介入法建立比格犬和小型猪急性心肌梗死模型的对比研究_顾晓龙

PO-212

RhoA/ROCK 信号通路参与调控ONOO-致大鼠冠状动脉舒缩功能损伤过程

孙志军, 李虹伟

首都医科大学附属北京友谊医院心内科 100050

目的观察RhoA和ROCK抑制剂对ONOO-刺激下大鼠冠状动脉舒缩功能受损的影响。

方法分离7周龄SD大鼠冠脉。1. 冠状动脉为5组：①正常葡萄糖组；②左旋葡萄糖组；③高葡萄糖组；④HG+C3转移酶组；⑤HG+Y-27632组。观察血管对4-AP的最大收缩反应和forskolin的舒张反应，并行免疫组化定量分析冠脉RhoA、ROCK1和ROCK2的蛋白表达。2. 小冠脉分为6组：①对照组；②ONOO-组；③DC-ONOO-组；④ONOO-+尿酸组；⑤ONOO-+C3转移酶组；⑥ONOO-+ Y-27632组。观察血管对4-AP的最大收缩反应和forskolin的舒张反应变化。

结果 1.与NG组，LG组，HG+C3转移酶组和HG+Y-27632组4组相比，HG组冠脉最大收缩反应显著降低，各组收缩E max分别为 3.15±0.31mN，2.08±0.17mN，2.13±0.09mN，2.02±0.16mN，1.37±0.22mN，（P <0.05）。与NG组，LG组，HG+C3转移酶组和HG+Y-27632组4组相比，HG 组冠脉对forskolin的最大舒张反应显著降低，分别为48.97±1.77%，39.47±1.32%，39.80±1.59%，39.68±1.57%，35.20±1.98%，（P <0.05）。2. 与对照组，DC-ONOO-组，ONOO-+尿酸组，ONOO-+C3转移酶组，ONOO-+ Y-27632组相比，ONOO-组冠脉对4-AP的最大收缩反应显著降低，（P <0.05）。与对照组，DC-ONOO-组，ONOO-+尿酸组，ONOO-+C3转移酶组，ONOO-+ Y-27632组相比，ONOO-组冠脉对forskolin的最大舒张反应显著降低（P <0.05）。3.与NG组，HG+C3转移酶组和HG+Y-27632组3组相比，HG组冠脉RhoA、ROCK1和ROCK2的蛋白表达均有明显升高（P <0.05）。

结论 1. 高糖可激活RhoA/ROCK信号传导通路，可引起大鼠冠状动脉RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达增加增强；2. RhoA/ROCK通路参与调控了ONOO-对高糖致大鼠冠脉舒缩功能受损的过程。

PO-213

介入法建立比格犬和小型猪急性心肌梗死模型的对比研究

顾晓龙, 黄军, 董正华, 雷辉燕, 龚志华, 文艳飞, 向定成

广州军区总医院心血管内科，广州军区总医院超声影像科 510010

目的经皮冠状动脉球囊封堵法建立五指山小型猪及比格犬两组动物急性心肌梗死模型，比较该两种动物建立急性心肌梗死模型的成功率以及风险发生率，为进行急性心肌梗死相关动物模型选择更合适的动物提供理论基础。

方法广州军区总医院动物实验室提供比格犬和五指山小型猪各6只，在基础麻醉结合局部麻醉下行右侧股动脉切开穿刺术，所有动物均未行气管插管，用JL3.5指引导管代替造影管行左冠造影后，直接送入runthrough导丝至前降支远端，并选择2.5mm*15mmSprinter球囊送至前降支中段（D1发出后）行缺血预适应，封堵时间从1,3,5mm开始逐渐延长，间隔5min，直至心电及血流动力学相对稳定后，持续封堵180min，撤出球囊，并拔除股动脉鞘管，逐层缝合皮肤包扎。术前术后均连续观察心电图变化并床旁按时间节点记录心电图，并于术后24小时抽血检测血CK,CK-MB,TnI，术后7天处死动物切开心包取出心脏行大体标本及病理学检查。

