色谱柱的保存

卡套柱的安装（加预柱） 卡套柱的安装（加预柱）
1．将卡套架套入柱芯 2．将两片夹套片嵌入柱芯的凹槽， 使夹套高于柱芯（见左图） 3．将已套到柱芯上的卡套架向上 推，直至高过夹套片 4．将“子弹头”预柱放入卡套片 ．将“子弹头” 内 5．将卡套帽和卡套架旋在一起， 然后用手拧紧 6．然后依同样的顺序连接好柱子 的另一端 7．连接到液相色谱仪，PEEK接头 ．连接到液相色谱仪，PEEK接头 手拧即可；若为不锈钢接头应使 用专用扳手
色谱柱的老化
色谱柱安装和系统检漏工作完成后，就可以对色谱柱进行老化了。对 色谱柱升至一恒定温度，通常为其温度上限。特殊情况下，可加热至 高于最高使用温度10-20℃ 高于最高使用温度10-20℃左右，但是一定不能超过色谱柱的温度上限， 那样极易损坏色谱柱。当到达老化温度后，记录并观察基线。初始阶 段基线应持续上升，在到达老化温度后5 10分钟开始下降，并且会持 段基线应持续上升，在到达老化温度后5-10分钟开始下降，并且会持 续30-90分钟。当到达一个固定的值后就会稳定下来。如果在2-3小时 30-90分钟。当到达一个固定的值后就会稳定下来。如果在2 后基线仍无法稳定或在15-20分钟后仍无明显的下降趋势，那么有可能 后基线仍无法稳定或在15-20分钟后仍无明显的下降趋势，那么有可能 系统装置有泄漏或者污染。遇到这样的情况，应立即将柱温降到40℃ 系统装置有泄漏或者污染。遇到这样的情况，应立即将柱温降到40℃ 以下，尽快的检查系统并解决相关的问题。如果还是继续的老化，不 仅对色谱柱有损坏而且始终得不到正常稳定的基线。 一般来说，涂有极性固定相和较厚涂层的色谱柱老化时间长，而弱极 性固定相和较薄涂层的色谱柱所需时间较短。而PLOT色谱柱的老化 性固定相和较薄涂层的色谱柱所需时间较短。而PLOT色谱柱的老化 方法有各不相同。
注意事项
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7.
柱子在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动； 当柱子和色谱仪联结时，阀件或管路一定要清洗干净； 要注意流动相的脱气； 避免使用高粘度的溶剂作为流动相； 进样样品要提纯； 严格控制进样量； 大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2 7.5，尽量不超过该 大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2－7.5，尽量不超过该 色谱柱的pH范围 色谱柱的pH范围
注意事项
1. 2.
3. 4. 5. 6.
避免流动相组成及极性的剧烈变化 如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在实验 完毕柱子冲洗干净，并保存在乙腈中 压力升高是需要更换预柱的信号 每天分析工作结束后，要清洗进样阀中残留的样品； 每天分析测定结束后，都要用适当的溶剂来清洗柱； 若分析柱长期不使用，应用适当有机溶剂保色谱柱标签上的箭头所示方向是评 价时流动相流动的方向，使用过程相流动 的方向也最好按此方向。
流动相
流动相中所用的各种有机溶剂要尽可能地 使用色谱纯或至少是分析纯试剂，配流动 相的水最好是超纯水或全玻璃器皿的双蒸 水。如果将所配得流动相再经过0.45 或0.22 m 的滤膜过滤一次则更好，这一点对含盐 的流动相尤为重要。另外装流动相的容器 和色谱系统中的在线过滤器等装置应该定 期清洗或更换。总之必须保证所使用的流 动相和色谱系统是足够的清洁。
2.
