有机磷农药降解菌的筛选及其降解能力的研究
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筛选 菌对 乐果 降解 能 力的判 定 ，是根 据 降解 菌在 含乐 果 培养 基 中培 养 一定 时间 后所 测 得 的乐 果 浓
收 稿 日期 ：２０１０－０６—０４ 基金 项 目 ：辽 宁 省 教 育厅 科 学 技 术 研 究 项 目（２ＯＯ８Ｓ１３５） 作者 简 介 ：姜 华 （１９５８一），女 ，黑 龙 江 富 裕 人 ，辽 宁师 范大 学 教 授 ，博 士 ．Ｅ—ｍａｉｌ：ｊｉａｎｇｈｕａ１２２５＠ １６３．ｃｏｍ
第 ３４卷 第 １期 ２Ｏｌ１年 ３ 月
辽 宁 师 范 大 学 学报 （自然 科 学版 ）
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｌｉａｏｎｉｎｇ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ （Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｅｄｉｔｉｏｎ）
文章 编 号 ：１０００－１７３５（２０１１）０１－００９３－０５
ｏ１ ３４ Ｎｏ．１ Ｍ ａｒ． ２０１１
摘 要 ：从 活性 污 泥 中 筛 选 出 ２株 具 有 降解 有 机 磷 农 药 —— 乐 果 的细 菌 ，经 鉴 定 １号 菌 为 粪产 碱 菌 （Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｆａｅ—
ｃａｌｉｓ）、２号 菌 为 麻 疹 孪 生 球 菌 （Ｇｅｍｅｌｌａ ｍｏｒｂｉｌｌｏｒｕｍ）．以气 相 色 谱 法 检 测 了 ２种 菌 对 乐 果 的 降 解 能 力 ，其 降 解 率 分 别
菌 降 解 乐果 的效 果 好 于 ２号 菌 ．
关 键 词 ：乐果 ；降 解 茵 ；微 生物 修 复
中 图 分 类 号 ：Ｑ９３９．９９
文 献标 识码 ：Ａ
关于 微生物降解有机磷农 药的研究 ，前人 已有报 道［１ 证 明了环 境 中富含有 机 磷农药 降解 菌资 源 ，但 关 于降解乐果 的微生物 及粪产 碱菌 （Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｆａｅｃａｌｉｓ）、麻 疹 孪生 球菌 （Ｇｅｍｅｌｌａ ｍｏｒｂｉｌｌｏｒｕｍ）对 乐果 的 降解 效果研 究少有 报道．本 文 以微 生物学 法及气 相色谱法 ，筛 选 出乐果 降解菌 ２株 ，并检 测 了 目的菌 对乐 果 的降解 能力．旨为有机磷农 药污染 土壤 的微 生物修复奠定理论基 础 ，为实 际应用 提供优势菌种．
胡 晓 静 （１９６２一），女 ，辽 宁 大 连人 ，辽 宁 ｝｝；入 境 检 验 检 疫 局 高级 Ｔ 程 师 ．Ｅ—ｍａｉｌ：ｊｘｈｕ＠２６３．ｎｅｔ
９４
辽 宁 师 范 大学 学 报 （自然科 学版 ）
第 ３４卷
