热原与内毒素区别
细菌内毒素对热原的影响
细菌内毒素对热原的影响《细菌内毒素对热原的影响》细菌内毒素是一种由细菌生成的毒性物质，在多个方面对人体产生不良影响。
其中之一是它对热原的影响。
热原是指引起发热反应的物质或生物。
细菌内毒素是细菌的一种代谢产物，它可以通过细菌细胞壁破裂、分解或释放进入周围环境以及宿主体内。
当细菌感染人体时，人体免疫系统会产生炎症反应，释放一系列炎症介质。
然而，细菌内毒素被认为是诱导这些炎症介质释放的主要原因之一。
在细菌感染的过程中，细菌内毒素会与免疫系统之间产生一系列的交互作用。
一方面，细菌内毒素可以刺激免疫系统释放大量的炎症介质，例如细胞因子、趋化因子等，导致全身炎症反应。
这不仅会使体温升高，还会引起其他症状，如头痛、肌肉疼痛等。
特别是在严重的细菌感染中，细菌内毒素的作用极为明显。
此时，人体的免疫系统不仅会产生大量的炎症介质，还会释放一些特定的趋化因子，吸引和激活大量的免疫细胞，如中性粒细胞、单核细胞等，迅速聚集至感染部位。
这些免疫细胞在感染部位发挥其杀菌作用，但同时也加剧了炎症反应。
这种炎症反应常常导致热原的过度活化，使体温上升，进而引发发热症状。
此外，细菌内毒素还可能通过一些其他的机制影响热原。
例如，细菌内毒素可直接影响神经系统，并与神经元相互作用。
这种作用可能导致体温调节中枢的紊乱，使得热原无法正常工作，从而产生发热的现象。
需要指出的是，不同的细菌内毒素对热原的影响程度可能有所不同。
某些细菌内毒素具有较高的毒性，可以迅速引起炎症反应和发热症状。
而其他一些细菌内毒素可能需要一定的时间才能达到影响热原的效果。
综上所述，《细菌内毒素对热原的影响》是一个重要的研究领域。
通过对细菌内毒素对人体热原的深入研究，人们可以更好地理解细菌感染的机制，并为预防和治疗相关疾病提供科学依据。
热原和细菌内毒素的检查方法
热原和细菌内毒素的检查方法我呀，就跟您唠唠这热原和细菌内毒素的检查方法。
您可别一听这名字就觉得头疼，其实啊，这里面也有不少有意思的事儿。
先说这热原，热原这东西啊，就像个隐藏在暗处的小捣蛋鬼。
那咋检查它呢？这就有一套法子。
咱得先准备好一些东西，就像准备打仗前得把武器啥的都备好一样。
得有合适的实验动物，这动物啊，那也是精挑细选的，得健康，看着就活蹦乱跳的那种。
把这热原注射到动物体内，然后就盯着这动物的反应，就像盯着一个调皮孩子看他会不会闯祸一样。
要是这动物体温突然升高了，嘿，那热原可能就藏在这儿呢。
再说说细菌内毒素，这细菌内毒素也不是个好惹的主儿。
检查它的方法和热原还有点不一样呢。
咱有一种试剂，那试剂就像个专门抓细菌内毒素的小警察。
把这试剂和可能含有细菌内毒素的东西放一块儿，要是这试剂变色了或者有啥特殊反应了，就像小警察发现了小偷立马拉警报一样，那就说明有细菌内毒素在里面。
我记得有一次啊，我在实验室里看一个小伙子检查热原。
那小伙子啊，眼睛瞪得大大的，死死盯着那实验动物，那神情就像在守护着什么宝贝似的。
我就问他：“小伙子，这么紧张呢？”他转过头来，脸上有点红扑扑的，说：“老师啊，我就怕一个不小心错过啥反应，这热原可不好找呢。
”我就笑着跟他说：“别太担心，按步骤来，总能发现它的踪迹。
”还有一回，是检查细菌内毒素的时候。
有个小姑娘拿着那试剂，手都有点微微颤抖，可能是怕操作不好。
我就走过去拍拍她的肩膀，说：“闺女啊，放轻松，这就跟做饭似的，按照菜谱一步一步来，准没错。
”她听了我的话，深吸一口气，然后就稳稳地操作起来了。
这热原和细菌内毒素的检查方法啊，虽然有点复杂，但只要您用心去了解，就像了解一个老朋友一样，慢慢就会掌握其中的窍门儿了。
细菌内毒素
细菌内毒素检查法一、细菌内毒素检查法的定义：●本法是利用鲎试剂与细菌内毒素产生凝聚反应的机理，以判断供试品中的细菌内毒素限度是否符合规定的一种方法。
二、背景介绍：●1、细菌内毒素●2、热原●3、鲎1、细菌内毒素●细菌内毒素是一种革兰氏阴性细菌细胞壁的产物，当其死亡或菌体裂解时释放出的一类具有多种生物活性的毒性物质特性：●（1）.致热性：内毒素作用人体细胞，使之释放内源性热原，刺激下丘脑体温调节中枢，引起发热反应。
