封闭式麦管玻璃化冷冻法用于人早期胚胎冷冻效果观察
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０ ７ ｏ Ｌ丙 二醇 ＋ ． ｏ Ｌ蔗 糖 、 ． ｌＬ丙 ．５ｍ ｌ ／ ０ ２ｍ ｌ ／ ０ ５ｍｏ ／
山东 医药 ２ １ ００年第 ５ ０卷第 １ ５期
封 闭式 麦 管 玻璃 化 冷冻 法 用 于 人 早 期 胚 胎 冷冻 效 果 观察
乜照燕 张 ， 娜 吴海峰 甄秀 丽 郭 丽娜 张 。 ， ， ， 轶
（ １河北 医科 大学 第四 医院 ， 家庄 ０ ０ １ ； 石 ５０ １２河北省胸科 医院 ）
５ ６
麦管斜面上。将 ０２ ｌ ．５ｍ 麦管装于 ０ ５ｍ 麦管内 ， ． ｌ 立即置入液氮并封闭 ０５ｍ 麦管， ． ｌ 置液氮中保存 。 胚胎与玻璃化冷冻保护液接触的总时问控制在 ６ ０ｓ 之 内。程 序化 组 ： 温下 将 胚 胎 移 至 １５ｍ ｌＬ丙 室 ． ｏ ／ 二醇 中 ８—１ ｉ，． ｏ Ｌ丙二 醇 ＋ ． ｏ Ｌ蔗 ０ｒ ｎ １ ５ｍ ｌ ａ ／ ０ １ｔ ｌ ｏ ／ 糖 ４～ ｉ ５ｒｎ中并 装入 ０２ ｌ 管 ， 管 。２ ａ ．５ｍ 麦 封 ２℃ 开 始 ， ２℃／ ｉ 至 一 植 冰 ，． ／ ｎ降至 一 以 ｍｎ降 ７ ０３ｑ ｍｉ Ｃ ３ ２℃ ， １ 以 ０℃／ ｎ从 一３ ｍｉ ２℃降至 一１０℃ ， ０ 备好 液 氮及镊子 ， 迅速 放人液 氮 中。 １２２ 胚胎 复苏 玻 璃 化组 从 液 氮 中取 出冷 冻 麦 ．． 管， 从外套管内取出装有胚胎的麦管 ， 快速将麦管从 液 氮 中转移 到 ３ ７℃预 热 １ｈ的 １０ｍ ｌＬ蔗糖 、０ ． ｏ ／ １ ｍｇｍ Ｓ 的 Ｈ Ｆ中 １ ｉ， ／ ｌ Ａ Ｈ Ｔ ｎ 后移 至含 ０５ｍ ｌＬ蔗 ａ ｒ ． ｏ ／ 糖、．５ ｏ Ｌ蔗糖溶液中， ０ ２ ｌ ｍ／ 分别停留３ｍｎ最后在 ｉ， 含 １ ｇｍ Ｓ ０ｍ ／ ｌ Ａ的 Ｈ Ｆ中平衡 ５ｒｎ后移入培养 Ｈ Ｔ ｉ ａ 箱内培养。程序化组取出麦管， 在空气 中停 留 ４ ０ｓ 后 ，５℃水浴 １ ｉ 后 转 至 １５ｍ ＬＬ丙 二醇 ＋ ． ３ ｎ ａ ｒ ． ｏ／ ０２ ｍｏ Ｌ蔗糖 、 ． ｏ／ ｌ ／ １ ０ ｍ ｌＬ丙 二 醇 ＋０ ２ ｍｏ Ｌ蔗 糖 、 ． ｌ ／
关键词 ： 卵裂期胚胎 ； 胚胎冷冻 ； 胚胎复苏 ； 封闭式麦管玻璃化法 ； 程序化慢速冷冻法
中 图分 类 号 ：３ １ １ ２ ３ 文献 标 志 码 ： Ｂ 文章 编号 ： ０ － ６ （０ ０ １ ４ ５ －２ １ ２２ Ｘ ２ １ ）５ ３ ６０ ０ ６ ０