度 与对 照处理 的 比值．其 公式 为 ：降解 率：＝＝（Ｋ—Ｍ）／Ｋ（Ｋ一不含 目的菌测 定 液的 乐果 浓度 ；Ｍ 一含 目的 菌 测 定 液 的 乐 果 浓 度 ）． １．２．３ 菌 种 鉴 定 采 用 全 自动 微 生 物 分 析 仪 ］． １．２．４ 目的茵生长 曲线及 ｐＨ 值 、温度对其 生长影 响的测 定 采用单 因素试验 法逐 一考察 多种 因素 对 目 的菌 生 长 的影 响 【４ ］． １．２．５ 菌株 对农 药耐受性 的测定 分 别 以不 同浓度 的乐果 培养基 ，于 ３０℃ 、１５０ ｒ／ｍｉｎ振 荡培 养 目的 菌 种 ，测定 ＯＤ 。。值 、计算菌浓 度及其 对乐果 的耐受 性． １．２．６ 农 药 降 解 茵 对 乐果 污 染 土 壤 修 复 效 果 的 检 测 土 壤 全 Ｎ、全 Ｐ、速 效 磷 、速 效 钾 、ｐＨ 和 有 机 质 含 量 的测 定 采 用 常 规 方 法 ［４ ］．
菌 乐 果 降解 率 分 别 为 ５５．１ 和 ８６ ，２号 菌 为 ２２．９ 和 ７３．２ ．在 １５０ ｍｇ／ｋｇ乐 果 污 染 的 土 壤 中 ，于处 理 第 ５、３０天
采 样 检 测 ，１号 菌乐 果 降 解 率 分 别 为 ２４．３％和 ５６．５ ，２号 菌 为 １８．３ 和 ３４．８％．处 理 与 对 照 比较 均 差 异 极显 著．１号
有机磷农药降解菌的筛选及其降解能力的研究
姜 华 ， 石 爽 。， 胡 晓 静。
（１．辽 宁 师范 大 学 生 命 科 学 学 院 ，辽 宁 大连 １１６０２９；２．沈 阳音 乐 学 院 大连 校 区 ，辽 宁 大 连 １１６６５０ ３．辽 宁 出入 境 检 验 检 疫 局 ，辽 宁 大 连 １１６００１）
Байду номын сангаас
为 ７１．８ 和 ５４．９ ，对 乐 果 最 大 耐受 浓 度 分别 为 ６ ０００，７ ０００ ｍｇ／Ｌ￣以 ２菌株 处 理 不 同浓 度 乐 果 污 染 的 土壤 ，二 者 均
能 降 低 乐 果 对土 壤 转 化 酶 、过 氧 化 氢 酶 活性 的抑 制 ．在 ５０ ｍｇ／ｋｇ乐果 污 染 的土 壤 中 ，于 处 理 第 ５、３０天 采 样 检 测 ，１号
１ 材 料 和 方 法
１．１ 材 料 仪 器 ：气 相色 谱仪 、全 自动微 生 物 分 析仪 （ＶＩＴＥＫ ＧＮＩ 鉴 定 卡 、ＶＩＴＥＫ ＧＰＩ鉴 定 卡 ）、分 光 光 度
计 、培 养箱 、显微 镜 、天平 、摇床 、水 浴锅 、灭菌 锅 、冰箱 、离 心机 等． 试 剂 ：牛 肉膏 、蛋 白 胨 、酵 母 膏 等 ，均 为 分 析 纯 ． 菌 源 ：从 活性 污泥 （采 自大 连春 柳河 污水 处理厂 ）中筛选 出来 的乐 果 降解菌 １号 和 ２号． 供试 农药 ：４Ｏ％乐果 （广州农 药 厂生产 ）． 培养 基 ：基 础培 养基 、富集培 养基 和乐 果培 养基 ］．
１．２ 方 法 １．２．１ 乐果 降解 茵的 筛选及分 离纯化 将 活性 污泥 接人基 础培 养基 和富集 培 养基 中 ，采用 常规 的微 生 物分离 纯 化法进 行驯化 培养 ［４ ］．纯 化 的 目的菌种接 种斜 面培养 基 ，用 于鉴 定 、研究其 生物 学特性 及 对 乐 果 污 染 土 壤 的 生 物 修 复 研 究 ． １．２．２ 菌种 降解农 药能 力的测 定 以常规 的气相 色 谱法嘲 检测 农 药 含 量及 判 定筛 选 菌种 对 乐 果 的 降 解 能力 ．气 相 色谱 仪 Ｆｉｎｎｉｇａｎ Ｔｒａｃｅ ＧＣ ２０００，检 测器 ＮＰＤ３００℃ ；色 谱 柱 ＤＢ－１７（３０ ｍ×０．３２ ｍｍ × ０．２５ ｍ）；进样 口温度 ２４０℃ ；柱 温 ２７０℃ ；载 气流量 Ｎ２２．５ ｍＬ／ｍｉｎ；燃 气 Ｈ２２．７ ｍＬ／ｍｉｎ；助燃 气 Ａｉｒ ６０ ｍＬ／ｍｉｎ．
