环介导等温扩增技术快速检测犬细小病毒方法的建立
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见 表 １ 。
１ 倍 ， ０ 效率 极高 ， 已建立 的不 同病 原 的 Ｌ ＡＭＰ方
法 证 明 了其 敏感 性 为 常规 Ｐ Ｒ 的 １ 。都 Ｃ Ｏ倍 ～ １ ０ ０ 倍， 且所 需 设备 简单 、 反应 结 果具 备 良好 的可 视 化效
果， 目前 已 成 为 病 原 临 床 快 速 诊 断 的一 种 新 思 路 。
ＴＡＣ ＴＧＣ ＴＴ ＧＧＧＡＣ ＴＧＧ ３ ， 游 引 物 为 Ｐ ： ， Ｔ 一 下 ２ ５＿
ＡＡ Ｃ Ｃ ＡＡＡＧ Ｔ Ｃ ＧＡＡＧ Ｃ ３ ， 南 京 百 龙 ＴＣ Ｃ ＴＧ 一 由 基 因公 司合 成 ， 扩增 Ｃ Ｖ ＶＰ Ｐ ２高 度保 守 区域７ ８ｂ １ ｐ 的 片 段 。Ｌ ＡＭＰ 引 物 的 设 计 ， 据 Ｃ Ｖ ２ 根 Ｐ ＶＰ （ ８ ４ ） 因序 列 ， 用 在线 软件 Ｐ ｉ ｒ ｘ ｌｒｒ Ｍ３ ２ ５ 基 应 ｒ ｍｅ ｐｏｅ Ｅ Ｖ３（ ｔ ａ ｏａｏｙ ｕｉ ｕ ＮｅＬ ｂ ｒｔｒ ；Ｆ ｊ ｓ ，Ｔｏ ｙ ，Ｊｐ ｎ 设 计 ｔ ｋｏ ａａ） 能 扩增 ＶＰ ２高度 保 守 区域 的引 物 ， 物 位 置 和序 列 引
宝 生物 工 程 （ 连 ） 限公 司产 品 。 大 有
１ ２ 方 法 ．
伴 侣 动物 及军 犬 和警犬 的饲养 中造 成 很 大 的经 济 损
失 ｌ 。该病 主要 经 由粪 便 向外排 毒 ， 感 染 Ｃ Ｖ 后 ＿ 】 ］ 犬 Ｐ ４ｄ ～７ｄ粪 便 中病 毒 滴 度 即 达 １ 。Ｔ Ｉ ｇ２， ０ Ｃ Ｄ 。 ［ 病 ／ ］
关键 词 ： 环介 导等 温扩 增 ； 细小病 毒 ； 犬 快速 检 测
中 图 分 类 号 ：８ ２ ６５ ￥ ５ ． ９ ￥ ５ ． ５ ；８ ８ ２ ２ 文 献标 识 码 ： Ａ 文章 编 号 ：０ ７５ ３ （ ０ ２ ０ — ０ ９ ０ １ ０ ０ ８ ２ １ ）２０ ０—５
源自文库犬 细小病 毒病 （ ａ ｉｅｐ ｒｏ ｉ ｓｄｓａｅ 是 一 Ｃ ｎｎ ａｖ ｖｒ ｉｅｓ ） ｕ
种 以肠 炎综合 征 为 特 征 的犬 类 、 科 和 鼬科 动 物 的 猫 急性 传 染 病 ， 犬 细 小 病 毒 （ ａ ｉｅ ｐ ｒｏ ｉ ｓ 由 Ｃ ｎｎ ａｖ ｖｒ ， ｕ
Ｃ Ｖ） Ｐ 引起 ， 其较 高 的发 病 率 和 病 死 率 在 经 济 动 物 、
究 所分 离 鉴定 、 养 、 培 保存 ； ６份 粪 便 或肠 内容 物 等 ３ 检测 材料 ， 集 自南 京 及 周 边 地 区 疑 似 Ｃ Ｖ 感 染 采 Ｐ
（９ ３ ） 检 出率 高于普通 Ｐ Ｒ ７ ． （ ６ ３ ） ２／ ６ ， Ｃ ２ ２ ２ ／ ６ 。建 立 的 Ｌ ＡＭＰ检 测 方 法 ， 示 了较 高的特 异 性 和敏 感性 ， 显 而且 兼 具 高效 、 捷 、 快 可视 化 的优 势 ， 为临床检 测 犬细 小病毒 感 染提供 了一种 快速 简便 的新 方 法 。
动物 医学 进展 ，０ ２ ３ （ ） ９１ ２ １ ，３ ２ ：－３
Ｐｒ ｇｒ ｓ ｎ Ｖ ｅ ｅ ｉ ｒ ｅ ｃ ｎ ｏ ｅ ｓ ｉ ｔ ｒｎａ ｙ Ｍ ｄｉｉ ｅ
环 介 导 等 温 扩增 技 术 快 速 检 测 犬 细 小 病 毒 方 法 的 建 立