随着体外受精胚胎移植（Ｖ —Ｔ 技术 的发展 ， ＩＦＥ ） 胚 胎冷 冻技术 的应 用越 来越广 泛 。长期 以来 主要采 用慢速程序化法冷冻早期分裂期胚胎 ， 该方法操作 费时、 费用昂贵。２０ ０７年 １ ～ ０８ １ 月 ２０ 年 ２月， 我院 采 用封 闭式 麦管玻 璃化 法冷 冻胚胎 ， 取得较 好效果 。 现报告如 下 。 １ 资料 与方法 １１ 临床资料 不孕症 患者 １３例， ． ４ 年龄（ １８ ３． ± ３６ 岁 ， ． ） 不孕 年 限 （ ． ２ ３ ａ ５ １± ． ） 。在 我 中心 进行 胚 胎 复苏 １０个 周期 ， ６ 均行 ＩＦＥ Ｖ —Ｔ助 孕 。取 卵周期 中 均采用促 性 腺 激 素 释放 激 素 激 动 剂 （ ｎ Ｈａ 和重 ＧＲ ） 组人 卵 泡 刺 激 素 （Ｆ Ｈ） 人 绝 经 期 促 性 腺 激 素 ｒＳ 、 （ ＭＧ）长 方案 控 制 性 超 排 卵 ， ≥３个 卵 泡直 径 Ｈ ， 在 达 １ ｍ 时肌 注人绒 毛膜促性 腺激 素 （ Ｃ ）０００ ８ｍ ｈ Ｇ １ ０ ｕ， 后取卵 ， ３ｈ ６ 获卵后根据患者情况采用 自然受精 或 者 卵 胞 质 内 单 精 子 注 射 ， 含 人 血 清 白 蛋 白 用 （Ｓ ） Ｈ Ａ 胚胎培养 液培养 ， 取卵后 ２ ４ｈ观察受精情 况 。经 患者知 情 同意后将 可利 用胚胎 冷冻保 存 。分 别 采用封 闭式 麦 管 玻 璃化 法 （ 玻璃 化 组 ） 及程 序 化 慢速冷冻法（ 程序化组） 冷冻。 １ ２ 方法 ． １２ １ 胚胎冷冻 玻 璃化组 ： ．． 自制封 闭式冷冻套 管， 用眼科剪在 ０２ ｌ ．５ｍ 麦管的部位剪 出一个斜面 ， 乙醇 消毒 后 备 用 。在 室 温 下 ， 胚 胎 移 至 含 ７ ５ 将 ．％ 乙二 醇 、．％二 甲亚砜 、０ｍ／ ｌ Ｓ ７５ １ ｇｍ Ａ的人输 卵管 Ｈ 液（ Ｔ ） Ｈ Ｆ 中平衡 ５ｒｎ 最后 于含 １％乙二醇、５ ｉ， ａ ５ １％ 二甲亚砜 、 ． ｏ Ｌ蔗糖、０ ｍ ／ ｌ 蔗糖 （ ｉ ０ ６ｍ ｌ ／ １ ｇｍ 聚 Ｆ ． ｃｉ 、０ｍｇｍ Ｓ 的 Ｈ Ｆ 中快 速 清 洗 至 少 ｌ ｏ ） ｉ ／ ｌＨ Ａ ｌ Ｔ ０ 次， 在体视镜下迅速将胚胎移置已经剪好的 ０２ ｌ ．５ｍ
化组 的胚胎存活率 、 完全胚胎存活率 、 植入率 明显高于 程序化组 ， 期取消率 明显低 于程 序化组 （ 周 Ｐ均 ＜ ．５ ； ０ ０ ） 继
续卵裂率 、 临床妊 娠率 、 流产率 ， 两组 比较均元显 著性差异 （ Ｐ＞０ ０ ） ．５ 。结论 封 闭式 麦管玻璃化法 用于人 早期胚
胎 冷冻可简化冷冻程序 ， 更好地保存胚胎复苏后 的发育潜能。
摘要： 目的
探讨 封闭式麦管玻璃化 法用于人早期 胚胎 （ 以下简称胚胎 ） 冷冻 的效果 。方法
将 接受 植后第 ３天的胚胎分别采用封闭式麦管玻璃化法 （ 璃化组 ） Ｉ ＦＥ ） 玻 及程序化 慢速冷冻法 （ 程序化组） 冷冻 ， 比较两组胚胎存活率 、 完全胚胎存活 率、 继续卵裂率及植 入率 、 妊娠 率和 流产率等 。结 果 玻璃
