HPLC法测定盐酸氨溴索片的有关物质

HPLC法测定盐酸氨溴索片的有关物质

发表时间：2013-02-06T14:07:29.387Z 来源：《医药前沿》2012年第32期供稿作者：李明华阮朝滨陈雨高菲菲[导读] 结果所用仪器具有良好的精密性。

李明华阮朝滨陈雨高菲菲（山东罗欣药业股份有限公司 276017）【摘要】目的建立测定盐酸氨溴索片有关物质的HPLC方法。方法用Diamonsil C18(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,以0.01mol/ml磷酸二氢铵溶液（用磷酸调节pH值至7.0）-乙腈（50:50）为流动相,流速为1.0ml/min,柱温30℃,检测波长248nm,进样量20μl。结果建立的高效液相色谱法，可用于盐酸氨溴索片的有关物质测定。结论该方法准确可靠,专属性强,适用于盐酸氨溴索片生产的质量控制。【关键词】盐酸氨溴索片有关物质高效液相色谱仪【中图分类号】R927.2 【文献标识码】B 【文章编号】2095-1752（2012）31-0240-02 盐酸氨溴索是一种呼吸道润滑祛痰药和粘液溶解药，由德国勃林格殷格翰大药厂（BOEHRINGER C.H. SOHN INGELHEIM(GE)）研制，国外对其疗效十分肯定，于1978年在德国上市，商品名“Mucosolvan（沐舒坦）”，后来又在日本、欧洲许多国家纷纷上市。该药具有溶解分泌黏液及促进黏液排除的作用，并能增加呼吸道黏膜浆液腺的分泌，减少黏液腺分泌，从而降低痰液黏度。同时，可促进肺表面活性物质的合成分泌及激活黏液纤毛净化功能的作用，并可降低痰液与纤毛的黏着力，增加支气管纤毛运动，使痰液易于咳出，达到显著排痰，改善呼吸状况的作用。

1 仪器与试药

岛津LC-20A高效液相色谱仪；盐酸氨溴索对照品（99.7%）、盐酸氨溴索片（批号：110514、110515、110516）均由山东罗欣药业股份有限公司提供；乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性[1,2] 色谱柱：Diamonsil C18(250mm×4.6mm,5μm)；柱温：30°C；流动相：0.01mol/ml磷酸二氢铵溶液（用磷酸调节pH值至7.0）-乙腈（50:50）；流速：1.0ml/min；进样量：20μl；检测波长：248nm。

2.2 专属性试验

空白干扰试验：精密量取空白溶剂20µl，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明，空白溶剂不干扰本品的有关物质测定。按处方配制不含盐酸氨溴索的空白样品，精密称取适量，置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含缬沙坦1mg的溶液，滤过，取续滤液作为供试品溶液。精密量取续滤液20µl，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明，空白辅料不干扰本品的有关物质测定。酸破坏试验：取本品的细粉适量，置100ml量瓶中加流动相制成每1ml中含缬沙坦2mg的溶液，摇匀，滤过，取续滤液作为储备液。精密量取上述溶液5ml，置10ml量瓶中，再加1mol/L的盐酸溶液1ml，摇匀，室温放置60分钟后，用1mol/L的氢氧化钠溶液调pH值至中性，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为酸破坏溶液。同法制备酸空白溶液。碱破坏试验：精密量取储备液5ml，置10ml量瓶中，加1mol/L的氢氧化钠溶液1ml，摇匀，在室温下放置30分钟后，用1mol/L的盐酸溶液调节pH值至中性，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为碱破坏溶液。同法制备碱空白溶液。高温破坏试验：精密量取储备液5ml，置10ml量瓶中，放置90℃水浴中加热2小时，取出，放冷，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为高温破坏溶液。同法制备高温空白溶液。氧化破坏试验：精密量取储备液5ml，置10ml量瓶中，加30%双氧水10滴，摇匀，室温下放置48小时，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为氧化破坏溶液。同法制备氧化空白溶液。光照破坏试验：精密量取储备液5ml，置10ml量瓶中，置光照度为4500lx环境中放置2天，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为光照破坏溶液。同法制备光照空白溶液。分别精密量取上述溶液各20µl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明，在此色谱条件下本品所含各种杂质均能与主峰完全分离，因此，采用上述色谱条件能够测定本品的有关物质。

2.3 方法学考察

2.3.1 定量限、检测限

精密称取盐酸氨溴索对照品适量，加流动相适量溶解并定量稀释。经试验溶液的色谱图中，信噪比约为3:1，盐酸氨溴索检测限为0.15ng，信噪比约为10:1，盐酸氨溴索定量限为0.45ng。

2.3.2 线性关系试验

取盐酸氨溴索对照品适量，精密称定，置于量瓶中，加流动相适量，振摇使缬沙坦溶解，并分别稀释制成每毫升含0.2、0.6、1、1.4、1.8ug的溶液。各取20µl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积对浓度作曲线，并计算回归方程Y=65.23X+189.53,r=0.9997。结果表明，盐酸氨溴索在0.2µg/ml～1.8µg /ml浓度范围内与峰面积呈良好线性关系。

2.3.3 精密度试验

取上述1ug/ml的盐酸氨溴索对照品溶液注入液相色谱仪，连续进样6次，记录色谱图及峰面积。结果所用仪器具有良好的精密性。

2.3.4 稳定性试验

取盐酸氨溴索片细粉适量，用流动相溶解并稀释制成每1ml含盐酸氨溴索1mg的溶液，作为供试品溶液，取20µl注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明供试品溶液在配制后1小时内较稳定。

2.4 样品有关物质测定[3] 按2.1色谱条件测定批号为110514、110515、110516的3批样品的有关物质，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍。按主成分自身对照法计算，结果见表1。

表1 样品有关物质测定结果生产企业批号单杂总杂

120324 0.03 0.12

罗欣 120325 0.02 0.11

120326 0.03 0.13

2.5 限度的确定

根据有关物质测定结果，将本品的限度定为：供试品溶液色谱图中如显杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积（0.1%），各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的3倍（0.3%）。

3 讨论

本文建立了盐酸氨溴索片的有关物质测定方法，该方法能将破坏试验产生的降解杂质与盐酸氨溴索很好的分离，且杂质限度比2010版药典中盐酸氨溴索片的杂志限度要求更为严格，测定方法简单、快速、重现性好。

参考文献

[1]英国药典.2009:265-266.

[2]中国药典[S].二部.2010:766-767.

[3]纪传侠，孟科，李雯，等.HPLC法测定注射用氨溴索中的含量和有关物质[J].化工时刊，2008,22（4）：40-42.