温度对奶牛冻精解冻后活力的影响

温度对奶牛冻精解冻后活力的影响

邱忠玉,桑国俊

(甘肃省畜牧兽医研究所,甘肃平凉744000)

摘 要:本研究对奶牛冻精解冻后在4 ,15 ,25 温度下分别保存2h,4h,6h,8h,10h的活力进行了测定。结果表明,4 和15 保存到10h精子活力0.3810.0170和0.3790.0197,与初解冻接近(P>0.05);25 保存随时间延长精子活力呈下降趋势,和初解冻相比,6h为0.349

0.0223(P<0.05),8h和10h分别为0.3020.0215和0.2630.0287(P<0.01)。牛冻精解冻

后在4 和15 保存10h以内,精子活力仍然维持在一个较高水平,符合输精要求,在此温度和时间范围内进行长距离携带,对精液质量影响小,可以达到预期的输精效果。环境温度在25 左右时,冻精解冻后宜于4h以内进行输精。

关键词:奶牛;冻精温度;精子活力

[中图分类号] S814.4 [文献标识码] A [文章编号] 1004 6704(2010)03 0011 03

E ffects of T e m perature on Dairy D efrosti ng of Frozen Se m en

Q I U Zhong yu,SANG Guo j u n

(In stit u te of A ni ma lH u sband ry and Ve t erina ry of Gan s u province,P ingli ang Gan s u744000,China)

Ab stract:Sper m ac ti v ity was m eas u red i n th i s study which kept i n4 ,15 ,25 for2h,4h,6h,8h and10h after defrosti ng, respecti ve l y.The results i nd i cated tha t spe r m ac tiv ity w as0.3810.0170and0.3790.0197a t4 and15 ,kept10h,wh i ch w as si m ilar w ith defrosti ng at t he very beg i nn i ng(P!0.05).Sper m acti v ity tended to be decreasi ng w ith long keeping ti m e a t25 ,com par i ng w ith defrosti ng at the very beg i nn i ng,sper m acti v ity was0.3490.0223kg(P<0.05)for6h,0.3020.0215kg and0.263 0.0287kg(P∀0.01)for8h and10h,respecti v ely.A fter de fro sti ng kept sperm at4 and15 for10h,spe r m acti v ity kept i n a higher l eve,l fi t for se m en depositi on,at this te m pera t ure and ti m e l ong d i stance carrying i m pired littl e o f qua lit y,can reach expec ted effects o f A I.In the ev ent o f env iron m en t temperature a t25 could be do A I in4h.

K ey w ords:Bull frozen se m en,te m perature,sem en mob ility.

人工授精技术的推广应用,加快了我国奶牛业的发展步伐,特别是人工授精技术在农村广大小型和散养奶牛户中的普及应用,加快了这一产业在农村的发展,明显提高了农村养殖业的经济效益。目前奶牛配种主要采用细管冻精,因解冻和携带方便已为广大奶牛饲养者采用。奶牛冻精解冻后要及时输精,放置时间过长会因营养物质的快速消耗而降低精子活力,从而影响母畜的受胎率。由于农村奶牛饲养分散,无法集中输精,个别养殖户位置偏远,缺少或根本没有冻精保存设备,只能在冻精点将细管解冻后运往养殖点进行输精,由于冻精在携带过程中温度和时间不好掌握,难以保证精子在一个适当的环境内生存,影响冻精活力,降低配种效果,造

[收稿日期] 2010 03 15

[作者简介] 邱忠玉(1955 ),男,甘肃平凉人,本科,高级畜牧

师,主要从事牛繁育研究与推广。成不必要的经济损失。本试验在奶牛冻精解冻后,在不同温度下进行保存,测定精子存活持久性和各时间段精子活力,通过不同保存温度和不同保存时间的对比,探讨解冻后的奶牛精液最佳保存环境和适宜的输精时段。

1 试验材料与方法

1.1 试验动物

供精公牛为牛号E T021207的一头6岁ho l s tei n牛。

1.2 试验器材

电子天平,电子恒温显微镜,电冰箱,水浴箱,消毒柜,液氮罐,冷冻仪,血细胞计数板,细管等。

1.3 稀释液原料

柠檬酸钠,果糖,甘油,卵黄,双蒸水,青霉素,链霉素。

1.4 试验方法

1.4.1 采精方法 每周采精两次,采前刷拭牛体,

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畜牧兽医杂志 第29卷 第3期 2010年

清洁环境,避免采精器械污染。手握式假阴道采集精液,假阴道温度控制在38 。

1.4.2 精液处理 将采集到的精液置入35 保温瓶内,在试验室内做肉眼直观检查,然后取一滴精液于显微镜下做原精精子活力检查,用血细胞计数板计算精子密度。将检验合格的原精加入第一液,在35 水浴箱中放置10m i n,再加入第二液于35 保持10m i n,于18 室温下注入细管,将分装好的细管置于4 冷藏器中平衡2~3h,然后用液氮熏蒸法进行冷冻处理。

