丝氨酸蛋白酶 (2)
食品酶学
食品酶学一、名词解释1、酶：酶是一类由活性细胞产生的具有催化作用和高度专一性的特殊蛋白质。
2、胞外酶（exoenzyme）：酶在活细胞中产生，被分泌到细胞外发挥作用。
如人和动物消化管中以及某些细菌所分泌的水解淀粉，脂肪和蛋白质的酶3、胞内酶：酶在活细胞中产生，在细胞内起催化作用，这些酶在细胞内常与颗粒体结合，并有着一定的分布4、多酶体系（multienzyme system）：体内物质代谢的各条途径往往有许多酶共同参与，依次完成反应过程，这些酶不同于多酶复合体，在结构上无彼此关联。
故称为多酶体系。
5、同功酶（(isoenzyme）：指在生物体内或组织中催化相同反应而具有不同分子形式（包括不同的AA序列、空间结构等）的酶。
6、酶活力单位（active unit）：在一定条件下,一定时间内将一定量的底物转化为产物所需的酶量。
7、酶原：不具有活性的酶的前体。
8、酶比活力（specific activity）：单位蛋白质（毫克蛋白质或毫克蛋白氮）所含有的酶活力（单位/毫克蛋白）9、酶的化学修饰（chemical modification）：通过化学方法使酶分子的结构发生某些变化，从而改变酶的某些特性和功能的技术过程。
10、固定化酶（immobilized enzyme）：指在一定的空间范围内起催化作用，并能反复和连续使用的酶11、聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）：以特定的基因片段为模板，利用人工合成的一对寡聚核苷酸为引物，以四种脱氧核苷酸为底物，在DNA聚合酶的作用下，通过DNA模板的变性，达到基因扩增的目的二、选择或判断（10题）三、简答题1、酶的特性及其对食品科学的重要性⑴酶的一般特性：酶的催化效率高（比一般反应速度快106-1013倍）、酶作用的专一性（键专业性、基团专一性、绝对专一性、立体异构专一性）、大多数酶的化学本质是蛋白质⑵酶对食品科学的重要性：①酶对食品加工和保藏的重要性：；例如葡萄糖氧化酶作为除氧剂普遍应用于食品保鲜及包装中，延长食品保质期。
中年男性,发作性头晕2年,右侧肢体无力2天——CADASIL 2型
・罕见病专栏・中年男性，发作性头晕2年，右侧肢体无力2天——CADASIL2型朱敏*周美鸿*洪道俊临1资料患者男,45岁，因“发作性头晕2年,右侧肢体无力2d”于2020年5月20日就诊于我院神经内科。
患者(III3,见图1)于2018年2月出现头晕，伴行走不稳感，症状持续数天逐步缓解，当时无视物旋转，无恶心呕吐，无耳鸣及听力下降，无肢体无力，未引起重视，未至医院就诊。
2018年5月再次出现头晕发作，伴右侧肢体麻木，无肢体无力，无视物成双，无吞咽困难，无饮食呛咳，无言语含糊等症状。
行头颅MRI检查提示左侧脑室旁急性腔隙性梗死病灶，伴白质病变。
经过治疗后患者症状改善，未遗留明显后遗症，之后一宜服用拜阿司匹林和他汀类药物治疗。
2019年7月再次出现头晕，无其他伴随症状，复查头颅MRI提示右侧脑桥急性腔隙性脑梗死。
此次入院患者2d前突发右侧肢体无力，表现为右手抬举费力，右下肢走路拖拽，伴言语含糊不清，偶有饮水呛咳，无肢体麻木，无头晕头痛，无视野缺损。
病程中患者无腰痛，无头痛，大小便正常。
患者长期睡眠不好，情绪较焦虑，饮食一般但食欲不佳，体重无明显变化。
既往史及家族史：患者银屑病史10余年，使用生物制剂，但具体药物不详，症状控制尚可。
否认高血压和糖尿病史等慢性病史，否认吸烟及饮酒史，否认关节疼痛。
母亲(113)50岁发生脑出血，52岁因脑出血死亡，也存在秃发情况，否认高血压及血管畸形病史；弟弟(1114)43岁，40岁发现额顶秃发，无腰痛，42岁发生1次脑梗死，头颅MRI显示多发陈旧性腔梗伴脑白质病变，现服用波立维、阿托伐他汀及盐酸美金刚，无高血压及糖尿病病史，无吸烟及饮酒病史；大舅舅(112)20岁时出现精神障碍，60余岁死亡，原因不详；三舅舅(115)20岁因脑肿瘤死亡(图1A)。
体格检查：体温36.7七，脉搏90次/min,呼吸15次/min,血压122mmHg/80mmHg。
双肺呼吸音浊，闻及少量湿啰音，心律齐，各瓣膜区听诊未闻及杂音。
第四章蛋白酶与溶解酶解析
– 木瓜蛋白酶存在于木瓜汁液中，分子量 23900，至少有3个氨基酸残基存在于酶 的活性部位，它们是Cys25（半胱）、 His159（组）和Asp158（天冬）。
– 当Cys25被氧化剂氧化或与重金属离子结 合时，酶活力被抑制，而还原剂半胱氨 酸（或亚硫酸盐）或EDTA能恢复酶的活 力。还原剂作用：从-S-S——-SH， EDTA螯合重金属离子。
– （3）对于肽链端解酶的氨肽酶，要求底物中X 是一个-H，优先选择Y不是-OH，特异性表现 在R1上。
• 5、对肽键的要求：
大多数蛋白酶不仅限于水解肽键， 尚能作用于酰胺（-NH2）、酯（COOR）、硫羟酸酯（-COSR）和异 羟污酸（力。如肽键→脂键， 即使R2满足要求也不能作为底物。
• 1、R1和R2基团的性质：
– 胰凝乳蛋白酶仅能水解R1是酪氨酸、苯 丙氨酸或色氨酸残基的侧链的肽键；胰 蛋白酶仅能水解R1是精氨酸或赖氨酸残 基的侧链的肽键。
– 胃蛋白酶和羧肽酶对R2基团具有特异性 要求，如R2是苯丙氨酸残基的侧链，那
• 2、氨基酸构型： 必须是L型的，天然蛋白质均属L
型。 • 3、底物分子大小：
5.1.2蛋白酶分类：
• 1、来源： （1）植物：菠萝、木瓜、无花果 （2）动物：胃、胰蛋白酶、凝乳酶 （胃）
（3）微生物：1398枯草杆菌、3942栖 土曲霉蛋白酶、放线菌蛋白酶
• 2、最适作用条件： （1）中性蛋白酶：pH6~8 1398枯草 杆菌、3942栖土曲霉蛋白酶 （2）碱性蛋白酶：pH9~11 2709枯草 杆菌蛋白酶
