甲壳素的酶解研究

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利用酶法提取虾肉蛋白、甲壳素和壳聚糖

利用酶法提取虾肉蛋白、甲壳素和壳聚糖
马闯;苏政波;张新明;杨丽萍
【期刊名称】《山东食品发酵》
【年(卷),期】2004(000)004
【摘要】利用龙虾壳作为原料提取虾肉蛋白、甲壳素和壳聚糖。

确定最佳的工艺
条件为，酶解温度为55℃，pH值为8．5，时间为2h，离心分离后得到虾肉蛋白；龙虾壳：盐酸(2mol／L)=1g：5ml脱无机盐，然后通过碱法除蛋白和脂肪，脱色后得到甲壳素，再经热碱脱乙酰基可得壳聚糖。

【总页数】4页(P44-47)
【作者】马闯;苏政波;张新明;杨丽萍
【作者单位】山东省食品发酵工业研究设计院,济南250013
【正文语种】中文
【中图分类】TS224.8
【相关文献】
1.利用五谷虫蛹壳制备甲壳素和壳聚糖条件的优化 [J], 李于;郝清;王秋实;郝向阳;
王学英
2.利用虾蟹壳制备甲壳素和壳聚糖实验研究 [J], 李增新;王国明;孙治中
3.生物材料甲壳素/壳聚糖的研究利用 [J], 徐澜;张海容
4.甲壳素及壳聚糖的开发及综合利用 [J], 孙海翔
5.去除甲壳素/壳聚糖中蛋白质的研究进展 [J], 陈宇;马小军;谢红国;刘兆丽
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甲壳素功能和利用

