志贺菌及三糖铁原理
三糖铁琼脂试验原理及结果对照
三糖铁琼脂试验原理及结果对照
1.原理分析
本培养基适合于肠杆菌科的鉴定。
用于观察细菌对糖的利用和硫化氢（变黑）的产生。
该培养基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例为10:10:1，只能利用葡萄糖的细菌，葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。
而发酵乳糖的细菌(e.coli)，则产生大量的酸，使整个培养基呈现黄色。
如培养基接种后产生黑色沉淀，是因为某些细菌能分解含硫氨基酸，生成硫化氢，硫化氢和培养基中的铁盐反应，生成黑色的硫化亚铁沉淀。
2.试验方法
以接种针挑取待试菌可疑菌落或者纯造就物穿刺接种并涂布于斜面置36±1℃造就18-24h观察结果
3.化学性质
粉红色粉末，一种鉴别培养基，由牛肉膏、酵母菌膏、卵白胨、胨、葡萄糖、乳糖、蔗糖、硫酸亚铁、氯化钠、硫代硫酸钠、酚红、琼脂等配合制造而成。
易吸湿，加水煮沸熔解后成橘红色半透明液体，pH约7.5，冷至45℃开始凝固。
4.结果
志贺氏菌都能分解葡萄糖，产酸不产气，大多不发酵乳糖，不产
1
生H2S。
大肠杆菌，能分解葡萄糖产酸产气，大多数能分解乳糖，不产生H2S。
沙门氏菌，能分解葡萄糖，不发酵乳糖，大多数产生H2S，多数产气。
2——志贺氏菌3——沙门氏菌4——大肠杆菌
2。
一株三糖铁反应似志贺菌属血清学交叉的产毒型大肠埃希菌
疗 效果也能够达到令人满意的效果。但是就镜下注射给药而言 ，许多文 献指出此种方法存在术后容易出现并发症的情 况 ，尚需观察 。
综上 所述 ，对于上 消化道 出血 的检查 和治疗 ，电子胃镜不但是 此
类疾病检查 的首选途径 ，镜 下治疗 也能够达到令 人满意的效果 。值 得
在临床上加以推广和应用。 参考文献
有准确率高、诊断方便且费用较低的特点，而且对于存在多个出血点 的患者，还能够进行准确的找出并进行治疗。在进行胃镜的检查和治
疗时 ，应 当注意在 内镜进入 的过程 中应 当缓慢 、轻柔 ，防 止患者 由于 反射而 引起再次 出血 ，而 且对于不易通过 的地 方应当放慢进 度 ，要求 患者进行 吞咽配合 ，切忌暴 力通过对患者 的黏 膜造成不必要 的损伤 。
在溃疡并合并活动性出血８例，食管静脉曲张患者２ 例。具体统计见 ９ ０
表１ 。以上患者在接受 治疗后均 能治 愈出院 ，总有 效率 １０ ０％。具 体统 计见表２ 。随访 １６ 月，无复发或并发症 出现 。 ￣个 ３讨 论 目前在临床上 胃镜检查是作为 上消化道 出血确诊 的首选方法 ，具
到防止胃 内容物对检查视野干扰的现象 。
由于上消化道出血的原因主要是由于消化道溃疡以及胃黏膜急性病
变所引起 的，所￣ｘ于此类疾病的镜下治疗较一般用药治疗而言具有着 Ａｑ － 相 当的优势。通过镜下止血 、喷洒药物等方式 ，能够做 到在检查的同时
进行治疗 ，而且较保守口服给药而言能够使药物直接针对病变部位 ，治
的具体情况进行分析用药 。治疗结束后缓缓向后使用这种方法 ，这 是由于洗 胃液 能够刺 激 ０ 患者的消化道黏 膜 ，一些没有完 全愈合的溃疡 或活动性出血部位 很可 能 由于药液 的刺 激而加重 出血 现象 ，同时也可 能造成 患者气管灌入 的 情况 。所 以可 以建 议患者 在进行检查 前保持 禁食 １ｈ ２ 以上 ，也能够 起
志贺菌及三糖铁原理[详细讲解]
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00000000志贺氏菌的检验发布日期：2010-09-01 浏览次数：4375 000000000核心提示：一、增菌称取检样25g，加入装有225mLGN增菌液的500mL广口瓶内，固体食品用均质器以8000-10000r/min打碎1min，或用0000000000一、增菌称取检样25g，加入装有225mLGN增菌液的500mL广口瓶内，固体食品用均质器以8000-10000r/min打碎1min，或用乳钵加灭菌砂磨碎，粉状食品用金属匙或玻璃棒研磨使其乳化，于36℃培养6～8h。
0000000000培养时间视细菌生长情况而定，当培养液出现轻微混浊时即应中止培养。
000000000二、分离和初步生化试验000000000取增菌液1环，划线接种于HE琼脂平板或SS琼脂平板1个；另取1环划线接种于麦康凯琼脂平板和伊红美蓝琼脂平板各1个，于36℃培养18～24h。
000 0000000志贺氏菌在这些培养基上呈现无色透明不发酵乳糖的菌落。