1.5 蛋白酶水解蛋白质的苦味来源：
• 水解蛋白酶的苦味和蛋白质原有的氨基
酸组成有关。特别是蛋白质中的疏水性 氨基酸是导致蛋白质经水解后产生苦肽
新型冠状病毒SARS-CoV-2的感染与免疫
• 616•国际免疫学杂志2020年丨1月第43卷第6期 Int J Immunol，Nov. 2020，Vol. 43，No. 6•新型冠状病毒专栏•新型冠状病毒SARS-C〇V-2的感染与免疫徐冉张临友哈尔滨医科大学附属第二医院胸外科150081通信作者：张临友，Email:hmulyzhang@outlook,c o m，电话：151****6696【摘要】严重急性呼吸综合征冠状病毒2 (severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，S A R S-C o V-2)属于p冠状病毒，其通过表面刺突蛋白（spike protein，S蛋白）以血管紧张素转换酶2( angiotensin-converting enzyme2，A C E2) 作为受体介导膜融合人侵宿主细胞。
感染过程中造成的功能性 A C E2 水平下降通过影响肾素血管紧张素系统（renin-angiotensin system，R A S)的平衡造成肺部损伤。
感染S A R S-C〇V-2的部分重症感染患者中，机体先天和适应性免疫机制的失衡而形成的细胞因子风暴，可导致急性呼吸窘迫综合征（acute respiratory distress syndrome，A R D S)及全身多器官功能脏器衰竭。
适应性免疫的失衡所致淋巴细胞总数的降低，并与不良预后相关。
【关键词】C0VID-19;严重急性呼吸综合征冠状病毒2;感染;免疫D0I ： 10. 3760/cma. j. issn. 1673-4394. 2020. 06. 003Infection and immunity of the SARS-CoV-2Xu Ran//hang LinyouDepartment of Thoracic Surgery^ the Second Affiliated Hospital of Harbin Medical Universityy Harbin150081,ChinaCorresponding author ： Zhang Linyou, Email ： hmulyzhang@ outlook, com, Tel：151****6696【Abstract】The novel coronavirus severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) is abeta coronavirus that mediates the incorporation of angiotensin-converting enzyme 2( ACE2 ) as a receptor intoinvading host cells via the surface S protein. In patients with severe SARS-CoV-2 infection, an imbalance between ihe innate and adaptive immune mechanisms leads to the formation of a cytokine storm, resulting in acuterespiratory distress syndrome and systemic multiorgan failure. Fhe imbalance of the immune system in adaptiveimmunity leads to a decrease in the total number of lymphocytes and is associated with poor prognosis.【Key words】COVID-19；SARS-CoV-2；Infection；ImmunityDOI： 10. 3760/cma. j. issn. 16734394. 2020. 06. 003世界卫生组织(World Health Organization, W H O)将2019年底开始流行的肺炎为主的疾病，命 名为 C0VID-19(coronavirus disease2019)，其病原体 被病毒学家推荐命名为严重急性呼吸综合征冠状病毒 2号（severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, SAR S-C〇V-2)[l_2」。
生物化学名词解释
生物化学名词解释《生物化学》——名词解释氨基酸（amino acids）:是含有一个碱性氨基和一个酸性羧基的有机化合物，氨基一般连接在α-碳上。
氨基酸是肽和蛋白质的构件分子。
必需氨基酸（essential amino acids）：指人（或其它脊椎动物）自己不能合成，需要从饮食中获得的氨基酸，例如赖氨酸、苏氨酸等氨基酸。
非必需氨基酸（nonessential amino acids）：指人（或其它脊椎动物）自己能由简单的前体合成的，不需要由饮食供给的氨基酸，例如甘氨酸、丙氨酸等氨基酸。
等电点（pI，isoelectric point）：使分子处于兼性分子状态，在电场中不迁移（分子的净电荷为零）的pH值。
茚三酮反应（ninhydrin reaction）：在加热条件下，氨基酸或肽与茚三酮反应生成紫色（与脯氨酸反应生成黄色）化合物的反应。
肽键（peptide bond）：一个氨基酸的羧基与另一个氨基酸的氨基缩合，除去一分子水形成的酰胺键。