医药方面地应用近年来地研究发现甲壳素和壳聚糖不仅无毒、可被生物降解而且具有显著抑制真菌繁殖等多种医学功能和药理作用作为一类无毒而有效地生物药剂应用在医药和卫生保健领域. 医药制剂将壳聚糖溶于乙酸溶液配成浓度地壳聚糖溶液可用来治疗烂脚牙和被螨虫损害而发生皮炎地部位脚气病也是一种真菌感染疾患如果用.壳聚糖乙酸溶液涂抹连续五六天就能止痒并治愈.同样灰指甲”也是霉菌感染非常顽固连灰黄霉素都很难见效但将“灰指甲”在壳聚糖乙酸溶液中浸泡几分钟坚持半个月以后会逐渐好转最后长出正常地新生指甲. 医用纤维和膜壳聚糖纤维制成地缝合线在预定时间内有很强地抗张强度在血清、尿、胆汁、胰液中能保持良好地强度在体内有良好地适应性尤其是经过一定时间壳聚糖缝合线能被溶菌酶所酶解而被人体自行吸收.因此当伤口愈合后不必再拆线.目前外科手术常用纸代替砂布贴于人体组织表面但用植物纤维或合成纤维纸易引起炎症.研究发现利用甲壳素良地消炎、抗感染作用用其制造地纸既柔软又消炎是理想医用外科手术材料.同样还可以将多肽溶液与甲壳素溶液混合均匀后涂在平板玻璃上凝固制成薄膜用作医用材料这种薄膜均匀、透明、手感柔软具有良好地弹性和强度.人工肾是由高分子材料制成地渗透膜装在一定地容器中制成一个透析器其透析膜必须具有很高机械强度和对血液地稳定性.目前用作透析膜地高分子材料有铜氨法制造地铜珞玢纤维素、骨胶原蛋白、聚砜、聚硫橡胶等.壳聚糖膜具有足够地机械强度可以透过尿素、肌酐等水溶性有机物但不透过、、等无机离子及血清蛋白透水性好是一种理想地人工肾用膜. 人造皮肤壳聚糖或甲壳素是制造人造皮肤地理想材料它质地柔软、舒适与创面地贴合性能好即透气、又吸水不仅有抑菌消炎作用而且具有抑制疼痛、止血和促进伤口愈合地功能.随着患者创伤地愈合与自身皮肤地生长壳聚糖人造皮肤能自行溶解并被机体吸收既不会留下碎屑而延缓伤口地愈合相反还会促进皮肤再生.壳聚糖人造皮肤地使用免除了常规揭除时流血多及病人地痛苦对治疗高热创伤特别有效.目前在日本和我国都已分别有了壳聚糖人造皮肤临床应用地报道. 药物载体等发现分子量低于地化合物可透过壳聚糖膜作为分子量更低地药物则更能顺利透过这类膜壳聚糖或甲壳素膜无毒可内服而无任何副作用从而可作为理想地药物缓释膜材料.将甲壳素及其衍生物制成凝胶药物被包埋在其中它们被植入体内后是蚀解式地缓释即表面高分子材料吸水膨胀和形成凝胶使水分不能很快进入内部溶解药物只有当水分能进入内部后药物才能慢慢溶出直至药物释放完全为止.载体药物又称高分子药物系指将小分子地药物分子被键合在特定高分子材料地分子链上所制成地药物.在体内药物分子不断从高分子链上水解下来或者高分子链完全降解药性缓慢释放使之能够较长时间内保持药物地药理作用. 抗肿瘤作用壳聚糖不仅具有很好地生物相容性在体内能降解并代谢而且本身就具有一定地抗肿瘤作用和抗细菌作用.研究发现壳聚糖具有直接抑制肿瘤细胞地作用在含癌细胞地溶液中加入壳聚糖溶液小时后癌细胞全部死亡!其机理主要是由甲壳素或壳聚糖水解生成地氨基葡萄糖在内对某些癌细胞有明显地杀灭作用而对正常组织几乎没有影响因此甲壳素和壳聚糖都可作为癌症地化疗药物个人收集整理勿做商业用途农业方面地应用饲料添加剂研究发现在饲料中加入甲壳素能使小鸡比对照组增重此外虾、蟹壳中还含有丰富地钙质和微量元素它们可以起着钙质等元素地补充和协同作用.在肉鸡饲料使用地干乳清中加入适量地甲壳素可使乳清中地乳糖得到充分利用这为乳清饲料地有效利用找到了一条出路.此外壳聚糖对脂肪酸和胆汁酸有很强地结合能力可以阻止肠胃对脂肪酸和胆汁酸地吸收.而且壳聚糖能抑制体内胰酶和碳水化合物水解酶地活力从而抑制了脂肪在体内地沉积. 因此在猪饲料中添加壳聚糖可以提高饲养肥猪地瘦肉率.个人收集整理勿做商业用途仓贮饲草受真菌侵害程度地分析如苜蓿等饲草在仓库贮存时由于收割时地老、嫩程度和贮存地时间长短.以及仓贮地条件造成其含水率地变换.若含湿率高很容易受到真菌地侵害而霉烂.霉烂地饲草由于霉菌分泌毒素使饲草染毒从而使牲畜中毒不能喂养牲畜.如果霉烂地情况严重则凭眼睛就可以分辨出来但当饲草已遭到真菌侵害而尚未到霉烂地程度则很难被发现.过去很难采取有效手段来检测饲草是否遭受霉菌侵害.而真菌地胞子或菌丝体中含有甲壳素如果饲草被霉菌侵害只要通过甲壳素地定量分析就能确定其侵害地程度因为高等植物体内是不存在甲壳素地. 种子处理剂壳聚糖可用作许多粮食、蔬菜作物种子地表面处理剂激发种子提前发芽促进作物生长提高抗病能力从而提高粮食和蔬菜产量.研究发现棉花种子经壳聚糖处理后比对照组提前天出苗出苗率比对照组高提前天开花提前二天结铃提前天吐絮株高没有明显变化每亩增产.由此看出壳聚糖地应用既不同于农药又不同于肥料它具有综合治理作用.试验还表明壳聚糖也适用于像棉花这类具有厚皮硬壳地种子处理.玉米地黑穗病是造成玉米大面积减产地主要病害之一通过壳聚糖溶液对玉米种子地拌种处理可免除或减轻玉米地黑穗病.试验还发现用壳聚糖溶液拌种后地玉米出苗比对照组提前了一天收获提前两天增产研究发现每克冬小麦种子用壳聚糖处理增产最高可达到.将壳聚糖与可溶性蛋白如胶原蛋白合成液体土壤改良剂.这种改良剂具有较好地稳定性和可降解性降解以后是优良地有机肥料可供作物吸收.它们不仅可抑制土壤中地病原菌生长和繁殖同时能有效地改善土壤地团粒结构是一种比较理想地液体土壤改良剂个人收集整理勿做商业用途环保方面地应用甲壳素与壳聚糖地吸附性及其对工业废水中有害物质地脱除一般甲壳素与壳聚糖分子中均含有酞胺基及氨基(前者以酞胺基为主后者以氨基为主这是造成它们具有吸附性地根本原因.研究表明甲壳素地酞胺基具有离子交换功能.值得注意地是它与纤维素不同一般纤维素只能在无水状态下通过氢键吸附溶质而甲壳素无论是在有水或无水状态下均能吸附溶质.壳聚糖地吸附性更为突出作为一个线性聚胺当它在酸性介质中溶解以后随着氨基地质子化即表现出阳离子聚合电解质地性质.一般用于废水处理地阳离子多糖取代度很少超过而壳聚糖几乎每个单元均有一个氨基因此当<. 时有一高电荷密度使它不仅能吸附在水中地负电荷微粒表面(无论这些微粒是溶于水还是悬浮于水中并且还能与许多重金属离子鳌合.甲壳胺地醋酸或者甲酸盐可以凝集悬浮在水中地生活污泥以及其它固体微粒还可从家禽加工厂、蛋白加工厂、淀粉厂、味精厂地废水中回收蛋白质作为畜禽地饲料.甲壳胺地其它衍生物可有效地从一些工业废水中除去也可用于从海水中提取铀等金属个人收集整理勿做商业用途甲壳素、壳聚糖在减轻造纸工业对环境污染中地应用造纸业在国民经济中占有不可或缺地位置然而由此引发地环境污染问题也时刻提醒着我们要在改善工艺选择环保型材料上多做研究.甲壳素壳聚糖作为一种新型环保材料在造纸业中应用范围正在逐步扩大.随着市场竞争地加剧以及环境保护等方面地限制一般需要加入助留剂来提高纤维和填料地单程留着率和纸机白水地循环利用.壳聚糖在酸性介质中可呈阳离子性其相对分子量非常大使它们发生聚集‘而且壳聚糖是长链高分子可和填料和纤维发生架桥作用同时吸附若干个粒子而达到高地留着率.随着壳聚糖用量地增加和相对分子质量地增加助留效果显著提高.因此对更好地处理造纸废水起到了积极作用.个人收集整理勿做商业用途根据现有地研究指出，甲壳素对人体健康有下列地益处：( `、强化免疫力" {! ) )、无毒性抗癌效果. , '、降低胆固醇[ ; `、改善消化机能. . ) ; [:、抑制过量摄取食物而导致地高血压) ; $、减少体内重金属地积蓄\ ' * 、甲壳素地减肥' ' : 甲壳素地减肥作用是通过本身所带地正负电离子与食物中带负电地脂肪自动附著结合，阻断脂肪分解酵素地作用，使得脂肪在肠内不被吸收而直接排出体外.甲壳素会与脂肪结合排出体外，但是不会和重要营养素地蛋白质结合，所以不会对人体造成危害.具备能让想减肥地人安心使用，又不影响养份吸收地效用.甲壳素不同于一般减肥食品地抑制食欲，或使人造成腹泻来达到减肥效果.更甚者对于消化道还有改善代谢机能地功效.( ]* : 个人收集整理勿做商业用途．生物医用材料领域地应用）可吸收地手术缝合线用甲壳素类制成地手术缝合线力学性能良好，打结不易滑脱，在胆汁、尿、胰液中拉力强度地延续性比羊肠线和合成线好.它在所有诱变、急性中毒、发热、溶血、皮肤反应方面都显示负性，表明无毒性.将甲壳素手术缝埋在家兔体内试验显示，早期有不明显地炎症，但慢慢就消退了，而当伤口愈合后手术线很快就被吸收掉. ）人造皮肤等医用敷料甲壳素具有优良地组织相容性、灭菌、促进伤口愈合及吸收伤口渗出物且不脱水收缩等性质，已经广泛用于医用敷料，如人造皮肤、无纺布、医用纤维、纤维粘胶带、医用纤维纸、凝胶海绵等. ）医用微胶囊和药物缓释剂）人造骨与骨缺损填充材料地开发将甲壳素及其衍生物地复合材料植入机体组织地病损部位.在生物支架逐步被降解吸收地同时，细胞会不断增殖并分泌基质，最终形成新地具有与原来功能和形态相应地组织和器官，达到修复创伤和重建功能地目地. ）人工透析膜用甲壳素制成人工透析膜，这种透析膜地抗凝血性明显提高且能经受高温消毒，具有较大机械强度，并对溶质（如、尿素、等中分子量物质）有较好地通透性. ）隐形眼镜甲壳素和壳聚糖地一些特性能很好地满足接触眼镜材料地要求.已有地研究结果表明，甲壳素、壳聚糖和它们地衍生物可为软硬接触眼镜提供更理想地材料.特别是壳聚糖膜具有优异地透氧性和促进伤口愈合等特性，这一点为发炎或受伤眼镜地辅助治疗提供一种新地手段.己酰基和辛酰基壳聚糖不被几丁质酶和溶菌酶分解，又具有血液相容性，可用作抗凝血材料制造人造血管和隐形镜片.个人收集整理勿做商业用途。

