谷物及其制品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定方法
酶联免疫吸附法快速检测谷物中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇2011-01—18
１ 仪器与设备 ． １ 酶标仪 ，上海纤检仪器有限公司提供 ；恒温培 养 箱 （～ ０ ℃） ０６ 、微 量 移 液 器 、分 析 天 平 、微 量 振 荡器 。 １２ 试 剂 ． 脱 氧 雪 腐 镰 刀 菌烯 醇 Ｅ ＩＡ试 剂 盒 ，无 锡 市艾 ＬＳ 赛生物技术有限公司提供 ；甲醇 （ 分析纯） Ｂ 缓 、Ｐ Ｓ 冲溶 液 （Ｈ值 ７ ） ｐ ． 。 ４ １ Ｄ Ｎ标准溶液的制备 ． Ｏ ３ １ 样 品处 理 ． ４ 准确称取 ５ 粉碎均匀的样品于三角瓶中，加入 ．ｇ ０ ２ Ｌ体积分数为 １％甲醇水提取液 ，振荡 １ ｉ， ５ ｍ Ｏ ５ｍｎ
１． 。 ７４％
关键词 ：脱氧雪腐镰刀菌烯醇 ；Ｅ ＩＡ；检测 ＬＳ 中图分类 号：￥ １ 文献标 志码 ：Ａ ５５ ｄ ｉ ０３ ６ ／ｓｎ１７ ～ ６ ６ Ｘ） ０ １ ５０ ８ ｏ：１．９ ９ ｉ ． １ ９ （ ． １ ． ． ｊｓ ６ ４ ２ ０ ２
Ｅ ｔ ｉ ｍ ｎ ｎｙ ｅＬｎ ｅ ｍ ｎｓｒｅｔ ｓａ （ＬＳ ）ｆ ｓ ｂｓ ｅｔ ｆ ｚｍ ｉ ｄＩ ｕ ｏｏｂｎ ｓｙ Ｅ ＩＡ ｏ ａ ｈ ｏＥ ｋ ｍ Ａ ｒ Ｄ ｏｙ ｉ ｌ ｏ Ｄ Ｎ ｎＣ ｒ ｅｘｎ ａ ｎｌ（ Ｏ ）ｉ ｏ ｖｅ ｎ
１ 材 料 与方 法
从冰箱中取 出脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫试剂盒 ， 平 衡 至 室温 ，用 ２０ｍＬ抗 体 稀 释缓 冲液 ，将 １支抗 ． Ｄ Ｎ单克隆抗体溶解 ；用 ４ Ｌ抗体稀释缓冲液将 Ｏ ．ｍ ０ １ 支酶标二抗浓缩液溶解 ，充分摇匀 ；取 ３ Ｌ ． ｍ 浓 ０ 缩洗涤液加 ５ Ｌ ７ 蒸馏水稀释 ，备用 。 ｍ
酶联免疫 吸附法快速检测 谷物 中的 脱 氧 雪腐 镰 刀 菌烯 醇
粮食中脱氧雪腐镰刀菌烯醇检测方法的研究进展
粮食中脱氧雪腐镰刀菌烯醇检测方法的研究进展摘要：快速、准确地检测和监测脱氧雪腐镰刀菌烯醇已成为粮食行业迫切解决的问题，本文主要从介绍粮食中脱氧雪腐镰刀菌烯醇发生的原因及检测方法进行研究。
在粮食行业中，选择良好的检测方式对策目的是为检测脱氧雪腐镰刀菌烯醇提供一种简单、快速、准确的方法，满足其多阶段的需要。
对食物的获取、贮存、处理提供指导和帮助。
关键词：粮食；脱氧雪腐镰刀菌烯醇；检测方法脱氧雪腐镰刀菌烯醇由三种菌群次级代谢产生，它会抑制蛋白质的组成，从而引发恶心、呕吐、腹泻、厌食、神经紊乱等毒性反应，所以又叫呕吐毒素。
这种毒素的性质是比较稳定的，烘培灭菌等食品加工方式对它的影响比较小，所以它的检测是非常重要的。
联合国粮农组织和世界卫生组织已确认，在加工、储存和烹调过程中，天然有害物质是最危险的。
1998年，在国际癌症研究机构公布的评价报告中，呕吐毒素被列为3类致癌物。
欧盟要求呕吐毒素要小于1.0mg/kg；中国饲料要求低于0.5 mg/kg。
脱氧雪腐镰刀菌烯醇是粮食赤霉病中十分重要的指示性毒素，同时具有很强的毒性，严重影响到人类健康，且易引发巨大经济损失。
1粮食脱氧雪腐镰刀菌烯醇概述脱氧雪腐镰刀菌烯醇是常见的真菌毒素，主要是是污染大麦、小麦、玉米和燕麦等谷类作物。
污染粮食制品食用后在体内蓄积就造成细胞毒性免疫抑制的性质，使脱氧雪腐镰刀菌烯醇的危害更加突出。
粮食中脱氧雪腐镰刀菌烯醇是禾谷镰刀菌等真菌在生长或贮存过程中产生的一种毒素。
本品毒性大，可引起动物拒食、呕吐、生长迟缓、生殖障碍，对人体免疫抑制、贫血、头痛呕吐、厌食腹痛等危害很大[1]。
目前我国食品安全国家标准对脱氧雪腐镰刀菌烯醇的含量有严格限制。
中国大多数地方气候温和，湿度大且部分地区秋季降雨持续时间较长，尤其适宜霉菌的生长代谢，导致霉菌毒素对食物造成污染。
其中脱氧雪腐镰刀菌烯醇是污染小麦和玉米赤霉病的重要指示毒素，其浓度与种植面积、品种关系密切。
高效液相色谱法测定粮谷类中脱氧雪腐镰刀菌烯醇
高效液相色谱法测定粮谷类中脱氧雪腐镰刀菌烯醇王丽君;禹洁;苏阿龙;贾红芳;朱书强【摘要】The deoxynivalenol in cereals samples was extracted by purified water and purified by immunoaffinity column,and the conditions of extraction and purification were optimized.The condition of deoxynivalenol was determined by HPLC.The results showed that filtrate 2 ml was dried at 40 ℃ by termovap sample concentrator,with 1 ml acetonitrile-water (20∶80,V/V) constant volume,and then detected at wavelength of 220 um.The separation effect of chromatographic peak was good.The deoxynivalenol had a good linear relationship in the range of 