蜡样芽孢杆菌的检测

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实验步骤
2:样品稀释及计数 样品稀释及计数: 样品稀释及计数
1mL 1mL 1mL 1mL 1mL
10-1
10-6Hale Waihona Puke Baidu
9mL
9mL
9mL
9mL
9mL
1 每个稀释度混匀吹打完毕 后换用另一只灭菌吸管。 后换用另一只灭菌吸管。 2 每稀释度接种两个平皿。 每稀释度接种两个平皿。
各稀释度0.1mL, 各稀释度0.1mL,L型玻棒均匀涂布 0.1mL 30℃ ,24h ℃
肠毒素测定
报告
实验步骤
1
样品的保存和送检 待检样品应保持在6℃以下运送并尽可能不使其冷冻。 6℃以下运送并尽可能不使其冷冻 待检样品应保持在6℃以下运送并尽可能不使其冷冻。 对可疑是该菌引起的食物中毒的病人, 对可疑是该菌引起的食物中毒的病人,应取可疑食 物或病患者的呕吐物、粪便,且立刻在3小时内送检 小时内送检。 物或病患者的呕吐物、粪便,且立刻在 小时内送检。 送达实验室后,应保存于4℃并尽快检验。 送达实验室后,应保存于 ℃并尽快检验。
二 培养特性
营养要求不高, 营养要求不高,在普通 培养基上可生长良好, 培养基上可生长良好, 最适宜温度为28~35℃。 最适宜温度为 ℃ 菌落较大,不透明, 菌落较大,不透明,表 面粗糙似毛玻璃状或蜡 边缘常成扩展状。 状,边缘常成扩展状。 在普通肉汤上培养基呈 浑浊生长, 浑浊生长,常形成菌膜 或壁环,震摇易乳化。 或壁环,震摇易乳化。
检验程序
检样 50g(mL)+450mL +450mL无菌磷酸盐缓冲稀释液 50g(mL)+450mL无菌磷酸盐缓冲稀释液
10-1~10-6稀释液 选择性培养基 MYP 30°C , 24h ° 形态观察 菌数测定 营养琼脂 30°C , 24h ° 证实试验
革兰染色 生长及菌落观察 鉴别试验
生化反应
实验结果
3 计数(表面涂布法)
1克样品中含的蜡样芽孢杆菌数: 克样品中含的蜡样芽孢杆菌数: 克样品中含的蜡样芽孢杆菌数 证实阳性菌落数 挑取的菌落数
MYP平板上的菌落数× 平板上的菌落数
× 稀释倍数× 10 稀释倍数×
举例:将检样10 稀释液0.1mL涂布于MYP 0.1mL涂布于MYP琼脂平板 举例:将检样10-4稀释液0.1mL涂布于MYP琼脂平板 生成的可疑菌落数为25 25个 个进行鉴定, 上,生成的可疑菌落数为25个,取5个进行鉴定, 证实为蜡样芽胞杆菌的是4 1g样品中含的蜡 证实为蜡样芽胞杆菌的是4个,则1g样品中含的蜡 样芽孢杆菌数为(25×4/5) 样芽孢杆菌数为(25×4/5)×104×1/0.1
计菌落数
MYP 琼脂平板
3 分离培养 计数后,从每个平板选取5个已计数的菌落分别接 种于营养琼脂斜面做纯培养,30℃培养24h,进 行形态观察和证实试验。
第二次课
分类 需氧芽孢杆菌根据芽孢囊膨大与否及芽孢的 形状,可将其分为3个群。第一群的芽孢不突出菌 体,形成的芽孢为椭圆形或圆柱形;第二类的芽 孢囊突出菌体,形成的芽孢为椭圆形;第三群的 芽孢囊突出菌体形成的芽孢为球形。 蜡样芽胞杆菌属于第一群。该群内细菌,根据 营养型细胞的宽度可以又分为两类,其中宽度 ≥0.9µm者称大细胞群,该群有蜡样芽胞杆菌、蕈 状芽孢杆菌、紫云金芽孢杆菌、炭疽芽胞杆菌、 巨大芽孢杆菌。这几种与蜡样芽胞杆菌形态上相 似的4个菌种必须用微生物学和生化学试验进行鉴 别。
动力-硝酸盐生化鉴定管 动力 硝酸盐生化鉴定管
1 形态观察 本菌革兰染色阳性,呈短链或长链,芽孢位于菌体 中央或偏端,不是菌体胀大。
