医学免疫学检验-MHCHLA检测及应用PPT课件

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(三).HLA功能
移植抗原 参与提呈抗原, MHC限制性 参与T细胞的成熟:胸腺内的选择 参与免疫调节：作为KIR的配体
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进入胸腺
PRO-T CD4-CD8-
在胸腺微环境中发育
Pre-T
CD4+CD8+
继续发育
CD4+CD8+CD3+TCR+
结合胸腺基质细胞 MHCI类 CD8+ MHCII类 CD4+
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不同物种的MHC
人 HLA
猩猩__ChLA
恒河猴__RhLA
狗__DLA
猪__SLA
兔__RLA
wk.baidu.com
大白鼠__AgBH-1
小白鼠__H-2
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二、HLA
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(一).HLA基因
位于第6对染色体短臂 有Ⅰ类,Ⅱ类,Ⅲ类基因 现发现等位基因已逾1000 均为共显性遗传
MHC & HLA检测
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第二十七章 人类白细胞抗原分型法
目的要求：
掌握血清学分型法的方法及用途。熟悉细胞
分型法和基因分型法的方法及用途。
教学内容：
1.血清学分型法
2.细胞分型法
3.基因分型 2020年10月2日
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一、MHC
MHC是主要组织相容性抗原的编码基 因,主要组织相容性复合物（ major histocompatibility complex MHC）
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CDC工作记录
血清编号 特异性 结果
NS
-
1
057
A1
1
243
A2
8
476
A2
8
T92
A2/B7 8
134
A9
4
231
A24
1
E54
A24
2
4T6
A24
1
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血清编号 特异性 结果
287
A10
1
007
A11
8
735
A11
8
125
A11/A33 8
O35
A31
4
376
A31/A30 2
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D
着
DP DQ DR C4 C2 BF B C A 基
丝
因
点
细 胞 膜
抗 原
Ⅱ类
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Ⅲ类
Ⅰ类
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1.HLA基因命名
HLA基因 HLA-DRß1*0401 HLA-DRß1 * 04 基因座位 等位基因组
01 等位基因号
HLA抗原: HLA-DR4
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(2)CDC原理:
淋巴细胞 抗体 补体
阴性
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阳性 28
(3)CDC步骤
制备抗体盘,应含有已知常见抗体 1μl 淋巴细胞悬液 5 μl 补体(兔血清) 3 μl 伊红或荧光染料 8 μl 福马林 待细胞沉降后,用相差显微镜或荧光显微
镜低倍观察
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A33
1
243
A33
1
ALS
+
8
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(4)CDC的技术要点
HLA抗体为同种抗体, 来自产妇或自愿免 疫者, 检测Ⅱ类抗原需除去其中的Ⅰ类抗 体, 现也可用单克隆抗体
检测Ⅰ类抗原用PBL或T细胞,检测Ⅱ类抗 原需用B细胞，细胞的活率要高，应避免 过多的红细胞或血小板的污染
检测Ⅱ类抗原时孵育时间延长
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3.单倍型：
• 一条染色体上的基因，在一起分离，结 合，传递
• 个体从父母亲各得到一条单倍型，故父 母和子女间有一条单倍型相同
• 兄弟姐妹间两条单倍型完全相同占1/4
两条单倍型完全不相同的占1/4
一条单倍型相同占1/2
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A/C
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结合 MHC+自身Ag
凋亡
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NK细胞及某些 T 细胞表达的杀伤细胞抑 制性受体(KIR)，对这些细胞的功能具有负调 节作用，也是NK细胞识别正常与异常细胞的机 制之一。
经典的HLAⅠ类分子和非经典Ⅰ类分子均
可作为KIR的配体，参与免疫调节作用。
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(四).HLA检测
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反应孔
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抗体1μl
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1μl 淋巴细胞 悬液
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5 μl 补体(兔血清)
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3 μl 伊红或荧光 染料
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8 μl 福马林
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HLA-A, HLA-B, HLA-C 抗原, HLA-DQ, HLA-DR 抗原可用血 清学方法检测
HLA-D, HLA-DP抗原须用细胞 学方法检测
现均可用分子生物学方法检测
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1.血清学方法
补体依赖的细胞毒性试验(CDC)
(1) 材料 抗原:淋巴细胞 抗体:同种抗体或单克隆抗体 兔补体 伊红或荧光染料 福马林
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(5)CDC试验的用途
HLA定型：用已知抗体
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两类HLA分子
类 位点
结构 分布
Ⅰ A,B,C
α 有核细胞
Ⅱ D,DR,DQ,DP α,β B，mo，
巨噬细胞
提呈功能 细胞内 细胞外
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HLA-I
类 分 子
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HLA-II
类 分 子
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• 组织相容性系指在两个体间交换 （移植）组织或器官的过程中, 组织或 器官能存活者为相容； 组织或器官不 能存活者为不相容即排斥
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排斥反应是免疫反应
有潜伏期 有再次应答 有免疫效应物质 免疫抑制剂可减轻
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决定排斥反应发生与否的抗原称组 织相容性抗原， 其编码基因即主要 组织相容性复合物 MHC
(二)
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几点说明:
•编号原则:A,B座位混合编号,其他座位独立编号
•超型和亚型:超型发现在前,亚型发现在后,超型 分裂成数个亚型
•W: C座位是为了避免和补体混淆
D,DP座位抗原因是用细胞学方法检测的， 不同于其他血清学检测抗原
BW4，BW6是HLA-B座位的共同抗原
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人类MHC的等位基因
基因位点 等位基因数 基因位点 等位基因数
HLA-A
151
HLA-DRA 2
HLA-B
301
HLA-DRB 282
HLA-C
83
HLA-DQA 20
HLA-DQB 43
HLA-DPA 87
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HLA-DPB
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2.HLA基因的多态性
现有特异性抗原164个 同一特异性中可有多个基因 等位基因近1000个