温 海 秦 海 斌 朱 骞 贺 星 亮 陆承 平 ， 汇 东ｈ ， ， ， ， 张
ｅ ｌ ｍｐｉｃ ｉ ， ＡＭＰ） 一 种 新 的 核 酸 扩 增 方 ｒａ ａ ｌ ｉ ｔ ｎ Ｌ ｆａｏ 是 法ｌ， ＿ 可在 １ ｎ ６ ｎ内将 ＤＮＡ 扩 增 １ 。 ３ ｊ ５ｍｉ ０ ｍｉ ０ 倍
～
Ｇｅ Ｂ ｎ 参 考 序 列 设 计 ， 游 引 物 为 Ｐ ： ， ｎ ａｋ 上 １ ５＿ ＡＴＧ—
（． 安 部 南 京 警 犬 研 究 所 ， 苏 南 京 ２０ １ ；． 京 农 业 大 学 预 防 兽 医 学 重 点 实 验 室 ， 苏 南 京 ２ ０ ９ ） １公 江 １０２２南 江 １ ０ ５
摘 要 ： 旨在 建 立一 种 利 用 环 介 导 等 温 扩增 技 术 （ ＡＭＰ 检 测 犬 细 小病 毒 感 染 的 新 方 法 。根 据 Ｇ ｎ Ｌ ） ｅ— Ｂｎ ａ ｋ中 犬细 小病毒 （ Ｐ Ｃ Ｖ）ＶＰ 基 因序列 ， 计 ４条 Ｌ ２ 设 ＡＭＰ特 异 性 引物 ， 对反 应条 件 、 异性 、 感 性 、 特 敏 可视
化 效果 和应 用 效果进 行研 究 。结果显 示 ， ６ 在 ５℃等 温条件 下 、 １ｈ内可 完成 Ｌ ＡＭＰ扩 增过 程 ； 病毒 的 最低检
出 限 量 为 １ 个 Ｔ Ｉ ｍＬ； 异 性 和 可 视 效 果 良好 ； ３ ０ Ｃ Ｄ。 ／ 特 对 ６份 临 床 标 本 进 行 检 测 ， 性 检 出 率 为 ８ ． 阳 ０５
犬 ； 肾细胞 （ ８ ） 自中 国兽 药监 察 所 。 猫 Ｆ １购 １ １ ２ 试剂 １ ×Ｔｈ ｒ Ｐ ｌ ． ． ０ ｅｍｏ ｏ 反应 缓 冲液 为 Ｎｅ ｗ Ｅ ｇａ ｄＢ ｏ ａ ｓ公 司产 品 ； ． ｎ ｌｎ ｉＬ ｂ ５ ０ｍｍｏ／ ｅａ ｅ为 ｌＬ Ｂ ｔｉ ｎ Ｓｇ — ｄｉｈ公 司 产 品 ； ＮＴ ｘｕ ｅ Ｔ ｑ酶 为 ｉｍａＡｌｒ ｃ ｄ Ｐ ｍｉｔ ｒ 、 ａ
毒 在粪 便 或 固体 污 染 物 中可存 活 数 月 乃 至 数 年 ， 极
易 造成 该 病 的群 体 性暴 发 。 因此 ， 该病 的快速诊 断对
１ ２ １ 引 物 的 设 计 与 合 成 ．．
Ｐ Ｒ 引 物 根 据 Ｃ
于及 时采取综合 防治措施 、 避免该病的流行至关重要 。 环介 导 等 温 扩 增 技 术 （ｏ ｐｍｅ ｉｔｄ ｉ ｔ ｅ— １ｏ — ｄａｅ ｓ ｈ ｒ ｏ
１ 倍 ， ０ 效率 极高 ， 已建立 的不 同病 原 的 Ｌ ＡＭＰ方
法 证 明 了其 敏感 性 为 常规 Ｐ Ｒ 的 １ 。都 Ｃ Ｏ倍 ～ １ ０ ０ 倍， 且所 需 设备 简单 、 反应 结 果具 备 良好 的可 视 化效
果， 目前 已 成 为 病 原 临 床 快 速 诊 断 的一 种 新 思 路 。
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宝 生物 工 程 （ 连 ） 限公 司产 品 。 大 有
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伴 侣 动物 及军 犬 和警犬 的饲养 中造 成 很 大 的经 济 损
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关键 词 ： 环介 导等 温扩 增 ； 细小病 毒 ； 犬 快速 检 测