0000000000附：HE琼脂平板原理及照片00000000SS平板原理及照片00000000麦康凯琼脂平板照片00000000伊红美蓝琼脂平板照片000000000在沙门氏菌的检验中，有时也使用HE、SS平板进行初步筛选。
00000000 0SN 0332-94 出口食品中沙门氏菌(辛酯酶荧光)检验方法000000000挑取平板上的可疑菌落，接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体各1管。
一般应多挑几个菌落，以防遗漏，经36℃培养18～24h，分别观察结果。
0000000000附：葡萄糖半固体原理及结果。
00000000三糖铁琼脂现象及原理分析00000000下述培养物可以弃去：a. 在三糖铁琼脂斜面上呈蔓延生长的培养物；b. 在18～24h内发酵乳糖、蔗糖的培养物；c. 不分解葡萄糖和只生长在半固体表面的培养物；d. 产气的培养物；e. 有动力的培养物；f. 产生硫化氢的培养物。
三糖铁琼脂培养基原理
三糖铁琼脂培养基原理一、前言三糖铁琼脂培养基是常用的微生物培养基之一，其主要成分包括葡萄糖、乳糖和蔗糖，以及铁盐和琼脂。
三糖铁琼脂培养基可以用于检测肠道杆菌科细菌的产气能力，也可以用于肠道杆菌科细菌的鉴定。
本文将对三糖铁琼脂培养基的原理进行详细阐述。
二、原理1.三种碳源三糖铁琼脂培养基中含有三种碳源：葡萄糖、乳糖和蔗糖。
这三种碳源在微生物培养中起到提供能量和碳源的作用。
不同种类的微生物对不同的碳源有不同的利用方式，因此在含有多种碳源的培养基中可以筛选出特定微生物。
2.铁盐三糖铁琼脂培养基中还含有铁盐，其作用是促进肠道杆菌科细菌产生黑色素。
肠道杆菌科细菌通常具有产生黑色素的能力，这是由于其酪氨酸代谢途径中的酪氨酸酶作用于酪氨酸时产生的黑色素。
铁盐可以促进黑色素的生成，从而使得肠道杆菌科细菌在培养基上呈现出黑色。
3.琼脂琼脂是一种天然高分子物质，可以在水中形成胶体溶液。
在三糖铁琼脂培养基中，琼脂的作用是将培养基凝固化。
凝固化后的培养基可以提供微生物生长所需的支撑和营养物质。
4.碱性pH三糖铁琼脂培养基通常具有碱性pH值（约为7.4），这是为了保证肠道杆菌科细菌能够正常生长。
肠道杆菌科细菌通常在肠道内生长，而肠道环境呈碱性，因此在含有碱性pH值的培养基中可以更好地模拟肠道内环境。
三、使用方法1.制备制备三糖铁琼脂培养基需要将葡萄糖、乳糖和蔗糖溶解在水中，加入适量的铁盐和琼脂，调节pH值至7.4左右，然后加热至完全溶解。
最后将培养基分装到培养皿中，待凝固后即可使用。
2.使用使用前需要进行无菌处理，然后接种待测微生物。
在肠道杆菌科细菌的鉴定中，可以观察培养基上是否有黑色素生成以及细菌形态等特征来进行鉴定。
四、总结三糖铁琼脂培养基是一种常用的微生物培养基，其主要成分包括三种碳源、铁盐和琼脂。
通过添加铁盐和调节pH值可以促进肠道杆菌科细菌产生黑色素，并且含有碱性pH值可以更好地模拟肠道内环境。
制备三糖铁琼脂培养基需要注意无菌操作，并且在使用时需要注意观察特征来进行微生物鉴定。
志贺菌
志贺菌的抵抗力
本菌对理化因素的抵抗力较其他肠道杆菌 为弱。对酸敏感，在外界环境中的抵抗力能 以宋内氏菌最强，福氏菌次之，志贺氏菌最 弱。一般56～60℃经10分钟即被杀死。在 37℃水中存活20天，在冰块中存活96天，蝇 肠内可存活9～10天，对化学消毒剂敏感，1% 石碳酸15～30GN增菌液 培养条件：36±1℃ 6—8h 当培养液出现轻微混浊即中止培养。 操作： 称取检样25g，加入装有225mLGN增 菌液的500mL广口瓶内，固体食品用均质器 以8000～10000r/min打碎1min，或用乳钵加 灭菌砂磨碎，粉状食品用金属匙或玻璃棒研 磨使其乳化，于36℃培养6～8h。培养时间 视细菌生长情况而定，当培养液出现轻微混 浊时即应中止培养。
细菌性痢疾是最常见的肠道传染病,夏秋两 季患者最多。传染源主要为病人和带菌者,通 过污染了痢疾杆菌的食物、饮水等经口感染。
志贺氏菌引起的细菌性痢疾，主要通过消化 道途径传播。根据宿主的健康状况和年龄， 只需少量病菌（至少为10个细胞）进入，就 有可能致病。人类对志贺氏菌易感，10～200 个细菌可使10～50%志愿者致病。
2.所致疾病 传染源是病人和带菌者. 传播途径主要为粪一口.人类对志贺氏菌较易 感. 痢疾志贺菌引起病情较重;宋内志贺菌多引起 轻型感染;福氏志贺菌感染易转变为慢性,病程 迁延;福氏和宋内志贺菌是我国常见的流行型 别.