山东 医药 ２ １ ００年第 ５ ０卷第 １ ５期
封 闭式 麦 管 玻璃 化 冷冻 法 用 于 人 早 期 胚 胎 冷冻 效 果 观察
乜照燕 张 ， 娜 吴海峰 甄秀 丽 郭 丽娜 张 。 ， ， ， 轶
（ １河北 医科 大学 第四 医院 ， 家庄 ０ ０ １ ； 石 ５０ １２河北省胸科 医院 ）
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麦管斜面上。将 ０２ ｌ ．５ｍ 麦管装于 ０ ５ｍ 麦管内 ， ． ｌ 立即置入液氮并封闭 ０５ｍ 麦管， ． ｌ 置液氮中保存 。 胚胎与玻璃化冷冻保护液接触的总时问控制在 ６ ０ｓ 之 内。程 序化 组 ： 温下 将 胚 胎 移 至 １５ｍ ｌＬ丙 室 ． ｏ ／ 二醇 中 ８—１ ｉ，． ｏ Ｌ丙二 醇 ＋ ． ｏ Ｌ蔗 ０ｒ ｎ １ ５ｍ ｌ ａ ／ ０ １ｔ ｌ ｏ ／ 糖 ４～ ｉ ５ｒｎ中并 装入 ０２ ｌ 管 ， 管 。２ ａ ．５ｍ 麦 封 ２℃ 开 始 ， ２℃／ ｉ 至 一 植 冰 ，． ／ ｎ降至 一 以 ｍｎ降 ７ ０３ｑ ｍｉ Ｃ ３ ２℃ ， １ 以 ０℃／ ｎ从 一３ ｍｉ ２℃降至 一１０℃ ， ０ 备好 液 氮及镊子 ， 迅速 放人液 氮 中。 １２２ 胚胎 复苏 玻 璃 化组 从 液 氮 中取 出冷 冻 麦 ．． 管， 从外套管内取出装有胚胎的麦管 ， 快速将麦管从 液 氮 中转移 到 ３ ７℃预 热 １ｈ的 １０ｍ ｌＬ蔗糖 、０ ． ｏ ／ １ ｍｇｍ Ｓ 的 Ｈ Ｆ中 １ ｉ， ／ ｌ Ａ Ｈ Ｔ ｎ 后移 至含 ０５ｍ ｌＬ蔗 ａ ｒ ． ｏ ／ 糖、．５ ｏ Ｌ蔗糖溶液中， ０ ２ ｌ ｍ／ 分别停留３ｍｎ最后在 ｉ， 含 １ ｇｍ Ｓ ０ｍ ／ ｌ Ａ的 Ｈ Ｆ中平衡 ５ｒｎ后移入培养 Ｈ Ｔ ｉ ａ 箱内培养。程序化组取出麦管， 在空气 中停 留 ４ ０ｓ 后 ，５℃水浴 １ ｉ 后 转 至 １５ｍ ＬＬ丙 二醇 ＋ ． ３ ｎ ａ ｒ ． ｏ／ ０２ ｍｏ Ｌ蔗糖 、 ． ｏ／ ｌ ／ １ ０ ｍ ｌＬ丙 二 醇 ＋０ ２ ｍｏ Ｌ蔗 糖 、 ． ｌ ／
关键词 ： 卵裂期胚胎 ； 胚胎冷冻 ； 胚胎复苏 ； 封闭式麦管玻璃化法 ； 程序化慢速冷冻法
中 图分 类 号 ：３ １ １ ２ ３ 文献 标 志 码 ： Ｂ 文章 编号 ： ０ － ６ （０ ０ １ ４ ５ －２ １ ２２ Ｘ ２ １ ）５ ３ ６０ ０ ６ ０