肽（peptides）：两个或两个以上氨基酸通过肽键共价连接形成的聚合物。
蛋白质一级结构(primary structure)：指蛋白质中共价连接的氨基酸残基的排列顺序。
层析(chromatography)：按照在移动相（可以是气体或液体）和固定相（可以是液体或固体）之间的分配比例将混合成分分开的技术。
离子交换层析(ion-exchange column chromatography)：使用带有固定的带电基团的聚合树脂或凝胶层析柱分离离子化合物的层析方法。
透析（dialysis）：通过小分子经半透膜扩散到水（或缓冲液）的原理将小分子与生物大分子分开的一种分离纯化技术。
凝胶过滤层析(gel filtration chromatography)：也叫做分子排阻层析（molecular-exclusion chromatography）。
一种利用带孔凝胶珠作基质，按照分子大小分离蛋白质或其它分子混合物的层析技术。
蛋白酶类医学知识课件
9;最适温度65℃，作用温度范围30-70℃，生成 产物：氨基酸。 菠萝蛋白酶(Bromelain)、无花果蛋白酶(Ficin)： （3）微生物蛋白酶 酸性蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶
2、医药工业： 含木瓜蛋白酶的药物，可起到消炎、利胆、止痛、
助消化的功效，进一步研究表明亦可治疗妇科病、青 光眼、昆虫的叮咬等。
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3、纺织工业：羊毛的防缩：用木瓜蛋白酶处理过的羊毛， 其抗张度比常规方法高，毛线手感柔软，收缩性为0；还 可用于蚕的脱胶和蚕丝的精炼。
金属离子对酶活的影响： Mn2+,Ca2+,Mg2+激活酶； Cu2+,Hg2+,Al3+抑制酶活。
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木瓜蛋白酶（Papain）
木瓜蛋白酶是从木瓜果实中提炼而得的纯天然生物酶，它是 由212个氨基酸组成，分子量为21000，属于含巯基（— SH）肽链内切酶，其活性受氧化剂氧化或重金属抑制。具 有蛋白酶和酯酶的活性，有较广泛的特异性，对动植物蛋白、 多肽、酯、酰胺等有较强的酶解能力，同时还具有合成的能 力，可把蛋白质水解物再合成蛋白质类物质，这种能力可用 来改善动植物蛋白的营养价值或功能性质。
（4）羧基蛋白酶：活性中心含天门冬氨酸等酸性氨基酸。 如米曲霉、黑曲霉产生的酸性蛋白酶。
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ACE2、TMPRSS2表达与小鼠COVID-19易感年龄及潜在靶器官关系的探讨
图 ３ 同龄小鼠肺、小肠和心脏组织 ＡＣＥ２和 ＴＭＰＲＳＳ２ｍＲＮＡ表达水平 Ａ：新生组；Ｂ：幼年组；Ｃ：成年组；Ｄ：老龄组；与肺比较： Ｐ＜００５， Ｐ＜００１， Ｐ＜０００１
安徽医科大学学报 ＡｃｔａＵｎｉｖｅｒｓｉｔａｔｉｓＭｅｄｉｃｉｎａｌｉｓＡｎｈｕｉ ２０２１Ｊｕｎ；５６（６）
·９８７·
司合成；ＲｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ仪 （美 国 ＵＶＰ公 司 产 品）； ＢＣＡ蛋白定量试剂盒（北京碧云天生物有限公司）； ＡＣＥ２兔源抗体（稀释浓度为 １∶１０００）、ＴＭＰＲＳＳ２ 兔源抗体（稀释浓度为 １∶１０００）、ＧＡＰＤＨ兔源抗 体稀释浓度为 １∶５０００）（美国 Ａｆｆｉｎｉｔｙ公司）。 １．２ 方法 １．２．１ 小鼠和人的 ＡＣＥ２、ＴＭＰＲＳＳ２蛋白氨基酸序 列保守性分析 通过氨基酸序列查询网站（ｈｔｔｐｓ：／／ ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ／）对小鼠和人的 ＡＣＥ２、ＴＭＰＲＳＳ２蛋 白进行 ＰｒｏｔｅｉｎＢＬＡＳＴ蛋白氨基酸序列保守性分析。 １．２．２ 组织样品制备 将 １２只不同年龄小鼠麻醉 （１０％水合氯醛腹腔注射，００５ｍｌ／１０ｇ）后，分别取 肺、小肠和心脏组织，每份不同组织来源样品又分为 ３份：１份组织为 ５０ｍｇ用于总 ＲＮＡ提取及后续的 ＲＴｑＰＣＲ实验；１份组织为 ２００ｍｇ用于组织蛋白提 取；剩余组织置于 ＥＰ管 －８０℃冻存备份。 １．２．３ ＲＴｑＰＣＲ检测小鼠 ＡＣＥ２、ＴＭＰＲＳＳ２ｍＲＮＡ 表达量 小鼠 ＡＣＥ２、ＴＭＰＲＳＳ２ｍＲＮＡ表达量采用 ＲＴｑＰＣＲ检测。① 总 ＲＮＡ提取：用 ＴＲＩｚｏｌ试剂从 组织中分离总 ＲＮＡ；② 逆转录：利用逆转录试剂盒 将 ＲＮＡ逆转录成 ｃＤＮＡ；③ 扩增：用 ＰＣＲ的方法扩 增 ｃＤＮＡ；④检测：实时检测和定量扩增的产物。扩 增结束后所得 Ｃｔ值采用相对定量法以 ＧＡＰＤＨ 为 内参基因计算目的基因表达量，读取目的基因及内 参基因的循环阈值（Ｃｔ值），并计算目的基因与内参 基因 Ｃｔ值差值（ΔＣｔ），以 ２－ΔＣｔ值代表目的基因 ｍＲ ＮＡ表达水平，所用引物序列见表 １。 １．２．４ Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测 ＡＣＥ２和 ＴＭＰＲＳＳ２蛋白表 达量 应用 ＲＩＰＡ裂解液及蛋白酶抑制剂（１００∶１） 提取组织总蛋白，ＢＣＡ法测定蛋白浓度并调节蛋白 浓度一致，加 入 蛋 白 上 样 缓 冲 液 水 浴 煮 沸，分 装 后 －８０℃冰箱 储 存 备 用。蛋 白 样 品 进 行 ＳＤＳＰＡＧＥ 电泳分离后常规湿转法转移蛋白至 ＰＶＤＦ膜上，在 ５％脱脂奶粉溶液中封闭后与一抗孵育过夜。次日 复温后 ＴＢＳＴ洗膜、二抗孵育、ＴＢＳＴ再次洗涤后加 入化学发光液，凝胶电泳成像系统进行图像采集。