3.临床感染类型 (1)急性菌痢 局部症状有脓血便,腹痛,里急后 重. 急性中毒性菌痢,以小儿多见,无明显的消化道 症状,主要表现全身严重的中毒症状.各型志贺 菌都有可能引起.临床主要有高热,神志障碍,休 克,病死率较高. (2)慢性菌痢 病程>2月,迁延不愈,局部症状为 主. 4.病后建立的型特异免疫(SIgA)短暂,不持久, 无交叉
三糖铁琼脂实验操作方法
三糖铁琼脂实验操作方法三糖铁琼脂实验是一种检测某些细菌对特定碳源利用能力的方法。
该实验基于细菌在铁琼脂培养基上对三糖（葡萄糖、乳糖和蔗糖）进行代谢，产生酸或气体的能力来进行鉴定。
以下是三糖铁琼脂实验的操作方法：材料准备：- 铁琼脂培养基：根据实验需要配制铁琼脂培养基。
- 细菌培养物：根据实验目的选择需要测试的细菌菌种。
- 试管：用于培养细菌的试管。
- 火焰：用于试管的无菌操作。
- 硅胶套：用于封闭试管。
- 高温灭菌器：用于高温灭菌培养基和装备。
- 高压灭菌器：用于高压灭菌培养基和装备。
实验操作步骤：1. 准备培养基：根据实验需要配制铁琼脂培养基。
将琼脂粉溶解于适量的蒸馏水中，加热并搅拌至溶解，然后将溶液倒入试管中。
让琼脂凝固并冷却后，将试管加盖，用高温灭菌器在121C高温下灭菌20分钟。
2. 培养细菌：选择需要测试的细菌菌种，从保存的培养物中提取适量的菌液接种至铁琼脂培养基试管中。
在无菌操作条件下，使用火焰先消毒试管口，然后加入适量的菌液，接种均匀。
3. 菌液的阶梯稀释：为了测试不同细菌菌落对三糖的代谢能力，可以通过稀释法进行不同浓度的试验。
将菌液均匀接种于不同含量的铁琼脂培养基试管中，再次进行高温灭菌处理。
4. 增强反应：可通过在培养基中加入某些物质来增强菌株对三糖的代谢反应，如氯化钠等。
根据实验需要，选取适量的增强物质加入铁琼脂培养基试管中。
5. 检测结果：将加入不同菌株的铁琼脂培养基试管培养在适宜的温度和环境下，观察菌落形态，记录菌落的颜色、透明度和产生的气体情况。
鉴定菌株对三糖的代谢能力。
实验注意事项：1. 灭菌：三糖铁琼脂实验中的培养基、试管和装备都需要进行灭菌处理，确保实验环境无菌。
2. 无菌操作：在菌液接种时和取样时，需要进行无菌操作，使用火焰烧毁菌液和取样器具。
3. 温度控制：根据细菌菌种的生长要求，将实验培养基试管放置在温度适宜、通风良好的环境下进行培养。
4. 观察记录：观察菌落的形态、颜色、透明度和产生的气体情况，及时记录实验结果。
食品微生物复习资料大全
食品微生物复习资料大全第一章绪论1、食品的卫生标准内容包含什么？感官指标.理化指标.微生物指标2 对食品进行微生物检验具有何意义？（一）有害微生物对人类与生产的影响：1）. 引起食品变质.2）. 引起食物中毒.3）导致人体患病(二) 食品微生物检验的意义1）. 是衡量食品卫生质量的重要指标,也是判定被检食品能否食用的科学根据品能否食用的科学根据.2）. 能够推断食品加工环境及食品卫生的情况,为卫生管理工作提供科学根据管理工作提供科学根据.3）. 能够有效地防止或者减少食物中毒与人畜共患病发生4）.保证产品的质量,避免不必要的缺失.3、食品微生物检验的范围包含什么？范围：1). 生产环境的检验2). 原辅料的检验3). 食品加工、储藏、销售储环节的检验4). 食品的检验（重点）4、食品卫生标准中的微生物指标有什么？1. 菌落总数2. 大肠菌群3. 致病菌4. 霉菌及其毒素5. 其他指标1、在微生物实验室中如何配置培养箱,使用中要注意什么问题?培养箱的配置与使用培养箱的配置与使用配置：22（℃）、30（℃）、37（℃）培养箱各一个使用注意事项：(1)箱内不能放入过热或者过冷的物品，取放物品时应快速进行并做到随手关闭箱门。
(2)内放一杯水，以保持湿度。
(3)培养物不能放在最底层，也不得放置过于拥挤。
(4)每月消毒一次，先用3%的来苏尔液涂布消毒，再用清水擦净。
(5)不得当烘箱使用。
2 在微生物实验室中如何配置水浴锅, 使用中要注意什么问题?使用注意事项：（1）37 ℃与42 ℃水浴锅24小时工作;（2）其余水涡锅用后关掉电源；（3）水浴锅内应注加蒸馏水而非自来水，使用时请注意水位。
配置：37 ℃、42 ℃、56 ℃各一个3 如何正确使用超净台?1）、使用前先打开紫外灯照射紫外线照射时间40~60分钟；2）、使用中，有机玻璃罩受到污染，严禁用酒精棉球擦拭,请用含水棉布檫拭；3）、请保持超净台整洁，不要堆积杂物；4）、使用完毕，勿忘关闭煤气开关或者酒精灯；5）、请做好使用记录。
微生物检验技术初级师专业实践能力-试卷3_真题(含答案与解析)-交互
微生物检验技术初级（师）专业实践能力-试卷3(总分78, 做题时间90分钟)1. A1型题1.采集浴盆微生物检测样品时的采样部位和采样布点分别是SSS_SINGLE_SELA 浴盆底部，呈梅花布点B 浴盆底部，呈直线布点C 浴盆四壁及盆底，呈梅花布点D 浴盆相对两侧壁，呈梅花布点E 任意位置分值: 2答案:C解析：采样点在浴盆四壁及盆底，呈梅花布点，选择在盆内侧壁1／3至1／2高度。