色谱柱使用前注意事项
在使用前一定要注意色谱柱的储存液与要分析样 品的流动相是否互溶，如胺基(NH2) 氰基(CN)柱 均为正相条件下评价，所以如果使用条件为反相 条件时，请用一中介流动相(如异丙醇) 先置换掉 柱内的储存液然后再应用。反相条件对于C18固定 相采用的是甲醇-水为评价流动相，若要使用含盐 浓度较高的流动相，使用前请用超纯水（或甲醇 含量相对较低的甲醇-水）顶替掉原来的评价流动 相，否则会对色谱柱造成极大的伤害，将会明显 地减少色谱柱使用寿命
卡套柱的安装（不加预柱） 卡套柱的安装（不加预柱）
1．将卡套架套入柱芯 2．将两片夹套片嵌入柱芯的凹槽，使 柱芯高于夹套（见左图） 3．将已套到柱芯上的卡套架向上推， 直至高过夹套片 4．将卡套帽和卡套架旋在一起，然后 用手拧紧 5．然后依同样的顺序连接好柱子的另 一端 6．连接到液相色谱仪，PEEK接头手 ．连接到液相色谱仪，PEEK接头手 拧即可；若为不锈钢接头应使用专用 扳手 注意：使用卡套柱时，两端的卡套应 时刻连接在柱芯上。不管是平衡色谱 柱或是清洗，任何时候都不能将卡套 取下来，否则会造成填料的流失。
色谱柱的保存
(1).在别无选择的情况下，流动相的使用条件又非常剧烈时 ( 如pH>10.0 或pH<2.0) ，凡是以硅胶为基质的色谱柱关机 前最好用适当的溶剂(如超纯水)将流动相顶替出柱然后方 可短时间或过夜保存。 (2).如色谱柱要长时间保存，色谱柱必须存于合适的溶剂状态 下。对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中；正相柱可以 存于严格脱水后的纯正己烷中；离子交换柱可以储存于水 (含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞)中，并将购买新色谱柱时附 送的防尘防干裂塑料堵头堵上。对使用过含盐浓度较高的 流动相的色谱柱，在储存之前，必须用超纯水顶替掉原来 的流动相后，再储存于合适的溶剂状态下。储存的温度最 好是室温
色谱柱的再生
(3).离子交换柱的再生长时间在高pH值和高离子强 (3).离子交换柱的再生长时间在高pH值和高离子强 度缓冲溶液中使用将导致色谱柱离子交换能力降 低用稀酸缓冲溶液冲洗可使阳离子柱再生反之用 稀碱缓冲溶液冲洗可使阴离子柱再生以上色谱柱 的再生方法并不是绝对的标准方法用户可根据自 己的实际经验和目的选择合适的并能溶解柱内污 染物的溶剂作流动相按正方向或反方向的冲洗但 是需要指出的是无论采用什么方法再生色谱柱均 不可能完全恢复柱效或其他参数至新柱水平
更换色谱柱滤网和玻璃棉过滤片 同时可以修补色谱柱） （同时可以修补色谱柱）
注意：在取出反相柱芯的滤网和玻璃片之前，应 该将色谱柱充分用水和甲醇/ 该将色谱柱充分用水和甲醇/乙腈冲洗，而且 修补工具的头部也应该蘸取少量的甲醇/ 修补工具的头部也应该蘸取少量的甲醇/乙腈， 以避免在取出滤网和玻璃棉滤片时带出柱子内 的填料。 1．将修补工具中的2套入柱芯的顶端 ．将修补工具中的2 2．将修补工具中的3轻轻地旋入已套着2的柱芯中， ．将修补工具中的3轻轻地旋入已套着2 并顺时针方向旋转到旋紧 3．一手握柱芯，另一只手轻轻地向外拉3，取出 ．一手握柱芯，另一只手轻轻地向外拉3 柱芯顶端的滤网 4．用一个小铲子轻轻地取出滤网下面的玻璃棉 以及被污染的填料 5．将新的填料用甲醇润湿，然后填入挖去的部 位，压平 6．照（左图）装上新的玻璃棉滤网，并用修补 工具中的4 工具中的4将玻璃棉压入柱芯顶端 7．柱芯顶端套上2，然后参照（左图）将滤网放 ．柱芯顶端套上2 入8．压紧，然后取下2，再用4将滤网的边缘 ．压紧，然后取下2，再用4 压平
