体内药物分析方法及方法的设计与评价ppt演示课件

2、紫外分光光度法
• 分光光度法的灵敏度较比色法高，适用于测定 具有紫外吸收的药物，方法简单，仪器要求也 不高。但用于测定含药浓度低的样品时，也受 到一定的限制。如测定体液中药物浓度时，亦 可能受体液中内源性杂质的干扰和影响。因 此，本法在体内药物分析中也受到灵敏度和专 一性的限制。但采用一些光谱分析技术，如用 差示分光光度法，导数分光光度法，双波长和 三波长分光光度法等，可适当提高方法的灵敏 度和选择性，也可消除杂质的干扰，因此，该 法目前仍用于一些生物样品中的药物检测。
• (3)分离效率高，流动相选择范围广，仪器自 动化程度高。
• (4)检测器多是针对整分子的光谱特征进行检 测的，专一性较高。检测方法多采用非破坏性 的。流出组分可回收，可用于样品的制备。
2、GC法
• GC法是最先兴起的具有分离和分析两种功能的 测定技术，在药物分析和体内药物分析中曾得到 较广泛的应用。由于HPLC法的发展，尤其是 RP-HPLC(反相-高效液相色谱法）的广泛应用， 使GC法的应用相对减少。其原因是GC法本身具 有一些缺点，应用时常受被测组分的挥发性和热 稳定性等方面的限制。用GC测定药物时一般需 要在120℃以上柱温条件下进行，因此不适合用 于遇热不稳定和极性大或挥发性差的药物，不适 合用于生物样品的测定。因而影响该法在体内药 物分析中的广泛应用。
3、荧光分光光度法
• 荧光分光光度法的灵敏度比紫外-可见分光光 度法的灵敏度高，最高可达到10-12g/mL，虽 然有荧光的物质数量不多，但体内许多重要的 生化物质、药物及其代谢物或致癌物都有荧光 现象。由于荧光衍生物试剂的使用，进一步扩 大了荧光分光光度法的应用，因此该法在体内 药物分析和药物动力学研究中得到广泛的应 用。
• 由于光谱法不具备分离功能，选择性较差，因 此对样品的预处理要求较高。选用专属的方法 或试剂与之反应，测定衍生物的荧光或对光吸 收强度，也可借助数学的方法消除干扰。
1、比色法
• 比色法灵敏度不高，通常只能测定出1ug/ml浓 度以上的样品。但该法具有快速，简便，对仪 器要求不高等特点。只要采用具有选择性的显 色剂和反应条件，可不经分离提取等步骤，直 接用于血药浓度监测。
• 选用何种方法进行体内药物分析为好呢？一般 要根据药物的理化性质、结构持征、药物浓度 大小、干扰成分的多少、预处理方法、实验目 的以及实验室条件等因素综合起来进行考虑。
分析方法的设定依据
(一)做好文献总结、整理工作 • 对已有报道的药物进行测定，应系统总结前人
的文献，从中找出哪些问题已解决，还存在哪 些问题等。对尚无文献报道的，也可根据药物 的性质情况，参考相似类型药物的文献资料。
• 由于该法具有高效、快速、灵敏、进样少、信 息量大、运行成本低、易于自动化等优点。因 此使其在体内药物分析及其代谢的检测中得到 广泛的应用。
• 根据HPCE法的分离模式的不同。HPCE又分 为：毛细管区带电泳、胶束电动毛细管色谱、 毛细管凝胶电泳、毛细管等电聚焦、毛细管等 速电泳和毛细管电色谱法。上述这些方法近几 年来在体内药物分析中均得到不同程度应用。
体内药物分析
Biopharmaceutical Analysis
体内药物分析方法及方法的设计与评价
• 生物样本经预处理后，选用适当方法进行测 定。可供生物体液中药物及其代谢物含量测定 wenku.baidu.com分析方法很多，归纳起来主要有三类：
（一）光谱分析法 （二）免疫分析法 （三）色谱分析法
• 除以上三类主要方法外，在生物药物分析中有 时还使用同位素标记药物，它们主要应用于 RIA、同位素逆稀释分析，或作为GC-MS分 析的内标，以及在药物分离中作示踪应用等。
（二）免疫分析法
• 免疫分析主要指放射免疫、酶免疫、荧光免疫 分析等。该法的原理是利用抗原-抗体特异反 应来测定体内药物的含量。该法具有灵敏度 高、专一性强、操作简便、快速等优点，是临 床治疗药浓监测和生化检验的常用方法，但需 要一定的试剂盒和仪器。
(三)色谱分析法
• 色谱方法包括HPLC、GC和TLC等方法。色谱 法在我国体内药物分析中的应用始于20世纪80 年代，由于色谱法具有分离分析功能，具有高 的专属性和灵敏度，并能同时分离分析结构相 似的药物和代谢物等优点，使得其近20年来发 展迅速，尤其是HPLC法，己在体内药物分析 领域中确立了主导地位，常用作体内药物分析 中评价其他方法的参比方法。近年手性色谱技 术、毛细管电泳技术、色谱与光谱联用技术、 色谱与免疫联用技术等的建立与发展，更为色 谱技术在体内药物分析中的应用增添了无量的 前景。
1、HPLC法
• HPLC法在体内药物分析中的应用已大大超过 其他分析方法，成为体内药物分析中应用最广 泛的技术之一。与GC法相比，它具有以下优 点：
• (1)适用范围广，可在室温下进行检测。对于 挥发性低的，热稳定性差的，分子量大的以及 离子型化合物等均可测定。
• (2)样品预处理简单，可不经萃取和衍生化处 理直接测定极性大的水溶性药物，特别适合生 物样品的测定；
（四）毛细管电泳法
• 毛细管电泳法(CE)，又称高效毛细管电泳法 (HPCE)，是20世纪末发展起来的一种高效、 快速的分析技术。HPCE是以高电压电场为驱 动力，以毛细管为分离通道，依据样品各组分 之间淌度和分配系数的不同而实现分离的一类 液相分离技术。
• 近年来HPCE发展十分迅速，已在化学、生命 科学和药学等领域得到广泛的应用。
• 此外，还有一些含抗生素类药物的生物样品， 它们可用微生物方法测定，利用抗生素在琼脂 培养基内的扩散作用，比较样品与药物标准品 两者对接种的试验菌产生的抑菌圈的大小，借 以测定样品内抗生素药物的浓度。
（一） 光谱分析法
• 光谱分析法包括比色测定、紫外分光光度法和 荧光分光光度法。光谱法在体内药物分析中是 应用较早的方法之一，根据陆明廉对我国 1975～1984年间血药浓度测定方法的统计，应 用光谱法占应用血药分析方法总数的三分之 一。虽然近十多年来色谱法的飞速发展，使光 谱法退出了体内药物分析应用方法的主角地 位，但因其操作简便、快速，在体内药物分析 中仍占有一定的地位。