●（2）.耐热性：需250度干热30分钟才能彻底灭活。
●（3）.分子极性：多糖链亲水，脂肪链疏水，在水中呈不均匀分布。
●（4）.鲎反应：能与鲎试剂发生多级酶促反应，形成凝胶。
2、热原2.1热原是指临床上引起哺乳动物发热反应的物质2.2细胞分裂素（IL-1, IL-2, IL-6, IL-8 ）内源性热原｛产生细胞分裂素的物质内毒素热原外源性热原｛非内毒素热原（病毒、细菌、真菌、抗体-抗原复合物、细胞分裂素）2.3热原和内毒素的关系：2.3.1热原是否就是内毒素？在学术上仍有争议，热原不仅是细菌内毒素。
但在药检的范畴，细菌内毒素是主要的热原物质，可以说无内毒素就无热原，控制内毒素就是控制热原。
3、鲎3.1鲎(horseshoe crab)是一类与三叶虫(现在只有化石)一样古老的动物。
鲎的祖先出现在地质历史时期古生代的泥盆纪，当时恐龙尚未崛起，原始鱼类刚刚问世，随着时间的推移，与它同时代的动物或者进化、或者灭绝，而惟独只有鲎从4 亿多年前问世至今仍保留其原始而古老的相貌，所以鲎有“活化石”之称。
又具有很高的药用价值。
3.2鲎试剂鲎的血液中含有铜离子，它的血液是蓝色的。
鲎血液颜色呈蓝色，是因为鲎血浆的主要成分是血蓝蛋白。
这种蓝色血液的提取物——“鲎试剂”。
鲎试剂是由海洋生物鲎的血液提取物制成的“鲎试剂”，能够准确、快速地检测人体是否因细菌感染而致病；鲎试剂在制药行业中，用于检测细菌内毒素。
目前使用的鲎试剂分为美洲鲎试剂和东方鲎鲎试剂两大类。
注射剂热原和细菌内毒素检查
1→3-β-D葡聚糖
B因子
活化B因子 活化G因子
G因子
前凝固酶
凝固酶(显色基质法)
凝固蛋白原
凝固蛋白
(比浊法,凝胶法)
鲎试剂凝集反应过程
二.热原和细菌内毒素检查方法
（一）.四国药典比较
❖ 热原：家兔体重（无上限），初温，测定 次数，结果判断
❖ 细菌内毒素：方法，标准品（保存时间）， 检查用水（限值），试验准备（除热原， PH），检查限值，关于0.5~2.0的范围
中国药典部分注射剂计算限值与规定限值差异
品名 人最大用量 计算限值 规定限值
❖ 5%葡萄糖 5ml/kg.h 1EU/ml 0.5EU/ml
❖ 50%葡萄糖 1ml
5 (10EU/g) 0.5
❖ 两性霉素B 0.16mg 30EU/mg 15EU/mg
❖ 青霉素钾(钠)16万IU 0.00003EU/IU 0.0001
克林霉素
0.1
0.58
（四）.2005版检查品种的增加研究
❖ 1).拟定了中美英药典热原内毒素对照表
化学药品约120种，生物制品约35种，根据 人用最大剂量参考热原和国外药典，初步 确定内毒素限值。
❖ 2).分工研究，化学药品146种，确定了研究 的指导原则，28家药检所负责
❖ 3).试验结果
❖ ①多数品种比较一致，用0.125～0.5EU/ml 灵敏度可以进行限值检测
❖ ②有的品种需要用0.03～0.06EU/ml才可检 测（肝素钠，放线菌素D等）
❖ ③少数品种不干扰浓度相差较大 抑肽酶 0.75u/ml 14u/ml 妥布霉素 0.5mg/ml 0.125mg/ml 丝裂霉素 1mg/ml 0.0125mg/ml 葡萄糖酸钙注射液 0.3125mg/ml；5mg/ml 氯唑西钠 5mg/ml 1.25mg/ml
解读2020药典热原检查法
说到热原检查，我们先了解几个概念，热原、热原反应、内毒素、实验动物。
热原（p yr o g e n）：指能引起恒温动物体温异常升高的致热物质。
它包括细菌性热原、内源性高分子热原、内源性低分子热原及化学热原等。
注射液中的热原主要是指细菌性热原，是某些细菌的代谢产物、细菌尸体及内毒素。
致热能力最强的是革兰氏阴性杆菌的产物，其次是革兰阳性杆菌类，革兰阳性球菌则较弱，霉菌、酵母菌、甚至病毒也能产生热原。
热原反应：临床上在进行静脉滴注大量输液时，由于药液中含有热原，病人在0.5～1h内出现冷颤、高热、出汗、昏晕、呕吐等症状，高热时体温可达40℃，严重者甚至可休克，这种现象称为热原反应。
细菌内毒素：是革兰氏阴性菌的细胞壁成分，当细菌死亡或自溶后便会释放出内毒素。