2.过硫酸铵在聚丙烯酰胺凝胶制备中的作用是SSS_SINGLE_SELA 控制分子筛孔径B 催化聚合C 提高电泳速度D 便于电泳结束后凝胶与玻璃板的剥离E 促进样本快速进入凝胶分值: 2答案:B3.按照我国医疗机构水污染物排放标准(GB18466—2005)的规定，医疗机构污泥中的蛔虫卵死亡率要求达到SSS_SINGLE_SELA ＞80％B ＞85％C ＞90％D ＞95％E ＞99％分值: 2答案:D4.医疗机构污水微生物检测样品最长的保存时间是SSS_SINGLE_SELA 2小时B 4小时C 6小时D 8小时E 12小时分值: 2答案:C5.参照GB18466一-2005《医疗机构水污染排放标准》检测医疗机构污水微生物时的采样体积是SSS_SINGLE_SELA 100mlB 200mlC 500mlD 800mlE 1000ml分值: 2答案:B解析：检测医疗机构污水中的粪大肠菌群、沙门菌、志贺菌和结核杆菌时样品的采集量都是200ml。
6.在检测医疗机构污水总余氯指标的样品采集时，错误的是SSS_SINGLE_SELA 所检样品需在医疗机构污水最终排放口处采集B 样品采集后应避免强光C 样品中的悬浮性固体对检测结果没有影响，不用去除D 被测样品的温度应在15—20℃E 如样品温度过低，应现将样品在温水中水浴，使其温度升至要求的温度后，再测定数值分值: 2答案:C解析：样品中的悬浮性固体对检测结果有影响，为了避免影响，可用离心机离心分离，弃去悬浮物沉淀。
沙门氏菌的练习题
学号：312013211018 姓名：刘从斌1、什么是食物中毒？其常见的引起食物中毒的原因有哪些种类？（1）概念：指摄入了含有生物性、化学性有害物质的食品或把有毒有害物质当作食品摄入后出现的非传染性的急性、亚急性疾病。
（2）①食用病畜禽的肉制品食品；②病畜禽、带菌人和动物使食品受污染；③用不洁净水处理食品。
2、沙门氏菌的主要形态特征有哪些？①革兰氏阴性短杆菌，无芽孢，一般无荚膜，除鸡沙门氏菌和雏沙门氏菌以外，都有周身鞭毛，运动力强。
②在普通营养琼脂上生长良好，菌落中等大小，无色半透明、圆形、光滑、湿润。
3、人类沙门氏菌感染的临床类型主要有哪三类？①伤寒型：由伤寒、副伤寒沙门氏菌引起；②败血症型：最常由猪霍乱、鼠伤寒和肠炎沙门氏菌引起；③胃肠炎型：主要由沙门氏菌I的各种血清型引起，最常见的是沙门氏菌食物中毒和感染性腹泻，是由沙门氏菌在食品中大量繁殖，侵入肠道后继续繁殖并释放大量肠毒素，引起剧烈胃肠炎。
4、沙门氏菌检验流程的主要操作要点？（1）前增菌：称取25 g （mL ）样品放入盛有225 mL BPW 的无菌均质杯中，以8 000 r/min～10 000 r/min 均质。
1 min～2 min，或置于盛有225 mL BPW 的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min。
若样品为液态，不需要均质，振荡混匀。
如需测定pH 值，用1 mol/mL 无菌NaOH 或HCl 调pH至6.8±0.2。
无菌操作将样品转至500 mL 锥形瓶中，如使用均质袋，可直接进行培养，于3℃±1 ℃培养8 h～18h。
如为冷冻产品,应在45 ℃以下不超过15 min,或2 ℃～5 ℃不超过18 h 解冻。
（2）增菌：轻轻摇动培养过的样品混合物，移取1 mL，转种于10 mL TTB 内，于42 ℃±1 ℃培养18 h～24h 。
同时，另取1 mL，转种于10 mL SC 内，于36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。
三糖铁培养基实验的原理
三糖铁培养基实验的原理
三糖铁培养基实验是一种鉴别大肠杆菌和沙门氏菌的常用方法。
它是建立在分析不同菌株对不同糖类的反应上的。
第一步是制备三糖铁培养基，其主要成分包括葡萄糖、乳糖、蔗糖和铁盐等。
制备过程中需要注意，需为无菌状态。
将制备好的三糖铁培养基加入培养皿中，然后在无菌条件下冷却。
接下来是检测菌株的反应。
在无菌试验过程中，将待测菌株各自接种到三糖铁培养基中，然后在适宜的温度下培养。
这一步骤可以通过传统的涂布技术或者其他相关的技术实现。
之后，我们需要观察目标细菌用三糖铁培养基的反应情况。
如果在制备的培养基中出现红色沉淀物，则说明该菌株是沙门氏菌，而不是大肠杆菌。
这是因为当沙门氏菌代谢三种糖时，会产生醛酮酸，在热的条件下，醛酮酸和铁盐会反应生成特殊的沉淀物，从而导致检测结果呈现红色的情况。
反之，如果没有出现红色沉淀物，则说明该菌株是大肠杆菌，因为大肠杆菌无法代谢蔗糖，所以不会产生醛酮酸，从而不会反应生成这种沉淀物。
除了以上两种情况，还可能会出现一种情况，就是无任何沉淀物的情况。
这种情况可能是由于培养基本身存在问题，导致检测结果出现了误差。
总结来看，三糖铁培养基实验的原理是通过检测不同菌株对三种糖的反应，然后根据反应情况来鉴别大肠杆菌和沙门氏菌。
这一方法简单易行，而且检测结果准确性高，具有广泛的实际应用价值。
三糖铁培养基原理
三糖铁培养基原理
三糖铁培养基是一种微生物培养基，其主要组成为三种不同的糖类和铁盐。
正是由于
这些成分的特殊性质，使得三糖铁培养基成为了一种较为优秀的微生物分离和鉴定的方法。
下面来详细介绍一下三糖铁培养基的原理。
首先是糖类成分。
三糖铁培养基中的三种糖类为葡萄糖、乳糖和蔗糖。
它们被作为基础纳入到培养基的
配方中，是为了提供其它生物合成所需的碳源。
由于不同的微生物在碳源的利用能力上存
在一定的差异，所以三种不同的糖类能够使得不同类型的细菌在培养基上显示出不同的特征。
其次是铁盐成分。
在三糖铁培养基中，铁盐是一种极为重要的组成部分。
铁元素在微生物代谢中发挥着
关键作用，能够参与多种代谢途径中的酶催化过程。
而且，铁还能够影响微生物的致病能
力和病原性。
三糖铁培养基中的铁盐用于提供微生物生长所需的铁元素，也被用于判定微
生物氧气需求量、分泌抗菌物质能力以及染色体颜色等特征。
三糖铁培养基的原理总体来说就是在糖类和铁盐的作用下，通过微生物的代谢产物、