新型冠状病毒3C样蛋白酶结构和功能特征分析
44微生物学杂志2020年12月第44卷第2期JOURNAL OF MICROBILLOGY Dee.2020Vol,44No.6新型冠状病毒3C样蛋白酶结构和功能特征分析戴姿薇，唐标**(湖南中医药大学医学院，湖南长沙412208)摘要采用生物信息学方法分析新型冠状病毒(Severe aceto respiratoy syad r ome coronavirus2,SARS-FoV-2)3C样蛋白酶(3-chymotypsin-Fke protease,307")的理化性质、结构与功能，为抗SARS-FoV-5药物研发提供参考。
通过ProtParam、ProtUcaW、BioeVit服务器对3CL2ic进行一级结构如氨基酸理化性质、疏水性的预测分析；COILS Server、SignaW、TMPreP、TargetP Server、NetPhos Server、NetNGWc Server服务器对3C l2"1结构进行如卷曲螺旋区、信号肽、跨膜结构域、亚细胞定位、磷酸化位点、糖基化位点的预测分析；sopma、SWISS-MODEL服务器对3cl210进行二级结构、三级结构的预测分析；IEBD对3cl210进行B细胞表位的预测分析。
3CL uic由306个氨基酸组成，其中亮氨酸占比最高，分子质量为33776.64,理论等电点值为5.65,半衰期为1.6h,脂肪系数为82.32；亲水性较高，不具有卷曲螺旋区与信号肽特点，含一个跨膜区；具有4个磷酸化位点，2个糖基化修饰点；二级结构中无规则卷曲占据主导地位，三级结构能与已知的2yPa.3(SMTL ID)模型同源建模;存在4个潜在的B细胞表位，位于02-141位的氨基酸区域应答频率最高。
利用生物信息学技术分析3CL210的结构和功能特征，可为新型冠状肺炎药物的研发提供参考。
关键词新型冠状病毒(SARS-doV-2)；3CL te；生物信息学;序列分析;蛋白结构中图分类号Q039.63文献标识码A文章编号1005-7021(2020)06-0044-09Poi：U.3969/j.issn.1405-7021.6020.46.407Structuroi and Functionai Charocteristics Analysis ofSARS-CoV-23CL prr vio BioinformaticcDAI Zi-wel,TANG Biav(Med.Schi,Huaao U oc of ChUtesc Mei,Changsha412208)Abstrrct In this swUp,physicochemical propeDies,structure and function of3-chymotypsin-dae protease(C—) were preVicwV via bioihormatics,to provide references for R&Dof anP-SARS-CoV-2meVicines.Bp preVicting and analyzing the primay structure ol3C—TO such as physicochemical propeDics ol amino acids,hyProphoXic chaycteDs-Pcs preViction analysis in terms ol theoyPcal isoelectric point,half-Ffc periob,fat0(/伍：60and hyPyphoXic chayc-teVstics ol3CLP"on ProtParam,Prothcalo and BioeVit;the structure such as cor/ng spiral reaion on the COILS Server,signal pepPPes on the SignalW,Nansmembranc domain via TMPreV,subcellular location on TarpetP Server,phos-phoyWtion sites and glycosylation sites ol3C—TO on NetPhos Server and NetNGlpe Server；the seconday structure on the SOPMA ,the ter/ay structure ol3CL2y on the SWISS-MODEL,the B cell epitopes ol3CL2y on the IEBD to reai-iec3(2—.3CLP"consists ol326amino acids；among them leacinc accounts for the highest propor/on,moWcoWr weight was33776.64,theoyPcaWsoeWctVc point5.95,haW-Ffe peVob1.9hours,fat0(0伍：6082.12；with relatively high hyPyphiWcitp,containing1Nansmembranc zone,possessing4phosphoyWtWn sites,2glycosylation moPi-fication sites；no chaycteVstic ol coileV spiral reaion and signal pepPPe;random coilc dominate in seconday sNuc-基金项目：2219年湖南省教育厅科学研究项目优秀青年项目(12B536)；湖南中医药大学“十三五”一级学科基础医学建设项目(No.06)作者简介:戴姿薇女,本科生o主要研究方向为免疫学基础研究o