样品
样品也要尽可能的清洁，同样可选用样品过 滤器或样品预处理柱(SPE柱)对样品进行预 处理，若样品不便处理要使用保护柱。在 用正相色谱法分析样品时如无特殊要求所 有的溶剂和样品应严格脱气
pH值
以常规硅胶为基质的键合相填料高效液相色 谱柱通常的pH 值适用范围是2.0-10.0。 当必 须要在pH值适用范围的边界(特别是在 8.0<pH< 10.0时)条件下使用高效液相色谱柱 时，每次使用结束后立即用适合于色谱柱 储存，并与所使用的流动相互溶的溶剂清 洗并完全置换掉原来所使用的流动相。
色谱柱的保存
LingHua
柱填料
液相色谱柱的分离作用是在填料与流动相之间进行的，柱 子的分类是依据填料类型而定。 正相柱：多以硅胶为柱填料。根据外型可分为无定型和 球型两种，其颗粒直径在3 球型两种，其颗粒直径在3—10 µm的范围内。另一类正相 填料是硅胶表面键合—CN， NH2等官能团即所谓的键合 填料是硅胶表面键合—CN，-NH2等官能团即所谓的键合 相硅胶。 反相柱：主要是以硅胶为基质，在其表面键合十八烷基 官能团(ODS)的非极性填料。也有无定型和球型之分。 官能团(ODS)的非极性填料。也有无定型和球型之分。 常用的其他的反相填料还有键合C8、C4、C2、苯基等， 常用的其他的反相填料还有键合C8、C4、C2、苯基等， 其颗粒粒径在3 其颗粒粒径在3—10 µm之间。
色谱柱的再生
因为高效液相色谱柱是消耗品随着使用时间或进样次数的增 加当出现色谱峰高降低峰宽加大或出现肩峰时一般来说可 能是柱效下降 (1).反相柱的再生采用以甲醇: (1).反相柱的再生采用以甲醇:水=95:5(V/V) 纯甲醇二氯甲烷 等溶剂作流动相顺次冲洗每种流动相流经色谱柱的量为20等溶剂作流动相顺次冲洗每种流动相流经色谱柱的量为2030倍色谱柱体积然后再以相反顺序冲洗色谱柱 30倍色谱柱体积然后再以相反顺序冲洗色谱柱 (2).正相柱顺次以正己烷异丙醇二氯甲烷甲醇作流动相冲洗色 (2).正相柱顺次以正己烷异丙醇二氯甲烷甲醇作流动相冲洗色 谱柱每步注意平衡溶剂的顺序不要颠倒每种流动相流经色 谱柱的量为20-30倍柱体积(因异丙醇9 谱柱的量为20-30倍柱体积(因异丙醇9的粘度较大冲洗过程 中请随时注意调整冲洗的流速) 中请随时注意调整冲洗的流速) 用甲醇冲洗完后再以相反 的顺序冲洗色谱柱要注意上述溶剂必需严格脱水
平衡色谱柱
1.
反相色谱柱在经过出厂测试后是保存在乙腈/ 反相色谱柱在经过出厂测试后是保存在乙腈/水 中的。需一定确保所使用的流动相和乙腈/ 中的。需一定确保所使用的流动相和乙腈/水互 溶。由于色谱柱在储存或运输过程中可能会干掉， 因此在用流动相分析样品之前，应使用10－20倍 因此在用流动相分析样品之前，应使用10－20倍 柱体积的甲醇或乙腈平衡色谱柱；如果所使用的 流动相中含有缓冲盐，应注意用纯水“过渡” 流动相中含有缓冲盐，应注意用纯水“过渡”。 硅胶柱或极性色谱柱在经过出厂测试后是保存在 正庚烷中的。如果该色谱柱需要使用含水的流动 相，请在使用流动相之前用乙醇或异丙醇平衡