因此，细菌内毒素广泛存在于自然界中。
如自来水中含内毒素的量为1至100E U/m l。
当内毒素通过消化道进入人体时并不产生危害，但内毒素通过注射等方式进入血液时则会引起不同的疾病。
注射液中如果含有内毒素，就会产生代谢产物，内毒素大量进入血液就会引起发热反应即热原反应。
因此，生物制品类、注射用药剂、化学药品类、放射性药物、抗生素类、疫苗类、透析液等制剂以及医疗器材类（如一次性注射器，植入性生物材料）必须经过细菌内毒素检测试验合格后才能使用。
由于家兔对热原的反应与人基本相似，对热原比较敏感，所以半个世纪以来一直用家兔来检测热原，家兔为保障药品质量和用药安全发挥了重要作用。
鲎试验在某些情况下，比如西药注射液、生理盐水等成分明确的药品，现在大多采用鲎试验来检测，但在一些中药注射剂、血液制品，抗毒素等由于自身特殊性无法通过稀释法消除干扰，还在使用兔法来检测热原，因此鲎试验目前还无法完全取代家兔热原试验。
检查法药典要求一雌兔应无孕，家兔怀孕了会出现腹围会变大，体重也会增大，情绪变得多变，在试验固定台上不容易固定，怀孕后温度波动也会变得不敏感，药物反应小，影响检验结果的准确性。
什么是热原
什么是热原什么是革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌，各指哪些主要细菌?自然界存在多种多样病菌，如何将这些病菌加以鉴别、分类，并选择有效药物进行治疗这是很重要的问题。
革兰氏染色法，能够把细菌分为两大类：采用这种染色方法，是先用龙胆紫来染病菌，所有细菌都染成了紫色，然后再涂以碘液，来加强染料与菌体的结合，再用95％的酒精来脱色20～30秒钟，有些细菌不被脱色，仍保留紫色，有些细菌被脱色变成无色，最后再用复红复染1分钟，结果已被脱色的细菌被染成红色，未脱色的细菌仍然保持紫色，不再着色，这样，凡被染成紫色的细菌称为革兰氏阳性菌；染成红色的称为革兰氏阴性菌。
革兰氏染色法的意义就在于鉴别细菌，把众多的细菌分为两大类，革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
大多数化脓性球菌都属于革兰氏氏阳性菌，它们能产生外毒素使人致病，而大多数肠道菌多属于革兰氏阴性菌，它们产生内毒素，靠内毒素使人致病。
常见的革兰氏阳性菌有：葡萄球菌、链球菌、肺炎双球菌、炭疽杆菌、白喉杆菌、破伤风杆菌等；常见的革兰氏阴性菌有痢疾杆菌、伤寒杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌、百日咳杆菌、霍乱弧菌及脑膜炎双球菌等。
在治疗上，大多数革兰氏阳性菌都对青霉素敏感；而革兰氏阴性菌则对青霉素不敏感，而对链霉素、氯霉素等敏感。
所以首先区分病原菌是革兰氏阳性菌还是阴性菌，在选择抗生素方面意义重大。
什么是热原热原系指由微生物产生的能引起恒温动物体温异常升高的致热物质。
它包括细菌性热原、内源性高分子热原、内源性低分子热原及化学热原等。
这里所指的“热原”，主要是指细菌性热原，是某些细菌的代谢产物、细菌尸体及内毒素。
致热能力最强的是革兰氏阴性杆菌的产物，其次是革兰阳性杆菌类，革兰阳性球菌则较弱，霉菌、酵母菌、甚至病毒也能产生热原。
热原通常是磷脂多醇与蛋白质结合而成的复合物。
磷脂多醇是复合物的活性中心，致热作用最强。
其化学组成因菌种不同而有所差异。
分子量为5×104～5×105，分子量越大致热作用也越强。
热原检查法
实验动物的选择
—
体重
性别
条件
饲养温度 试验温度
中国药典
＞1.7kg
不限，雌兔 应无孕
使用7天预养期未见异常的未试
动物，或已试的符合热原规定的 动物。
美国药典
≥2.0kg
不限，雌兔 不使用3天内已试动物，不使用 应无孕 热原试验不合格的动物。
17-25℃ 变化≤3℃
20-23℃ 选定温度 ±3℃
英国药典 ≥1.5kg 不限，雌兔 应无孕
新方法国内研究现状
国内对新方法的研究与国际相比有一定差距， 2010版中国药典未收录新热原检测方法。 国家药典委员会已经启动了体外热原检查法 的课题.