收 稿 日期 ：２０１０－０６—０４ 基金 项 目 ：辽 宁 省 教 育厅 科 学 技 术 研 究 项 目（２ＯＯ８Ｓ１３５） 作者 简 介 ：姜 华 （１９５８一），女 ，黑 龙 江 富 裕 人 ，辽 宁师 范大 学 教 授 ，博 士 ．Ｅ—ｍａｉｌ：ｊｉａｎｇｈｕａ１２２５＠ １６３．ｃｏｍ
第 ３４卷 第 １期 ２Ｏｌ１年 ３ 月
辽 宁 师 范 大 学 学报 （自然 科 学版 ）
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｌｉａｏｎｉｎｇ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ （Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｅｄｉｔｉｏｎ）
文章 编 号 ：１０００－１７３５（２０１１）０１－００９３－０５
ｏ１ ３４ Ｎｏ．１ Ｍ ａｒ． ２０１１
摘 要 ：从 活性 污 泥 中 筛 选 出 ２株 具 有 降解 有 机 磷 农 药 —— 乐 果 的细 菌 ，经 鉴 定 １号 菌 为 粪产 碱 菌 （Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｆａｅ—
ｃａｌｉｓ）、２号 菌 为 麻 疹 孪 生 球 菌 （Ｇｅｍｅｌｌａ ｍｏｒｂｉｌｌｏｒｕｍ）．以气 相 色 谱 法 检 测 了 ２种 菌 对 乐 果 的 降 解 能 力 ，其 降 解 率 分 别
菌 降 解 乐果 的效 果 好 于 ２号 菌 ．
关 键 词 ：乐果 ；降 解 茵 ；微 生物 修 复
中 图 分 类 号 ：Ｑ９３９．９９
文 献标 识码 ：Ａ
关于 微生物降解有机磷农 药的研究 ，前人 已有报 道［１ 证 明了环 境 中富含有 机 磷农药 降解 菌资 源 ，但 关 于降解乐果 的微生物 及粪产 碱菌 （Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｆａｅｃａｌｉｓ）、麻 疹 孪生 球菌 （Ｇｅｍｅｌｌａ ｍｏｒｂｉｌｌｏｒｕｍ）对 乐果 的 降解 效果研 究少有 报道．本 文 以微 生物学 法及气 相色谱法 ，筛 选 出乐果 降解菌 ２株 ，并检 测 了 目的菌 对乐 果 的降解 能力．旨为有机磷农 药污染 土壤 的微 生物修复奠定理论基 础 ，为实 际应用 提供优势菌种．
胡 晓 静 （１９６２一），女 ，辽 宁 大 连人 ，辽 宁 ｝｝；入 境 检 验 检 疫 局 高级 Ｔ 程 师 ．Ｅ—ｍａｉｌ：ｊｘｈｕ＠２６３．ｎｅｔ
９４
辽 宁 师 范 大学 学 报 （自然科 学版 ）
第 ３４卷
度 与对 照处理 的 比值．其 公式 为 ：降解 率：＝＝（Ｋ—Ｍ）／Ｋ（Ｋ一不含 目的菌测 定 液的 乐果 浓度 ；Ｍ 一含 目的 菌 测 定 液 的 乐 果 浓 度 ）． １．２．３ 菌 种 鉴 定 采 用 全 自动 微 生 物 分 析 仪 ］． １．２．４ 目的茵生长 曲线及 ｐＨ 值 、温度对其 生长影 响的测 定 采用单 因素试验 法逐 一考察 多种 因素 对 目 的菌 生 长 的影 响 【４ ］． １．２．５ 菌株 对农 药耐受性 的测定 分 别 以不 同浓度 的乐果 培养基 ，于 ３０℃ 、１５０ ｒ／ｍｉｎ振 荡培 养 目的 菌 种 ，测定 ＯＤ 。。值 、计算菌浓 度及其 对乐果 的耐受 性． １．２．６ 农 药 降 解 茵 对 乐果 污 染 土 壤 修 复 效 果 的 检 测 土 壤 全 Ｎ、全 Ｐ、速 效 磷 、速 效 钾 、ｐＨ 和 有 机 质 含 量 的测 定 采 用 常 规 方 法 ［４ ］．