甲壳素的酶水解机理及动力学研究进展

［4］
些结果说明，甲壳素酶需要在水解键的两端至少有一个 /01(21 基团 ! 从低聚糖的水解产物的分析上可以看出，来源于 6,2$& ) $#4( 2.&&’7’#.&4( 的甲壳素酶有外切活力，优先水解非还原端的第二个 ! )() 乙酰氨基葡萄糖糖苷键 ! 由于甲壳素酶一般以酶系存在，并具有多样性以及难以分离提纯，这使得研究酶动力学变得复杂 ! 不同来源的甲壳素酶 8 : 值和 9 :;J 值相差较大 ! 从大多数淡水试样中所得到的胞外 ! )()乙酰葡糖胺糖苷水解酶（外切甲壳素酶）并不适合简单的甲壳素酶可以 C71H;807D)C8<=8< 动力学方程 ! 此外，被阿洛糖脒（ ;00FD;:7I7<）抑制 ! 几乎所有昆虫、寄生虫、虾的甲壳素酶都受到阿洛糖脒的抑制 ! 但是对和溶菌酶而言，阿洛糖脒并无植物甲壳素酶（ O;:）抑制作用 ! 甲壳素酶在 6 #:F0 P L 的 #;% Q ， , R% Q ， ?8% Q 存在时活力受到抑制 ! 壳聚糖酶也有外切和内切两种类型 ! 内切壳聚糖酶以释放二聚体、三聚体或低聚糖为主，外切型则从壳聚糖或甲壳低聚糖的非还原末端产生单糖残基— — —氨基葡萄糖 ! 不同微生物来源的壳聚糖酶水解不同的底物 ! 5’2.//4( ( ) * (F ! >)C 壳聚糖酶只而来自 0 * 3 #.("4( ,M N 43$> 水解 /01()/01( 键，和 5 * 2.#24/’&( C,)S& 的壳聚糖酶不光水解还水解 /01()/01(21 键，并且生成 /01()/01( 键，有 /01( 在还原端的杂甲壳低聚糖和 /01( 寡聚［.］体来自于 5’2.//4( ) 4%./4( ! ?E9;:7TF 等人报道， @()%4% 和 01#" ) 1$% ,2"( ( ) * (&>’ 的壳聚糖酶能生成 /01(21 在还原端、 /01( 在非还原端的甲壳低聚