20-500ng/ml (R2=0.999 8).The limit of detection was 2 μg/kg.The relative standard deviation (RSD) of precision tests results was 2.4％.The recovery rate was 87.6％-98.9％ and the RSD was 2.04％-2.68％,which indicated the method could be used for the quantitative analysis and detection of deoxynivalenol content in cereals since it had the good precision and accuracy.%利用纯水溶解提取粮谷类样品中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇,经过免疫亲和柱净化,并优化提取净化条件,通过高效液相色谱检测其含量.结果表明,采用2mL滤液上样,经氮吹仪在40℃吹干后,用1mL乙腈-水(20∶80,V/V)定容,在波长220 nm 条件下进行检测,色谱峰分离效果良好.脱氧雪腐镰刀菌烯醇含量在20～500ng/mL范围内线性关系良好(R2=0.999 8),检出限2μg/kg,精密度试验结果相对标准偏差(RSD)值为2.4％,回收率为87.6％～98.9％,RSD值为2.04％～2.68％,表明该方法具有良好的精密度和准确性,适用于粮谷类样品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇含量的定量分析检测.【期刊名称】《中国酿造》【年(卷),期】2017(036)006【总页数】4页(P179-182)【关键词】脱氧雪腐镰刀菌烯醇;粮谷类;免疫亲和柱;高效液相色谱【作者】王丽君;禹洁;苏阿龙;贾红芳;朱书强【作者单位】甘肃省食品检验研究院,甘肃兰州730030;甘肃省食品检验研究院,甘肃兰州730030;甘肃省食品检验研究院,甘肃兰州730030;甘肃省食品检验研究院,甘肃兰州730030;甘肃省食品检验研究院,甘肃兰州730030【正文语种】中文【中图分类】O657.7脱氧雪腐镰刀菌烯醇（deoxynivalenol，DON）是镰刀菌属（Fusarium）产生的一种B型单端孢霉烯族真菌毒素，对动物和人都具有很强的致呕吐能力，因此又被称为“呕吐毒素（vomitoxin）”[1]。
胶体金免疫层析法快速测定玉米和小麦中脱氧雪腐镰刀菌烯醇
１２ 方 法 ．
小麦 、 麦 、 大 玉米 等谷 类 作 物 ， 和动 物 在 误 食 被 该 人
毒 素污染 的粮 谷 类 后 常 引起 呕 吐 、 痛 、 热 和 恶 头 发 心 。近 年来 发现 Ｄ Ｎ可 能 与人 类 食 管 癌 、 Ａ 肾病 Ｏ Ｉ ｇ
有 关 ， 人 类 及 动 物 的健 康 构 成 威 胁 ＿ 。 因此 ， 对 １ Ｊ 各 国都对 谷物 及饲 料 中 Ｄ Ｎ 的含量 制 定 了严 格 的限 Ｏ 量标 准 ， 国谷 物 中 Ｄ Ｎ 的 限 量 标 准 为 １ ０ｍ ／ 我 Ｏ ． ｇ
低检 出限 小麦 ８０ｎ／ ， 米 １０ ｇｇ ０ ｇ ｇ玉 ００ｎ／ 。检 测 结 果与 酶 联 免 疫 法一 致 ， 有操 作 简便 、 具 快速 、 灵敏
度 高、 异性 强 、 定性好 、 特 稳 分析 结 果 易于判 定 的特 点 ， 用 于样品 的现 场快 速检 测 。 适 关键 词 ： 胶体 金免 疫层 析 法 ； 氧 雪腐镰 刀 茵烯 醇 ； 脱 玉米 ； 小麦
等 ， 不利 于快 速 检 测 ， 很少 利 用 ； 很 也 一类 是 理 化 检 测， 薄层 色谱 法 （ Ｌ ） 高 效 液相 色谱 法 （ Ｐ Ｃ 。 ＴＣ 和 Ｈ Ｌ ）
薄层色谱法（ Ｌ ） Ｔ Ｃ 的灵 敏度差 ， 而高效液相色谱法 （ Ｐ Ｃ 的灵 敏度 高 ， 样 品处 理 麻 烦 ， 作 复 杂 ， ＨＬ） 但 操
质 量控制
粮 食 科 第２卷 ２１年 第１ 油 品 技 ０ ０ ２ 期
胶 体 金免疫 层析 法快 速测 定 玉 米和 小麦 中脱氧雪腐镰刀菌烯醇
牟 钧， 陈 昱 ， 杨 军 ， 李贵友
６０ ３ ） １０ １ （ 川省粮 油 中心监 测 站 ， 四 四川 成 都 摘 要 ： 用 高效液相 色谱 法 对脱氧 雪腐镰 刀 茵烯 醇阳性 样 品进行 定值 ， 阳性 样 品制备 为 不 同毒 采 将
脱氧雪腐镰刀菌烯醇和雪腐镰刀菌烯醇检验
脱氧雪腐镰刀菌烯醇和雪腐镰刀菌烯醇检验(一）理化性质单端孢霉素是由镰刀菌属产生的一类真菌代谢产物，又称单端抱霉烯族化合物，分子中只含有C、H、O三种元素。
谷物中自然污染的单端孢霉烯族化合物分离属于A、B两型，化学结构式如下： A、B两型单端孢霉烯族化合物结构中含有12,13-环氧环，认为是其毒性的化学基础。
单端泡霉烯族化合物经过体内代谢，脱去环氧环结构，生成一类脱环氧单端孢霉烯族化合物，其毒性将大大降低。
B型单端孢霉烯族化合物去环氧环结构后，其结构式如下：结构式中R1、R2、R3、R4取代基不同，则得到不同的单端孢霉烯族化合物和脱环氧单端孢霉烯族化合物。
频繁的有：脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol, DON)、(nivalenol, NIV)、脱环氧雪腐镰刀菌烯醇(de-epoxy nivalenol,de-epoxy NIV)、脱环氧脱氧雪腐镰刀菌烯醇(de-epoxy deoxynivalenol, de-epoxy DON)等。
