合要求，如严重脂血等即为不合格样本。
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免疫比浊分析
在抗原或抗体量一定的条件下，可以利用比 浊仪在光源的光路方向上测定透射光强度与 入射光强度的比值或吸光度，来判断待测抗 原的量，这种方法称为透射比浊法 。
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免疫比浊分析
透射免疫比浊法光路图
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免疫比浊分析
（二）技术要求
• 待测的抗原抗体复合物分子量足够大。
影响检测结果，因此需要选择均匀一致的
胶乳颗粒。此外，试剂需要加保护剂以提
高其稳定性，所用器皿要洁净，避免杂质 微粒的干扰。
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免疫比浊分析
（三）方法学评价 该法敏感度高，试剂稳定，个体免疫复 合物对结果影响也小，因此结果稳定、可 靠，特异性好，精确度高，且不需要特殊
免疫透射比浊法 透射免疫比浊法检测的原理是
免疫透射比浊法一、原理当光线通过一个浑浊介质溶液时，由于溶液中存在混浊颗粒，光线被吸收一部分，吸收的多少与混浊颗粒的量成正比，这种测定光吸收量的方法称为透射比浊法。
这一方法早于1959 年Schultre 和Schuick 等报道应用于血浆蛋白与其抗体结合后形成复合物，导致浊度的改变，再进行透射比浊测定，一般采用抗体对抗原定量的透射比浊法，称为免疫透射比浊法。
其原理是，利用抗原和抗体的特异性结合形成复合物，通过测定复合物形成量的多少对抗原或抗体进行定量的方法。
在介质溶液中，抗原与特异性抗体在一定条件下才能形成复合物，一定的条件包括：①对抗体的要求，作为体液或组织中蛋白质种类很多，若要快速特异检测，要求有单价特异抗体才能与抗原形成复合物。
某一种蛋白质，有其特异抗体才能与该抗原结合，形成免疫复合物进行定量，若抗体不纯混杂有另一种或两种少量的抗体，这种免疫复合物就不是单一复合物而是大杂烩，结果偏高；②抗原抗体比例适当，因免疫复合物形成有三个阶段，第一阶段是复合物形成抗原抗体复合物；第二阶段是初步形成抗原抗体复合物，此阶段是复合物交联成大的网格状结构；第三阶段是复合物聚合产生絮状沉淀。
只有在抗原与抗体等价时即无过剩抗体，此时，复合物的结合与解离处于平衡状态，其混浊程度达高峰。
在抗体过量时，随抗原量的增加而复合物形成也增加，其测定只能在反应曲线的左侧进行（见图18-4 ）;3—般要求溶液中有非离子性亲水多聚体促进免疫复合物的形成，如聚二乙醇6000等。
溶液pH为6.5〜8.0之间为宜。
载脂蛋白有形成两性螺旋片（amphipathic helix ）的特性, 对脂质（特别是磷脂）有高度亲和力，与脂质结合后有时会掩盖抗原位点或构象改变，可以部分或完全丧失对抗血清的特异反应。
为此，载脂蛋白检测过程中有必要先暴露抗原位点，所用试剂有表面活性剂，尿素，盐酸胍和吐温等解离蛋白剂，或用四甲基脲脱脂或有机溶剂脱脂等暴露抗原决定簇等方法，血清脂蛋白颗粒中的载脂蛋白，能在短时间内形成抗原抗体复合物进行定量；④抗原不能过量，因为抗原过量，抗原抗体复合物形成不但不增加，反而会减少，光散射或光吸收减少，检测结果反而偏低。
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免疫透射比浊法一、原理当光线通过一个浑浊介质溶液时，由于溶液中存在混浊颗粒，光线被吸收一部分，吸收的多少与混浊颗粒的量成正比，这种测定光吸收量的方法称为透射比浊法。
这一方法早于1959 年Schultre 和Schuick 等报道应用于血浆蛋白与其抗体结合后形成复合物，导致浊度的改变，再进行透射比浊测定，一般采用抗体对抗原定量的透射比浊法，称为免疫透射比浊法。
其原理是，利用抗原和抗体的特异性结合形成复合物，通过测定复合物形成量的多少对抗原或抗体进行定量的方法。
在介质溶液中，抗原与特异性抗体在一定条件下才能形成复合物，一定的条件包括：①对抗体的要求，作为体液或组织中蛋白质种类很多，若要快速特异检测，要求有单价特异抗体才能与抗原形成复合物。
某一种蛋白质，有其特异抗体才能与该抗原结合，形成免疫复合物进行定量，若抗体不纯混杂有另一种或两种少量的抗体，这种免疫复合物就不是单一复合物而是大杂烩，结果偏高；②抗原抗体比例适当，因免疫复合物形成有三个阶段，第一阶段是复合物形成抗原抗体复合物；第二阶段是初步形成抗原抗体复合物，此阶段是复合物交联成大的网格状结构；第三阶段是复合物聚合产生絮状沉淀。