已开展的研究方法
兔新鲜全血法 鼠新鲜全血法 人新鲜全血法 人冻存全血法 PBMC细胞法
感谢聆听！
第三组：王雅静、吴显婷、郭帅、祁宇
时间：2017年4月
20-23℃ 变化≤3℃
—
中国药典
时间
3-7天
给药
N
美国药典 7天内
N
测量次数
选择条件
8次 30min/次
8次体温均在38.0-39.6℃之间， 且最高与最低体温相差≤0.4℃，
个体间体温差≤1℃
8次 30min/次
体温不超过39.8℃，个体间体 温差≤1℃
英国药典
1-3天
10ml/kg生
10次
体温在38.0-39.8℃之间，个体
理盐水 30min/次，舍
（38.5℃）
去前2次
间体温差≤1℃
注意事项
1. 抓取兔子的正确方法：一手抓持兔颈背部皮毛，一手托起兔臀部。 2. 在热原检查前1～2日，供试用家兔应尽可能处于同一温度的环境中，实验室
热原与内毒素的区别
热原系指由微生物产生的能引起恒温动物体温异常升高的致热物质。
它包括细菌性热原、内源性高分子热原、内源性低分子热原及化学热原等。
所以热原有外生致热原和内生致热原之分。
细菌内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁上的一种脂多糖（Lipoply Saccharide）和微量蛋白（Protein）的复合物，它的特殊性不是细菌或细菌的代谢产物，而是细菌死亡或解体后才释放出来的一种具有内毒素生物活性的物质。
一般来说内毒素是热原,但热原不全是内毒素。
欧洲药典委员会副主席J.Van Noordwijk提出：“严格地讲，不是每一种热原都具有脂多糖的结构，但所有已知的细菌内毒素脂多糖都有热原活性”。
在药品生产质量管理规范（GMP）条件下，药品生产的质量控制一般可以接受的观点是：不存在细菌内毒素意味着不存在热原。
热原检查法系将一定剂量的供试品，静脉注入家兔体内，在规定时间内，观察家兔体温升高的情况，以判定供试品中所含热原的限度是否符合规定的一种方法。
细菌内毒素检查法系利用鲎试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。
细菌内毒素检查法，现已在《中国药典》2010年版二部、三部内广泛应用，但在《中国药典》2010年版一部内一个药品都未运用，这主要是由细菌内毒素检查法的持点所决定的：细菌内毒素检查法具有较家兔热原检查法灵敏、快速、简便易行、重现性好、结果准确等优点，目前细菌内毒素检查法已广泛应用于西药、生物制品。
但同时也应该指出，细菌内毒素检查是一复杂的酶促反应过程，生产工艺的细微变化都可能引起其干扰的增加，然而根据中药制剂，成分复杂，影响因素多的特点，因此，中药注射剂一般还是采用传统的家兔热原检查法。
但是对一些具有解毒降温作用的药物，因会干扰家兔的生理活性，引起体温下降，用家兔法检测不准，还是应考虑用细菌内毒素检查法。
由此可见，热原与细菌内毒素两者之间既有许多相同之处，但还是有区别的。
热源、无菌、细菌内毒素、微生物限度检查
热源、无菌、细菌内毒素、微生物限度检查的关系前面看到过关于无菌和内毒素区别的帖子。
那么请问各位，热源、无菌、细菌内毒素和微生物限度检查究竟有什么区别，又有什么联系呢？本人我在微生物方面比较白，只是觉得这四项都和细菌有关，都需要培养基，都要在无菌台里做…… 汗~~ 其他的实在不知了。
头都大了，希望各位指点迷津，谢谢。
[楼主] | Posted:08-09-09 10:22|珊瑚礁级别: ★会员发帖: 292威望: 6财富: 95注册时间:2008-03-06最后登陆:2010-11-25无菌，最终灭菌产品和百级生产非灭菌产品需要检测的项目，一般采用薄膜过滤法；如，粉针剂、大输液产品。
微生物限度，允许结果有菌落，但有限度，是一定范围，一般采用半封闭薄膜过滤法和平皿法。
指非灭菌产品，如口服制剂和食品、外用药。
热源，目前很多品种采用细菌内毒素检测方法代替，简单，成本低。
但必须按照国家标准。
内毒素和热源一般是大输液产品的检测项目。
想了解很多，应该多看看专业书籍啊[1 楼] | Posted:08-09-09 12:21|洲际捣蛋级别: 论坛版主发帖: 2500威望: 315财富: 42注册时间:2008-03-15最后登陆:2010-11-08热原---不需要培养基兔法看药典就知道是怎么回事了细菌内毒素----不需要培养基一般工作环境也可以做无菌----需要培养基薄膜过滤法直接接种法也可以参照药典微生物限度检查----需要培养基薄膜过滤法梯度稀释图布平板法区别：热原和细菌内毒素检验方法的不同但检验的东西在本质上其实是一样的另外细菌内毒素检查法要比热原检查法灵敏10倍，根据各种药物的特性，规定检查热原还是细菌内毒素。
注册时间:2008-03-10最后登陆:2010-10-11zyb3421060级别: ★会员发帖: 65威望: 3财富: 1注册时间:2008-03-10最后登陆:2010-11-12还不是很明白[5 楼] | Posted:08-12-25 08:26|shabb007级别: ★★会员发帖: 649威望: 20财富: 20注册时间:2007-12-14最后登陆:2010-12-03这么说吧。