DON和NIV的结构都属于单端孢霉烯族化合物中的B型，它们的化学基本结构及理化性质，见表9-2。
表9-2 DON、NIV 化合物的化学基本结构及理化性质 (二)主要来源 DON、NIV主要是雪腐镰刀菌污染玉米、小麦、大麦、燕麦等谷类植物而产生的代谢产物，其对谷物的污染率和污染水平居单端孢霉烯族化合物之首，且常与其他真菌毒素共存，在赤霉病麦中可检出高含量的DON。
(三)毒性与危害 DON,NIV的毒性主要表现为强细胞毒性和胚胎毒性，低剂量接触则表现为肠胃功能紊乱、免疫系统伤害。
猪对该类化合物最敏感，食用霉变的玉米饼、小麦等饲料能引起食欲缺乏、呕吐、全身无力等症状，故又称呕吐毒素。
DON可以引起人类食管癌,IgA肾病、克山病、大骨节病等，而NIV在急性毒性、细胞毒性、皮肤毒性等其他生物作用方面均比DON强10倍。
在谷物中NIV常与DON一起被检出。
(四)分析办法食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的分析办法有免疫亲和层析净化高效液相色谱法(GBIT 23503)，谷物及其制品中DON的测定办法是薄层色谱法和免疫测定法(GBIT5009.111)。
呕吐毒素在粮食及农副产品中的检测方法
呕吐毒素在小麦及面粉等农副产品中的检测方法呕吐毒素又称脱氧雪腐镰刀菌烯醇,是单端孢菌素烯烃中的一种。
作为一种常见的真菌毒素，呕吐毒素在自然界中广泛存在于小麦等粮谷类农作物中，在世界范围内存在着较高的污染率。
小麦一旦被呕吐毒素产毒霉菌株污染，在适宜生长环境(水分活度Aw>0.87)中，产毒菌株会迅速生长，产生呕吐毒素，而小麦中的呕吐毒素又会随小麦粉的生产过程带入到面粉中，严重威胁人体健康。
呕吐毒素属于剧毒或中等毒物，对人有很强的毒性，当人摄入了被呕吐毒素污染的食物后，会导致厌食、呕吐、腹泻、发烧、站立不稳、反应迟钝等急性中毒症状，严重时损害造血系统造成死亡。
由于DON的严重影响引起了各国的普遍重视。
美国食品药物管理局规定食品中呕吐毒素安全标准是1000ug/kg,而欧盟制定的限量标准相对较严，谷粉及玉米粉中允许限量750ug/kg 。
我国2013年国家风险监测计划已将小麦和面粉中呕吐毒素含量的检测列为重点。
呕吐毒素的检测标准1、大麦、小麦、麦片、小麦粉≤1000ug/kg2、玉米、玉米面（渣、片）≤1000ug/kg3、大米、小米、高粱米、大麦米、黍米≤1000ug/kg4、米粉、汤圆粉、面条、饺子皮、馄钝皮、烧麦皮、面糊、面筋、八宝粥罐头≤1000ug/kg呕吐毒素检测方法的国标（1）GB/T23503-2009《食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定免疫亲和层析净化高效液相色谱法》（2）GB/T5009.111-2003《谷物及其制品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定》第二法免疫测定法（ELISA)呕吐毒素检测方法的行标LS/T6113-2015《粮油检测粮食中脱氧雪腐镰刀菌烯醇测定胶体金快速定量法》呕吐毒素商检推荐行业标准SN/T《1571-2005进出口粮谷中呕吐毒素检验方法液相色谱法》测定呕吐毒素的常用方法如：济南痕量生物提供的胶体金定性卡法、酶联免疫吸附测定法、免疫亲和柱高效液相色谱法、胶体金定量卡法。
胶体金免疫层析法检测玉米中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的研究
的原理是通过以胶体金为示踪物 ， 滴加提取液到检
测孔 中 ， 抗原抗 体 反应 生成 不 同 深 浅 的颜 色 来 判定 样品中 Ｄ ＯＮ 的含 量 。胶 体 金 免 疫 层 析 法 操 作 简
单， 检测速度快 ， 很适合现场检测 ， 得到 了愈来愈多
的应 用 。
Ｄ Ｎ ［ 。许多粮谷类都可以受到污染， Ｏ ）］ ２ 如小麦、 大 麦、 燕麦和玉米等。Ｄ Ｎ对粮谷类的污染状况与产 Ｏ 毒菌株 、 温度、 湿度、 通风和 日照等因素有关。这种
层 ， 刻度 管量 取 ２ ０ｍＩ上层 清 液 于 ８ 璃 用 ． ＯｍＩ玻
程较为繁琐 ， 不利于大规模 的推广使 用。胶体金免
烧杯中， 用电吹风加热 ， 将上清液吹干。待烧杯冷却
＊ 收 稿 日期 ： ０ ２ ０ — ２ ２ １－ ４ ４
通 讯 地 址 ： 汉 市江 汉 区江 汉 一路 ７ ９号 武 —
真 菌大 多在 低温 、 潮湿和 收割季 节 ， 谷物 中慢慢 生 在 长， 般 在大麦、 一 小麦 、 米 、 麦 中含 有 较 高 的浓 玉 燕 度， 黑麦、 梁、 在 高 大米 中 的浓 度较低 ， 人 和动物可 对
１
材 料 与 方法
１ １ 仪 器与试 剂 ．
Ｗ ａｅｓ２９ 效 液 相 色 谱 系 统 ， 体 金 标 准《 ／ ３ ０ — ２０ ＧＢ Ｔ ２ ５３ ０９食 品 中脱 氧雪 腐镰 刀菌 烯 醇 的测定 免 疫 亲 和 层 析净 化 高 效 液相 色谱 法 》］ ［。 ５
１ ２ ２ 胶 体金 免疫层 析法 ．．
１２２ １ 称 取 具 有代 表性 的 ５ ～ １０ｇ以上 谷 ．．． ０ｇ ０ 物样品， 粉碎 ， ２ 过 Ｏ目筛 ， 匀后 称 取 ２０ｇ试 样加 混 ． 入 到 １ 心管 中 。再分 别加 入 ４０ｍｌ乙酸 乙 ５ｍＩ离 ． 酯 和 去离 子水 ， 紧盖子 后放 置 于振 荡 器 充分 振 荡 盖