外观形态、染色等途径对不同微生物进行分离和鉴定。
当然，具体的操作方法还需要根据
实验情况进行相应的调整。
细菌常见的生化反应试验
细菌常见的生化反应试验（一）什么是生化试验?指通过利用生物化学的方法来测定微生物的代谢产物、代谢方式和条件等来鉴别细菌的类别、属种的试验。
生化试验或称生化反应：细菌的酶不完全相同，对营养物质的分解能力不一致，因此其代谢产物各异。
在培养基中加入可与被测终产物反应的指示剂，产生肉眼可见的变化，如颜色的改变等，利用生化方法来鉴定细菌的试验，统称为细菌的生化试验或称生化反应（二）生化试验的方法：1在培养物中加入某种底物与指示剂,经接种、培养后,观察培养基的pH值变化。
2在培养物中加入试剂，观察它们同细菌代谢产物所生成的颜色反应。
3根据酶作用的反应特性，测定酶的存在。
4根据细菌对理化条件和药品的敏感性，观察细菌的生长情况。
（三）生化试验的注意事项1.待检菌应是新鲜培养物，培养18~24h。
2.待检菌应是纯种培养物。
3.遵守观察反应的时间。
观察结果的时间，多为24或48小时。
4.应做必要的对照试验。
5.提高阳性检出率，至少挑取2~3待检的疑似菌落分别进行试验。
（四）检验细菌的生化试验范围:1、糖（醇）类代谢试验 2、氨基酸和蛋白质代谢试验3、有机酸盐和铵盐的利用试验 4、呼吸酶类试验 5、毒性酶类试验二、糖醇类代谢试验（一）糖醇类发酵试验（二）葡萄糖氧化发酵（O/F）试验（三）V-P试验（四）甲基红（Methyl Red）试验MR（五）七叶苷水解试验（六）甘油品红试验（一）糖醇类发酵试验1、原理：不同的细菌对各种糖醇的分解能力及所产生的代谢产物各不同，有的能分解多种糖(醇)，有的只能分解1~2种糖(醇) ，有的分解糖(醇)能产酸产气，有的分解糖(醇)只产酸不产气，根据这些特点，可鉴别细菌。
常用的糖醇单糖：葡萄糖、甘露糖醇、木糖、半乳糖鼠李糖双糖：乳糖、蔗糖、麦芽糖、蕈糖三糖：棉子糖多糖：菊糖、肝糖、淀粉醇类：甘露醇、山梨醇、肌醇、卫茅醇2试验方法：用接种针或环移取纯培养物少许，接种于糖发酵管中，若为半固体培养基，则用接种针作穿刺接种。
食品中志贺氏菌检验
20g 0.4% 溴麝香草芬兰钠溶液16ml 乳糖12g 氯化钠5g 蔗糖12g 琼 脂20g 甲液20ml HP7.5 ❖ 制法：将蛋白胨、乳糖、水杨素、氯化钠、蔗糖、牛肉膏、胆盐等溶 解于400ml蒸馏水中作为基础液；加琼脂与600ml蒸馏水中，加热溶 解。加入甲液乙液与基础液中，校正HP,再加指示剂。并与琼脂液合 并，冷却，倾注平板，
❖ 7.镜检 从三塘铁琼脂和半固体各一管中挑取生长出来的 菌落，进行革兰氏染色，然后放在显微镜下观察。
❖ 8.结果报告
五． 注意事项
1、志贺菌在常温存活期很短。因此，当样品采集后， 应尽快进行检验。如果在24h内检验，样品可保存在 冰箱内，入欲保存较长时间，必须放在低温冰箱内。 2、迄今没有很好的曾菌培养基。目前仍然认为用GN 肉汤曾菌检查食品中和粪便中的志贺菌是有效的。
注意事项
3、增加鉴别培养基的数目，可以增加志贺菌的 阳性检出率。用于分离的鉴别培养基一般不少于 两个。中等选择性的，HE或SS琼脂平板一个； 弱选择性的。麦康凯或EMB琼脂平板一个。WS 琼脂可作为中等选择性培养基使用，FX琼脂可作 为弱选择性培养基使用。 4、动力的观察非常重要。挑取可疑菌落，除接 种一支三糖铁琼脂外，还要接种一支半固体琼脂。
实验结果
志贺菌在培养基上呈现无 色透明不发酵乳糖的菌落
志贺菌在三糖铁琼脂中底沉产酸，不 产气，斜面产碱，不产生硫化氢 无 动力在，在半固体管内沿穿刺线生长。
实验结果
纹和水珠 ❖ 对试管、玻璃棒、移液管、锥形瓶、烧杯、培养皿进行包
扎：要将报纸裁成5-10公分，成30°卷起，结尾处向上折 叠即。
食品中常检病原微生物的检验技术
3. 外毒素：此与霍乱弧菌、ETEC产生的毒素相同。 其作用有三：①肠毒素性：引起早期的水样腹泻；
②细胞毒性，对Vero细胞、Hela细胞、血管内皮细胞、 肾小管内皮细胞、人肝细胞均有毒性；③神经毒性或致 死毒性：注入家兔可使其麻痹、死亡。
整理ppt
二、检验程序
HE琼脂或SS
检样
25g+GN 225mL
整理ppt
5）在鲜血琼脂平板上生长，有些菌株可见β溶血环。 6）在远藤琼脂上长成带金属光泽的红色菌落 7）在S．S琼脂平板上多不生长，少数生长的细菌，
也因发酵乳糖产酸而形成红色菌落； 8）在伊红美兰琼脂上形成紫黑色具有金属光泽的菌
落 9）在麦康凯琼脂上培养24小时后孤立菌落呈红色
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埃希氏菌在S．S琼脂平板上形成红色菌落
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4
二、沙门菌检验
（一）检验所需器材与培养基
1、器材 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 冰箱（2℃~5℃），恒温培养箱(36±1℃、42±1℃)， 均质器， 振荡器，电子天平（感量0.1g），全自动微生物生化鉴定系统等。 2、培养基 缓冲蛋白胨水（BPW），四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液，亚硒酸 盐胱氨酸（SC）增菌液，亚硫酸铋（BS）琼脂，HE琼脂，木糖赖氨 酸脱氧胆盐（XLD）琼脂，沙门氏菌属显色培养基，三糖铁（TSI） 琼脂等。
