志贺菌及三糖铁原理

志贺氏菌的检验

发布日期：2010-09-01 浏览次数：4375

核心提示：一、增菌称取检样25g，加入装有225mLGN增菌液的500mL广口瓶内，固体食品用均质器以8000-10000r/min打碎1min，或用

一、增菌

称取检样25g，加入装有225mLGN增菌液的500mL广口瓶内，固体食品用均质器以8000-10000r/min打碎1min，或用乳钵加灭菌砂磨碎，粉状食品用金属匙或玻璃棒研磨使其乳化，于36℃培养6～8h。

培养时间视细菌生长情况而定，当培养液出现轻微混浊时即应中止培养。

二、分离和初步生化试验

取增菌液1环，划线接种于HE琼脂平板或SS琼脂平板1个；另取1环划线接种于麦康凯琼脂平板和伊红美蓝琼脂平板各1个，于36℃培养18～24h。

志贺氏菌在这些培养基上呈现无色透明不发酵乳糖的菌落。

附：HE琼脂平板原理及照片

SS平板原理及照片

麦康凯琼脂平板照片

伊红美蓝琼脂平板照片

在沙门氏菌的检验中，有时也使用HE、SS平板进行初步筛选。

SN 0332-94 出口食品中沙门氏菌(辛酯酶荧光)检验方法

挑取平板上的可疑菌落，接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体各1管。一般应多挑几个菌落，以防遗漏，经36℃培养18～24h，分别观察结果。

附：葡萄糖半固体原理及结果。

三糖铁琼脂现象及原理分析

下述培养物可以弃去：

a. 在三糖铁琼脂斜面上呈蔓延生长的培养物；

b. 在18～24h内发酵乳糖、蔗糖的培养物；

c. 不分解葡萄糖和只生长在半固体表面的培养物；

d. 产气的培养物；

e. 有动力的培养物；

f. 产生硫化氢的培养物。

凡是乳糖、蔗糖不发酵，葡萄糖产酸不产气(福氏志贺氏菌6型可产生少量气体)，无动力的菌株，可做血清学分型和进一步的生化试验。

三、血清学分型

挑取三糖铁琼脂上的培养物，做玻片凝集试验。

先用4种志贺氏菌多价血清检查，如果由于K抗原的存在而不出现凝集，应将菌液煮沸后再检查；

如果呈现凝集，则用A1、A2、B群多价和D群血清分别试验。

如系B群福氏志贺氏菌，则用群和型因子血清分别检查。福氏志贺氏菌各型和亚型的型和群抗原见表1。可先用群因子血清检查，再根据群因子血清出现凝集的结果，依次选用型因子血清检查。

4种志贺氏菌多价血清不凝集的菌株，可用鲍氏多价1、2、3分别检查，并

进一步用1～15各型因子血清检查。如果鲍氏多价血清不凝集，可用痢疾志贺氏菌3～12型多价血清及各型因子血清检查。

附：福氏志贺氏菌各型和亚型的型抗原和群抗原

四、进一步的生化试验

在做血清学分型的同时，应做进一步的生化试验，即：

葡萄糖铵

西蒙氏柠檬酸盐

赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶

pH7.2尿素

KCN生长

水杨苷和七叶苷的分解

除宋内氏菌和鲍氏13型为乌氨酸阳性外，志贺氏菌属的培养物均为阴性结果。

。必要时还应做革兰氏染色检查和氧化酶试验，应为氧化酶阴性的革兰氏阴性杆菌。生化反应不符合的菌株，即使能与某种志贺氏菌分型血清发生凝集，仍不得判定为志贺氏菌属的培养物。

已判定为志贺氏菌属的培养物，应进一步做

5%乳糖发酵

甘露醇

棉子糖

甘油的发酵

靛基质试验

志贺氏菌属4个生化群的培养物，应符合该群的生化特性。但福氏6型的生化特性与A群或C群相似。

附：志贺氏菌属四个群的生化特性

五、结果报告：综合生化和血清学的试验结果判定菌型并作出报告。

编

三糖铁（TSI）琼脂试验的原理

发布日期：2010-05-13 浏览次数：2610

核心提示：试验方法：以接种针挑取待试菌可疑菌落或纯培养物，穿刺接种并涂布于斜面，置36±1℃培养18~24h，观察结果。三

试验方法：以接种针挑取待试菌可疑菌落或纯培养物，穿刺接种并涂布于斜面，置36±1℃培养18~24h，观察结果。

三糖铁琼脂(TSI)成分：

蛋白胨 20.0g

牛肉膏 3.0g

乳糖 10.0g

蔗糖 10.0g

葡萄糖 1.0g

硫酸亚铁铵(含6个结晶水) 0.5g

酚红 0.025g或5g/L溶液5mL

氯化钠 5.0g

硫代硫酸钠0.5g

琼脂 12.0g

蒸馏水 1000.0mL

除酚红和琼脂外,将其他成分加入400mL蒸馏水中,搅拌均匀,静置约10min,加热煮沸至完全溶解,调至pH7.4±0.1。另将琼脂加入600mL蒸馏水中,搅拌均匀,静置约10min, 加热煮沸至完全溶解。

将上述两溶液混合均匀后,再加入酚红指示剂,混匀,分装试管

(12mm×100mm),每管约2～4mL,高压灭菌121℃ 10 min或115℃15 min,灭菌后置成高层斜面,呈桔红色。

原理分析：本培养基适合于肠杆菌科的鉴定。用于观察细菌对糖的利用和硫化氢（变黑）的产生。该培养基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例为10:10:1，只能利用葡萄糖的细菌，葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。

而发酵乳糖的细菌(e.coli)，则产生大量的酸，使整个培养基呈现黄色。

如培养基接种后产生黑色沉淀，是因为某些细菌能分解含硫氨基酸，生成硫化氢，硫化氢和培养基中的铁盐反应，生成黑色的硫化亚铁沉淀。

微生物在培养基上的典型特征

2009-09-22 18:10:29| 分类：微生物学| 标签：|字号大中小订阅

金黄色葡萄球菌在BP琼脂上典型特征