高效液相色谱法测定粮食中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇
Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ：Ａ ｍｅ ｔ ｈ ｏｄ ｗａ ｓ ｅ ｓ ｔ ａ ｂ ｌ ｉ ｓ ｈ ｅ ｄ ｆ ｏ ｒ ｄｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎｉ ｎ ｇ ｄｅ ｏｘ ｙｎ ｉ ｖ ａ ｌ ｅ ｎｏ ｌ ｉ ｎ ｇ ｒ ａ ｉ ｎ ｂ ｙ ｈｉ ｇ ｈ ｐｅ ｒ —
ｗｉ ｔ ｈ ｕ ｌ ｔ ｒ ａ ｖ ｉ ｏ ｌ ｅ ｔ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｏ ｒ ． Ｒｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ ｓ ｈ ｏ ｗ ｔ ｈ ａ ｔ ｔ ｈ ｅ ｌ ｉ ｎ ｅ ａ ｒ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｒ ａ ｎ ｇ ｅ ｓ ｏ ｆ ｄ ｅ ｏ ｘ ｙ ｎ ｉ ｖ ａ ｌ ｅ ｎ ｏ ｌ ａ ｒ ｅ
为三级致癌物要求其含量应小于10mk我和柱使约23ml空气进入柱中准确加入1mlgg国食品安全国家标准食品中真菌毒素限量的甲醇以每秒滴的流速洗脱洗脱液氮吹至干gb127612011中规定玉米等谷物及其制品中呕吐毒用05ml流动相涡旋溶解经022m针式滤器素限量为
高效液 相色谱法测 定粮食中的 脱氧 雪腐镰 刀菌烯醇
ａ ｎ ｄ Ｄｅ ａ ｋ ａ ｒ ｅ ａ ｕｎ ｄｅ ｒ ｔ ｈ ｒ ｅ ｅ ｃ ｏｎ ｃ ｅ ｎｔ ｒ ａ ｔ ｉ ｏｎｓ ａ ｒ ｅ ｂ ｅ ｔ ｗｅ ｅ ｎ ０． ０ ４１ ｔ ｏ ０． ０ ４ ３ ａ ｎｄ ０ ．１ １ ｔ ｏ １ ． ５ ７ ．
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１ ．Ｎａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｌ Ｃｅ ｎ ｔ ｅ ｒ ｆ ｏ ｒ Ｓ ｕ ｐ ｅ ｒ ｖ ｉ ｓ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ Ｉ ｎ ｓ ｐ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｇｒ ａ ｉ ｎ ａ ｎ ｄ Ｏｉ ｌ（ Ｂ ｅ ｉ ｊ ｉ ｎ ｇ １ ０ ０ １ ６ ２ ） ２ ．Ｓ ｈ ｉ ｍａ ｄ ｚ ｕ（ Ｃｈ ｉ ｎ ａ ）Ｌｉ ｍｉ ｔ ｅ ｄ，Ａｎ ａ ｌ ｙ ｔ ｉ ｃ ａ ｌ Ａｐ ｐ ｌ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ Ｃ ｅ ｎ ｔ ｅ ｒ（ Ｂｅ ｉ ｊ ｉ ｎ ｇ １ ０ ０ ０ ２ ０ ）
谷物中脱氧雪腐镰刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮同时测定 荧光免疫层析快速定量法
谷物中脱氧雪腐镰刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮同时测定荧光免疫层析快速定量法1.范围本文件适用于稻谷、玉米、小麦、大豆等粮食及其加工产品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮快速同时定量检测。
2.规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。
其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 5491 粮食、油料检验扦样、分样法GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法GB/T 27404-2008 实验室质量控制规范食品理化检测LS/T 6402-2017 粮油检验设备和方法标准适用性验证及结果评价一般原则3.术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。
4.原理基于抗原抗体免疫性竞争结合的原理，待测定样本中如果含有DON、ZEN等待测抗原，则在层析涌动过程中会与结合垫上荧光微球标记的特异性单克隆抗体反应，抑制带有荧光标记物的抗体与固相在NC 膜检测线上DON-BSA与ZEN-BSA固相物的结合。
待测物中DON 与ZEN 含量不尽相同，结合于检测线上的荧光标记的抗体量也不同，相应的检测线上微球的荧光强度也有强弱。
使用多通道时间分辨荧光免疫分析仪对检测线进行扫描，仪器将光信号转换为电压信号，经过放大输入到模拟数字转换器，将模拟信号转换为数字信号，通过读数仪微处理器预置代码程序分别计算检测线T1、T2 与C 的荧光强度比值，结合标准定量曲线即可一体式同步定量测定样本中DON与ZEN的含量。
5.材料和试剂除另有规定，所有试剂均为分析纯及以上，水为GB/T 6682规定的二级及以上水。
5.1 脱氧雪腐镰刀菌烯醇/玉米赤霉烯酮一体式时间分辨荧光免疫层析定量卡（以下简称检测卡）：性能应满足附录A的要求，不同品牌不同批次的检测卡使用前，应按照附录A进行检测卡性能测定。
5.2 10 µg/mL脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准储备溶液。
脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准
脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准是近年来新出现的一种血液学检测标志物，被广泛应用于临床医学领域。
这种标准的出现对于疾病的早期诊断及治疗具有重要的意义。
下面将详细介绍脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准的应用及检测步骤。
一、脱氧雪腐镰刀菌烯醇的意义脱氧雪腐镰刀菌烯醇简称DHEA，是一种人体内合成的激素，它主要具有调节免疫系统、抗氧化、抗应激等功能。
科学研究发现，DHEA水平的降低与多种疾病存在关联性，如糖尿病、心血管疾病、癌症等。
因此，DHEA水平的检测可作为疾病预防、早期诊断及治疗的重要参考。
二、脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准的测定方法1、采血脱氧雪腐镰刀菌烯醇检测需要抽取静脉血。
在此之前需请患者前一天晚上禁食8-12小时，以保证血液样本处于空腹状态，不会有外界条件的干扰。
2、制备血清将采集的血液样本放置在离心管中，并在室温下静置约30分钟。
待血液凝结后，使用离心机将其离心，分离出血清。
3、检测DHEA水平使用高灵敏度的化学发光法或酶联免疫吸附法检测DHEA水平。
首先将样本加入试剂盒中，分别加入标准品和对照品。
经过混合后读取样本的吸光值，并将其与标准品和对照品的吸光值进行比较，以获得样本DHEA浓度值。
三、脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准的应用1、肿瘤筛查DHEA水平的异常变化有一定的与肿瘤相关。
例如在肺癌、支气管癌、卵巢癌等较多的疾病中可以发现DHEA的含量有着明显变化。
因此，通过测定DHEA水平，可以对肿瘤进行早期筛查、诊断及观察。
2、心血管疾病评估DHEA在调节心血管系统中具有重要作用。
研究表明，DHEA水平不足可引起心脏疾病的发生和加重。
因此，测定DHEA水平有助于对心血管疾病的早期诊断、治疗、观察及预防。
3、调节人体免疫系统DHEA可以提高人体免疫力，并增加机体对应激的适应性能力。
且在老年人中，DHEA水平通常较低。
因此，DHEA水平的检测可以预防免疫系统的降低，改善人体健康状况。
在生活中，随着人们对健康的重视，脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准的应用将会越来越广泛，它将会成为一种常见的体检指标，对人们的健康日常管理提供更为稳妥的指导。
液相色谱法测定谷物中脱氧雪腐镰刀菌烯醇
液相色谱法测定谷物中脱氧雪腐镰刀菌烯醇脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol，DON)又名呕吐毒素，是一种单端孢霉烯族毒素。
主要由禾谷镰刀菌和粉红镰刀菌产生。
DON污染粮谷的情况非常普遍。
世界各地均有报道，特别在中国、日本、美国、阿根廷和南非。
在我国胃癌、食管癌等恶性肿瘤高发区．DON是居民饮食中主要的污染霉菌毒素之一。
DON主要在田间侵染小麦、玉米等谷类作物，当人摄入了被DON污染的食物后。
会导致厌食、呕吐、腹泻、发烧、站立不稳、反应迟钝等急性中毒症状，严重时损害造血系统造成死亡。
DON化学名称为3，7，15一三羟基一12，13一环氧单端孢霉一9一烯一8一酮，为无色针状晶体。
熔点为151。
153℃。
其化学性能非常稳定，具有较强的热抵抗力和耐酸性．在pH值10．O条件下。
100℃加热60min部分被破坏，120℃加热30 min和170℃加热15 min完全被破坏【”。
目前，测定粮谷作物中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇的方法很多，如薄层色谱法(TLC)、气相色谱法(GC)、酶联免疫法(ELISA)等。
本文采用了液相色谱法，使用海能LC7000液相色谱仪配紫外检测器和C18亲水性分离柱，不仅获得了准确的测定结果．而且极大地提高了工作效率。
l 材料与方法1．1仪器海能LC7000液相色谱仪(配备紫外检测器)，7mILOGY呕吐毒素专用净化柱TC—T200，C18亲水性分离柱，旋转蒸发仪，高速均质机，真空泵，小型粉碎机。
1．2试剂乙腈(Merck，色谱纯)，甲醇(Merck，色谱纯)，呕吐毒素标准品(FERMENTEK LTD)。
1．3 操作步骤(1)提取称取粉碎过筛样品25．O g于均质杯中，加入100 mL y(乙腈)：y(水) =84：16提取液，于高速均质机上均质4 min，静置。
(2)净化浓缩取2 mL样品提取液上清液到净化小柱顶端，向下推活塞，使溶液全部过柱，收集净化后溶液放入100 mL标准磨口蒸发瓶中．取出注射器，加入8 mL y(乙腈)：y(水)=84：16提取液到柱顶端，将溶液彻底过柱，合并净化液，于60℃减压蒸干。
谷物及其制品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定方法
谷物及其制品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定方法1 主题内容与适用范围本标准规定了谷物及其制品(蛋糕、饼干、面包等)中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的薄层色谱测定法及免疫测定法(ELISA)的基本要求。