E-mail：U90129594@qq•cm*通讯作者o男，博士，硕士生导师o主要研究方向为免疫学基础研究o Tel:9751-C8457291,E-mail：njtangbiao@122.10m 收稿日期：2929W6W86期戴姿薇等:新型冠状病毒3C样蛋白酶结构和功能特征分析45turo,the te/iae structure can be homologops with koowu6yp5.1(SMTL IU)moPei;existing4potexOui B celt epitopes,with the h/hest espoxse freyuexcy ic amiue acid areas at92-41.By aPopOng bioinformatics techuology anapsis ox the structure and fuuctiox of30°coulP provide efeexces for R&D of SARS-CoV2mediciuc.Keywords Severe acoto espietoe syndrome coroxavirus2(SARS-CoV2)；3O°；bioinformatics;sequexcing；proteic structure2222年上半年，由新型冠状病毒(Severe uchiv espiwtoe syndema coennviws2,SARS-CoV-4)引起的新型冠状病毒肺炎(Coexo Virus Disensa224,COVIU-4)以数月时间在全世界引起了大流行,对全球居民健康构成了严重威胁。
丝氨酸蛋白酶名词解释
丝氨酸蛋白酶（Serine protease）是一类酶，属于蛋白酶的一种，它在生物体内起到分解蛋白质的作用。
这类蛋白酶通过将底物蛋白质的肽键切断，从而将底物分解成小的肽片段。
以下是丝氨酸蛋白酶的一些特点和功能：
1.活性位点：丝氨酸蛋白酶的活性位点包含一个丝氨酸残基，它在底物蛋白质的特定肽
键附近，通过切断肽键来实现底物的分解。
2.底物特异性：不同种类的丝氨酸蛋白酶具有不同的底物特异性，即它们对不同的肽键
序列有选择性，只能在特定的位点进行切割。
3.生物学功能：丝氨酸蛋白酶在生物体内具有多种重要的生物学功能，包括消化、凝血、
免疫调节、炎症反应等。
例如，胰蛋白酶就是一种丝氨酸蛋白酶，参与食物消化过程。
4.药物靶点：由于丝氨酸蛋白酶在许多生理过程中起关键作用，它们也成为药物研发中
的重要靶点。
一些药物被设计用来抑制特定的丝氨酸蛋白酶，以调节相关生物过程，如凝血抑制剂和抗炎药物等。
丝氨酸蛋白酶是一类在生物体内起到分解蛋白质的作用的酶，具有广泛的生物学功能，包括消化、凝血、免疫和炎症等。
它们在生命体内的许多重要生理过程中发挥着关键作用。
西安大学生物工程学院2020级《生物化学》考试试卷(2449)
西安大学生物工程学院2020级《生物化学》课程试卷（含答案）__________学年第___学期考试类型：（闭卷）考试考试时间：90 分钟年级专业_____________学号_____________ 姓名_____________1、判断题（50分，每题5分）1. DNA是生物界中唯一的遗传物质。
（）答案：错误解析：2. DNA核蛋白及RNA核蛋白可用0.14molL NaCl溶液抽提出来。
（）答案：错误解析：DNA核蛋白及RNA核蛋白一般用1molL NaCl抽提。
3. 测定别构酶的相对分子质量可以用十二烷基硫酸钠（SDS）聚丙烯酰胺凝胶电泳。
（）答案：错误解析：别构酶一般是由亚基组成轻链的。
SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测出的是亚基的相对分子质量，而产品质量不是别构酶的相对水分子质量。
4. 同工酶就是一种酶同时具有几种功能。
（）答案：错误解析：5. 正负超螺旋DNA容易解链进行复制和转录。
（）答案：错误解析：负超螺旋DNA容易解链进行复制和转录。
6. 血红蛋白与肌红蛋白均为氧载体，前者是一个典型的别构（或变构）蛋白，因而与氧结合过程中呈现协同效应，而后者却不是。
（）答案：正确解析：7. 酶和底物的关系比喻为锁和钥匙的关系是很恰当的。
（）答案：错误解析：8. 核糖上被甲基化的胞嘧啶核苷酸表示为Cm。
（）答案：错误解析：9. 核苷酸分子中的核糖为吡喃型结构。
（）答案：错误解析：核苷中的D核糖与D2脱氧核糖为呋喃型环状结构。
10. 真核生物细胞核内的不均一RNA（hnRNA）分子质量虽然不均一，但是半衰期长，比胞质成熟mRNA更为稳定。
（）答案：错误解析：不同细胞类型的hnRNA半衰期不同，一般在几分钟至1h左右，而胞质成熟mRNA的半衰期一般为1～10h，神经细胞的mRNA的半衰期最长，可达数年。
2、名词解释题（25分，每题5分）1. 亚基[暨南大学2019研]答案：亚基是指具有三级结构的核苷酸。
4补体系统
（二）CR2（CD21） 配体：iC3b和C3dg 主要生物学功能： 1. 调节B细胞增殖、分化、记忆和抗体 的产生； 2. 作为EB病毒受体，与某些疾病相关。
（三） CR3（ Mac-1 、CD11b/CD18） 配体：iC3b 主要生物学功能： 1. 介导粘附； 2. 增强吞噬细胞功能； 3. 具有凝集素活性。
三、主要理化性质：
1. 肝细胞、巨噬细胞以及肠粘膜上皮细胞等多种细 胞产生的。 2. 化学组成均为多糖蛋白，大多是β球蛋白。 3. 理化性质及血清中含量差异甚大，C3为最高。 4. 对热不稳定。56度30分灭活。 5. 补体系统的各组分在体液中通常以非活性状态存 在。
第二节 补体的激活