1.4.3 稀释液配方 第一液

2.9%柠檬酸钠液80 mL,卵黄20m L,果糖2.8%。第二液2.9%柠檬酸钠液70mL,卵黄20mL,果糖2.8%,甘油10mL。每100mL加青、链霉素各5~10万I U。

1.4.4 试验设计与步骤 将用于试验的细管分别打上标记,平衡处理后进行熏蒸冷冻,熏蒸距离3 c m,熏蒸时间8m in。冻精活力测定分两步进行。第一步,冷冻结束30m i n后进行活力测定,每次测定10支细管,重复测定2次,分别记录。第二步,将冻精解冻后置于4 、15 、25 温度下保存,分别于2h、4h、6h、8h、10h进行活力测定,每次每组测定10支细管,重复2次,记录各时间组精子活力。解冻时将细管于38 水中放置8s取出。

1.5 数据处理

全部试验数据用t检验法进行分析,做出差异显著性评定。

2 试验结果

2.1 精液冷冻效果测试

细管经冷冻在液氮中放置30m i n后解冻,直观检查,精液色泽﹑外观及均匀度正常;显微镜下观察,精子密度适中,顶体完整,呈直线快速运动。精子活力为0.3980.0322,测定值在输精要求的正常值范围内。

2.2 不同保存温度精子活力测定

解冻后将细管在4 、15 、25 温度下分别保存2h、4h、6h、8h、10h做镜检。测定表明,在4 下保存2~10h,各时间段精子活力和初解冻变化不大,测定值无明显差异。在15 下保存2~10h,各时间段精子活力和初解冻接近,变化也不明显。在25 下保存2~10h,各时间段精子活力和初解冻比较,精子活力随时间的延长呈下降趋势,8h和10h 组下降幅度较大,精子活力降低,死亡精子逐渐增多。详见下表。

表1 不同保存温度和时间精子活力对比

时间n4 n15 n25

2h300.3790.0125300.3820.0123300.3810.0105 4h300.3820.0143300.3800.0151300.3720.0159 6h300.3800.0158300.3780.0165300.3490.0223 8h300.3760.0159300.3750.0178300.3020.0215 10h300.3810.0170300.3790.0197300.2630.0287

2.2.1 同一温度组内测定 4 保存:2h、4h、6h、8h和10h各组精子活力分别为0.3790.0125、0.3820.0143、0.3800.0158、0.3760.0159和0.3810.0170。各组精子活力与初解冻测定值接近,显微镜下观察精子呈直线运动,运动快而有力。5组之间与初解冻差异不显著(P>0.05)。

15 保存:2h,4h,6h,8h,10h各组精子活力分别为0.3820.0123,0.3800.0151,0.378 0.0165,0.3750.0178,0.3790.0197。各组精子活力与初解冻测定值接近,从表形值看后3组测定值略呈下降趋势。显微镜下观察,各组精子均为直线向前运动,个别有摆动前行现象。各组之间与初解冻差异不显著(P>0.05)。

25 保存:2h,4h,6h,8h,10h各组精子活力分别为0.3810.0105,0.3720.0159,0.349 0.0223,0.3020.0215,0.2630.0287。其中前2组精子活力与初解冻测定值接近,后3组活力明显下降。显微镜下观察,6h组和8h组少量精子运动缓慢,前行无力;10h组出现精子转圈或原地摆动和断尾,死亡精子增多,活力明显下降。经显著性测定,6h组与前两组差异显著(P<0.05),8h和10h 组与前两组相比差异极显著(P<0.01),与6h组相比差异显著(P<0.05),8h和10h两组相比较差异也极显著(P<0.01)。

2.2.2 不同温度组间测定 保存4 ,15 和25 各时间组比较,2h和4h两组精子活力测定值接近,差异不显著(P>0.05)。25 保存6h精子活力比4 和15 两组分别低0.031和0.029,差异显著(P<0.05)。25 保存8h精子活力明显低于其他两组,分别低0.074和0.073,差异极显著(P< 0.01)。25 保存10h精子活力显著低于其他两组,分别低0.118和0.116,差异极显著(P<0.01)。

12Jour nal of Ani m a l Science and Veterinary M edic i n e Vo.l29 No.3 2010