紫杉醇的提取制备

紫杉醇浸膏的固液萃取纯化
本实验采用了石油醚（60~90℃）对浸膏进行固液萃取，结果如 图所示。
随石油醚用量的增加，萃取的杂质百分率也在增加，但当石 油醚的用量达到原始浸膏的5倍（mL/g）时，被萃出的杂质百分 数则不再有明显变化。 因此，采用为原始浸膏5倍体积的石油醚 进行固液萃取效果最佳。
紫杉醇浸膏的液-液萃取纯化
紫杉醇硅胶柱层析纯化
由于己烷沉淀法得到的样品中仍含有较多杂质，本试验采用了分 段梯度操作. 洗脱中以正己烷/丙酮作为流动相。 取1 g浸膏溶于5 mL 丙酮，加样于含15 g硅胶的层析柱，用正己 烷/丙酮（体积比为8∶2）洗脱，每5 mL 收集流份，不断减少流动相
中正己烷的含量，最终以正己烷/丙酮（体积比为5∶5）结束. 对所有
紫杉醇浸膏的己烷沉淀
紫杉醇有在正己烷中沉淀这一特性，所以向上述得到的紫杉醇 乙酸乙酯溶液中加入不同体积的正己烷溶剂，将紫杉醇沉淀下来，沉 淀效果如图所示。
当加入正己烷的量较小时，紫杉醇沉淀的量也小，在加入正己烷与 乙酸乙酯溶液体积比在6∶1 以上时，沉淀量几乎不再变化，但HPLC 测 定发现，体积比在10∶1 以下时，紫杉醇不能完全沉淀。 因此，正己烷 与乙酸乙酯溶液的体积比以10∶1 为好，加入量再大，不但对去除杂质 没有多少帮助，还会造成正己烷使用量过大，溶剂浪费。
紫杉醇是一种分子量很大，结构很复杂的化学物质。 目前，紫杉醇 的来源主要有以下几种：(1)天然红豆杉植物提取;（2）人工栽培;(3 ）半合成；（4）全合成；（5）生物合成；（6）真菌发酵；（7）植 物组织细胞培养。但更多的还是从天然和栽培红豆杉的树皮或枝叶中 直接提取得到。 其提取物中含有大量的植物腊、色素和树胶等杂质 ，特别是其中共存许多分子结构和理化性质与紫杉醇极其相近的紫杉 烷系列化合物，给分离工作带来很大的困难。 研究表明，紫杉醇有明显的抗肿瘤作用。对人体肿瘤MX-1乳腺癌、 CX-1结肠癌、LX-1肺癌异种移植均有明显的抑制作用。临床上主要用 于卵巢癌、也用于肺癌、恶性淋巴瘤、乳腺癌等。
高效液相色谱检测
将紫杉醇标准品和实验中制备的样品分别进行HPLC 检测，紫杉 醇标准品的HPLC 检测得到的回归方程为：Y=0.0298 + 0.356 X ， r=0.998。说明紫杉醇在10~20μ g/mL浓度范围内线性关系良好。紫杉 醇标准品和实验中制备的样品HPLC 谱图如图4所示。 紫杉醇标准品HPLC 图谱
树枝叶样品HPLC 图谱
由图可知，本实验获得的紫杉醇样品，通过回归方程计算，样品 中紫杉醇含量为6.3 μ g，纯度为93%。
迄今为止，红豆杉属植物仍然是紫杉醇的主要资源，紫杉
醇的价格曾经一度每公斤高达上千万美元。 目前国际市
场上，每公斤紫杉醇仍达几十万美元。 本实验利用紫杉
树的细枝、叶等可再生材料，提取紫杉醇，该方法将为解
用 10 倍体积（mL/g）乙酸乙酯溶解适量浸膏；加入等体积 1mol/L 的NaOH 溶液，搅拌10~20 min；静置分相后，有机相用1/2 倍NaOH。溶液体积的蒸馏水洗涤 2 次。由于第二次洗涤常伴有乳化 现象，所以在第二次洗涤中改用浓度为0.5 mol/L 的盐水洗涤，洗涤 后有机相用无水硫酸钠进行脱水，旋转蒸发浓缩至25%~30%的有机相 体积。
收集液进行毛细管薄层点样后，发现在体积比为7∶3 这个浓度之前 杂质很多。
紫杉醇的结晶
紫杉醇结晶体系以甲醇和水（3∶1）体系较佳. 将层析后含紫杉
醇的组分减压浓缩后，按8 mL/g 的比例溶解在甲醇中，水浴加热到
50℃，同时在搅拌的情况下缓缓滴入1/3 甲醇体积的双蒸水，4℃冷 却放置48 h 以上即可得呈白色发黄的紫杉醇针状晶体。
紫杉醇的HPLC 检测