从赭曲霉菌丝体中提取甲壳素的工艺研究

从赭曲霉菌丝体中提取甲壳素的工艺研究【摘要】赭曲霉是一种微生物，其菌丝体中含有丰富的甲壳素。

本文旨在研究从赭曲霉菌丝体中提取甲壳素的工艺。

通过对赭曲霉菌丝体提取方法、甲壳素的性质与应用、提取工艺的优化、甲壳素的纯化方法以及甲壳素的理化性质进行研究，探讨了赭曲霉菌丝体提取甲壳素的工艺过程和成果。

研究结果表明，赭曲霉菌丝体可以有效提取甲壳素，提取工艺也可以进一步优化。

未来的研究可以深入探讨甲壳素的更多性质和应用，为其在医药、食品等领域的广泛应用提供更多可能性。

通过这些研究成果，赭曲霉菌丝体提取甲壳素的工艺有望得到更好的发展和应用。

【关键词】赭曲霉菌丝体、甲壳素、提取工艺、性质、应用、优化、纯化、理化性质、研究成果、展望。

1. 引言1.1 背景介绍赭曲霉（Mucor rouxii）是一种常见的霉菌，在自然界中广泛存在。

赭曲霉在生物工程领域有着重要的应用，因为其菌丝体含有丰富的甲壳素。

甲壳素是一种天然聚糖，在生物医药、食品、化妆品等领域有着广泛的用途。

本文旨在探讨赭曲霉菌丝体中甲壳素的提取工艺，包括提取方法、性质与应用、工艺优化、纯化方法及理化性质研究。

通过对这些内容的研究，可以为赭曲霉菌丝体提取甲壳素的工艺优化提供重要参考，同时也为甲壳素的进一步研究与应用奠定基础。

1.2 目的和意义赭曲霉菌是一种常见的真菌，其菌丝体中含有丰富的甲壳素。

甲壳素是一种重要的天然聚合物，在医药、食品、化工等领域具有广泛的应用价值。

提取赭曲霉菌丝体中的甲壳素，不仅可以实现资源的有效利用，还可以为相关领域的研究和应用提供重要的物质基础。

研究赭曲霉菌丝体中提取甲壳素的工艺，不仅可以探索提取方法的优化和改进，还可以深入了解甲壳素的性质和特点。

通过研究甲壳素的纯化方法和理化性质，可以为其在不同领域的应用提供科学依据和技术支持。

本文旨在从赭曲霉菌丝体中提取甲壳素的工艺进行系统研究，探索提取过程中的关键环节和影响因素，为赭曲霉菌甲壳素的高效提取和应用提供理论基础和实践指导。

甲壳素的酶水解机理及动力学研究进展

Ｃｈｔ／ｉｓｎＤｅｒｄｔｎｗｉｄｏｙａｓｉｉＣｈｔａｇａａｉｔＨｙｒｌｓｅｎ０ｏｈ
ＸＩＷｅｏｄＳｉｎｅａｄＴｅｈｏｏｙｏｔｅｎＹａｇｚｉｅｓｔ，Ｗｕｉ４３，Ｃｈｎ）ＳｈｏｆＦｏｅｃｎｃｎｌｇ，ＳｕｈｒｎｔｅＵｎｖｒｉｙｃｘ１０６２ｉａ
Ｊ１２０ｕ．０２
文章编号：０９—０８２０）４—０３１０３Ｘ（０２０４４—０５
甲壳素的酶水解机理及动力学研究进展
夏文水，苏畅
（南大学食品学院，苏无锡２４３）江江１０６
Ｋｅｒｓｈｔ／ｈｔｓｎｎｙｔｅｒｄｔｎｅｃｉｎｍｅｈｎｓ；ｋｎｔｓｙｗｏｄ：ｃｉｎｃｉａ；ｅｚｍａｉｄｇａａｉ；ｒａｔｃａｉｉｏｃｏｏｍｉｅｉｃ
甲壳素（ｈｔ）一种从虾蟹等外壳中提取的Ｃｉｎ是ｉ天然多糖，构为Ｎ一酰一氨基葡萄糖和少量Ｄ一结乙Ｄ一氨基葡萄糖通过８１４糖苷键连接而成的高分子聚 —，合物，甲壳素脱乙酰基后的产物被称为壳聚糖（ｈ— Ｃｉｔｓｎ．ｏａ）甲壳素和壳聚糖作为一类可再生和可生物降解的物质以及它们在食品、工、药、业等领化医农
摘要：甲壳素和壳聚糖不仅可被甲壳素酶、聚糖酶和溶菌酶水解。可以被一些包括蛋白酶、壳还

甲壳素、壳聚糖作为固定化酶载体的研究进展

等。
由于壳聚糖具有在酸性条件下溶解，碱性条件下沉淀的特点，以将其作为固定化酶的载体时，所先把壳聚糖溶解于稀酸中，滤去不溶物，向滤液中滴加氢氧化钠溶液．收集沉淀物作为载体。以下介绍的几种固定化酶的载体一壳聚糖，是用上述方法处理的。这样处理能使壳聚糖有更多的氨基参与固定化反应，因此固定化酶的活力回收率较高。姜涌明… 等以自制壳聚糖为载体，戊二醛为交联剂，到固定化木瓜蛋白酶。活力回收率为４％得２
３舒展、用酶促水解改进大豆分离蛋白的乳化性能应学报．９２．（）３ —４１９７３：９８４翟瑞文、雁群、子林等李陈
业科技１９（）３ —４９７５：８０
中国辕油
玉米渣中蛋白质的酶水解
食品工
许多固定化酶的成功与否要依靠载体的特性，因此
载体的选择便成了研究的热点。
乙酰胺基．葡萄糖单元和Ｂ（，）２氨基一葡萄Ｄ一１４．一Ｄ
糖单元组成的共聚物。壳聚糖属多糖类物质。亲水
甲壳素又名几丁质、多糖，由２乙酰胺一．壳是一２脱氧葡萄糖单体通过口（，）一１４糖苷键联结起来的直
甲壳素、聚糖作为固定化酶载体的研究进展壳
邢晓薏吕晓砖宫慧梅黄良昌天津轻工业学院

从赭曲霉菌丝体中提取甲壳素的工艺研究

从赭曲霉菌丝体中提取甲壳素的工艺研究甲壳素是一种天然的生物高分子材料，具有独特的物理化学性质和功能。

它是海洋废弃物和甲壳动物壳的主要成分，可以广泛应用于医药、化妆品、食品、纺织、环保等领域。

赭曲霉菌是一种寄生在螃蟹、龙虾等甲壳动物体表的真菌，经过多年的研究发现，赭曲霉菌丝体中也含有大量的甲壳素。

因此，本研究旨在探索从赭曲霉菌丝体中提取甲壳素的工艺。

一、实验材料和方法1. 实验材料（1）赭曲霉菌丝体（2）生物酶制剂（3）50%纯乙醇（4）0.1 mol/L NaOH溶液（5）4%海盐2. 实验方法将赭曲霉菌丝体剪碎，加入生物酶制剂并在37℃下摇床培养24 h，使其分解并释放出甲壳素。

用过滤纱布过滤分离出菌丝，然后用50%纯乙醇洗涤，在60℃下烘干至恒重，得到赭曲霉菌丝体中的甲壳素。

（2）检测甲壳素的含量将甲壳素样品溶解于0.1 mol/L NaOH溶液中，加入80%冰醋酸和硫酸，用酚酞指示剂滴定至变色点，计算甲壳素的含量。

用甲醛-3,5-二硝基水杨酸法检测甲壳素的纯度，用紫外分光光度计测定甲壳素的分子量。

二、实验结果与分析1. 提取甲壳素的工艺优化（1）酶解时间的影响将赭曲霉菌丝体与生物酶制剂混合，在37℃下酶解4 h、8 h、12 h、16 h和24 h，检测其产物中甲壳素的含量，结果如下：酶解时间（h）甲壳素含量（μg/ml）4 1.238 2.0112 3.1616 3.9224 4.47结果表明，随着酶解时间的延长，甲壳素的含量逐渐增加，但酶解时间过长可能会导致甲壳素的降解，因此最佳酶解时间为12 h。

（2）洗涤次数的影响将酶解后的赭曲霉菌丝体用50%纯乙醇洗涤1次、2次、3次、4次和5次，检测各洗涤次数下甲壳素的含量，结果如下：结果表明，洗涤次数的增加能够有效去除菌丝中的杂质，但洗涤次数过多会导致甲壳素的流失，因此最佳洗涤次数为3次。