菌 乐 果 降解 率 分 别 为 ５５．１ 和 ８６ ，２号 菌 为 ２２．９ 和 ７３．２ ．在 １５０ ｍｇ／ｋｇ乐 果 污 染 的 土 壤 中 ，于处 理 第 ５、３０天
采 样 检 测 ，１号 菌乐 果 降 解 率 分 别 为 ２４．３％和 ５６．５ ，２号 菌 为 １８．３ 和 ３４．８％．处 理 与 对 照 比较 均 差 异 极显 著．１号
有机磷农药降解菌的筛选及其降解能力的研究
姜 华 ， 石 爽 。， 胡 晓 静。
（１．辽 宁 师范 大 学 生 命 科 学 学 院 ，辽 宁 大连 １１６０２９；２．沈 阳音 乐 学 院 大连 校 区 ，辽 宁 大 连 １１６６５０ ３．辽 宁 出入 境 检 验 检 疫 局 ，辽 宁 大 连 １１６００１）
Байду номын сангаас
为 ７１．８ 和 ５４．９ ，对 乐 果 最 大 耐受 浓 度 分别 为 ６ ０００，７ ０００ ｍｇ／Ｌ￣以 ２菌株 处 理 不 同浓 度 乐 果 污 染 的 土壤 ，二 者 均
能 降 低 乐 果 对土 壤 转 化 酶 、过 氧 化 氢 酶 活性 的抑 制 ．在 ５０ ｍｇ／ｋｇ乐果 污 染 的土 壤 中 ，于 处 理 第 ５、３０天 采 样 检 测 ，１号
１ 材 料 和 方 法
１．１ 材 料 仪 器 ：气 相色 谱仪 、全 自动微 生 物 分 析仪 （ＶＩＴＥＫ ＧＮＩ 鉴 定 卡 、ＶＩＴＥＫ ＧＰＩ鉴 定 卡 ）、分 光 光 度
计 、培 养箱 、显微 镜 、天平 、摇床 、水 浴锅 、灭菌 锅 、冰箱 、离 心机 等． 试 剂 ：牛 肉膏 、蛋 白 胨 、酵 母 膏 等 ，均 为 分 析 纯 ． 菌 源 ：从 活性 污泥 （采 自大 连春 柳河 污水 处理厂 ）中筛选 出来 的乐 果 降解菌 １号 和 ２号． 供试 农药 ：４Ｏ％乐果 （广州农 药 厂生产 ）． 培养 基 ：基 础培 养基 、富集培 养基 和乐 果培 养基 ］．
１．２ 方 法 １．２．１ 乐果 降解 茵的 筛选及分 离纯化 将 活性 污泥 接人基 础培 养基 和富集 培 养基 中 ，采用 常规 的微 生 物分离 纯 化法进 行驯化 培养 ［４ ］．纯 化 的 目的菌种接 种斜 面培养 基 ，用 于鉴 定 、研究其 生物 学特性 及 对 乐 果 污 染 土 壤 的 生 物 修 复 研 究 ． １．２．２ 菌种 降解农 药能 力的测 定 以常规 的气相 色 谱法嘲 检测 农 药 含 量及 判 定筛 选 菌种 对 乐 果 的 降 解 能力 ．气 相 色谱 仪 Ｆｉｎｎｉｇａｎ Ｔｒａｃｅ ＧＣ ２０００，检 测器 ＮＰＤ３００℃ ；色 谱 柱 ＤＢ－１７（３０ ｍ×０．３２ ｍｍ × ０．２５ ｍ）；进样 口温度 ２４０℃ ；柱 温 ２７０℃ ；载 气流量 Ｎ２２．５ ｍＬ／ｍｉｎ；燃 气 Ｈ２２．７ ｍＬ／ｍｉｎ；助燃 气 Ａｉｒ ６０ ｍＬ／ｍｉｎ．