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第三节志贺菌检验
学习目的与要求
1. 掌握志贺菌的主要生物学特性、 检验程序和检验方法。 2. 了解志贺菌的致病性。 3. 了解其他肠道杆菌。
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一、生物学特性
（一）培养特性：
需氧或兼性厌氧菌，最适温度37℃，pH6.4~7.8，在普通琼脂培 养基和SS平板上，形成圆形、微凸、光滑湿润、无色半透明、边缘 整齐、中等大小的菌落，半透明的光滑型菌落。宋氏致贺菌菌落较 大，较不透明，粗燥而扁平，在SS平板上可迟缓发酵乳糖，菌落呈 玫瑰红色。在肉汤中呈均匀混浊生长，无菌膜。
三糖铁实验原理
三糖铁实验原理“三糖铁实验原理”又称为“三糖铁试验原理”，是一种在化学分析中应用广泛的实验方法，主要用于检测铁的存在和浓度以及分析物质中的还原物质含量等。
其基本原理是利用三糖对铁盐的还原作用，从而使铁离子还原成元素铁，形成蓝色络合物。
以下是三糖铁实验的详细步骤：1.制备三糖试剂三糖试剂是实验的核心之一，它是由三个单糖组成的混合物。
首先需要分别制备葡萄糖水溶液、果糖水溶液和半乳糖水溶液，最后将三个水溶液混合制成三糖试剂。
三糖试剂应制备新鲜使用，不能置放过久，否则实验结果将会产生误差。
2.制备铁盐和还原剂在实验前需要准备含铁的化合物，如FeSO4、FeCl2等铁盐。
此外，还需要制备还原剂，常用的还原剂有氨水和亚硫酸氢钠，这些化合物都能对铁离子产生还原作用。
3.实验操作将铁盐溶液放在试管中，加入少量的还原剂，振荡混合至溶液变成浅绿色。
待盐酸稀溶液和三糖试剂分别加入试管中后，溶液颜色会逐渐变化，从绿色变成深蓝色。
深蓝色络合物的浓度和铁离子的浓度成正比，因此可以通过对深蓝色络合物的吸光度进行测量，计算出铁的浓度。
4.实验数据分析在完成实验后，需要对数据进行分析和总结，计算出铁的浓度和分析物质中的还原物质含量等。
一般情况下，使用紫外分光光度计可以对样品的吸收率进行检测，并根据标准曲线计算样品的浓度。
总的来说，“三糖铁实验原理”是一种简单而实用的化学分析方法，其基本原理易于理解，操作简单易行，可以在实验室和工业生产领域中广泛应用。
同时，它也为化学领域的研究和应用提供了一个有效的工具。
非无菌产品微生物限度检查中控制菌检查原理
⾮⽆菌产品微⽣物限度检查中控制菌检查原理⾮⽆菌药品微⽣物限度检查中控制菌检查及原理⼀、⼤肠埃希菌1.菌体特性⼤肠埃希菌属于肠杆菌科埃希菌属，菌体细胞两端钝圆，为⾰兰染⾊阴性⽆芽孢杆菌，细胞⼤⼩为1.1～1.5×2～6.0 µm。
周⾝鞭⽑、运动或不运动。
能形成荚膜和微荚膜。
最适⽣长温度37℃，可在15～46℃⽣长。
最适pH为7.4～7.6。
在营养⾁汤培养基中，37℃培养24⼩时后，形成菌膜，管底粘液状沉淀，培养物有粪臭味。
在伊红美兰琼脂（EMB）平板上，典型的菌落呈紫⿊⾊，有⾦属光泽，菌落扁平，低度凸起，光滑湿润。
也有呈粉红⾊、⽆⾦属光泽、中⼼紫⾊的菌落。
在麦康凯琼脂（MaCC）平板上，菌落扁平、圆形、光滑湿润。
呈桃红⾊、微红⾊或菌落中⼼桃红⾊。
2. ⽣化实验原理（1）MUG试验97％的⼤肠埃希菌含有β—葡萄糖醛苷酶，可分解4—甲基伞形酮β－D－葡萄糖苷酸，⽣成的4—甲基伞形酮在366nm紫外灯下产⽣蓝⽩⾊荧光。
（2）靛基质试验（I实验)有些细菌具有⾊氨酸酶，在蛋⽩胨⽔培养基中⽣长时，能分解蛋⽩胨中的⾊氨酸，⽣成靛基质（吲哚）。
靛基质⽆⾊，不能直接观察，加⼊靛基质试液（对⼆甲氨基苯甲醛试液），产成红⾊的玫瑰靛基质。
⾊氨酸酶活性的最适pH为7.4～7.8。
pH降低，靛基质产⽣减少，可能出现假阴性或弱阳性反应，故培养基pH应为7.4～7.6 。
因产⽣靛基质的细菌都能发酵糖类⽽产酸，增加培养基的酸度，不宜⽤含葡萄糖的培养基进⾏此试验。
（3）甲基红试验（M）肠杆菌科细菌均可发酵葡萄糖产⽣酸性代谢产物，使培养基pH值下降，最初可使甲基红指⽰液［变⾊域pH4.5－5.4（红→黄）］变⾊⽽呈现阳性反应。
但继续培养后，产⽓杆菌能将两分⼦的丙酮酸脱羧⽣成⼀分⼦的中性⼄酰甲基甲醇⽽使培养基pH值上升⾄5.4以上，使甲基红指⽰液变为桔黄⾊（甲基红试验阴性）。
⽽⼤肠埃希菌则继续产⽣⼤量的酸，如甲酸、⼄酸、乳酸、琥珀酸等，保持⾼氢离⼦浓度，故甲基红试验为阳性反应。
食品中志贺氏菌的检验
如培养基接种后产生黑色沉淀，是因为某些细菌能分解含硫氨基酸，生成硫化氢，硫化氢和培养基中的铁盐反应，生成黑色的硫化亚铁沉淀。
01
03
02
三糖铁琼脂原理分析：
答案：2－志贺氏菌 3－沙门氏菌 4－大肠杆菌
下述培养物可以弃去：
(3) 下述培养物可以弃去： a. 在三糖铁琼脂斜面上呈蔓延生长的培养物；(无鞭毛无动力) b. 在18-24h内发酵乳糖、蔗糖的培养物(不发酵乳糖,仅宋内志贺氏菌迟缓发酵乳糖)； c. 不分解葡萄糖和只生长在半固体表面的培养物；(分解葡萄糖,兼性厌氧) d. 产气的培养物；(分解葡萄糖产酸不产气) e. 有动力的培养物；(无动力) f. 产生硫化氢的培养物。(不产生硫化氢) 凡是乳糖、蔗糖不发酵，葡萄糖产酸不产气(福氏志贺氏菌6型可产生少量气体)，无动力的菌株，可做血清学分型和进一步的生化试验。
志贺氏菌的检验
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实验目的