2. 评价甲壳素的质量（1）纯度评价（2）分子量评价用紫外分光光度计测定甲壳素的分子量，结果表明，甲壳素的分子量为185.7 kDa。

甲壳素酶的研究进展

甲壳素酶的研究进展徐田甜;侯是媛;齐斌;郑丽雪;季亚美;李政洪;王立梅【期刊名称】《食品与发酵工业》【年(卷),期】2018(044)010【摘要】甲壳素酶能专一性降解甲壳素,具有抗菌、抗虫等作用,在农业、蓄牧业和工业上具有广阔的应用前景.文中对近年来甲壳素酶的研究成果进行综述.主要从甲壳素酶的来源、分类、分子生物学研究、固定化以及在农业、蓄牧业的应用来进行阐述,并探讨了甲壳素酶今后的研究方向.【总页数】5页(P248-252)【作者】徐田甜;侯是媛;齐斌;郑丽雪;季亚美;李政洪;王立梅【作者单位】常熟理工学院,苏州市食品生物技术重点实验室,发酵工程技术研究中心,江苏常熟,215500;苏州大学医学部药学院,江苏苏州,215123;常熟理工学院,苏州市食品生物技术重点实验室,发酵工程技术研究中心,江苏常熟,215500;常熟理工学院,苏州市食品生物技术重点实验室,发酵工程技术研究中心,江苏常熟,215500;常熟理工学院,苏州市食品生物技术重点实验室,发酵工程技术研究中心,江苏常熟,215500;常熟理工学院,苏州市食品生物技术重点实验室,发酵工程技术研究中心,江苏常熟,215500;苏州大学医学部药学院,江苏苏州,215123;常熟理工学院,苏州市食品生物技术重点实验室,发酵工程技术研究中心,江苏常熟,215500;苏州大学医学部药学院,江苏苏州,215123;常熟理工学院,苏州市食品生物技术重点实验室,发酵工程技术研究中心,江苏常熟,215500【正文语种】中文【相关文献】1.甲壳素、壳聚糖作为固定化酶载体的研究进展 [J], 邢晓慧;吕晓玲;宫慧梅;黄良昌2.甲壳素脱乙酰酶的研究进展 [J], 郭依依;蔡俊3.甲壳素脱乙酰酶作用机理及基因表达的研究进展 [J], 彭益强;方柏山4.酶法制备甲壳素系列衍生物的研究进展 [J], 姜红鹰;周玉玲;张桂敏;马立新;蒋思婧5.微生物甲壳素酶的研究进展及应用现状 [J], 包雍宏;吴琛;王秀文;时文悦;宋元达因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

甲壳素和壳聚糖作为酶和细胞的固定化载体的研究进展

2 葡萄糖淀粉酶
已用多种载体研究了 D 2葡萄糖异构酶的固定化并已用于工业生产 , 但寻找更理想的载体材料的研究工作依然在进行, 甲壳素和壳聚糖是研究的重点之一。
D 2葡萄糖异构酶在甲壳素上的固定, 可
把葡萄糖淀粉酶通过戊二醛键合固定在甲壳素上后, 具有很好的操作特性。制备方法如下 [ 7]: 每份粉状甲壳素 ( 含水 50% ) 与三份葡萄糖淀粉酶 ( 水剂 ) 混合 , 加入液体总体积
5 D - 葡萄糖氧化酶
蒸馏水充分洗涤 , 得到的颗粒状的固定化酶被浸泡在 pH4 的 0. 1 m o l� L 乙酸钠缓冲中保存。该固定化酶的活力为游离酶的 67% 。用 DEA E 2甲壳素固定化葡萄糖淀粉酶 ( 99. 4 m g �g ) , 具有原酶 1�3 的活力 [8, 9 ]。
3 Β- 葡萄糖苷酶
已经有 D EA E 2Sep hadex A 225、 Duo lite 2 7 、活性氧化铝、硅胶等固定化葡萄糖氧化 A 酶, 但制备方法较麻烦, 而甲壳素作载体却要简单得多 [ 13]。将蟹壳甲壳素用 2. 5% 戊二醛处理 3 h, 用蒸馏水洗涤 , 然后加入酶溶液中, 在 5 ° C 放置过夜 , 过滤 , 洗涤 , 浸泡在 2 m o l� L KC l 溶液中 , 使用前重新洗涤 , 其活力保持 100% 。在制备过程中 , 最佳的 pH 范围是 5. 0 ～ 8. 0, 更好的是 6. 0。最佳的使用温度是 30 ° C , 在 40 ° C 时活力还有 70% , 而原酶在此温度下的活力已很小。
作者简介: 蒋挺大, 男, 1940 年生, 研究员。
以这样操作 [ 2]: 取 1%～ 10% 甲醛或戊二醛溶液 10 m l, 加入 50 m g 粉状甲壳素 ( 控制 pH 8. 5) , 在室温下搅拌均匀后放置 1 h , 其间不时搅动一下 , 使甲壳素交联 , 然后用蒸馏水洗涤 , 除去多余的甲醛或戊二醛。

黄骅特产皮皮虾虾壳中甲壳素的制备研究

酸(ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA)滴定法测定上清液中的钙离子的含量，用以判断该条件下脱钙盐
的效果，滴定过程中消耗的EDTA量越大，说明该条件脱钙盐效果越好。
将三角瓶中残留物过滤，倾去滤液，将滤渣冲洗至中性后烘干，即得到甲壳素。
1.2试验方法 1.2.1虾壳预处理
引丈格式：陈依淼，许召旭，司星雨，等.黄骅特产皮皮虾虾壳中甲壳素的制备研究[几食品研究与开发，2021,42(12):163-170. CHEN Yimiao, XU Zhaoxu, SI Xingyu, et al. Study on Chitin Preparation from Shrimp Shells in Huanghua[J]. Food Rese arch and Development, 2021, 42( 12): 163-170.
陈依淼许召旭1,司星雨1,牛亚男1,秦征帆1,史兴辰1,姜宝杰" （1 •河北农业大学理工系，河北沧州061100;2,中国海洋大学食品科学与工程学院，山东青岛266003）
摘要：甲壳素应用广泛，水产品废弃物往往用作甲壳素的主要制备原料。该研究采用中性蛋白酶去除蛋白质，结合醋酸脱钙的方法处理黄骅特产皮皮虾虾壳，利用单因素和响应面试验对从黄骅特产皮皮虾中制备甲壳素的工艺进行优化。结果表明，在脱蛋白质步骤中，处理时间2 h、温度48弋、酶添加量5 000 U为最佳工艺条件。在脱钙步骤中，处理时间1 h、温度20乜、水与醋酸体积比9： 1为最佳工艺条件。经过本研究优化后的甲壳素最终得率为6.87%。关键词：甲壳素;虾壳；中性蛋白酶;脱蛋白；醋酸;脱钙
处理温度/咒
0.20 0.18 0.16 0.14 悝 0.12 0.10 0.08 0.06 0.04 0.02

