毒理学试验

茶多酚毒理学试验及其评价方案
摘要：本文为茶多酚急性毒性试验、蓄积性试验和致突变试验的方案。

确定大鼠口服LD50，毒性强弱，是否可作为食品添加剂，及其添加用量。

关键字：茶多酚、L—EGCG、急性毒性试验、蓄积性试验、致突变试验
茶多酚（Tea Polyphenols）是茶叶中多酚类物质的总称。

研究表明，茶多酚等活性物质具解毒和抗辐射作用，能有效地阻止放射性物质侵入骨髓，并可使锶90和钴60迅速排出体外，被健康及医学界誉为“辐射克星”。

为了使作为天然抗氧化剂广泛应用于食品和医药等产品中, 必须探讨T P 的安全性.。

本文对T P 进行了毒性试验及遗传毒理试验外, 还增加了某些亚急性毒性试验及慢性毒性试验。

1 材料
1.1受试物: TP, 淡棕色粉剂, 由桂林实力天然食品有限公司提供，密闭干燥
保存, 临用时以生理盐水溶解配制成溶液。

1.2实验动物:昆明种小白鼠,体重(20±2) g。

Wistar大白鼠, 5周龄,体重(105±25)
g。

1.3仪器: 日立7170A 生化全自动分析仪(日本日立公司) ,AC920 血球全自动
分析仪(瑞典)。

2 方法
2.1大鼠急性经口毒性试验(改良寇氏法)：
2.1.1大鼠急性毒性预试验: 按卫生部卫法监发(2003)42号文5《保健食品安全性毒理学评价程序和检验方法规范》及所附小鼠、大鼠。

选取体重为(200±20) g 的雄性白鼠24只,按体重随机分为4 组, 每组6只, 禁食12 h 后,按0.2ml/10 g 一次性灌胃给药, 给药剂量分别为4.5、
3.0、2.5、1.8 g/kg。

给药后观察14 d白鼠死亡数及死亡分布情。

2.1.2 LD50测定: 根据预试验结果, 确定100%的死亡剂量为LD100, 0% 的死亡剂量为LD0, 100%致死和100%存活量之间设5个剂量,根据i=(lgLD100-lgLD0)/(n-1)确定组距。

选取体重为(20±2) g大鼠50只,按体重随机分为5组, 每组10 只, 禁食12 h 后, 各组按0.2ml/10 g 一次性灌胃给药, 观察14 d 死亡情况。

根据Karber法，确定大鼠经口LD50值。

2.2小鼠急性经口毒性试验：
2.1.2 LD50测定(改良寇氏法) : 根据大鼠LD50值，设置4种给药剂量，选取体重为(20±2) g 雄性小白鼠24 只,按体重随机分为4 组, 每组6 只, 禁食12 h 后, 各组按0.2ml/10 g 一次性灌胃给药, 观察14d 死亡情况。

根据Karber法，确定小鼠经口LD50值。

2.3亚急性毒性试脸
取大鼠30 只, 随机分成三组, 雌雄各半, 以0.1 % ( 15 m g /只·日) 和0.3 % ( 45 m g / 只·日) 的T P 水溶液放入鼠饮水中连续喂六周后,对大鼠经行腹腔麻醉并采用腹腔动脉采血的方法经行采血。

然后将血样一部分取到加有血液抗凝剂的采血管中充分摇匀，然后参照下表对其进行血液指标检查。

另一部分取到未加有血液抗凝剂的采血管中，进行离心分离后取上清液参照表中的血液指标经行检测。

等称重并计算脏器系数，然后将全部脏器组织以10%甲醛固定，石蜡包埋，进行
2.4蓄积性试验
2.4.1蓄积系数法
取健康小鼠40只, 雌雄各半, 每天用1/10(LD)剂量配成0.2m1/ 10g 水溶液灌胃一次, 至动物死亡数达一半。

2.4.2二十天试验
取昆明小鼠5 0只, 雌雄各半, 随机分成五组, 各剂量组配成0.2 m l/ 10g 的水溶液, 每天灌胃一次, 连续20天, 观察各组死亡情况.,外观行为,呼吸,饮食情况,粪便。

2.5遗传毒理学(致突变作用)研究
由于急性毒性试验结果有其局限性,不能反应出受试物对人类潜在的危害性"所以尽管茶儿茶素制剂作为保健食品己通过急性毒性试验,仍需要进一步考察
其遗传毒性"遗传毒性研究主要是对致突变作用进行测试的研究"以致突变试验来定性表明受试物是否有突变作用或潜在的致癌作用"突变是细胞的遗传物质发生改变所引起的一种生物学现象"发生变化的遗传物质在细胞分裂繁殖过程中可被传递到后代细胞,使后代细胞及生物具有新的特性"能引起生物细胞发生突变
的物质称为致突变物"致突变性也认为是致突然变异性,是指细胞或个体诱发突
然变异,发生细胞遗传因子变化的现象"在毒性试验中,如果食物中某种物质能引起某些动物或人体细胞发生突变,不论其性质如何,均认为是一种毒性表现,应在
食品中严格控制致突变试验的基本原理是将受试物与一种生物系统相接触,观察该生物系统是否发生突变现将茶儿茶素制剂遗传毒性的研究方法。

2.5.1 Ames试验
TA97a、TA98、TA100、TA102标准菌株采用常规平板掺入法。

顶层分别加入各种浓度TP 0.1ml,Sq混合液0.5ml,0.5mmol/L组氨酸/生物素0.2ml试验菌液0.l ml, 均匀倒于底层。

每一测试, 作三皿重复, 37 ℃,48小时,观察结果。

以双蒸水作阴性对照, 四环素( 2 A F ) 作阳性对照。

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