除热原内毒素
除热原/内毒素
工艺流程说明：
内毒素是存在于病原体如细菌内的天然化合物，具有潜在的毒性。
一般来说，内毒素不同于外毒素，活的细菌是不会分泌可溶性的内毒素的。
内毒素是细菌的结构成分，当细菌被溶解时而被细菌释放出来。
内毒素的典型例子是各种革兰氏阴性菌外膜的脂多糖（LPS）或脂寡糖（LOS）。
电子级超纯水及医药注射用水对细菌内毒素的要求都非常严格，如美国ASTM—E—1级水要求内毒素含量
<0.03EU/mL中国药典(2000年版)对注射用水要求内毒素含量<0.25EU/mL，要达到这些指标，一般的加热灭菌法、活性炭吸附或普通过滤法等效果均不理想，而用膜法则很容易达到这些指标，超滤膜去除内毒素是被公认的先进工艺方法。
热源、内毒素相关说明
去除水中的内毒素（热源），可以选用超纯水系统来去除。
特别是在做细胞和组织培养、蛋白质分析和蛋白质纯化等实验时，内毒素（热源）的存在会直接导致培养物的污染而失败，为此，应该用超纯水系统来除实验室用水中的热源。
如果进水为自来水，则一般的顺序是：1、预处理2、R O （反渗透）3、初级纯化（离子交换）4、双波长UV 灯消毒5、超滤柱（去内毒素）6、终端过滤器（最后一道过滤）。
这样得出的水就是实验室级超纯水，一定会符合你的需要。
我们昨天药剂课刚学的，水中内毒素的消除方法有：离子交换法、凝胶过滤法、蒸馏法和反渗透法制药用水热源的去除去除热原是制药用水系统设计建造的重要目标之一。
自水的预处理开始，直到注射用水的使用点，水处理的许多工艺环节都考虑了去除热原的要求，如活性炭过滤、有机物去除器、反渗透、超过滤及蒸馏。
中国及美国现行版药典中，对纯化水尚没有控制内素的标准，但在欧洲药典2000 增补版中，已作出了“细菌内毒素低于0.25EU/mL ”的规定，这意味着对制药用水内毒素的控制将会更加严格。
至于对注射用水，中国药典和欧美药典对细菌内毒素的控制标准已完全一致。
现拟对制药用水系统去除热原常见的方法作一简单介绍。
1、反渗透反渗透膜的孔径最小，按其阻滞污染物（包括热原）的分子量大小计，一般在100~200之间。
由于热原的分子量在5X104以上，其直径大小一般在1~50 am之间，因此能被有效去除。
美国药典将反渗透作为注射用水的生产方法，意味着反渗透技术在去除热原方面的成熟。
2、超过滤微孔滤膜过滤有某种去除热原的功效。
它利用筛分、静电吸附、架桥，利用微孔滤膜拦截直径比较大的那一部分热原物质。
应当指出，这种去除是很不完全的，直径比较小的热原物质会通过0.22 的微孔滤膜，微小的热原可以透过0.025 z的滤膜，最小的热原体可以穿透所有的微孔滤膜，污染水体。
由于热原分子量越大，致热作用就越强，因此利用微孔滤膜进行除菌过滤时，客观上可能会起到某些截留热原的积极作用，但它不能作为去除热原的可靠方法而单独使用。
热原和细菌内毒素
热原pyrogen热原系指由微生物产生的能引起恒温动物体温异常升高的致热物质。
它包括细菌性热原、内源性高分子热原、内源性低分子热原及化学热原等。
这里所指的“热原”，主要是指细菌性热原，是某些细菌的代谢产物、细菌尸体及内毒素。
致热能力最强的是革兰氏阴性杆菌的产物，其次是革兰阳性杆菌类，革兰阳性球菌则较弱，霉菌、酵母菌、甚至病毒也能产生热原。
热原通常是磷脂多醇与蛋白质结合而成的复合物。
磷脂多醇是复合物的活性中心，致热作用最强。
其化学组成因菌种不同而有所差异。
分子量为5×104～5×105，分子量越大致热作用也越强。
系能够致热的微生物的尸体及其代谢产物，即细菌的一种内毒素。
细菌、霉菌、病毒均可产生热原。
热原最主要特性为耐热性，其为由磷脂、脂多糖和蛋白质所组成的复合物，存在于细菌的细胞和固体膜之间。
脂多糖是内毒素的主要成分，具很强的热原活性。
热原分子量为10×105左右。
热原具耐热性、滤过性、水溶性、不挥发性。
当热原被输入人体后，约0.5h后，使人发冷寒战、高热、出汗、恶心、呕吐、昏迷甚至危及生命，可于注射剂灭菌时根据其特性彻底破坏热原。
注入人体的注射剂中含有热原量达1μg/kg就可引起不良反应，发热反应通常在注入1小时后出现，可使人体产生发冷、寒颤、发热、出汗、恶心、呕吐等症状，有时体温可升至40℃以上，严重者甚至昏迷、虚脱，如不及时抢救，可危及生命。
该现象称为“热原反应”。
热原引起机体发热机理热原——白细胞——吞噬——白细胞崩解，释放内源性致热源——作用与体温调节中枢——产热增加，散热减少——体温上升细菌内毒素细菌内毒素，英文称作Endotoxin，是G-菌细胞壁个层上的特有结构，内毒素为外源性致热原，它可激活中性粒细胞等，使之释放出一种内源性热原质，作用于体温调节中枢引起发热。
细菌内毒素的主要化学成分为脂多糖。