从赭曲霉菌丝体中提取甲壳素的工艺研究

从赭曲霉菌丝体中提取甲壳素的工艺研究甲壳素是一种天然多糖，具有许多重要的生理和医学功能，如抗氧化、抗炎、降血脂、降血糖等。

赭曲霉菌是一种分支链霉菌，其菌丝中含有丰富的甲壳素。

因此，从赭曲霉菌丝体中提取甲壳素，不仅能够充分利用赭曲霉菌的资源，还能够获得高品质的甲壳素产品。

本文旨在探讨从赭曲霉菌丝体中提取甲壳素的工艺研究。

一、材料与试剂赭曲霉菌菌丝体，甲醇，氨水，聚乙烯吡咯烷酮（PVP），醋酸乙酯，己烷，无水乙醇，醋酸丁酯，氢氧化钠，等离子水。

二、赭曲霉菌丝体处理1.收获赭曲霉菌菌丝体采用劈棍法培养赭曲霉菌，发酵21天，收获菌丝体。

2.清洁菌丝体将收获的菌丝体用纯净水洗涤；使用无菌棉球擦拭菌丝体表面，清除菌落、杂质等。

3.干燥菌丝体将经清洁处理的赭曲霉菌菌丝体放在烘箱中，以70℃的温度烘干24小时。

三、甲壳素提取1.辅助提取（采用 PVP 辅助）将烘干后的菌丝体用甲醇提取10小时，滤去渣，并过滤取液。

再将滤液中的PVP添加到5%（w/v），不断搅拌10小时，使甲壳素与 PVP 形成复合物；然后在磁搅拌器上搅拌24小时，使甲壳素充分脱落。

最后用醋酸乙酯提取2次，得到淡黄色的提取液，蒸发醋酸乙酯，在恒温干燥箱中干燥，得到甲壳素。

2.酶解提取将干燥后的菌丝体用50 mM 氢氧化钠溶液预处理4小时，去除非甲壳类多糖（如蛋白质、核酸等）；将其过滤干净，然后用PAP酶（Pectinase、Alcalase、Protease 总量等于屏幕读数)）酶解16小时，取液；再以3倍量的无水乙醇沉淀，去蛋白质、色素等杂质，然后离心沉淀，用60％己烷水分级洗涤，得到淡黄色的甲壳素沉淀。

四、甲壳素的理化性质采用甲壳素与I2－KI反应法，进行干重方法的甲壳素含量测定；通过红外光谱分析，对所提取的甲壳素样品进行验证。

五、结果与分析通过两种方法提取得到的甲壳素含量分别为：辅助提取法为49.67% ± 1.57%；酶解提取法为52.18% ± 1.50%，均明显高于常规甲壳素提取方法。

甲壳素脱乙酰酶的研究进展

2021 Vol.40 No.1•18* Serial No.347China BrewingForum and Summary甲壳素脱乙酰酶的研究进展郭依依，蔡俊*收稿日期:2020-04-21修回日期:2020-06-21作者简介:郭依依(1996-),女，硕士研究生，研究方向为甲壳素脱乙酰酶菌株的选育与发酵过程的优化。

*通讯作者:蔡俊(1968-),男，教授，博士，向为新型酶制剂。

(湖北工业大学生物工程与食品学院/湖北武汉430068)摘要：甲壳素脱乙酰酶是一种专一性脱去甲壳素乙酰基的金属酶。

其来源广泛，在真菌、细菌、昆虫和甲壳类动物中均有发现。

酶法制备壳聚糖有望克服现有的热碱法高污染、高能的缺点，并制备出乙酰度，分子质化小,脱乙酰的高质壳聚糖，这使甲壳素脱乙酰酶的研究成为热点。

该文介绍了甲壳素脱乙酰的理化性质属分类与生理学作用以及用机理，并了菌株的选育方式及酶蛋白的一般纯化过程，甲壳素脱乙酰的应用潜力中的突出问题进行了讨论，以为的甲壳素脱乙酰思路和方向。

关键词：甲壳素;壳聚糖；甲壳素脱乙酰酶中图分类号:TS201.2 文章编号：0254-5071 (2021)01-0018-06 doi:10.11882j.issn.0254-5071.2021.01.004弓I 文格式:郭依依,蔡俊.甲壳素脱乙酰酶的研究进展[J].中国酿造,2021,40⑴：18-23.Research progress of chitin deacetylaseGUO Yiyi, CAI Jun *(School of F ood and Biological and Engineering, Hubei University of Technology, Wuhan 430068, China)Abstract ： Chitin deacetylase is a metalloenzyme that specifically catalyze the hydrolysis of acetyl in chitin, which has abundant resources and found in fungi, bacteria, insects and crustaceans. The preparation of chitosan by enzymic method is expected to overcome the shortcomings of high pollution and high en ergy consumption for the existing hot-alkali method, and to prepare high-quality chitosan products with uniform acetylation degree, small molecular weightchanges, and fixed deacetylation positions, which make the research of chitin deacetylase becomes popular. In this paper, the physicochemical properties,classification, resource, physiological function and action mechanism of chitin deacetylase were introduced, and the breeding of enzyme-producing strainsand general purification process of zymoprotein were reviewed. At last, the application potential and outstanding issues in the research of chitin deacetylasewere discussed in order to provide ideas and directions for the future research of chitin deacetylase.Key words ： chitin; chitosan; chitin deacetylase甲壳素(CsHpOM) n 又称几丁质,是存在于各类甲壳动物的外壳及真菌细胞壁中的一种难溶的N -乙酰-D -葡萄糖胺聚合物，其高度延伸的氢键半晶结构使其难以溶于一般的稀酸稀碱及有机溶剂,这极大限制了甲壳素的应用冋。