色谱条件：流动相为甲醇：水=65∶35，进样量10 μ L，流量为 1.0 mL／min，检测波长为227 nm 检测。标准曲线绘制：用甲醇配制
浓度为 0.1 mg／mL 的紫杉醇标准品溶液，分别以10、12、14、16、
18、20 μ L 的进样量进行HPLC分析并绘制标准曲线。
决资源保护与医学需要之间的矛盾提供新思路。
熔点为213~216 ℃ ，比旋度为[α ]D20-49（MeOH），结构式如图。
溶解性：可溶于甲醇、乙醇、丙酮、二氯甲烷，三氯甲烷等有机溶剂 ，难溶于水（在水中溶解度仅为0.006mg/ml），不溶于石油醚。与糖 结合成苷后的水溶性大大提高，但在脂溶性溶剂中溶解性降低。 酸碱性：紫杉醇分子结构中虽然含有氮取代基，但氮原子处于酰胺状 态，且邻近连有苯基、羟基、酯基等吸电子基，不显碱性，故紫杉醇 为中性化合物。 化学性质：紫杉醇在PH4-8范围内比较稳定，碱性条件很快分解，对 酸相对稳定；紫杉醇在甲醇钠溶液中发生剧烈反应，可与MnO2试剂发 生反应，且不易还原。
提取制备方法
提取纯化工艺
60g红豆杉枝叶、树皮、 树枝杉枝叶、树皮、树枝
干燥与粉碎，乙酸乙酯-丙 酮（1:1）索式提取8h
紫杉醇浸膏, 取5g小试
经50 mL 石油醚固液萃取， 90 mL 乙酸乙酯溶解， 90 mL 1mol/L 的NaOH洗 涤，蒸馏水分两次淋洗
有机相用无水硫酸钠脱 水后浓缩，己烷沉淀后上样层析 （硅胶用量25 g）， 经结晶反应获得纯化的紫杉醇样品
实验结果
由60g红豆杉枝叶粉末最后获得紫杉醇69.64 μ g，纯度 93%。由于在本实验中选取试剂均以无毒、廉价为原则， 所以在环境、经济性上有一定பைடு நூலகம்优势，可以为工业放大提 供参考。
分析与讨论
溶剂对紫杉醇提取率的影响
不同种类的溶剂对红豆杉紫 杉醇醇类化合物的萃取效果不同
溶剂 氯仿 叶末质 量/g 30 30 30 30 浸质量 /g 3.75 5.40 5.21 6.18 4.63 浸膏得 率/% 12.5 18.0 17.4 20.6 15.4
TLC 薄层板检测
将结晶产物 4℃低温离心后弃上清，沉淀溶解在甲醇中进行薄 层板点样检测。展开剂：氯仿/甲醇（体积比为12∶1）；显色剂：茴 香醛/硫酸/乙醇（体积比为1∶3∶50）放置干燥箱内100℃烘干，10
min 或直接在紫外检测器下观察。紫杉醇的Rf值为0.6 左右. 薄层色
谱法检测的优点在于所用设备简单，分离、定量检测迅速，在一般实 验条件下就可以完成，但是该方法不能够测定紫杉醇的含量及纯度。
。 本实验采用了几种溶剂进行提 甲醇
取，所得结果见右表。
乙醇 酯/丙酮
确定采用乙酸乙酯/丙酮为提 乙酸乙 取溶剂。
甲醇/乙 30 醇 氯仿/丙 30 酮
4.22
14.0
提取方法对紫杉醇提取的影响
实验采用普通浸提法与索式提取法进行比较，两种提取方法使用相 同量的乙酸乙酯/丙酮提取相同质量的红豆杉叶粉末。结果见表。
乙酸乙 叶末 酯 /丙酮 质量/g /mL 浸膏 质量/g 浸膏 得率/%
时间/h
普通浸提
索氏提取
60
60
200
200
48
8
7.60
12.44
12.5
20.7
在提取方式上索氏提取明显优于普通浸提，所用时间较少， 而且普通浸提过滤时由于粉末过于细微，很难过滤. 而索氏提取则 可直接得到提取液且无需过滤。
紫杉醇的提取制备
中药化学与分析 宗阳 20141576
1 2 3 4 5
具体介绍 提取制备的方法 实验结果 分析与讨论
具体介绍
紫杉醇（paclitaxel，商品名Taxol）是从红豆杉属（Taxus spp）植 物中分离得到的一种具有独特抗癌作用的二萜类化合物。
分子式为C47H51NO14，分子量为853.89，外观为白色针状结晶，