实验四、革兰氏染色法PPT课件

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❖菌种
➢ 参考菌：金黄色葡萄球菌(G+), 大肠杆菌 (G-) ➢ 待测菌：蜡样芽孢杆菌、蓝细菌(微囊藻)
❖仪器 显微镜
❖材料 载玻片、香柏油、二甲苯、擦镜纸、 吸水纸、染色缸等
❖染料 草酸铵结晶紫染色液、卢戈氏碘液、 95%乙醇、0.5%番红染色液
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主要Hale Waihona Puke Baidu作步骤
❖制片
❖初染
❖媒染
❖脱色
❖复染
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革兰氏阳性和阴性菌细胞壁成分比较
成分
占细胞壁干重的%
革兰氏阳性菌
革兰氏阴性菌
肽聚糖 含量很高（50-90） 含量很低（~10）
磷壁酸 含量较高（<50） 无
类脂质 一般无（ < 2） 含量较高（~20）
蛋白质 无
含量较高
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❖ G-菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂 质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇 或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的 通透性，使结晶紫和碘的复合物易于渗出，结 果细菌就被脱色，再经番红复染后就成红色。
➢媒染 滴加碘液冲去水迹，再染1-2min， 水洗。
➢脱色 吸水纸吸去多余水分,滴加95%乙醇， 脱色20-30s立即水洗，以终止脱色。
➢复染吸水纸吸去多余水分,滴加番红，染色 2-3min，水洗。最后用吸水纸轻轻吸干。
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• 干燥后，置显微镜下观察。
• 被染成蓝紫色者即为革兰氏阳性菌(G) • 被染成红色者是革兰氏阴性菌(G-)
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❖ G菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质 含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层失水、 孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染 时的颜色，即结晶紫的蓝紫色。
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作业
• 结果
简述4种细菌的染色结果（形态、颜色、 革兰氏染色结果）
• 思考题
84页，思考题1、2、4
下一次实验:细菌的芽孢染色和荚膜染色
思考题1：培养基配置好后，为什么必须立即 灭菌？如何检查灭菌后的培养基是否为无菌 的？
思考题2：如果需要配制一种含有某抗生素的 固体培养基，其中抗生素的终质量浓度（或 工作浓度）为50ug/mL，你将如何操作？ （提示：抗生素在高温下易失效）
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实验四 革兰氏染色法
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目的要求
1. 学习并掌握革兰氏染色法。 2. 了解革兰氏染色原理。 3. 巩固显微镜的使用方法及无菌操作技术。
❖镜检
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制片
❖要用活跃生长期的培养物进行革兰氏染色; ❖注意练习无菌操作； ❖在载玻片上滴一小滴生理盐水； ❖取菌不要贪多，接种环上肉眼可见菌苔痕
迹即可； ❖菌苔在生理盐水中涂片要均匀，局部不宜
过厚,以免脱色不完全造成假阳性 ❖涂片--室温干燥--固定
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➢初染 将玻片置于玻片搁架上，加草酸铵结 晶紫染色液(加量以盖满菌膜为度)，染色 1min。倾去染色液，用自来水小心地冲洗。