2 实验结果 1 MYP平板上:粉红色菌落,菌落周围产生粉红色浑浊 MYP平板上 粉红色菌落 菌落周围产生粉红色浑浊 平板上: 菌落, 圈。 2 L-酪蛋白琼脂培养基:菌落周围形成透明圈。 酪蛋白琼脂培养基:菌落周围形成透明圈 透明圈。 3 触酶试验:加入过氧化氢后30秒产生气泡。 触酶试验:加入过氧化氢后30秒产生气泡 30秒产生气泡。 4 TSSB平板上:菌落周围产生的β溶血圈。(在菌落 TSSB平板上 菌落周围产生的β溶血圈。 平板上: 周围出现一个大小不一的完全透明清楚的宽带)。 周围出现一个大小不一的完全透明清楚的宽带)。 紫云金芽孢杆菌和蕈状芽孢杆菌呈现弱得溶血现象, 紫云金芽孢杆菌和蕈状芽孢杆菌呈现弱得溶血现象, 而炭疽芽胞杆菌通常不溶血。 而炭疽芽胞杆菌通常不溶血。 5 动力-硝酸盐生化鉴定管:细菌沿穿刺线扩散生长, 动力-硝酸盐生化鉴定管:细菌沿穿刺线扩散生长 扩散生长, 加硝酸盐试剂后培养基变红 加硝酸盐试剂后培养基变红。 蕈状芽孢杆菌常常呈绒毛状生长, 蕈状芽孢杆菌常常呈绒毛状生长,蜡样和紫云金芽 孢杆菌通常运动极为活泼,而炭疽芽胞杆菌则不运动。 孢杆菌通常运动极为活泼,而炭疽芽胞杆菌则不运动。
4 证实试验
预 实 验 营 养 琼 脂 培 养 基 菌落形态观察
革兰染色
镜检观察菌体 卵磷脂酶实验 L-酪氨酸分解实验 酪氨酸分解实验 触酶实验 溶血实验
双氧水 胰酪胨大豆羊血琼脂平板 MYP琼脂平 琼脂平 板 L-酪氨酸琼脂培养基 L-酪氨酸琼脂培养基
生 化 实 验
鉴 别 试 验
动力与硝酸盐还原实验
三 流行病学
蜡样芽胞杆菌
病原菌 条件致病菌
肠 毒 素 不 耐 热

eg:
实验目的
1、掌握蜡样芽孢杆菌检验的主要步骤与方法。 掌握蜡样芽孢杆菌检验的主要步骤与方法。
2、了解蜡样芽孢杆菌菌落特点和掌握生化反 了解蜡样芽孢杆菌菌落特点和掌握生化反 应结果的判断方法。 应结果的判断方法。
蜡样芽胞杆菌具有以下生化特性: 实验原理:蜡样芽胞杆菌具有以下生化特性:
产生溶血素:使胰酪胨大豆羊血琼脂( 产生溶血素:使胰酪胨大豆羊血琼脂(TSSB) ) 中的血细胞发生β溶血 溶血。 中的血细胞发生 溶血。 产生明胶酶: 产生明胶酶:将明胶水解为多肽再水解为氨 基酸而使其由半固体转化为液态状。 基酸而使其由半固体转化为液态状。 触酶实验: 触酶实验 产生过氧化氢酶分解过氧化氢生 成水和氧气。 成水和氧气。 动力和硝酸盐试验: 蜡样芽胞杆菌运动活泼, 动力和硝酸盐试验 蜡样芽胞杆菌运动活泼 能还原硝酸盐为亚硝酸盐。 能还原硝酸盐为亚硝酸盐。
不发酵甘露醇:在甘露醇 卵黄 卵黄-多粘菌素 不发酵甘露醇:在甘露醇-卵黄 多粘菌素 (MYP)琼脂平板上生成微粉红色菌落。 )琼脂平板上生成微粉红色菌落。 产生卵磷脂酶:分解MYP琼脂中的卵磷脂, 琼脂中的卵磷脂, 产生卵磷脂酶:分解 琼脂中的卵磷脂 在菌落周围产生粉红色混浊环(沉淀环)。 在菌落周围产生粉红色混浊环(沉淀环)。 产生酪蛋白酶:分解培养基中的酪蛋白, 产生酪蛋白酶:分解培养基中的酪蛋白,生 酪氨酸在菌落周围形成透明圈。 成L-酪氨酸在菌落周围形成透明圈。 酪氨酸在菌落周围形成透明圈
(第一次课) 第一次课)
蜡样芽胞杆菌概述 蜡样芽胞杆菌概述
一 形态与染色
本菌是革兰氏阳性杆菌, 本菌是革兰氏阳性杆菌, 1.0~1.2µm×3~5µm,菌 × 菌 体两端钝圆,有鞭毛, 体两端钝圆,有鞭毛, 无荚膜, 无荚膜,多成短链状排 列。 本菌生长6小时以后可以 本菌生长 小时以后可以 既可以形成芽孢, 既可以形成芽孢,形成 的芽孢小于菌体横径, 的芽孢小于菌体横径, 位于中心或稍偏于一端 稍偏于一端。 位于中心或稍偏于一端。
实验材料 •甘露醇 卵黄 多粘菌素(MYP)琼脂平板 甘露醇-卵黄 多粘菌素( 甘露醇 卵黄-多粘菌素 ) •营养琼脂培养基 营养琼脂培养基 •L-酪氨酸营养琼脂培养基 •胰酪胨大豆羊血琼脂 胰酪胨大豆羊血琼脂(TSSB) 胰酪胨大豆羊血琼脂 •动力 硝酸盐生化鉴定管 动力-硝酸盐生化鉴定管 动力 •木糖 明胶生化鉴定管 木糖-明胶生化鉴定管 木糖 •硝酸盐试剂 硝酸盐试剂(1%对氨基苯磺酸溶液 0.2% α-萘胺溶 对氨基苯磺酸溶液, 硝酸盐试剂 对氨基苯磺酸溶液 萘胺溶 液) •3%的双氧水 的双氧水 •革兰染液 革兰染液
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