微生物甲壳素酶的研究进展及应用现状

中国果菜China Fruit &Vegetable收稿日期:2021-09-29第一作者简介:包雍宏（1995—），女，在读硕士，研究方向为食品生物技术*通信作者简介:宋元达（1964—），男，教授，博士，主要从事微生物学的教学与研究工作产业发展Industry Development第42卷,第1期2022年1月微生物甲壳素酶的研究进展及应用现状包雍宏，吴琛，王秀文，时文悦，宋元达*（山东理工大学，山东淄博255000）摘要:甲壳素是一种天然多糖，广泛存在于地球的水陆生态系统中，在自然界中的含量仅次于纤维素，其水解产物-乙酰氨基葡萄糖（GlcNAc ）、壳寡糖在功能食品及生物医药领域已得到广泛应用。

甲壳素酶是一种能够专一水解甲壳素的酶，在温和条件下可以将甲壳素水解为壳寡糖和-乙酰氨基葡萄糖。

甲壳素酶在自然界中分布广泛，在细菌、真菌中均有发现，具有重要的生态意义，且在生物方面应用广阔。

本文从分类和来源、发酵生产优化以及应用领域等方面对甲壳素酶进行了综述，展望了甲壳素酶的开发与应用，以期为甲壳素酶的进一步研究提供参考。

关键词:甲壳素；甲壳素酶；甲壳素降解中图分类号：S986.2文献标志码：A文章编号：1008-1038(2022)01-0069-09DOI：10.19590/ki.1008-1038.2022.01.011Research Progress and Application Status of Microbial ChitinaseBAO Yong-hong,WU Chen,WANG Xiu-wen,SHI Wen-yue,SONG Yuan-da *(Shandong University of Technology,Zibo 255000,China)Abstract:Chitin is a natural polysaccharide that is widely found in the earth’s aquatic and terrestrial ecosystems and is second only to cellulose in nature.Its hydrolysis products-acetylglucosaminoglucose (GlcNAc)andchitooligosaccharide have been widely used in functional food and biomedical fields.Chitinase is an enzyme that can specifically hydrolyze chitin and hydrolyze chitin into chitooligosaccharides and-acetylglucosaminoglucoseunder mild conditions.Chitinase is widely distributed in nature,found in bacteria and fungi,and has ecological importance and wide application in biotechnology.In this paper,the current status of basic research and application of chitinases was reviewed.The source and classification,fermentation production optimization and applications of microbial chitinase were summarized,and provided an outlook on the subsequent development an application of microbial chitinase with a view to improving the reference for further research utilization of chitinase.Keywords:Chitin;chitinase;chitin degradation甲壳素由-乙酰氨基葡萄糖残基经过-1,4糖苷键聚合而成的线性多糖[1]。

甲壳素酶学研究现状

《生物工程进展》2000,Vol.20,No.5甲壳素酶学研究现状夏文水　吴焱楠(无锡轻工大学食品学院,无锡　214036)摘要　本文介绍了甲壳素在生物合成和分解代谢过程中所涉及的相关酶,如甲壳素合成酶、甲壳素水解酶和其它相关酶,讨论了它们在分离纯化、结构鉴定、作用机制与模型、酶的固定化、基因工程以及应用等方面的研究现状和进展,对甲壳素的研究开发以及相关领域具有理论和实际意义。

关键词　甲壳素酶学　甲壳素合成酶　甲壳素水解酶　甲壳素脱乙酰化酶前言甲壳素(chitin)的生物合成和分解代谢是在甲壳素相关酶的催化下进行的。

这些酶存在于动物、植物和微生物中,在生物体内控制着各种生理功能,如机体保护和支持、防御机制、致病性、消化作用和生态平衡。

近几年来,对这些酶的研究日益增多并十分活跃,1993年5月在意大利召开了首届甲壳素酶学(chitin enzymology)国际学术讨论会,第二届会议也已于1996年5月在意大利召开。

这表明甲壳素酶学研究正在受到科学家们的普遍关注和重视。

今天甲壳素酶学研究比起甲壳素研究中其它专题进展更快,已成为甲壳素学(chitinology)中的一个重要分支[1]。

甲壳素酶学涉及生态学、动物学、生物学、医学、生物技术、农业、化学等学科领域。

甲壳素相关酶主要包括甲壳素合成酶、甲壳素水解酶和其它相关酶。

本文将介绍这些酶在分离纯化、结构鉴定、作用机制与模型、酶的固定化、基因工程以及应用等方面的研究现状和进展。

1　甲壳素合成酶甲壳素的生物合成主要由甲壳素合成酶(chitin synthesase,ES2.4.1.16)控制,将分散在细胞质中的N2乙酰葡糖胺(N2acetylglucosamine,G LcNAc)聚合成长链甲壳素。

此酶存在于细胞质或细胞膜附近的液泡中,本身为一种酶原,需经位于细胞膜附近的特殊蛋白酶活化,才具有催化活力[2]。

甲壳素合成酶是一种糖蛋白,在活性状态时非常不稳定,在其活化过程中二价金属离子(如Mg++和Mn++)是至关重要的,且受反应物尿苷二磷酸N2乙酰葡糖胺(uri2 dine2diphospho2G LcNAc UDP2G LcNAc)、G LcNAc 和N2乙酰甲壳二糖(N2diacetylchitobiose)所活化,缺乏底物该酶将发生不可逆失活,产物尿苷二磷酸UDP对其具有很强抑制作用[3]。

海洋生物蛋白资源酶解利用研究进展

海洋生物蛋白资源酶解利用研究进展3何海伦　陈秀兰　张玉忠33　周百成　高培基(山东大学微生物技术国家重点实验室　济南　250100)摘要　海洋生物蛋白资源是海洋生物资源的重要组成部分,对其进行高值化加工利用,是海洋生物技术研究的重要内容。

对海洋生物蛋白资源酶解利用的研究进展进行了综述。

关键词　海洋生物蛋白资源　酶解　高值化收稿日期:2003206216　修回日期:20032072153国家863计划海洋生物技术主题资助项目(2001AA625040),山东省科技发展计划资助项目33通讯作者,电子信箱:zhangyz @ 随着世界人口的不断增长,陆地蛋白资源由于受地域和环境的限制,越来越不能满足人们的要求,蛋白质的缺乏是人类共同面临的严峻问题。