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02
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检验志贺氏菌的方法很多，但食品卫生微生物检验具有法规性，检验必须采用国家标准规定的方法。近年来发展了许多快速检验的新方法，如技术等。我们下面介绍的方法即是国家标准规定的方法。要弄清检验原理，首先需要了解志贺氏菌的生物学特性。
内毒素：志贺氏菌属中各菌株都有强烈的内毒素，作用于肠壁，使通透性增高，从而促进毒素的吸收。继而作用于中枢神经系统及心血管系统，引起临床上一系列毒血症症状，如发热、神志障碍，甚至中毒性休克。毒素破坏粘膜，形成炎症、溃疡，呈现典型的痢疾脓血便。毒素作用于肠壁植物神经，使肠道功能紊乱，肠蠕动共济失调和痉挛，尤其直肠括约肌最明显，因而发生腹痛、里急后重等症状。
三糖铁琼脂试验原理
三糖铁琼脂试验原理
三糖铁琼脂试验是一种常用于鉴别肠出血的方法。
其原理是：将肠道分泌的血红蛋白和大肠杆菌等细菌经过肠道的作用后，会分解血红蛋白，生成氨基酸和类铁质体，类铁质体会进一步铁蛋白化而转化为亚铁离子。
在细菌代谢过程中，会产生亚硝酸根离子和酸性产物，酸性产物会使琼脂变色，亚硝酸根离子与亚铁离子结合后会使琼脂变成红色。
因此，若肠内容物经过三糖铁琼脂试验后变成红色，则说明是肠道产生亚硝酸根离子的细菌感染所致，可以作为肠出血的依据。
微生物检测课后习题
1.食品的卫生标准内容包括那些？感官指标、理化指标、微生物指标2.对食品进行微生物检验具有何意义？是衡量食品卫生质量的终于指标，也是判断被检食品是否能食用的科学依据；可以判断食品加工环境及食品卫生的情况，为卫生管理工作提供科学依据；可以有效地防止人畜共患病的发生；保证产品质量，避免不必要的损失3.食品微生物检验的范围包括那些？生产环境的检验；原辅料的检验；食品加工、储藏、销售等环节的检验；食品的检验4.食品卫生标准中的微生物指标有那些？菌落总数；大肠菌群；致病菌；霉菌及其毒素；其他指标菌落总数概念和测定意义1.什么是菌落总数？是指食品检验经过处理，在一定条件下培养后，所得1mL （g）或1cm2面积检样中所含菌落的总数2.测定食品、饮料等产品的菌落总数有什么意义？（1）判定食品被细菌污染的程度及卫生质量（2）预测食品存用的期限长短（3）了解细菌在食品中的繁殖3.画出平板倾注法测定菌落总数的示意图：步骤:检样—稀释处理—选择3个适宜稀释度—倒平板—培养—菌落计数—报告结果4.在测定菌落总数时，如何选择菌落进行计数？(1)选取菌落数在30-300之间的平板,若有两个稀释度均在30-300之间时,比值小于或等于2取平均数,比值大于2则取稀释度较低平板菌落数(2)如均大于300,,则取最高稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数报告(3)如均小于30,则以最低稀释度的平均菌落数乘稀释倍数报告(4)如菌落数有的大于300,有的又小于30,不再30-300之间,以最接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数报告(5)如所有稀释度均无菌落生长,则应按小于1乘以最低稀释倍数报告5.在菌落总数的检验中，要注意哪些事项？(1)对照平板出现几个菌落时,要追加对照平板(2)吸管进出瓶子或试管时,吸管口不得触及瓶口、管口的外围部分（3）吸管插入试样液内的深度不得小于2.5cm，调整时要使管尖与容器内壁紧贴（4）进行稀释时，吸管口不得与稀释液接触（5）检验从开始稀释到倾注最后一个平皿所用时间不宜超过20min（6）稀释倍数越高菌落数越少，如出现逆反现象，不可作为检样计数报告的依据。
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志贺氏菌的检验
发布日期：2010-09-01 浏览次数：4375
核心提示：一、增菌称取检样25g，加入装有225mLGN增菌液的500mL广口瓶内，固体食品用均质器以8000-10000r/min打碎1min，或用
一、增菌
称取检样25g，加入装有225mLGN增菌液的500mL广口瓶内，固体食品用均质器以8000-10000r/min打碎1min，或用乳钵加灭菌砂磨碎，粉状食品用金属匙或玻璃棒研磨使其乳化，于36℃培养6～8h。
培养时间视细菌生长情况而定，当培养液出现轻微混浊时即应中止培养。
二、分离和初步生化试验
取增菌液1环，划线接种于HE琼脂平板或SS琼脂平板1个；另取1环划线接种于麦康凯琼脂平板和伊红美蓝琼脂平板各1个，于36℃培养18～24h。
志贺氏菌在这些培养基上呈现无色透明不发酵乳糖的菌落。
附：HE琼脂平板原理及照片
SS平板原理及照片
麦康凯琼脂平板照片
伊红美蓝琼脂平板照片
在沙门氏菌的检验中，有时也使用HE、SS平板进行初步筛选。
SN 0332-94 出口食品中沙门氏菌(辛酯酶荧光)检验方法
挑取平板上的可疑菌落，接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体各1管。
一般应多挑几个菌落，以防遗漏，经36℃培养18～24h，分别观察结果。
附：葡萄糖半固体原理及结果。
三糖铁琼脂现象及原理分析
下述培养物可以弃去：
a. 在三糖铁琼脂斜面上呈蔓延生长的培养物；
b. 在18～24h内发酵乳糖、蔗糖的培养物；
c. 不分解葡萄糖和只生长在半固体表面的培养物；
d. 产气的培养物；
e. 有动力的培养物；