只有在抗原与抗体等价时即无过剩抗体，此时，复合物的结合与解离处于平衡状态，其混浊程度达高峰。
在抗体过量时，随抗原量的增加而复合物形成也增加，其测定只能在反应曲线的左侧进行（见图18-4 ）;3—般要求溶液中有非离子性亲水多聚体促进免疫复合物的形成，如聚二乙醇6000等。
溶液pH为6.5〜8.0之间为宜。
载脂蛋白有形成两性螺旋片（amphipathic helix ）的特性, 对脂质（特别是磷脂）有高度亲和力，与脂质结合后有时会掩盖抗原位点或构象改变，可以部分或完全丧失对抗血清的特异反应。
为此，载脂蛋白检测过程中有必要先暴露抗原位点，所用试剂有表面活性剂，尿素，盐酸胍和吐温等解离蛋白剂，或用四甲基脲脱脂或有机溶剂脱脂等暴露抗原决定簇等方法，血清脂蛋白颗粒中的载脂蛋白，能在短时间内形成抗原抗体复合物进行定量；④抗原不能过量，因为抗原过量，抗原抗体复合物形成不但不增加，反而会减少，光散射或光吸收减少，检测结果反而偏低。
图18-4抗原抗体反应曲线在免疫比浊过程中，由于抗原抗体结合的三过程，从而导致光密度与浓度之间不呈线性关系，一般是3次方程曲线关系。
若将抗原与抗体两个变量之间的变动特征恰当地反映岀来，需要经过3次方程拟合成近似直线化的曲线方程，再进行运算，免疫比浊中，采用终点法或速率法，用5个或7个不同梯度进行定标，经3次曲线方程求岀一条能反映真实情况的浓度与光密度的关系曲线方程，才能作为定量的工作曲线。
二、血清ApoA 1( B ioo )透射比浊测定法脂蛋白抗原在溶液中与相应特异抗体形成抗原抗体复合物的混浊颗粒，分散于溶液介质中，在一定波长下测定其混浊程度，进行ApoA 1( Bp。
)的定量测定。
(一)手工操作1 •原理血清ApoA 1( B ioo) +抗人ApoA 1( B ioo)—抗原抗体复合物—测定光密度2 •试剂(伊利康)(1 ) Apo缓冲液(R I),含4%PEG6000和表面活性剂(2)羊抗人ApoA I( B ioo)抗体液(R H):监用前取抗血清200g l，力口0.9%NaCI液700 g l,混匀,待用，置冰箱一周内有效。
（3）A poA 1（B100）参考血清（R 山）3．操作（1 ）按ApoA I抗血清液或ApoB 100抗血清100卩1,加相应的Apo缓冲液0.9ml的比例混合成单一试剂（Apo 抗体液）。
最好临用前配制当天用量。
（2 ）各试剂用量如下表ApoA I ApoB 100标准管测定管空白管标准管测定管空白管参考血清 5 gl5gl待测血清5gl5glApoA I抗体液 1.0ml 1.0ml 1.0mlApoB 100抗体液 1.0ml 1.0ml 1.0ml 混匀各管，37 C保温10min，波长340min，于半自动分析仪上先吸入空白管液，再吸入标准管，仪器根据光密度及参考值得出一换算系数，再吸入测定管，仪器内根据光密度及系数进行运算，打印结果。
（3）定标方法，根据免疫比浊法原理，应取多点（3〜9点），按y=a+bx+cx 2+dx3的3次方程回归曲线进行定标，制作参考工作曲线。
①校正工作曲线的绘制：配制抗血清稀释工作液：按R I试剂0.9ml，加R H试剂100卩啲比例（Apo抗体液）混匀，待用。
制备5点校正液：取R山（参考血清），用0.9%生理盐水倍比稀释成5个浓度，第5管为原参考血清浓度，其他4管分别为第5管的1/2、1/4、1/8、1/16 （或浓度为0即0.9%NaCl ）。
表18-20 标准曲线制备的各管（点）浓度管号123451 号管( 0)( g)52 号管(1/8)( g)53 号管( 1/4)( g)54 号管( 1/2 )( g)55 号管(1/1 )( g)5Apo 抗体液( ml) 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0混匀各管，置37 C水浴保温10min，按程序上机作工作曲线②标本测定：吸待测血清（测定管）5g，加上述稀释抗血清工作液1.0ml，于37 C水浴保温10min，上机读数，打印结果。
③如测定值超过工作曲线上限值，仪器会打印显示过高”此时，将待测标本稀释1倍再测。
④每批号的抗血清应作一次多点定标，即测定标本的抗血清应与定标的抗血清是同一批号抗血清。
(二)生化分析仪测定1 •原理脂蛋白抗原在溶液中与相应特异抗体形成抗原抗体复合物的混浊颗粒分散于溶液介质中，在一定波长下测定其混浊程度，进行ApoA 1( B ioo )的定量测定。
ApoA 1( B ioo) +抗人ApoA 1(B ioo)宀抗原抗体复合物宀测定吸光光密度2 •双试剂单(双)波长法图I8-5 ApoA I五点免疫定标曲线图(以CL-7200仪器为例)(4)上机(终点法或两点法)4比严抗Apo堪补雅340nrn(RD ?(RI ) 3 二‘詁!！CM)(1 ) 试剂(温州伊利康)R I: Apo缓冲液，含4% PEG6000和表面活性。