结果比格犬组均存活，五指山小型猪组死亡1例（1/6）；根据心电图、心肌酶学指标及病理改变诊断急性心肌梗死，模型成功率在比格犬组仅成功1例（1/6），小型猪组6例（5/6），恶性心律失常比格犬组无1例发生，小型猪组6例均出现不同程度心律失常（6/6），两组动物感染发生率均为0，两组造模所花费的时间相当（P＞0.05）。

结论五指山小型猪在介入法建立急性心肌梗死模型中虽然心律失常的风险发生率高于比格犬，但是最终的成功率仍高于比格犬组，因此急性心肌梗死动物实验中五指山小型猪与比格犬相比是理想的建模动物。

PO-214

牛磺酸镁配合物对Nav1.5通道电流和蛋白的影响

赵临, 康毅, 娄建石

天津医科大学药理学教研室 300052

目的观察牛磺酸镁配合物(taurine magnesium coordination compound，TMCC)对Nav1.5通道电流、通道动力学以及通道蛋白的影响，以探讨其抗心律失常作用机制。

方法建立表达Nav1.5基因的HEK293细胞模型。采用全细胞膜片钳技术记录I Na，观察TMCC对I Na 的影响并进行通道动力学研究。采用免疫蛋白印迹技术评价TMCC对Nav1.5通道蛋白的影响。

结果在急性作用下，TMCC对Nav1.5通道的峰电流I Na具有浓度和电压依赖性抑制作用，半数最大抑制浓度(IC50)为8.1±0.5 μM。TMCC 100 μM可以使得通道的激活曲线左移，加快通道的激活过程；使通道的失活曲线左移，加快通道的失活过程；显著减缓钠电流从失活状态的恢复速度。在各刺激频率下，给予TMCC 100 μM，第100次系列脉冲刺激时钠电流并无显著性差异。在慢性作用下（孵育24小时），TMCC并未显著性抑制Nav1.5通道电流，也没有使激活曲线、失活曲线以及失活后恢复曲线发生显著性变化。在10Hz刺激频率下，给予TMCC 100 μM，第100次系列脉冲刺激时钠电流有显著性差异。TMCC (100 μM和1000 μM) 均显著性抑制Nav1.5通道蛋白，其中高浓度TMCC (1000 μM)抑制作用的更显著。

结论在急性作用时，TMCC对Nav1.5通道电流具有浓度依赖性和电压依赖性的抑制，主要是通过结合到通道的激活态和失活态而发挥作用的。在慢性作用时，TMCC并未影响Nav1.5通道电流及通道动力学，但是对Nav1.5通道的作用具有一定的使用依赖性。TMCC对Nav1.5蛋白的作用是抑制合成后的蛋白转运到细胞膜上。TMCC既抑制Nav1.5通道电流又抑制通道蛋白表达，可能是TMCC抗心律失常作用的机制之一。

PO-215

阿托伐他汀对异丙肾上腺素诱导的心衰小鼠胞浆内钙火花影响的研究

钱海超, 张鹤萍, 吴永全

首都医科大学附属北京友谊医院心血管中心 100077

目的研究阿托伐他汀对心衰小鼠心功能的影响及探索阿托伐他汀介导的心脏保护作用的潜在机制。

方法将60只C57 BL小鼠用随机数字表随机分为三组：心衰模型组（HF 组）,心衰基础上给予阿托伐他汀治疗组（ATO 组），正常对照组（WT组）。小鼠心衰模型通过应用微渗泵每天给予200 mg/kg/day的异丙肾上腺素建立,HF组基础上同时给予20mg/kg/day阿托伐他汀治疗制备ATO组。应用超声心动图评估模型建立成功与否及不同组别心功能情况。每组动物的心室肌细胞分离及应用荧光染料Fluo4/AM标记后即可进行共聚焦显微镜扫描，观察指标为钙火花及钙瞬变。

结果阿托伐他汀治疗组在给药1周后与心衰未给药组相比明显改善了小鼠心功能(ejection fraction=51% vs.39% ; P<0.001),共聚焦扫描发现WT组和ATO组之间自发钙火花的发生频率(Ca