实验：阿司匹林血药浓度测定

二、实验原理
• 阿司匹林在体内转化为水杨酸盐。把混合 阿司匹林在体内转化为水杨酸盐。 试剂加到家兔口服阿司匹林后采集不同时 间的血清样本中，升汞沉淀蛋白质， 间的血清样本中，升汞沉淀蛋白质，而铁 盐与水杨酸作用显紫色， 盐与水杨酸作用显紫色，在一定温度范围 显色强度与水杨酸的浓度成正比。 内，显色强度与水杨酸的浓度成正比。在 λ540nm波长处测定紫色溶液的吸光度 波长处测定紫色溶液的吸光度 ），再根据标准曲线进行浓度换算 （A），再根据标准曲线进行浓度换算，即 ），再根据标准曲线进行浓度换算， 得到给药后不同时间的血药浓度值。 得到给药后不同时间的血药浓度值。采用 残数法求出Cmax，tmax，K，t1/2， 残数法求出 ， ， ， ， V等有关药动学参数。 等有关药动学参数。 等有关药动学参数
五、实验数据处理
• 1.作图：在座标纸上以血药浓度 时间描点 作图： 作图 在座标纸上以血药浓度-时间描点 作图。 作图。 • 2.用线性回归法法求出口服给药后的各药 用线性回归法法求出口服给药后的各药 物动力学参数（ 物动力学参数（Cmax，tmax，K，Ka， ， ， ， ， t1/2，V，CL），同时计算 ），同时计算 ， ， ），同时计算AUC0～∞ ～ 积分法或梯形法）。 （积l）
1 99.5
2
3
4
5
298.5 497.5 696.5 895.5
0.135 0.282 0.443 0.643 0.787
2.血药浓度测定 血药浓度测定
• （1）实验家兔的准备及给药方法 ） • 体重 体重2.5～3kg，耳完整无缺，静脉清晰，血 ～ ，耳完整无缺，静脉清晰， 提前12h禁食 流通畅无阻滞的健康家兔 ，提前 提前 禁食 • 口服片剂剂量为 ～100mg/kg 口服片剂剂量为50～ • 给药时，二人协作，一人坐好，将兔躯干体夹 给药时，二人协作，一人坐好， 于两腿之间，左手握住双耳，固定头部，右手 于两腿之间，左手握住双耳，固定头部， 抓住前肢，另一人将开口器横放于兔口中， 横放于兔口中 抓住前肢，另一人将开口器横放于兔口中，将 舌压在开口器下面，固定开口器， 舌压在开口器下面，固定开口器，用镊子夹住 药片，从开口器洞孔送入咽部， 药片，从开口器洞孔送入咽部，用20ml水冲 水冲 服下。 服下。
阿司匹林血药浓度测定
一、实验目的
1.掌握阿司匹林血样的处理方法 掌握阿司匹林血样的处理方法 掌握阿司匹林血样的 2.掌握血药浓度 时间曲线的测定方 掌握血药浓度-时间曲线的测定方 掌握血药浓度 法 3.掌握单室模型血管外给药药物动 掌握单室模型血管外给药药物动 力学参数的提取方法 力学参数的提取方法
三、试 剂
• 1.混合试剂。（升汞 硝酸铁） 混合试剂。（升汞+硝酸铁 混合试剂。（升汞 硝酸铁） • 2.水杨酸标准溶液（500µg/ml） 水杨酸标准溶液（ 水杨酸标准溶液 ）
四、实验内容
• 1.血清水杨酸标准曲线的制作 血清水杨酸标准曲线的制作 • 取刻度离心管 只，各加入空白血清 取刻度离心管5只 各加入空白血清 空白血清0.5ml， ， 依次加入水盐酸标准液0.1、0.3、0.5、 依次加入水盐酸标准液 、 、 、 0.7、0.9ml，各加蒸馏水至2.0ml，加入 、 ，各加蒸馏水至 ， 混合试剂4.0ml，振摇混合，离心 混合试剂 ，振摇混合，离心10min， ， 分离上清液。测定吸收度，并以2ml蒸馏水 分离上清液。测定吸收度，并以 蒸馏水 混合试剂作空白对照。 加4ml混合试剂作空白对照。在λ540nm处 混合试剂作空白对照 处 测定上清液的吸收度（ ） 测定上清液的吸收度（A）
（2）实验家兔取血时间和方法 ）
• 取血时间：给药后，在0.25 0.5 1.0 1.5 取血时间：给药后， 2.0 2.5 3.0 4 5 7 9h分别取兔耳静脉 分别取兔耳静脉 血2ml 静脉切口法 • 取血方法 ：家兔耳静脉切口法 家兔耳静脉切口 • 固定家兔，在兔耳静脉处剪毛，用酒精棉球擦 固定家兔，在兔耳静脉处剪毛 剪毛， 并用手弹打耳根部，使局部充血， 洗，并用手弹打耳根部，使局部充血，用手术 刀片在耳缘静脉远心端进行横切， 刀片在耳缘静脉远心端进行横切，滴血取血样 1.5～2ml。取血毕，用干棉球压住出血口数 ～ 。取血毕， 分钟即可止血，下次取血时， 分钟即可止血，下次取血时，可在原刀口出进 。，出血太慢时 可用二甲苯涂擦兔耳 出血太慢时， 二甲苯涂擦兔耳， 行。，出血太慢时，可用二甲苯涂擦兔耳，使 其充血。 其充血。
（3）分离血清及测定 ）
• 将血样置于室温下，10～30min凝血， 将血样置于室温下， ～ 凝血， 凝血 若室温在10℃以下，可将血样置于37℃ 若室温在 ℃以下，可将血样置于 ℃水 浴中或孵箱内保持2h左右 加速血清渗出， 左右， 浴中或孵箱内保持 左右，加速血清渗出， 待血清渗出后，离心（ 待血清渗出后，离心（2500转/min）， 转 ）， 分离上清液（血清）。 分离上清液（血清）。 • 吸取血清 吸取血清0.5ml置试管中，按实验内容 置试管中， 置试管中 1……从各加蒸馏水至 从各加蒸馏水至2.0ml起操作，在 起操作， 从各加蒸馏水至 起操作 λ540nm处测定上清液的吸收度 ，并在 处测定上清液的吸收度A， 处测定上清液的吸收度 水杨酸的浓度 标准曲线方程计算出水杨酸的浓度。 标准曲线方程计算出水杨酸的浓度。