生物技术抗体制药

Biblioteka Baidu
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
单克隆抗体用于临床治疗， CD3单克隆抗体作为免疫抑制剂 对器官移植免疫排斥有抑制作 用。
以单克隆抗体作为载体的药 物对肿瘤进行定向治疗。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
第二节 单克隆抗体
单克隆抗体是将抗体产生 细胞与具有无限增殖能力的骨髓 瘤细胞相融合，通过有限稀释法 及克隆化使杂交瘤细胞成为纯一 的单克隆细胞系而产生的。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
多克隆抗体：病原微生 物含有多种抗原决定簇的抗 原物质，因此这些抗体制剂 也是多种抗体的混合物，故 称多克隆抗体。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
1975年Kohler和Milstein首先 利用B淋巴细胞杂交瘤技术制备出 单克隆抗体（monoclonal antibody McAb）。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
细胞融合后可产生多种融合。 脾—脾、脾—瘤、瘤—瘤融合细胞。 选择性培养: 培养基 为HAT培养液。 次黄嘌呤(H) 氨甲喋呤(A)胸腺嘧啶(T)配制。 A阻断DNA合成。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
三、筛选阳性克隆与克隆化
为使杂交瘤细胞稳定，免疫 动物和骨髓瘤细胞供体同一品系 动物进行免疫。
目前常用的骨髓瘤细胞系多 来自BALB/c小鼠和 LOU大鼠，因 此免疫动物也采用相应的品系。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
免疫的方法采用体内免疫法和 体外免疫法。
体内免疫法适用于免疫原性强、 抗原量较多时应用，一般用8～12周 龄雌性鼠。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
五、单克隆抗体的大量制备
体外培养法可获的10μg/ml抗体 体内诱生法可获的5～20mg/ml抗体 用BALB/c小鼠。 降植烷 接种杂交瘤细胞 取腹水 离心 上清。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
六、单克隆抗体的纯化
依单抗IgG类和亚类不同，选各种不同 的纯化方法。 体内诱生法单克隆抗体的纯化方法： 1离心 取上清，超滤，盐析。 2分离 ⑴凝胶过滤用于IgG IgM单抗纯化。 ⑵阴离子交换层析IgG单抗纯化。⑶亲 和层析 IgG单抗纯化。
细胞融合的方法： 脾细胞（1×108 ） 骨髓瘤细胞（2×107 ）混合 聚乙二醇诱导下融合，2分钟，然后用 培养液将融合液缓慢稀释。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
用于细胞融合的骨髓瘤细胞应具有 融合率高，自身不分泌抗体，所产 生的杂交瘤细胞分泌抗体能力强， 长期稳定。 PEG相对分子量4000，浓度为50% 二甲基亚砜增加融合率。
颗粒性抗原（如细菌细胞抗原） 的免疫原性强，可不加佐剂，直接 注入腹腔107个细胞进行初次免疫， 间隔1～3周，再追加免疫1～2次。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
可溶性抗原按每只小鼠10～100μg 抗原与福氏完全佐剂等量混合后注 入腹腔内，进行初次免疫，间隔 2～4周，再用不加佐剂原抗原追加
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
一、抗原与动物免疫
制备特定抗原的单克隆抗体，首 先要制备用于免疫的适当抗原，再 用抗原进行动物免疫。
有的抗原可以用化学合成：地高辛 多数抗原物为混合物须经免疫、筛 选、克隆化。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
筛选阳性克隆常用检测方法： 免疫酶技术、免疫荧光技术、放射免 疫技术等。 克隆化是指单个细胞通过无性繁殖而 获得细胞集团的整个培养过程。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
ELISA用于破伤风抗体的筛选
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
四、杂交瘤细胞与抗体性状的鉴定
杂交瘤细胞鉴定：染色体分析。它是 鉴定的客观指标，了解分泌抗体的能 力。 单抗进行Ig类和亚类鉴定： 用羊或兔抗Ig不同类或亚类抗体，进行 免疫扩散或ELISA鉴定。 亲和力、特异性、纯度、分子量测定。
抗体的产生：机体免疫系统 受抗原刺激后，B淋巴细胞被活 化增殖和分化为浆细胞，由浆 细胞合成和分泌的球蛋白。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
20世纪60年代发现多发性骨髓 瘤是浆细胞癌变形成的恶性增殖性 疾病。病人血清中出现同抗体结构 类似的球蛋白， 统称为免疫球蛋 白（immunoglobulin，Ig）。所以 Ig是化学结构的概念，而抗体是生 物学功能的概念。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
第一节 概述
1890年Behring和北里柴三郎 发现白喉抗毒素,建立了血清疗法, 开创了抗体制药。
1937年Tiselius用电泳法将 血清蛋白分离为白蛋白、α、β、 γ球蛋白，并证明抗体活性主要 存在于γ球蛋白组分。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
抗体是指能与相应抗原特异 性结合具有免疫功能的球蛋白。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
体外免疫法：用4～8周龄BALB/c 小鼠的脾脏制成单细胞悬液，再 加入适当抗原使其浓度达0.5～ 5μg/ml,在5% CO2 37 oC 下培养 4～5天,再分离脾细胞,进行细胞 融合。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
二、细胞融合与杂交瘤细胞的 选择性培养
免疫1～2次。 一般再采脾细胞前3日由静脉注射最 后一次抗原。刺激B细胞分裂。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
脾内免疫法即在麻醉下直接将 0.1～0.2ml抗原注入脾脏进行 免疫。细胞抗原需105个，可溶 性抗原需10μg。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
体外免疫法用于不能采用体 内免疫的情况下，如制备人源性 单克隆抗体；免疫源性极弱，易 引起免疫抑制。 优点：需抗源量少，免疫期短， 干扰因素少。
单克隆抗体具有高度特异性、 均一性、来源稳定、可大量生产等 特点，为抗体制备和应用提供了全 新的手段，还促进了基础和临床医 学的发展。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
单克隆抗体作为抗体制剂， 在临床上主要用与疾病的诊断和 治疗。
单克隆抗体检测与某些疾病 有关的抗原，辅助临床诊断。用 放射性核素标记单克隆抗体进行 肿瘤显像，做免疫定位诊断。