特点：
①多条激活途径与共同末端通路： 主要分三条途径: ---经典途径（classical pathway） ---旁路途径（alternative pathway） --- MBL途径（mannan-binding lectin pathway） 共同的末端通路，即膜攻击复合物 （membrane attack complex，MAC）的形成。
第四节 补体受体 (complement receptor, CR)
概念：细胞膜上存在的能与补体活性分 子相结合的糖蛋白。
（一）CR1（CD35） 配体：C3b、C4b 主要生物学功能： 1. 抑制补体激活，协助I因子裂解C3b和C4b； 2. 调理作用； 3. 促进免疫复合物清除； 4. 免疫调节。
④补体呈现级联式活化 被激活的上游补体组分可裂解多个下游组分， 导致若干下游补体活化，形成一系列连续的 级联反应。 ⑤激活的补体具有多种生物学效能 在发挥生理性作用的同时，裂解的补体片断 还可造成免疫病理损伤等。 ⑥补体激活的调控性 补体激活是在机体一系列因素的调控下的活 化过程。
生物化学8
DIFP能使乙酰胆碱酯酶（一种丝氨酸蛋白水 能使乙酰胆碱酯酶（ 能使乙酰胆碱酯酶 解酶）失活。 解酶）失活。乙酰胆碱酯酶的作用是使乙酰胆 碱水解成乙酸和胆碱。 碱水解成乙酸和胆碱。 乙酰胆碱是一种神经传导物质， 乙酰胆碱是一种神经传导物质，本身具有很高 的毒性， 的毒性，完成传递任务后必须立即被水解成无 毒的乙酸和胆碱。 的存在， 毒的乙酸和胆碱。DIFP的存在，使乙酰胆碱 的存在 酯酶不可逆失活， 酯酶不可逆失活，导致乙酰胆碱在生物体内累 积，引起中毒死亡。 引起中毒死亡。 具有类似DIFB的化合物还包括一些著名的有 具有类似 的化合物还包括一些著名的有 机磷杀虫剂，如对硫磷、马来硫磷(结构式书 机磷杀虫剂，如对硫磷、马来硫磷 结构式书 p112)
4.4.5 丝氨酸蛋白酶水解机制
丝氨酸蛋白酶： 丝氨酸蛋白酶： 酶的活性中心有丝氨酸残基， 酶的活性中心有丝氨酸残基，如胰凝乳 蛋白酶、胰蛋白酶、 蛋白酶、胰蛋白酶、弹性蛋白酶 含硫的蛋白酶： 含硫的蛋白酶： 活性中心有半胱氨酸， 活性中心有半胱氨酸，如木瓜蛋白酶 含羧基的蛋白水解酶： 含羧基的蛋白水解酶： 如胃蛋白酶
可逆抑制
竞争性抑制作用（ 竞争性抑制作用（competitive inhibition） ）
E+I EI
例: 丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制作用
琥珀酸
丙二酸
非竞争性抑制作用（ 非竞争性抑制作用（noncompetitive inhibition） ）
I E+S →ES →ESI
S →ESI E+I → EI
反应的第一步： 反应的第一步： 酶中“催化三元区” 酶中“催化三元区”的Ser-195羟基对 羟基对 底物肽键的酰基亲核进攻， 肽键的酰基亲核进攻 底物肽键的酰基亲核进攻，形成一个包括 Ser-195的羟基、底物酰基、氨基在内的共 的羟基、 的羟基 底物酰基、 价四面体中间体。 价四面体中间体。
碱性蛋白酶在洗涤剂行业的生产及应用
碱性蛋白酶在洗涤剂行业的生产及应用前言碱性蛋白酶（又称丝氨酸蛋白酶）是能使蛋白质水解成肽或氨基酸的酶的总称，包括动物产生的胃蛋白酶和胰蛋白酶、由植物产生的木瓜朊酶和由微生物产生的霉菌蛋白酶。
碱性蛋白酶对去除奶渍、汗渍、血渍及肉汁等蛋白质类污渍很有效果，使不溶性的蛋白质污渍分解成可溶性氨基酸和肽，从而去除这些污渍。
广泛存在与细菌、放线菌和真菌中，研究最为广泛和深入的是芽孢杆菌的丝氨酸蛋白酶。
这种酶在洗涤剂、制革、丝绸等工业上有广泛用途。
1 碱性蛋白酶的性质碱性蛋白酶最早发现于猪胰脏中，1913年Rohm首先将胰蛋白酶作为洗涤浸泡剂使用。
1945年瑞士学者Jaag等发现微生物能产生碱性蛋白酶，如芽孢杆菌属细菌和曲霉属的真菌等，从而使蛋白酶应用拓展到洗涤剂工业。
近20年来，随着新的产碱性蛋白酶菌株的不断分离和发现，碱性蛋白酶的研究有了很大的发展。
迄今，已有多种微生物来源的碱性蛋白酶被纯化和鉴定。
昆虫病原菌产蛋白水解酶的报道很少。
自60年代始，有关耳霉属菌株分泌碱性蛋白酶的报道日渐增多，研究日益深入。
研究表明，耳霉能产生高分子量的碱性蛋白酶A和低分子量的碱性蛋白酶B。
冠状耳霉分泌的碱性蛋白酶B分子量蛋白为6800，是迄今为止报道的分子量最小的碱性蛋白酶。
它的最适pH 9.7，最适反应温度45℃。
该酶经50℃时1小时后完全失活。
该酶具有广泛的底物专一性，能催化水解多种天然蛋白质（如酪蛋白，血红蛋白，卵清蛋白，牛血清白蛋白），其中酪蛋白是最适底物。
此外，碱性蛋白酶B还具有一定的酯酶活性，可专一性水解苯赖氨酸和苯甘氨酸衍生物L－型异构体酯键的羧基，而D－型异构体不受酶处理的影响。
可用于分离氨基的消旋混合物。
可望代替目前工业上用来分离DL－旋光异构体的枯草芽孢杆菌蛋白酶。
与其它产碱性蛋白酶菌株相比，冠状耳霉能分泌高比活力碱性蛋白酶。
如地衣芽孢杆菌株2709碱性蛋白酶比活力为1800u/mg蛋白，枯草芽孢杆菌碱性蛋白酶比活力为880u/mg蛋白，短小芽孢杆菌碱性蛋白酶比活力为3602.4u/mg蛋白，嗜麦芽假单胞菌碱性蛋白酶比活力为1173u/mg蛋白。
免疫学复习资料
抗体(Immunoglobulin)1．Ig 的基本结构、功能区基本结构：Ig由两条相同的重链和两条相同的轻链通过二硫键连接而成的四肽链分子。
每条重链和轻链分为氨基端和羧基端。
Ig的功能区及其功能：（1）VH、VL：是Ig特异性识别和结合抗原的功能区，该区也是Ig分子独特型决定簇的存在部位。
（2）CH、CL：具有Ig部位同种异型的遗传标记。
（3）IgG的CH2和IgM的CH3：与补体经典途径的激活有关。