本标准适用于谷物(小米、玉米、大麦等)及其制品(蛋糕、饼干、面包等)中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定。
第一法的最低检出浓度为0.1mg/kg。
第二法的最低检出浓度为0.1ng/kg。
第一篇薄层色谱测定法2 原理谷物及其制品中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇经提取、净化、浓缩和硅胶G薄层展开后，加热薄层板。
由于在制备薄层板时加入了三氯化铝，使脱氧雪腐镰刀菌烯醇在365nm紫外光灯下显蓝色荧光，与标准比较。
3 试剂以下试剂除特殊规定外均为分析纯试剂，水为蒸馏水或同等纯度的水。
3.1 三氯甲烷。
3.2 无水乙醇。
3.3 甲醇。
3.4 石油醚(60～90℃或的30～60℃)。
3.5 乙酸乙酯。
3.6 乙腈。
3.7 丙酮。
3.8 异丙醇。
3.9 乙醚。
3.10 无水乙醚。
3.11 氯化铝(AlCl3·6H2O)：化学纯。
3.12 中性氧化铝：层析用，经300℃活化4h，置干燥器中备用。
3.13 活性炭：20g活性炭，用3mol/L盐酸溶液浸泡过夜、抽滤后，用热蒸馏水洗至无氯离子，在120℃烘干备用。
3.14 硅胶G：薄层层析用。
3.15 脱氧雪腐镰刀菌烯醇(以下简称DON)标准溶液，精密称取5.0mg DON，加乙酸乙酯－甲醇(19∶1)溶解。
转入10m 容量瓶中，用乙酸乙酯－甲醇(19∶1)稀释至刻度，此标准溶液含DON0.5mg/mL。
吸取此标准溶液0.5mL，用乙酸乙酯－甲醇(19∶1)稀释至10mL，此溶液每毫升含DON25?g。
4 仪器4.1 小型粉碎机。
4.2 电动振荡器。
4.3 75mL玻璃蒸发皿。
4.4 层析柱：内径2cm，长10cm，不具活塞。
4.5 10mL具塞浓缩瓶：底部具0.2mL刻度尾管。
4.6 玻璃板：5×20cm。
酶联免疫吸附快速试剂盒法测定谷物及其制品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇过程探讨
酶联免疫吸附快速试剂盒法测定谷物及其制品中脱氧雪腐镰刀
菌烯醇过程探讨
蒋凤琳;麻玉娥;刘莉
【期刊名称】《粮食科技与经济》
【年(卷),期】2011(036)A02
【摘要】用酶联免疫吸附快速试剂盒法检测谷物及其制品中的呕吐毒素含量，对
检测过程中样品制备、样品前处理及操作过程相关事项进行了探讨，为该方法的操作提供参考。
【总页数】1页(P77-77)
【作者】蒋凤琳;麻玉娥;刘莉
【作者单位】驻马店市粮油质量检测中心,河南驻马店463000
【正文语种】中文
【中图分类】TS207.4
【相关文献】
1.毛细管柱-气相色谱法测定谷物中脱氧雪腐镰刀菌烯醇和雪腐镰刀菌烯醇含量 [J], 唐吉旺;周丛;林源;陈鹏飞;钟文涛;吴海智
2.酶联免疫吸附法快速检测谷物中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇 [J], 罗瑞峰
3.基于LTQ-Orbitrap检测粮食及其制品中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇和雪腐镰刀菌烯醇 [J], 黎永乐;李苑雯
4.谷物中脱氧雪腐镰刀菌烯醇和雪腐镰刀菌烯醇的气相色谱测定 [J], 魏润蕴;王竹天
5.谷物中脱氧雪腐镰刀菌烯醇和雪腐镰刀菌烯醇的气相色谱分析 [J], 胡绪英;王令春;曹金鸿
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毛细气相色谱方法检测谷物及豆类中脱氧雪腐镰刀菌烯醇
毛细气相色谱方法检测谷物及豆类中脱氧雪腐镰刀菌烯醇马易怡;郭红卫【期刊名称】《中国卫生检验杂志》【年(卷),期】2007(17)5【摘要】目的:建立检测谷物及豆类中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的毛细气相色谱方法。
并且通过与酶联免疫方法的比较来探讨此方法的优势与缺点。
方法:用甲醇-水(3:1)提取毒素,经过硅镁型吸附剂净化,采用DB-5MS毛细柱以及配备微池电子捕获检测器(μECD)的毛细气相色谱仪测定。
结果:方法的检测限为1.78μg/kg。
在阴性样品中分别添加标准品浓度为0.09、0.15、0.3μg/ml的回收率为86.84%-101.85%,RSD<10%。
结论:此方法有很好的灵敏度、精确度和准确性。
并且,通过与酶联免疫方法的比较,显示出了毛细气相色谱方法的显著优势。
【总页数】3页(P789-790)【关键词】脱氧雪腐镰刀菌烯醇;毛细气相色谱法【作者】马易怡;郭红卫【作者单位】上海复旦公共卫生学院【正文语种】中文【中图分类】O657.71【相关文献】1.毛细管柱-气相色谱法测定谷物中脱氧雪腐镰刀菌烯醇和雪腐镰刀菌烯醇含量 [J], 唐吉旺;周丛;林源;陈鹏飞;钟文涛;吴海智2.高效液相色谱-蒸发光散色法测定西洋参中脱氧雪腐镰刀菌烯醇和雪腐镰刀菌烯醇的方法研究 [J], 吴剑威;赵润怀;陈波3.小麦和玉米中脱氧雪腐镰刀菌烯醇与雪腐镰刀菌烯醇的免疫亲和净化-高效液相色谱检测方法研究 [J], 吴振兴;鲍蕾;静平;门爱军;庞国兴;赵华梅4.谷物中脱氧雪腐镰刀菌烯醇和雪腐镰刀菌烯醇的气相色谱测定 [J], 魏润蕴;王竹天5.谷物中脱氧雪腐镰刀菌烯醇和雪腐镰刀菌烯醇的气相色谱分析 [J], 胡绪英;王令春;曹金鸿因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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谷物及其制品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定方法1 主题内容与适用范围本标准规定了谷物及其制品(蛋糕、饼干、面包等)中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的薄层色谱测定法及免疫测定法(ELISA)的基本要求。