随着体外受精胚胎移植（Ｖ —Ｔ 技术 的发展 ， ＩＦＥ ） 胚 胎冷 冻技术 的应 用越 来越广 泛 。长期 以来 主要采 用慢速程序化法冷冻早期分裂期胚胎 ， 该方法操作 费时、 费用昂贵。２０ ０７年 １ ～ ０８ １ 月 ２０ 年 ２月， 我院 采 用封 闭式 麦管玻 璃化 法冷 冻胚胎 ， 取得较 好效果 。 现报告如 下 。 １ 资料 与方法 １１ 临床资料 不孕症 患者 １３例， ． ４ 年龄（ １８ ３． ± ３６ 岁 ， ． ） 不孕 年 限 （ ． ２ ３ ａ ５ １± ． ） 。在 我 中心 进行 胚 胎 复苏 １０个 周期 ， ６ 均行 ＩＦＥ Ｖ —Ｔ助 孕 。取 卵周期 中 均采用促 性 腺 激 素 释放 激 素 激 动 剂 （ ｎ Ｈａ 和重 ＧＲ ） 组人 卵 泡 刺 激 素 （Ｆ Ｈ） 人 绝 经 期 促 性 腺 激 素 ｒＳ 、 （ ＭＧ）长 方案 控 制 性 超 排 卵 ， ≥３个 卵 泡直 径 Ｈ ， 在 达 １ ｍ 时肌 注人绒 毛膜促性 腺激 素 （ Ｃ ）０００ ８ｍ ｈ Ｇ １ ０ ｕ， 后取卵 ， ３ｈ ６ 获卵后根据患者情况采用 自然受精 或 者 卵 胞 质 内 单 精 子 注 射 ， 含 人 血 清 白 蛋 白 用 （Ｓ ） Ｈ Ａ 胚胎培养 液培养 ， 取卵后 ２ ４ｈ观察受精情 况 。经 患者知 情 同意后将 可利 用胚胎 冷冻保 存 。分 别 采用封 闭式 麦 管 玻 璃化 法 （ 玻璃 化 组 ） 及程 序 化 慢速冷冻法（ 程序化组） 冷冻。 １ ２ 方法 ． １２ １ 胚胎冷冻 玻 璃化组 ： ．． 自制封 闭式冷冻套 管， 用眼科剪在 ０２ ｌ ．５ｍ 麦管的部位剪 出一个斜面 ， 乙醇 消毒 后 备 用 。在 室 温 下 ， 胚 胎 移 至 含 ７ ５ 将 ．％ 乙二 醇 、．％二 甲亚砜 、０ｍ／ ｌ Ｓ ７５ １ ｇｍ Ａ的人输 卵管 Ｈ 液（ Ｔ ） Ｈ Ｆ 中平衡 ５ｒｎ 最后 于含 １％乙二醇、５ ｉ， ａ ５ １％ 二甲亚砜 、 ． ｏ Ｌ蔗糖、０ ｍ ／ ｌ 蔗糖 （ ｉ ０ ６ｍ ｌ ／ １ ｇｍ 聚 Ｆ ． ｃｉ 、０ｍｇｍ Ｓ 的 Ｈ Ｆ 中快 速 清 洗 至 少 ｌ ｏ ） ｉ ／ ｌＨ Ａ ｌ Ｔ ０ 次， 在体视镜下迅速将胚胎移置已经剪好的 ０２ ｌ ．５ｍ
化组 的胚胎存活率 、 完全胚胎存活率 、 植入率 明显高于 程序化组 ， 期取消率 明显低 于程 序化组 （ 周 Ｐ均 ＜ ．５ ； ０ ０ ） 继
续卵裂率 、 临床妊 娠率 、 流产率 ， 两组 比较均元显 著性差异 （ Ｐ＞０ ０ ） ．５ 。结论 封 闭式 麦管玻璃化法 用于人 早期胚
胎 冷冻可简化冷冻程序 ， 更好地保存胚胎复苏后 的发育潜能。
摘要： 目的
探讨 封闭式麦管玻璃化 法用于人早期 胚胎 （ 以下简称胚胎 ） 冷冻 的效果 。方法
将 接受 植后第 ３天的胚胎分别采用封闭式麦管玻璃化法 （ 璃化组 ） Ｉ ＦＥ ） 玻 及程序化 慢速冷冻法 （ 程序化组） 冷冻 ， 比较两组胚胎存活率 、 完全胚胎存活 率、 继续卵裂率及植 入率 、 妊娠 率和 流产率等 。结 果 玻璃