.细菌内毒素这个概念在1890年的时候就已被提了出来，它是在研究发热物质过程所引起的，1933年Boivin最先由小鼠伤寒杆菌提取出来，进行化学免疫学方面的研究，到1940年时候，Morgan使用志贺氏痢疾菌阐明了细菌内毒素是由多糖脂质及蛋白质三部分所组成的复合体，到了1950年以后，随着生物学，物理化学，免疫学以及遗传学等的进步发展，细菌内毒素的研究工作，尤其是其化学结构组成及各种生物活性间的关系也更加明确起来。
热原质简述
强。刺激机体产生抗毒素。 经甲醛处理可脱毒成类毒 素。
二、细菌毒素
4、内毒素的化学组成及其结构
内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁中的脂多糖成分， 分子量大于10万Da，其化学结构由O－特异多糖、非 特异核心多糖和类脂A三个部分共价连接而成。其中 O－特异性多糖链游离于菌体表面，基部与核心多糖 相连；核心多糖的内侧端以其特有的2－酮－3脱氧辛 酸（reto-deoxy-octulonate，KDO）与类脂A相结合。 通常把KDO－类脂A部分称作核心糖脂，其结构和组 成在细菌中相当保守。脂多糖约占细菌干重的3.4%， 每个菌细胞外面，约有一百多万个脂多糖分子，脂多 糖分子通过类脂A锚定在外膜磷脂层的外叶中。
POLYSACCHARIDE
O OPO
O O
OH O
O
NH
O
O
O
O
O
HO O O OH
O
14 12
14 14
14
图2 大肠杆菌类脂A结构（12、14代表脂肪酸的碳原子数）
二、细菌毒素
核心多糖又称核心区，是由内外两部 分较短的低聚糖组成，见图3
外核（outer core）
内核（inner core）
二、细菌毒素
内毒素的致热性。人体内毒素的正 常阈值保持在0.001－0.05ng/ml之间，一旦 体内内毒素的浓度高于这个阈值时，就可 启动内外源热原质引起机体发热。另有资 料称，极微量的内毒素（1－5 ng/kg ）注 射人体，体温于2小时内上升，可持续4小 时左右。
二、细菌毒素
2、外毒素
产生外毒素的细菌主要是革兰氏阳性菌中的 破伤风杆菌、肉毒杆菌、白喉杆菌、产气荚膜杆 菌、溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌等。革兰氏 阴性菌中的痢疾志贺氏菌、鼠疫杆菌、霍乱弧菌、 产肠毒素大肠杆菌、绿脓杆菌也能产生外毒素。
热原的性质及去除思路
①外源性热原，是指细菌内毒素，主要是指革兰氏阴性细菌细胞壁的脂多糖成分，是在细菌菌体裂解后释放出来的。
②内源性热源是指中性粒细胞，在外源性热源等作用下所释放出来的某些应激物质。
在没有特指的情况下，热源通常是指外源性热源，大多数细菌、真菌甚至病毒都能产生热源，其中致热能力较强的热源是革兰阴氏杆菌所产生的脂多糖，脂多糖组成因菌种的不同而不同，热源的相对分子质量一般约为1×106。
3．水溶性：由于磷脂结构上连接有多糖，所以热源能溶于水。
4．不挥发性：热源本身不挥发，但在蒸馏时可由水蒸气中的雾滴带入蒸馏水，故应注意。
5．其他：热源可被强酸、强碱破坏，也能被强氧化剂（如高锰酸钾或过氧化氢）破坏，也能因超声波及其它表面活性剂（如去氧胆酸钠）而失活。
热源的主要污染途径
注射用水：注射用水是热源污染的主要来源，注射用水易被空气或含尘空气中的微生物污染，故应使用新鲜注射用水，最好随蒸随用。
吸附法：活性炭对热源有较强的吸附作用，同时有助滤脱色作用，注射剂常用优质针剂用活性炭处理，用量为0.1%-0.5%（W/V），此外将0.2%活性炭与0.2%硅藻土合用，除热效果较好。
超滤法：一般用3.0-15纳米（nm）超滤膜除去热源，如用超滤膜过滤10%-15%的葡萄糖注射液，可除去热源。
热原的性质
1．耐热性：热源在100℃加热不降解，因此在一般注射剂的热压灭菌法过程中，热原不易被破坏，但在180℃加热3-4h，240℃加热60min，或者250℃加热30-45min，可以使热源彻底破坏。
2．过滤性：热源体积小，约为1-5nm，一般的滤器均可过通过，用微孔滤膜也不能截留，但可被活性炭吸附。
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一、热原热原跟灭菌的目的有区别，灭菌是杀死产品内的活的微生物，当产品的菌数太多，杀死后会有许多细菌尸体，而产生细菌内毒素造成在输液过程中引起输液反应，就是常说的产品有热原而引起的。
灭菌只能把活的细菌杀灭，而留下的细菌尸体过多可能带来超标的细菌内毒素，接触病人血液引起热原反应。
发热多数是由于致热原（指能够引起发热的物质）引起的。
致热原可分为外源性和内源性两类，前者包括各种病原体如细菌、病毒、立克次体、衣原体、螺旋体、原虫和寄生虫等的毒素及其代谢产物，尤以内毒素（多属脂多糖类物质）最为重要，其次是原胆烷醇酮、多核苦酸、抗原—抗体复合物、抗原（通过淋巴细胞释放的淋巴激活素）等。