中 图 分 类 号 ：８ ２ ６５ ￥ ５ ． ９ ￥ ５ ． ５ ；８ ８ ２ ２ 文 献标 识 码 ： Ａ 文章 编 号 ：０ ７５ ３ （ ０ ２ ０ — ０ ９ ０ １ ０ ０ ８ ２ １ ）２０ ０—５
源自文库犬 细小病 毒病 （ ａ ｉｅｐ ｒｏ ｉ ｓｄｓａｅ 是 一 Ｃ ｎｎ ａｖ ｖｒ ｉｅｓ ） ｕ
种 以肠 炎综合 征 为 特 征 的犬 类 、 科 和 鼬科 动 物 的 猫 急性 传 染 病 ， 犬 细 小 病 毒 （ ａ ｉｅ ｐ ｒｏ ｉ ｓ 由 Ｃ ｎｎ ａｖ ｖｒ ， ｕ
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究 所分 离 鉴定 、 养 、 培 保存 ； ６份 粪 便 或肠 内容 物 等 ３ 检测 材料 ， 集 自南 京 及 周 边 地 区 疑 似 Ｃ Ｖ 感 染 采 Ｐ
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动物 医学 进展 ，０ ２ ３ （ ） ９１ ２ １ ，３ ２ ：－３
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环 介 导 等 温 扩增 技 术 快 速 检 测 犬 细 小 病 毒 方 法 的 建 立
温 海 秦 海 斌 朱 骞 贺 星 亮 陆承 平 ， 汇 东ｈ ， ， ， ， 张
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～
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（． 安 部 南 京 警 犬 研 究 所 ， 苏 南 京 ２０ １ ；． 京 农 业 大 学 预 防 兽 医 学 重 点 实 验 室 ， 苏 南 京 ２ ０ ９ ） １公 江 １０２２南 江 １ ０ ５
摘 要 ： 旨在 建 立一 种 利 用 环 介 导 等 温 扩增 技 术 （ ＡＭＰ 检 测 犬 细 小病 毒 感 染 的 新 方 法 。根 据 Ｇ ｎ Ｌ ） ｅ— Ｂｎ ａ ｋ中 犬细 小病毒 （ Ｐ Ｃ Ｖ）ＶＰ 基 因序列 ， 计 ４条 Ｌ ２ 设 ＡＭＰ特 异 性 引物 ， 对反 应条 件 、 异性 、 感 性 、 特 敏 可视
化 效果 和应 用 效果进 行研 究 。结果显 示 ， ６ 在 ５℃等 温条件 下 、 １ｈ内可 完成 Ｌ ＡＭＰ扩 增过 程 ； 病毒 的 最低检
出 限 量 为 １ 个 Ｔ Ｉ ｍＬ； 异 性 和 可 视 效 果 良好 ； ３ ０ Ｃ Ｄ。 ／ 特 对 ６份 临 床 标 本 进 行 检 测 ， 性 检 出 率 为 ８ ． 阳 ０５
犬 ； 肾细胞 （ ８ ） 自中 国兽 药监 察 所 。 猫 Ｆ １购 １ １ ２ 试剂 １ ×Ｔｈ ｒ Ｐ ｌ ． ． ０ ｅｍｏ ｏ 反应 缓 冲液 为 Ｎｅ ｗ Ｅ ｇａ ｄＢ ｏ ａ ｓ公 司产 品 ； ． ｎ ｌｎ ｉＬ ｂ ５ ０ｍｍｏ／ ｅａ ｅ为 ｌＬ Ｂ ｔｉ ｎ Ｓｇ — ｄｉｈ公 司 产 品 ； ＮＴ ｘｕ ｅ Ｔ ｑ酶 为 ｉｍａＡｌｒ ｃ ｄ Ｐ ｍｉｔ ｒ 、 ａ
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１ ２ １ 引 物 的 设 计 与 合 成 ．．
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