f. 产生硫化氢的培养物。
凡是乳糖、蔗糖不发酵，葡萄糖产酸不产气(福氏志贺氏菌6型可产生少量气体)，无动力的菌株，可做血清学分型和进一步的生化试验。
三、血清学分型
挑取三糖铁琼脂上的培养物，做玻片凝集试验。
先用4种志贺氏菌多价血清检查，如果由于K抗原的存在而不出现凝集，应将菌液煮沸后再检查；
如果呈现凝集，则用A1、A2、B群多价和D群血清分别试验。
如系B群福氏志贺氏菌，则用群和型因子血清分别检查。
福氏志贺氏菌各型和亚型的型和群抗原见表1。
可先用群因子血清检查，再根据群因子血清出现凝集的结果，依次选用型因子血清检查。
4种志贺氏菌多价血清不凝集的菌株，可用鲍氏多价1、2、3分别检查，并
进一步用1～15各型因子血清检查。
如果鲍氏多价血清不凝集，可用痢疾志贺氏菌3～12型多价血清及各型因子血清检查。
附：福氏志贺氏菌各型和亚型的型抗原和群抗原
四、进一步的生化试验
在做血清学分型的同时，应做进一步的生化试验，即：
葡萄糖铵
西蒙氏柠檬酸盐
赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶
pH7.2尿素
KCN生长
水杨苷和七叶苷的分解
除宋内氏菌和鲍氏13型为乌氨酸阳性外，志贺氏菌属的培养物均为阴性结果。
必要时还应做革兰氏染色检查和氧化酶试验，应为氧化酶阴性的革兰氏阴性杆菌。
生化反应不符合的菌株，即使能与某种志贺氏菌分型血清发生凝集，仍不得判定为志贺氏菌属的培养物。
已判定为志贺氏菌属的培养物，应进一步做
5%乳糖发酵
甘露醇
棉子糖
甘油的发酵
靛基质试验
志贺氏菌属4个生化群的培养物，应符合该群的生化特性。
但福氏6型的生化特性与A群或C群相似。
附：志贺氏菌属四个群的生化特性
五、结果报告：综合生化和血清学的试验结果判定菌型并作出报告。
编
三糖铁（TSI）琼脂试验的原理
发布日期：2010-05-13 浏览次数：2610
核心提示：试验方法：以接种针挑取待试菌可疑菌落或纯培养物，穿刺接种并涂布于斜面，置36±1℃培养18~24h，观察结果。
三
试验方法：以接种针挑取待试菌可疑菌落或纯培养物，穿刺接种并涂布于斜面，置36±1℃培养18~24h，观察结果。
三糖铁琼脂(TSI)成分：
蛋白胨 20.0g
牛肉膏 3.0g
乳糖 10.0g
蔗糖 10.0g
葡萄糖 1.0g
硫酸亚铁铵(含6个结晶水) 0.5g
酚红 0.025g或5g/L溶液5mL
氯化钠 5.0g
硫代硫酸钠0.5g
琼脂 12.0g
蒸馏水 1000.0mL
除酚红和琼脂外,将其他成分加入400mL蒸馏水中,搅拌均匀,静置约10min,加热煮沸至完全溶解,调至pH7.4±0.1。
另将琼脂加入600mL蒸馏水中,搅拌均匀,静置约10min, 加热煮沸至完全溶解。
将上述两溶液混合均匀后,再加入酚红指示剂,混匀,分装试管
(12mm×100mm),每管约2～4mL,高压灭菌121℃ 10 min或115℃15 min,灭菌后置成高层斜面,呈桔红色。
原理分析：本培养基适合于肠杆菌科的鉴定。
用于观察细菌对糖的利用和硫化氢（变黑）的产生。
该培养基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例为10:10:1，只能利用葡萄糖的细菌，葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。
而发酵乳糖的细菌(e.coli)，则产生大量的酸，使整个培养基呈现黄色。
如培养基接种后产生黑色沉淀，是因为某些细菌能分解含硫氨基酸，生成硫化氢，硫化氢和培养基中的铁盐反应，生成黑色的硫化亚铁沉淀。
微生物在培养基上的典型特征
2009-09-22 18:10:29| 分类：微生物学| 标签：|字号大中小订阅
金黄色葡萄球菌在BP琼脂上典型特征
金黄色葡萄球菌呈圆形, 表面光滑、凸起、湿润, 直径 2 ～3mm 。
灰黑色至黑色, 有光泽, 常有浅色( 非白色) 的边缘, 周围绕以不透明圈( 沉淀), 其外常有一清晰带( 卵磷脂环) 。
当用接种针触及菌落时具有黄油样粘稠感。
有时可见到不分解脂肪的菌株, 除没有不透明圈和清晰带外, 其他外观基本相同。
从长期贮存的冷冻或脱水食品中分离的菌落, 其黑色常较典型菌落浅些, 且外观可能较粗糙, 质地较干燥。
大肠菌群在结晶紫中性红琼脂(VRBA)上典型特征
典型菌落为紫红色, 菌落周围有红色的胆盐沉淀环。
菌落直径为0.5mm 或更大。
沙门氏菌在HE琼脂上典型特征
在37 ℃培养18-24 小时后，沙门氏菌、亚利桑那菌和变形杆菌为蓝绿色至蓝色、有或无黑色中心的菌落；大肠杆菌和大肠菌群为粉红色菌落，有沉淀环；，无色半透明有黑色中心或几乎全为黑色。
志贺氏菌和普罗菲登斯菌为绿色、湿润而隆起菌落。
大肠杆菌在伊红美蓝琼脂(EMB)上典型特征
大肠杆菌呈黑色中心,有或无金属光泽.
大肠菌群在去氧胆酸盐琼脂(DC)上典型特征
典型菌落为红色, 菌落周围有红色的胆盐沉淀环。
菌落直径为2-3mm 或更大。
沙门氏菌在SS琼脂上典型特征
沙门氏菌在37 ℃培养18-24 小时后，无色透明菌落有黑色中心；志贺氏菌呈无色透明菌落。
副溶血性弧菌在海博弧菌显色培养基上典型特征
典型副溶血性弧菌显蓝色至蓝绿色，霍乱弧菌和其它弧菌显无色。
霉菌在孟加拉红培养基上典型特征
霉菌在孟加拉红培养基上典型特征为灰色菌落，有黑色孢子。
李斯特氏菌在牛津琼脂(OXA agar)上典型特征
李斯特氏菌在35 ℃培养24-48 小时后，灰绿色菌落。
其外围。