实验四 巨噬细胞的吞噬实验.ppt

血细胞包括红细胞、白细胞和血小板。根据白细胞的细胞质 内是否含有特殊颗粒，把白细胞分为有粒、无粒两类。含有 颗粒的白细胞为粒细胞，按瑞色染色时所染成的不同颜色分为 中性、嗜酸性和嗜碱性三种粒细胞。无粒白细胞又分为淋巴 细胞和单核细胞。
白细胞5000～10000/ml个。嗜中性粒细胞数量最多，占50～70％ 常穿出血管，聚集于炎症组织的周围，作变形运动，吞噬细菌。
实验四 小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬实验
实验简介
细胞的胞吞胞吐是细胞进行新陈代谢的方 式之一。高等动物的细胞在摄取营养物质的同 时，有的细胞如单核细胞和巨噬细胞还有通过 识别与吞噬细菌、病毒等外来物质的作用来达 到机体防御的功能。本实验通过预先激活腹腔 巨噬细胞，然后腹腔注射鸡红细胞，从而引起 腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞。通过光镜可清楚 地观察到这一有趣的现象。
体内有炎症时，它的数量就增多。嗜酸性粒细胞数量最少。淋巴
细胞与免疫有密切关系，患结核病时，淋巴细胞明显增加。单核
细胞是血液中最大的细胞，变形活动非常活跃，能吞噬细菌和
异物。单核细胞穿出血管到结缔组织中可变为巨噬细胞。
嗜酸性粒细胞具有粗大的嗜酸性颗粒，颗粒内含有过氧化物酶 和酸性磷酸酶；嗜碱性粒细胞中有嗜碱性颗粒，内含组织胺、
将染色后的涂片置于显微镜油镜下观察，绘图记录。 未被吞噬பைடு நூலகம்鸡红细胞
吞噬了鸡红细胞 的吞噬细胞
实验结果的观察
观察细胞的形态特征，注意不同细胞的大 小比例和形状；鸡红细胞和巨噬细胞的区分； 吞噬前后的大小和形状的不同。注意鸡红细胞 被吞噬后形态上的变化：多观察不到核，且形 态变圆。
吞噬过程的观察：吸附、正在吞噬、吞噬 后、消化后（一般观察不到正在吞噬的过程， 想想为什么）。
目的要求
1．了解小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象的原理 2．熟悉细胞吞噬作用的基本过程
基本原理
高等动物体内的巨噬细胞、单核细胞和嗜中性粒细胞，具 有吞噬的功能。它们广泛分布在组织和血液中，在机体的 非特异免疫功能中起着重要的作用。当病原微生物或其它 异物侵入机体时，能招引巨噬细胞，而巨噬细胞又具有趋 化性，它通过产生活跃的变形运动，主动向病原体和异物 移行聚集，首先把异物吸附在细胞表面，随之，吸附区域 的细胞膜向内凹陷，伸出伪足包围异物，并吞入胞质，形 成吞噬泡，继而在细胞质中的初级溶酶体与吞噬泡融合， 形成吞噬溶酶体，把病原体杀死，异物消化分解。
肝素与5-羟色胺等生物活性物质 ；中性粒细胞具有变形运动和 吞噬活动的能力。
噬碱性粒细胞
噬酸性粒细胞
淋巴细胞
噬中性粒细胞
单核细胞
实验用品
1．器材：显微镜、解剖盘、剪刀、镊子、注射器、 载玻片、盖玻片、吸管等
2．试剂： 0.85%生理盐水；阿氏（Alsever）血液保存液； 6%的淀粉肉汤。
3．材料：小白鼠；1%鸡红细胞悬液
方法与步骤
鸡翼下静脉取血后，用Alsever以1:4比例保存 于4度（可保存一周）。实验前加生理盐水离 心两次，然后根据获得的红细胞的体积加入适 量的生理盐水，调至鸡红细胞浓度为1%。
实验前1天，向小鼠腹腔注射1ml淀粉肉汤(预先激活腹腔 巨噬细胞：诱导腹腔内产生较多的巨噬细胞 )，实验前30 分钟，向腹腔内注射1ml1%的鸡红细胞。
注意事项
小鼠处死后立即注人生理盐水 2ml，轻揉 腹部，可获得较多的巨噬细胞。
1、实验报告
作业
高倍镜下绘处在不同吞噬阶段的巨噬细胞图各一个，示 吞噬作用的过程。
计算吞噬细胞的吞噬指数和吞噬百分数。 吞噬百分率＝100个巨噬细胞中内含鸡红细胞的巨噬细 胞数/100个巨噬细胞总数 吞噬指数＝100个巨噬细胞吞噬的鸡红细胞总数/100个巨 噬细胞总数
淀粉肉汤为异物， 但是无毒害，可刺 激小鼠巨噬细胞的 产生，并且淀粉肉 汤里含有台盼蓝， 巨噬细胞吞噬后会 被染成蓝色，便于 观察。
注射后30分钟，处死小鼠。 （右手抓住鼠尾，用力向后拉， 左手拇指与食指同时向下按住 鼠头，使脊髓与脑髓间断开）
吸取腹腔液
在干净的载玻片上滴加一滴生理盐水，向其中滴加一滴腹 腔液，静置10分钟，使腹水细胞贴壁，弃去生理盐水，待 其稍干后，进行瑞氏染色。
2、思考题
实验前一天，给小白鼠注射含淀粉肉汤 的目的是什么？
1、能否用生理盐水、葡萄糖等代替淀粉肉汤？能否单纯注射 台盼蓝？
不能用生理盐水、葡萄糖代替淀粉肉汤（可用蛋白胨 等代替），因为所有细胞都具有生理盐水及葡萄糖，它们可以 通过浓度梯度进入细胞，不足以诱导更多巨噬细胞的作用； 不能单纯注射台盼蓝，因为其不能诱导巨噬细胞的产生。 在注射淀粉肉汤后，抽取腹腔液，后在离体条件下在培 养皿中加入墨汁，可以观察到巨噬细胞吞噬墨汁，变成黑色。
观察时，将视野光线调暗。在高倍镜下，先分辨清鸡红细胞和 巨噬细胞。鸡红细胞为淡黄色、椭圆形、有核的细胞。而数量较 多、体积较大圆形或不规则的细胞，其表面有许多似毛刺状的小突 起（伪足），胞质中有数量不等的蓝色颗粒（为吞入的含台盼蓝 淀粉肉汤形成的吞噬泡）即为巨噬细胞。变换视野，仔细观察巨噬 细胞吞噬鸡红细胞的过程。可见有的鸡红细胞（一至多个）紧贴附 于巨噬细胞的表面；有的巨噬细胞已将1至数个红细胞部分吞入； 有的巨噬细胞已吞入1个或几个红细胞在胞质中刚刚形成椭圆形的 吞噬泡；有的巨噬细胞内的吞噬泡体积缩小，并呈现圆形，这是 与初级溶酶体发生融合，泡内物正在被消化分解。