（4）CH3/CH4：具有与多种细胞FcR结合的功能，不同Ig在结合不同的细胞时可产生不同的免疫效（5）铰链区：位于CH1和CH2之间，富含脯氨酸，对蛋白酶敏感，不易形成α螺旋，易伸展弯曲，由此可与不同距离的抗原表位结合，使补体结合点得以暴露。
2．Ig 的功能Ig的生物学功能主要有①特异性结合抗原，发挥中和毒素和病毒作用，介导体液免疫免疫效应；②激活补体③与细胞表面的Fc受体结合，介导吞噬调理作用、ADCC作用和I 型超敏反应；④IgG 可通过胎盘；sIgA可穿过呼吸道和消化道粘膜，参与粘膜局部免疫。
⑤抗体对免疫应答有正、负调节作用。
3．Ig 的水解片断⑴木瓜蛋白酶： Ig →2个抗原结合片段（Fab）和1个可结晶片段（Fc）⑵胃蛋白酶：Ig →1个双价活性F(ab’)2片段和若干个pFc’片段4．五类Ig 的生物学特性及功能1. IgG:血清含量最高再次免疫应答的主要抗体调理、ADCC、激活补体经典途径通过胎盘2. IgM:分子量最大初次免疫应答早期出现的抗体激活补体作用最强天然抗体为IgM3. IgA:血清型IgA（单体）和分泌型IgA（二聚体）参与呼吸道、消化道等局部黏膜免疫4. IgD：血清型功能不清；膜型为BCR的重要组成成分，是B细胞分化发育成熟的标志5. IgE：血清含量最少与肥大细胞、嗜碱性粒细胞结合，参与I型超敏反应与抗寄生虫免疫有关5．人工抗体多克隆抗体：用含多种抗原决定簇的Ag物质免疫动物，刺激多个B细胞克隆所获得的免疫血清（含多种Ab的混合物），此为pAb。
tmprss2基因
tmprss2基因
TMPRSS2基因是人类基因组中的一种基因，它位于X染色体上。
TMPRSS2基因编码一种叫做转蛋白酶丝氨酸蛋白酶2（Transmembrane protease serine 2）的蛋白质。
这种蛋白质在人
体中扮演着重要的角色，特别是在细胞内的信号传导和蛋白质降解
等生物学过程中起着关键作用。
TMPRSS2基因的突变与一些疾病的发生有关。
例如，研究表明，TMPRSS2基因与前列腺癌的发生有一定的关联。
此外，最近的研究
还发现，新型冠状病毒（SARS-CoV-2）入侵人体细胞时，需要与人
体细胞表面的ACE2受体结合，而TMPRSS2蛋白质的活化可以促进这
一过程，因此TMPRSS2基因与SARS-CoV-2的感染也存在一定的关联。
除了与疾病相关的研究外，科学家们还在研究TMPRSS2基因在
正常生理过程中的作用。
例如，一些研究表明TMPRSS2基因在肺部
和胰腺中的表达与正常的生理功能密切相关，这为我们进一步理解
这些器官的生理功能提供了重要线索。
总的来说，TMPRSS2基因是一个在人类生物体内发挥重要作用
的基因，它不仅与一些疾病的发生有关，还参与调控一些重要的生
理过程。
对于TMPRSS2基因的研究，有助于我们更深入地了解相关疾病的发病机制，为相关疾病的预防和治疗提供理论基础。
医学免疫大题 啊(2)
1. 免疫系统组成与功能。
免疫系统是执行免疫功能的组织系统，包括：（1）免疫器官：由中枢免疫器官（骨髓、胸腺）和外周免疫器官（脾脏、淋巴结和黏膜免疫系统）组成；（2）免疫细胞：主要有T淋巴细胞、B淋巴细胞、中性粒细胞、单核-巨噬细胞、自然杀伤细胞、树突状细胞等；（3）免疫分子：如抗体、补体、细胞因子和免疫细胞表面的多种膜分子，可发挥三种功能：（1）免疫防御：即抗感染免疫，机体针对病原微生物及其毒素的免疫清除作用，保护机体免受病原微生物的侵袭；（2）免疫自稳：机体可及时清除体内衰老或损伤的体细胞，对自身成分处于耐受，以维系机体内环境的相对稳定；（3）免疫监视：机体免疫系统可识别和清除畸形和突变细胞的功能。在某些情况下，免疫过强或低下也能产生对机体有害的结果，如引发超敏反应、自身免疫病、肿瘤、病毒持续感染等。
功能：（1）特异性识别结合抗原：可变区（V区）内的超变区可特异性识别、结合病原体或细菌毒素，可阻断病原体的入侵或中和毒素的毒性作用；（2）激活补体：IgG或IgM与相应抗原特异性结合后，可激活补体经典途径，形成膜攻击复合体（MAC），溶解破坏靶细胞；③调理作用：IgG与细菌等颗粒性抗原结合后，通过其Fc段与吞噬细胞（巨噬细胞或中性粒细胞）表面的Fc受体结合，促进吞噬作用；④抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用（ADCC效应）：IgG（Fab段）与肿瘤细胞或病毒感染细胞表面的抗原（表位）特异性结合后，再通过其Fc段与具有细胞毒作用的效应细胞（巨噬细胞、NK细胞或中性粒细胞）表面的Fc受体结合，增强或触发对靶细胞的杀伤作用；⑤穿过胎盘屏障和黏膜：人类IgG是唯一能从母体转运到胎儿体内的免疫球蛋白，对新生儿抗感染具有重要意义。分泌型IgA（SIgA）可通过分泌片介导穿越呼吸道、消化道等黏膜上皮细胞，到达黏膜表面发挥局部抗感染免疫作用。
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丝氨酸蛋白酶
摘要：丝氨酸蛋白酶是一种种类丰富的酶类【1】，之所以以此命名是因为在酶的催化活性位点上包含丝氨酸在内的丝氨酸、组氨酸、天冬氨酸组成的催化三联体。
有些丝氨酸蛋白酶类如凝血酶类蛋白酶，其中包括凝血酶，组织纤维蛋白溶酶原激活剂、血纤维蛋白溶酶，它们参与凝血的发生以及炎症应答反应；也有些如胰蛋白酶类的丝氨酸蛋白酶类的参与消化的酶类，包括胰蛋白酶、弹性蛋白酶、胰凝乳蛋白酶；还有一些表达在神经系统中的丝氨酸蛋白酶类，这些酶类与神经系统正常的维持或是介导病理情况的发生。
其实丝氨酸蛋白酶类在执行功能的时候也受到许多因素的限制，如受一些抑制剂的影响等，这些物质对蛋白酶功能的执行起到重要的作用。
关键词：丝氨酸蛋白酶催化机制功能调节