本标准适用于谷物(小米、玉米、大麦等)及其制品(蛋糕、饼干、面包等)中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定。
第一法的最低检出浓度为0.1mg/kg。
第二法的最低检出浓度为0.1ng/kg。
第一篇薄层色谱测定法2 原理谷物及其制品中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇经提取、净化、浓缩和硅胶G薄层展开后，加热薄层板。
由于在制备薄层板时加入了三氯化铝，使脱氧雪腐镰刀菌烯醇在365nm紫外光灯下显蓝色荧光，与标准比较。
3 试剂以下试剂除特殊规定外均为分析纯试剂，水为蒸馏水或同等纯度的水。
3.1 三氯甲烷。
3.2 无水乙醇。
3.3 甲醇。
3.4 石油醚(60～90℃或的30～60℃)。
3.5 乙酸乙酯。
3.6 乙腈。
3.7 丙酮。
3.8 异丙醇。
3.9 乙醚。
3.10 无水乙醚。
3.11 氯化铝(AlCl3·6H2O)：化学纯。
3.12 中性氧化铝：层析用，经300℃活化4h，置干燥器中备用。
3.13 活性炭：20g活性炭，用3mol/L盐酸溶液浸泡过夜、抽滤后，用热蒸馏水洗至无氯离子，在120℃烘干备用。
3.14 硅胶G：薄层层析用。
3.15 脱氧雪腐镰刀菌烯醇(以下简称DON)标准溶液，精密称取5.0mg DON，加乙酸乙酯－甲醇(19∶1)溶解。
转入10m 容量瓶中，用乙酸乙酯－甲醇(19∶1)稀释至刻度，此标准溶液含DON0.5mg/mL。
吸取此标准溶液0.5mL，用乙酸乙酯－甲醇(19∶1)稀释至10mL，此溶液每毫升含DON25?g。
4 仪器4.1 小型粉碎机。
4.2 电动振荡器。
4.3 75mL玻璃蒸发皿。
4.4 层析柱：内径2cm，长10cm，不具活塞。
4.5 10mL具塞浓缩瓶：底部具0.2mL刻度尾管。
4.6 玻璃板：5×20cm。
4.7 薄层涂布器：0.3mm。
4.8 展开槽：内长25cm，宽6cm，高4cm。
4.9 紫外光灯：365nm。
4.10 微量注射器：10?L、50?L。
4.11 50mL平底管。
4.12 双波长薄层扫描仪：带数据处理机。
5 分析步骤5.1 提取称取20g粉碎样品置于200mL具塞锥瓶中，加8mL水和100mL三氯甲烷－无水乙醇(8∶2)，密塞。
在瓶塞上涂层水，盖严防漏，振荡1h，通过折叠快速定性滤纸过滤，取25mL滤液于75mL玻璃蒸发皿中，置90℃水浴上通风挥干。
5.2 净化5.2.1 液－液分配5.2.1.1 谷物：用50mL石油醚分次溶解蒸发皿中的残渣，洗入100mL分液漏斗中，再用20mL(玉米样品用30mL)甲醇－水(4∶1)分次洗涤蒸发皿，转入同一分液漏斗中。
5.2.1.2 谷物制品(蛋糕、饼干、面包等)：用100mL石油醚分次溶解蒸发皿中的残渣，洗入250mL分液漏斗中，再用30mL甲醇－水(4∶1)分次洗涤蒸发皿，转入同一分液漏斗中。
振摇分液漏斗1.5min，静置约15min，使分层后，将下层甲醇－水提取液过柱净化，不要将两相交界处的白色絮状物放入柱内。
5.2.2 柱净化5.2.2.1 小麦及其制品：在层析柱下端与小管连结处塞约0.1g脱脂棉，尽量塞紧，先装入0.5g中性氧化铝，敲平表面，再加入0.4g活性炭，敲紧。
将层析柱下端小管插入一橡皮塞，塞在抽滤瓶上，抽滤瓶中放一平底管接受过柱液将抽滤瓶接上水泵或真空泵，稍稍开启泵，使活性炭压紧，将分液漏斗中的甲醇水提取液小心地沿管壁加入柱内，控制流速为每15s 18～20滴(3mL/min)，甲醇－水提取液过柱快完毕时，加入10mL甲醇－水(4∶1)淋洗柱，抽滤，直至柱内不再有液体流出。
过柱速度控制在2～3mL/min，速度太快净化效果不好，太慢耗时太长。
5.2.2.2 玉米：同5.2.2.1，只是将活性炭的用量改为0.3g。
5.3 制备薄层层析用样液将过往后的洗脱液倒入75mL玻璃蒸发皿中，用少量甲醇－水(4∶1)洗涤平底管。
将蒸发皿置沸水浴上浓缩至干。
5.3.1 小麦：趁热加入3mL乙酸乙酯，加热至沸，在水浴锅上轻轻地反复转动蒸发皿数次，使充分沸腾将残渣中的DO 溶出，并将乙酸乙酯挥发至干，再加入3mL乙酸乙酯同样处理一次，将溶剂挥干，最后加3mL乙酸乙酯，加热至沸，放冷至室温后转入浓缩瓶中，再用三份1.5mL乙酸乙酯洗涤蒸发皿，并入浓缩瓶中。
5.3.2 小麦制品、玉米：趁热加入3mL乙酸乙酯，加热至沸，在水浴锅上轻轻地反复转动蒸发皿数次，使充分沸腾，将残渣中DON溶出，放冷至室温后转入浓缩瓶中。
加约0.5mL甲醇－丙酮(1∶2)于蒸发皿中，用玻棒搅动溶解残渣，将蒸发皿置水浴锅上挥干溶剂后，加入3mL乙酸乙酯，加热至沸，转动蒸发皿，使充分沸腾，放冷至室温后转入同一浓缩瓶中，再用0.5mL甲醇－丙酮(1∶2)和3mL乙酸乙酯同样处理一次，乙酸乙酯提取液并入浓缩瓶中。