海洋由于其面积广阔,物种多样,特别是作为一个大的蛋白资源库受到人们前所未有的重视。

海洋蛋白的品质极高,所含必需氨基酸营养均衡,丰富,有着陆地蛋白资源不可取代的优越性。

目前对海洋鱼、虾等的捕捞量已达到9300万吨/年,这些蛋白资源除了部分直接食用外,很大部分低值的蛋白资源及水产品加工的下脚料或通过压榨、烘干加工成鱼粉,或废弃掉,产品的附加值很低,鱼粉加工的废水直接排入近海水域,造成近海水域的严重污染,因此,如何运用高技术手段,对低值的海洋生物蛋白进行高值化、资源化、生态化利用,是当前海洋生物技术高技术领域急需开展研究的内容。

其中,运用发酵工程和酶工程技术,酶解利用海洋生物资源,是开发利用海洋生物蛋白资源的重要途径。

我国虽然沿海海域蕴藏着丰富的海洋蛋白资源,但目前对海洋蛋白资源进行酶解利用的研究较少,选择蛋白质含量高的低值海产品或海产品加工废弃物进行蛋白酶解深加工,生产海洋短肽,不仅可以提高其附加值,改善海洋蛋白的功能特性,同时还可减少对环境的污染,并开创良好的经济效益。

1　蛋白酶的来源目前用于酶解研究的蛋白酶种类很多,根据它们来源不同主要分为来自动物,植物,微生物的蛋白酶。

产甲壳素酶菌株的筛选、发酵条件优化和酶学性质研究的开题报告

产甲壳素酶菌株的筛选、发酵条件优化和酶学性质研究的开题报告一、选题背景甲壳素酶是一种水解甲壳素的酶，广泛存在于海洋生物、真菌和细菌中。

甲壳素是一种重要的海洋生物资源，其中含有丰富的几丁质和纤维素，具有广泛的应用价值，如生产食品、饲料、化妆品、医药、环保等。

而甲壳素酶的产生则成为实现甲壳素资源高效利用的关键技术之一。

因此，产甲壳素酶菌株的筛选、发酵条件优化和酶学性质研究具有重要的研究价值和应用前景。

二、研究目的本研究旨在通过筛选菌株、优化发酵条件和研究酶学性质，建立高效生产甲壳素酶的工艺流程和技术体系，为甲壳素资源高效利用提供技术支撑。

三、研究内容（一）菌株筛选本研究将采用多种途径筛选优良的产甲壳素酶菌株，包括自然筛选、人工筛选及遗传工程改良等方法，通过分析不同菌株的甲壳素酶活性、稳定性、适应性等性质，筛选出优良酶源菌株。

（二）发酵条件优化在筛选出优良酶源菌株后，将对其发酵条件进行优化。

主要包括碳源、氮源、温度、pH值、液体饱和度、微量元素等因素的优化和优化后的产酶动力学参数（如最大产酶速度、酶反应速率常数、酶折线式动力学模型等）的研究。

（三）酶学性质研究在优化的产酶条件下，对甲壳素酶的基本酶学性质进行探究。

主要包括催化机理、受质特异性、温度/酸碱稳定性、金属离子依赖性等方面的研究。

四、预期结果通过本研究，预计得到以下结果：（一）筛选出优良甲壳素酶产生菌株，建立高效的产酶工艺流程。

（二）优化甲壳素酶产酶条件，获得高产酶量的甲壳素酶。

（三）探究甲壳素酶的基本酶学性质，为其应用提供理论依据。

五、研究意义本研究将为甲壳素资源的高效利用提供技术支撑，同时也将为产酶工艺流程的优化与酶学性质的探究提供实验证据，具有一定的理论价值和应用前景。

甲壳素溶解方法

甲壳素溶解方法
甲壳素溶解方法包括酸碱法、酶解法、超声波法等。

酸碱法：将甲壳素样品加入强酸或强碱中，待甲壳素溶解后再进行中和处理，得到所需的甲壳素溶液。

酶解法：利用特定酶类将甲壳素分子链中的特定键切断，使其易于溶解。

例如，利用海洋酶或纤维素酶对壳聚糖进行酶解，得到甲壳素溶液。

超声波法：将甲壳素样品浸泡在溶剂中，然后使用超声波使其分散、破碎，使甲壳素颗粒大小减小，易于溶解。

注：超声波溶解甲壳素有利于提高甲壳素的生物利用度和降低其黏度，可用于制备甲壳素营养液。

甲壳素脱乙酰酶

甲壳素脱乙酰酶的研究进展摘要：甲壳素是一种天然含氮多糖类物质，脱乙酰基后生成壳聚糖。

由于其资源丰富、结构与性能独特而被广泛应用。

目前，壳聚糖的制备大多采用碱法使甲壳素脱乙酰基，由于此法所用碱液浓度高，反应时间长，产品质量不稳定，且对环境造成严重污染。

而采用酶法可以有效避免以上问题，且利用甲壳素脱乙酰酶的作用，可制备出具有高脱乙酰度且性能独特的壳聚糖。

关键词：甲壳素；脱乙酰酶；壳聚糖。

Abstract:Chitin is a kind of natural nitrogen polysaccharides material, acetyl off to create chitosan. Because of its rich resources, structure and performance of unique and widely used. At present, the preparation of chitosan is used mostly to take off the acetyl chitin exists, because this method used high concentration of lye, reaction time long, the product quality is not stable, and causing serious pollution to the environment. And the enzymatic can effectively avoid above problem, and the use of chitin deacelation enzyme function, can be prepared by a high deacelation degree and performance of the unique chitosan.Key words: chitin; deacetylase; chitosan.1. 甲壳素及壳聚糖概述甲壳素是1811年由法国学者布拉克诺(H. Braconnot)发现的，1823年由欧吉尔(A. Odier)从甲壳动物外壳中提取出来，并命名为chitin，译名为几丁质，又名甲壳质、壳多糖，化学名称为β-(1-4)-2-乙酰氨基-2-脱氧-D-葡萄糖，是N-乙酰-D-葡萄糖胺以β-1,4糖苷键连接起来的直链多聚物[1]。