外源性致热原一般不能直接作用于体温调节中枢引起发热，但能激活主要存在于白细胞、单核细胞和组织吞噬细胞内的内源性致热原前体.这些具有活性的热原一旦被释放入血液中，经血液循环可直接作用于体温调节中枢，亦可通过诱发下丘脑合成前列腺E（PGE）和环磷酸腺苷（cAMP），作为中枢传导介质对发热也起重要作用。
热原包括内毒素，内毒素合格热原不一定合格，检查热原要做动物实验。
医院临床在使用药品注射剂时，常有发生冷感、寒战、发热、头痛、恶心、呕吐、肤色灰白、休克、严重时导致死亡，这种症状称为热原反应。
热原系指由微生物产生的能引起恒温动物体温异常升高的致热物质。
它包括细菌性热原、内源性高分子热原、内源性低分子热原及化学热原等。
这里所指的“热原”，主要是指细菌性热原，是某些细菌的代谢产物、细菌尸体及内毒素。
致热能力最强的是革兰氏阴性杆菌的产物，其次是革兰阳性杆菌类，革兰阳性球菌则较弱，霉菌、酵母菌、甚至病毒也能产生热原。
热原通常是磷脂多醇与蛋白质结合而成的复合物。
磷脂多醇是复合物的活性中心，致热作用最强。
其化学组成因菌种不同而有所差异。
分子量为5×104～5×105，分子量越大致热作用也越强。
注入人体的注射剂中含有热原量达1μg/kg就可引起不良反应，发热反应通常在注入1小时后出现，可使人体产生发冷、寒颤、发热、出汗、恶心、呕吐等症状，有时体温可升至40℃以上，严重者甚至昏迷、虚脱，如不及时抢救，可危及生命。
该现象称为“热原反应”。
《中国药典》2005年版规定热原检查采用家兔法，细菌内毒素检查采用鲎试剂法。
为提高药品质量和用药安全，人们对热原进行了广泛的研究，直到1923年Seibert提出了用家兔检测热原的方法。
在1942年美国药典首先将家兔热原检查项收入药典成为法定方法，中国药典1953年版开始收载该方法，随后的世界各国药典都以动物热原检查法作为药品质量监测的方法之一。
家兔热原检查法的优点，可在规定时间里观察到家兔的体温变化，相应反应了热原质引起哺乳类动物复杂的体温反应过程。
所以，在半个多世纪以来热原检查法，为保障药品质量和用药安全发挥了重要作用。
但随着制药工业的发展和临床用药的要求，该方法的局限性越来越明显。
这种热原检查法，只局限于某种药物进入体内（血循环）是否能引起体温变化或热原反应作为判断药品是否污染热原的方法，已不能满足医药工业发展的需要。
其缺点：①标准化程度低，无法判断检查样品中存在的热原质到底是什么或是哪一种物质。
②由于试验动物家兔是处在被细菌污染的环境中，通过吸入或皮肤感染细菌内毒素而被免疫，导致动物的个体差异较大。
③试验动物受到药品的药理活性干扰，而影响体温变化（如放射性药品、抗生素、生物制品等），实验结果难以判断。
④设备及实验费用昂贵（如建设动物房、水电、动物饲料等耗费），做一种药品需要几百元/次，而鲎试剂仅几十元/次。
综上情况分析，鲎试验法可避免以上动物热原检查法的不足，该技术的成功和应用真可谓是药品质量监控一场大革命。
欧洲药典委员会副主席J.Van Noordwijk提出：“严格地讲，不是每一种热原都具有脂多糖的结构，但所有已知的细菌内毒素脂多糖都有热原活性”。
在药品生产质量管理规范（GMP）条件下，药品生产的质量控制一般可以接受的观点是：不存在细菌内毒素意味着不存在热原。
二、细菌内毒素（Endotoxin）细菌内毒素，英文称作Enolotoxin，是G-菌细胞壁个层上的特有结构，内毒素为外源性致热原，它可激活中性粒细胞等，使之释放出一种内源性热原质，作用于体温调节中枢引起发热。
内毒素的主要化学成分为脂多糖中的类脂A细菌内毒素这个概念在1890年的时候就已被提了出来，它是在研究发热物质过程所引成的，1933年Boivin最先由小鼠伤寒杆菌提取出来，进行化学免疫学方面的研究，到1940年时候，Morgan使用志贺氏痢疾菌阐明了细菌内毒素是由多糖脂质及蛋白质三部分所组成的复合体，到了1950年以后，随着生物学，物理化学，免疫学以及遗传学等的进步发展，细菌内毒素的研究工作，尤其是其化学结构组成及各种生物活性间的关系也更加明确起来。
细菌英文叫Bacteria：为原核生物中的一类单细胞微生物由二分裂法繁殖。
若按革兰氏染色法可将细菌分为G+菌和G-菌两大类。
这两类细菌细胞壁的结构和化学组成存在很大差异。
唯有肽聚糖为其共同成分，但其含量的多少和肽链的性质有所不同，见上图表细胞壁较薄，厚约10－15nm，结构也较复杂。
肽聚糖含量低，仅占细胞干生10％左右，层薄又较疏松，因肽聚糖之间仅四肽侧链直接联结，缺乏五肽桥；肽聚糖居于细胞最内层，外面由内向外还有脂蛋白，外膜和脂多糖的三层聚合物。
（1）脂蛋白（lipoprotein）由类脂和蛋白质构成，联结在外膜与肽聚糖层之间，类脂一端经非共价键联结到外膜的磷脂上，另一端由共价键联结到肽聚糖肽链中的二氧基庚二酸残基上，使外膜和肽聚糖层构成一个整体。
（2）外膜（outer membrane）是革兰氏阴性菌细胞壁的重要结构，位于肽聚糖的外侧，其结构类似细胞膜，为液态的磷脂双层，其中镶嵌一些特异蛋白质，穿透外膜的内外双层，呈液态镶嵌体。