酶的功能
已知所有的蛋白分解酶类丝氨酸蛋白酶占到了其中的三分之一，这些酶又可以细分成很多种类有胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、弹性蛋白酶、凝血酶、纤溶酶、组织纤溶酶原激活剂、神经源类的丝氨酸蛋白酶等。
这些酶类具有消化凝血、纤溶、消化、受精、生长发育、凋亡、免疫等方面都有重要的作用。
酶的催化位点
由于丝氨酸蛋白酶的种类很多根据其催化的特点以及种树亲疏性可以分成不同的类别，不同的组织器官，不同的生物种系中酶的分布与种类是不同的(见表格)。
但是其催化特点通常都是其反应的催化三联体，丝氨酸的亲核攻击，即丝氨酸的羟基攻击酰胺键的羰基碳，但是在生物进化的长时间了这种催化活性结构也发生了改变。
如在有些酶中其催化三联体不在是固定的丝氨酸、天冬氨酸、组氨酸，而是只有丝氨酸与天冬氨酸或是组氨酸的一种组成催化活性位点，也有的如组氨酸成对出现于丝氨酸组合形成新的催化结构，但是无论怎样其上的丝氨酸残基是固定保守的。
酶的活化
对于丝氨酸蛋白酶类的活化，一般来说是通过对酶前体【2】的加工使其形成具有催化活性的酶，或者是通过一些辅助因子的协同作用使其由闭合的非活化状态转成活性状态，也有通过信号的捕获诱发一系列的级联反应从而活化蛋白，或是通过一些关键因子的作用使得构想发生改变来实现活化等等。
通常来说酶的状态一种是抑制非活化状态，另一种是活化的活性状态，但是在一些研究中酶具有新的状态，而这种状态与酶原或是缺少辅因子而显示无活性的酶的状态是不同的，虽然这种状态下的酶也没有活性，但是其结构上出现一些特有的变化，在对凝血酶的研究中发现，这种状态称为E*【3】，其伴有一些氨基酸链陷入酶的催化活性部位从而破坏其中的氧离子空穴，致使没得活性受阻，因此对于这种酶的活化一定有其他的方式，研究发现当E*状态下在远离活性部位连接一种配体时会将这种氨基酸陷入活性位点的状况扭转过来，从而恢复酶的活性位点，并在其他因子的作用下得到活化。
酶的催化机制
对于丝氨酸蛋白酶类的催化活性，有的是通过前体酶原的活化，比如胰蛋白酶类
就是通过将蛋白的前导序列进行切除之后，然后空间构象进行调整折叠成具有反应活性的活化酶。
对于丝氨酸蛋白酶类的催化机制由于其催化活性位点上关键氨基酸是丝氨酸、天冬氨酸、组氨酸，所以可以描述为：催化三联体中的天冬氨酸通过氢键来固定组氨酸残基，反应开始阶段是组氨酸作为广义碱从丝氨酸上夺取一个质子并促使丝氨酸的羟基氧对蛋白质的肽键中的羰基碳进行亲核攻击并使肽键断裂【4】，此时形成酰基酶共价复合物，这是一个不稳定的中间复合物，由于断裂的肽键上存在着带有养的负电荷，下一步反应是组氨酸向肽键的酰胺氮提供质子，得到共价的质子化氮，形成四面体中间物，随后促进键的断裂，产物胺的解离，随后是脱酰化，水亲核攻击羰基碳，产生另一个四面体过渡态中间物，这一步中组氨酸作为广义碱从攻击的水分子接受一个质子，随后将此质子提供给丝氨酸的氧，并协调四面体中建五的瓦解，羧基去质子化并脱离出来，反应完成（见参考图）。
常见的消化类胰蛋白酶类就是采用这种催化机制，如凝乳糖蛋白酶【5】，但是其识别的蛋白质多是些带有络氨酸或是苯丙氨酸的侧链，这与其他的丝氨酸蛋白酶类的专一性不同，比如胰蛋白酶类主要是识别碱性氨基酸精氨酸或是赖氨酸的侧链。
酶的调节机制
酶活性的调节机制有多种，例如酶可逆共价修饰，使得酶处于活性与非活性的互变状态，或是通过酶原的激活，这种调节是不可逆的，第三种就是酶的别构调节。
别构调节主要涉及到酶的构想变化，进而导致酶的活性改变，丝氨酸蛋白酶是一种别构酶类，其活性的改变可以通过这种别构调节进而影响到酶的活性，除此之外丝氨酸蛋白酶的调节也包括酶原活化的调节方式，这主要是涉及到如消化类蛋白酶的活化和凝血作用中涉及到的丝氨酸蛋白酶。
酶的别构调节是酶分子非活性位点与化合物通过非共价结合的方式发生的构象改变，当酶结合一个分子之后，酶的构象发生了变化，这种构象的改变会影响到后续分子与酶结合的亲和性，
进而影响到酶的活性状态，这种有别构效应的物质称为效应物或别购剂，如果别购剂起到增加酶活性叫做激活剂。
酶的抑制与激活
丝氨酸蛋白酶的抑制剂有很多种类，通过模拟底物的特性与活性位点结合从而影响到酶的催化活性，或是通过别构效应来改变酶的空间构象来抑制酶的活性。
酶的激活效应主要是一些激活效应物与酶上面的结构域或是氨基酸片段结合来改变酶的空间取向，调节其结构特性进而影响到酶的活性。
总结
丝氨酸蛋白酶是重要的蛋白分解酶类，它又可分成不同的种属与类别，不同的生物之间的表达也有所不同，起到的功能也是有所差异。
在哺乳类生物类之中丝氨酸蛋白酶是具有多种功能的蛋白分解酶类，它具有消化作用，参与凝血与纤溶作用，丝氨酸蛋白酶参与补体的活化因此对于免疫系统来说是起到重要的作用，对于丝氨酸蛋白酶参与神经系统的调节作用仍在不断地研究中，神经丝氨酸蛋白酶【6】是由神经元合成并短暂的储存在突触之中，当其表达异常时，都会引起神经系统的紊乱并导致一些疾病的发生【7】。
综上所述丝氨酸蛋白酶对于生物机体的代谢是重要的，它参与机体不同生物功能的实现，对维持生物体的生长发育起着重要作用，虽然对于有些丝氨酸蛋白酶类的研究还不够透彻，但是随着技术的发展与科学的进步其中奥秘终有一天会被解密，届时对于疾病的治疗与健康的维持
带来新的契机。
结构特点
Step 1：Ser-195作用于底物的肽键酰基，发起亲核进攻，形成一个包括Ser-195的羟基、底物酰基和氨基在内的共价四联体中间物
Step 2：四面体中间物分解，即生成酰基-酶中间物并伴随着C-N键的断裂。
脱胺加水
Step 3：酰基-酶中间物的解离，这时His-57作为广义酸起催化作用
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