项目R n：R山：(2)ApoA I ApoB ioo 羊抗人ApoA ( B ioo)稀释抗血清Apo定值血清各试剂及标本用量如下表:血清Apo缓冲液(R I)300 〜350 gl300 〜350 glApoA I抗血清液(R n)80 〜I00 glApoB ioo抗血清液(R n)80- IOO gl(3) 定标：以5点Apo梯度浓度，采用免疫定标法按表I8-2I参数上机定标，如图I8-5所示。
(5)说明：①Apo测定的光密度从340〜700nm范围都可采用，多用340nm ;②国内已有的Apo试剂盒均无需处理；③血清标本也无需处理，均可直接检测；④本法适用于多种类型的全自动生化分析仪检测，自动扣除空白，快速准确；⑤效价不同的抗血清，其用量应作适当的调整。
(5)计算△ A=A2-A1,以厶A值采用免疫定标自动运算。
3. 单一试剂单波长法(1)试剂同双试剂法(2)标本及试剂用量：按ApoA I抗血清液或ApoB抗血清液(R II )100卩加相应的Apo缓冲液(R I )0.3m l的比例混合成单一试剂(Apo抗体液)。
最好临用前配制当天用量，此抗体液置2〜8C保存一周有效。
(3)定标：按五点梯度稀释定值血清(见表18-21 )，以终点法或两点法进行免疫定标。
(4)按以下步骤操作：Itl清2-曲1J/V(AI)340 nm曲光密芟；'A2"；Apo 比输300 - 350^15-10S5^6min(5)以厶A=A2-A1值按免疫定标自动运算。
(6)说明：①该法一般用半自动生化分析仪；②通过设延迟时间以扣除空白；③R I、R I试剂以临用时混合为好，未用完的混合试剂应置于2〜8 'C冰箱保存，只允许使用一周；④血清标本无需再处理。
4. ApoA I、A I、B、C I、C山和E的全自动生化分析仪检测的有关数据。
(1 )上机参数(以CL-7200型为例)如表18-21所示。
表18-21自动生化分析仪检测ApoA I Apo有关参数A IBC I C山E反应类型终点法样品量 3 gl 3 gl 3 gl8 gl 3 gl 5 gl 600nm (第一) 数据数据700nm700nm700nm 测量波长700nm (第二) 数据数据340nm340nm340nm第一波长5min数据数据数据数据数据反应时间第二波长4.99min数据数据数据数据数据试剂I 350gl290 X350X l 300X l 290Xl350Xl试剂U 100g l75X l100X l50Xl75Xl50Xl单位g/L g/L g/L mg/dl mg/dl mg/dl标准浓度点数555555（2 ）标准曲线制备参数如表18-22所示。
表18-22 生化分析仪检测Apo的定标浓度标准管号123456稀释倍数0 1 ：21：4 1 ：81：1604321.510.80 ApoA I 度数(g/L)17286ApoA H 度数(g/L)36189 4.5 2.250 ApoB 浓度(g/L)1809145.522.611.30 ApoC H 浓度(mg/dl)4210.50.250 ApoC 山浓度(mg/dl)5 2.5 1.250.630.310 ApoE 浓度(mg/dl)105 2.5 1.250.6250 5．单一试剂和双试剂检测方法的比较单一试剂和双试剂在全自动生化分析仪测定的光密度变化过程，如图18-6 所示。
从理论上考虑任何一种生化测定方法的试剂，临用时混合最好，可以消除试剂各种成份的自身化学变化和相互影响。
而在实际工作中，是不可能的，只能是将几种不会起化学反应而又无相互影响的试剂配制成2〜4种，临用时按一定比例配制使用。
临床化学试剂盒，目前主要以1或2种试剂形式供医学检验使用，即单一试剂和双试剂两种形式。
笔者认为双试剂比单一试剂好，尤其是含酶试剂和免疫试剂以双试剂包装形式为好，有利于对酶的活性或抗体效价的保存。
单一试剂是所有试剂混合在一起，存放过程中，有可能因化学物质的存在而损害试剂中的工具酶或抗体，存放时间越长，损害可能性越大，然而双试剂不存在这一问题。
对脂质的测定双试剂法更显其优越性，因为血清中脂质与载脂蛋白是以脂蛋白的形式存在，当测定试剂与血清标本混合后，首先解联脂蛋白，让其释放出脂质和载脂蛋白，。
作为免疫测定试剂还兼有使载脂蛋白抗原决定簇暴露的作用。
当R1试剂作用完后，加进第二试剂（R2 ）后，使其抗体适应抗原决定簇的要求，达到抗原抗体结构呈完全的互补状态，从而产生最大的抗原抗体结合量，达到定量的目的。