外膜中间有微小孔道，容许水溶性的小分子通过，以进行细胞内外的物质运输和交换。
除此之外，外膜还能防止胰蛋白酶和溶菌酶等进入，起到保护性屏障作用。
（3）脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）由多糖O抗原、核心多糖和类脂A(lipid A)组成（图1-8），位于最外层。
多糖O抗原向外，由若干个低聚糖的重复单位组成的多糖链，即革兰氏阴性菌的菌体抗原（O抗原），有特异性。
核心多糖由庚糖、半乳糖、2-酮基-3-脱氧辛酸（2-keto-3-deoxyoctonic acid, KDO）等组成，所有革兰氏阴性细菌都有此结构。
类脂A是以脂化的葡萄胺二糖为单位，通过焦磷酸酯键组成的一种独特的糖脂化合物，具有致热作用，是革兰氏阴性细菌内毒素的毒性成分。
细菌内毒素即：许多病原性细菌所产生的毒素。
一般细菌毒素可分为两类，一类为外毒素（Exotoxin）；它是一种毒性蛋白质，是细菌在生长过程中分泌到菌体外的毒性物质。
产生外毒素的细菌主要是革兰氏阳性菌。
如白喉杆菌、破伤风杆菌、肉毒杆菌、金黄色葡萄球菌以及少数革兰氏阴性菌。
加一类为内毒素（Endotoxin）。
是革兰氏阴性菌的细胞壁外壁层上的特有结构。
细菌在生活状态时不释放出来，只有当细菌死亡自溶或粘附在其它细胞时，才表现其毒性，内毒素的主要化学成分是脂多糖中的类脂A成分。
细菌内毒素的生物活性：1、致热性。
2、致死性毒性。
3、白细胞减少。
4、Shwartzman反应。
5、降低血压，休克6、激活凝血系统。
7、诱导对内毒素的耐受性。
8、鲎细胞溶解物（鲎试剂）的凝集。
9、刺激淋巴细胞有丝分裂。
10、诱导抗感染的特异性抵抗力。
11、肿瘤细胞坏死作用。
细菌内毒素的量值（单位）在80年代以前，所有研究内毒素的报道，毫无例外地使用重量单位表示内毒素的量，在鲎试剂建立后也同样以重量单位表示鲎试验的灵敏度。
随着人们对细菌内毒素生物活性认识的提高，以重量单位表示的不科学性被揭示，即相同重量的内毒素，对于菌种来源不同，其生物活性相差很大。
1980年美国学者Hochstein完成了将重量单位转化为内毒素单位的工作。
当时美国内毒素参考标准品代号为EC-2，该品的家兔发热剂量ED50为1.04ng/kg，而与此同时美国食品药品管理局（FDA）批准的鲎试剂参考品为第四批，FDA邀请当时已获有鲎试剂生产许可证的制造商进行协作研究，采用EC-2与第四批鲎试剂参考品，求出两者的凝聚终点用ng/ml表示，四个实验室的56次单独试验结果，几何平均值为0.194ng/ml，FDA就此规定该值为EC-2的1个内毒素单位，EC-2的量值为5EU/ng。
自1982年美国药典修订1980年（20）版首次收载的细菌内毒素试验，内毒素单位（EU）被正式引入，明确指出美国内毒素参考标准品每瓶含10000EU。
细菌内毒素的检测细菌内毒素是革兰氏阴性菌的细胞壁成分，当细菌死亡或自溶后便会释放出内毒素。
因此，细菌内毒素广泛存在于自然界中。
如自来水中含内毒素的量为1至100EU/ml。
当内毒素通过消化道进入人体时并不产生危害，但内毒素通过注射等方式进入血液时则会引起不同的疾病。
内毒素小量入血后被肝脏枯否细胞灭活，不造成机体损害。
内毒素大量进入血液就会引起发热反应—“热原反应”。
因此，生物制品类、注射用药剂、化学药品类、放射性药物、抗生素类、疫苗类、透析液等制剂以及医疗器材类（如一次性注射器，植入性生物材料）必须经过细菌内毒素检测试验合格后才能使用。
由于家兔对热原的反应与人基本相似，所以半个世纪以来用家兔来检测热原，为保障药品质量和用药安全发挥了重要作用。
1956年美国人Bang发现美洲鲎血液遇革兰氏阴性菌时会产生凝胶。
其后Levin和Bang又搞清楚微量革兰氏阴性菌内毒素也可以引起凝胶反应，从而创立了鲎试剂检测法。
由于鲎试剂法简单﹑快速﹑灵敏﹑准确，目前已广泛用于临床、制药工业药品检验等方面。
在美国，鲎试验被称作为“细菌内毒素试验（Bacterial Endotoxin T est）收载于1980年20版美国药典。
随后英、德、意、日以及中国相继在药典中收载了这一检查法。
此后鲎试验逐渐替代家兔热原试验，但由于部分药品由于自身特殊性无法通过稀释法消除干扰，因此鲎试验还无法完全取代家兔热原试验。
2005年版中国药典规定133个品种进行细菌内毒素检查法，并收录了2种细菌内毒素检查法：包括凝胶法和光度测定法两种方法。
前者利用鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应的原理来定性检测或半定量内毒素，后者包括浊度法和显色基质（比色）法，系分别利用鲎试剂与内毒素反应过程中的浊度变化及产生的凝固酶使特定底物释放出呈色团的多少来定量测定内毒素。
比色法又可分为终点显（比）色法和动态比色法。
该方法灵敏度、精密度高。
国内如厦门鲎试剂厂早在05年即有显色基质（终点显色）鲎试剂盒上市。