将浓缩瓶置约95℃水浴锅上，用蒸汽加热吹氮气浓缩至干，放冷至室温后加入0.2mL三氯甲烷－乙腈(4：1)溶解残渣留作薄层层析用。
5.4 测定5.4.1 薄层板的制备：4g硅胶G加约9mL 15%氯化铝(AICl3·6H2O)水溶液，研磨约2min至呈粘稠状，铺成5cm×20c 的薄层板三块，置室温干燥后，于105℃活化1h，贮干燥器中备用。
5.4.2 点样：在每块薄层板上距下端2.5cm的基线上点样。
第一块板：对每一个样品先点第一块薄层板。
在距板左边缘1.8cm处点25?L样液，在距板上端1.5cm处的横线上并与基线样品点相对应的位置上点2?LDON标准液(50ng)。
按5.4.3.1条下横展薄层板，挥干溶剂后再在薄层板上距左边缘1cm处的基线上点2?LDON标准液(50ng)。
第二块板：在第一块板上未显荧光的样品则需在第二块薄层板上距左边缘0.8～1cm处滴加25?L样液，加1?L标准液(25ng)，在距左边缘2cm处滴加1?L标准液(25ng)，在距右边缘1.2cm处滴加2?L标准液。
对阳性样品可进行概略定量：在薄层板上距左边缘0.8～1cm处滴加样液点(根据情况估计滴加点，或稀释后定量)，在距板左边缘2cm处和在距右边缘1.2cm处分别滴加二个标准点，DON的量可为50ng、75ng、100ng。
再在距板上端1.5cm处的横线上点三个DO 标准点(各约50ng)，使之与基线上的三个点相对应。
5.4.3 展开横展剂：乙醚、乙醚丙酮(95∶5)或无水乙醚。
任选其中一种，使样品DON点偏离原点0.7～1cm，刚好与杂质荧光分开。
纵展剂：三氯甲烷－丙酮－异丙醇(8∶1∶1)三氯甲烷－丙酮－异丙醇－水(7.5∶1∶1.5∶0.1)5.4.3.1 横展：在展开槽内倒入10mL横展剂。
将点好样的薄层板靠样液点的长边斜浸入溶剂，展至极端过1～2min，取出通风挥干3min。
对小麦制品还须再用10mL石油醚(30～60℃)横展一次，展至板端过1min，取出通风挥干5min。
5.4.3.2 纵横：在展开槽内倒入10mL纵展剂。
将横展捍干后的薄层板置展开槽内纵展15cm，取出通风挥干10min。
由于DON与杂质分离的效果受空气湿度影响较大，当板面分离效果不太好时即第一块薄层板的样品点附近有杂质荧光干扰时，可按极性大小依次换用以下几种展开方式：a. 三氯甲烷－丙酮－异丙醇(8∶1∶1)。
b. 三氯甲烷－丙酮－异丙醇(8∶1∶1)并在展开槽盖内面贴上水饱和的滤纸。
c. 三氯甲烷－丙酮－异丙醇－水(7.5∶1∶1.5∶0.1)。
d. 三氯甲烷－丙酮－异丙醇－水(7.5∶1∶1.5∶0.1)并在展开槽内面贴上水饱和的滤纸。
改换纵展方式，展开第二块薄层板。
如展开槽内极性太大，会使DON点变偏。
5.4.4 显荧光：先观察未加热的薄层板可见到显蓝紫荧光的干扰点，这时DON不显荧光，加热薄层板后，杂质点仍显荧光，它在DON荧光点附近，但不干扰DON。
然后将此薄层板置130℃烘箱中加热7～10min，取出放在冷的表面上，1～5min后于365nm紫外光灯下观察。
5.4.5 观察与评定：薄层板经横展后，板上样液点的DON移动约0.7～1cm，正是根据这一点在纵展后使样品DON点摆脱了杂质荧光的干扰。
薄层板上端未经纵展的三个DON标准点可分别作为横展后样品DON点和二个标准DON点的横向定位点，样品DON点又可与纵展后的DON标准点比较R f值而定性，这样从横向和纵向两个方面确定样品DON点的位置达到定性的目的。
两个标准DON点的位置上均无杂质荧光干扰。
如在第一块薄层板上样液未显荧光，而在第二块薄层板上25?L样液＋25ng标准所显荧光强度与25ng标准DON相等，则样品中DON含量为阴性或0.05mg/kg以下。
阳性样品概略定量时，虽然薄层板上三个DON点在横展中都稍有移动，但对各点荧光强度无影响，二个标准点均可用于和样品DON点比较荧光强度。
5.4.6 薄层光密度计测定：激发光波长340nm、发射光波长400nm。
在薄层板上标准DON荧光点至少在100ng、200ng 400ng时，测得的响应与DON的量才呈线性关系。
对DON含量在0.3mg/kg以上的样品才用光密度计测定。
当DON含量在0.3mg/kg时点20?L样液使测得的DON量落在100～ 200ng之间。
用薄层光密度计测定时每块板上滴加二个标准DO 点，DON标准点的量为100ng、200ng或200ng、400ng，以测得的峰面积值为纵坐标，DON的量为横坐标，绘制标准曲线。
5.4.7 计算式中：X——样品中DON的含量，mg/kg；A——薄层板上测得样液点上DON的量，?g；V1——加入三氯甲烷－乙腈混合液溶解残渣的体积，mL；V2——滴加样液的体积，mL；D——样液的总稀释倍数；m——三氯甲烷－乙腊混合液溶解残渣相当样品的质量，g。
5.4.8 精密度：当空白小麦中加入DON量为0.3、0.5、1mg/kg，每个水平n＝4时，目视比较测定结果分别为0.237±0.025、0.5±0.081、0.97±0.112。
用薄层光密度计测定结果分别为0.290±0.053、0.456±0.077、1±0.159(小麦制品的DON回收率为80%～100%)。
空白玉米中加入DON量为0.3、0.5、1mg/kg，每个水平n＝4时，目视比较测定结果为0.234±0.005、0.415±0、0.800±0以上数据为±SD。
第二篇免疫测定法(ELIsA)6 原理将已知抗原吸附在固相载体表面，洗除未吸附抗原，加入一定量抗体与待检样品(含有抗原)提取液的混合液，竞争温育后，在固相载体表面形成抗原抗体复合物。