比格犬雌激素β受体RNA干扰实验细胞及PCR检测引物的筛选

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ｏｆｅｓｔｒｏｇｅｎｒｅｃｅｐｔｏｒｂｅｔａｉｎＢｅａｇｌｅｓ
ＺＨＯＮＧＲｕｉ，ＧＡＮＹｉ一，ＺＨＡＯＹａｎ — ｂｉｎ，ＬＩＵＢｉｎｇ，ＳＵＮＺｈａｏ — ｚｅｎｇ，ＺＨＵＹｕ — ｊｉｎｇ，
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】０ｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｓｃｒｅｅｎｔｈｅｃｅｌｌｓａｎｄｃｏｎｓｔｒｕｃｔｐｒｉｍｅｒｓｔｏｂｅｕｓｅｄｆｏｒＲＮＡｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｏｆ
ＬＵＡＮＸｉｎ— ｈｏｎｇ，ＨＵＺｈｏｎｇ — ｍｉｎｇ，ＺＨＡＮＧＹｏｎｇ，ＺＥＮＧＬｉｎ
（１．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＶｅｔｅｒｉｎａｒｙａｎｄＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅ，ＳｈｅｎｙａｎｇＡｇｒｉｃｕｈｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ１１０８６６，Ｃｈｉｎａ；
３．黑龙江八一农垦大学动物科技学院，大庆１６３３１９）
【摘要】目的
筛选用于比格犬Ｅ基因ＲＮＡ干扰实验的细胞和检测所用引物。方法根据比格犬昭
氨基末端区域和ＤＮＡ结合区设计三对引物，用阳性质粒筛选最佳引物应用于ＲＮＡ干扰效果检测，并利用２９３Ｔ、Ｈｅｌａ和ｖｅｒｏ细胞的ｃＤＮＡ验证该引物的特异性。对这三种细胞内人Ｅ邸基因的存在情况也进行了检测。结果经过三次重复性实验之后，结果显示引物Ｃ３６６８４扩增效率高，且没有非特异条带，该引物对２９３Ｔ、Ｈｅｌａ和ｖｅｒｏ细胞ｅＤＮＡ扩增时同样没有非特异性条带，但２９３Ｔ细胞中存在人的Ｅ祁基因。结论引物Ｃ３６６８４用于检测ＲＮＡ
２．ＬａｂｏｒａｔｏｙｒＡｎｉｍａｌＣｅｎｔｅｒｏｆｔｈｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＭｉｌｉｔａｒｙＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００７１；３．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＨｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇＢａｙｉＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｄａｑｉｎｇ１６３３１９）
干扰效率，而Ｈｅｌａ细胞则作为ＲＮＡ干扰实验的细胞工具。
【关键词１Ｅ邓基因；比格犬；筛选引物；细胞【中图分类号】Ｒ３３【文献标识码】Ａ【文章编号】１６７１．７８５６（２０１４）０２－００４２－０４
２０１４年２月
中国比较医学杂志
ＣＨＩＮＥＳＥＪＯＵＲＮＡＬＯＦＣＯＭＰＡＲＡＴＩＶＥＭＥＤＩＣＩＮＥ
Ｆｅｂｒｕａｒｙ，２０１４Ｖｏ１．２４ＮＯ．２
第２wk.baidu.com４卷
第２期
研究报告
石．、
ｄｏｉ：１０．３９６９．．．ｉｓｓｎ．１６７１．７８５６．２０１４．００２．０１０
ＰＣＲｐｒｉｍｅｒｓａｎｄｃｅｌｌｓｃｒｅｅｎｉｎｇｆｏｒｔｈｅＲＮＡｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ
比格犬雌激素Ｉ３受体ＲＮＡ干扰实验细胞及ＰＣＲ检测引物的筛选
兆增，朱宇旌’ ，钟睿，甘艺，赵彦斌，刘冰，孙
栾新红，胡仲明，张勇，曾
（１．沈阳农业大学畜牧兽医学院，沈阳１１０８６６；２．军事医学科学院实验动物中心，北京１０００７１；
Ｅｅ￣ｇｅｎｅｉｎＢｅａｇｌｅｓ．ＭｅｔｈｏｄｓＴｈｒｅｅｐａｉｒｓｏｆｐｒｉｍｅｒｓｗｅｒｅｄｅｓｉｇｎｅｄａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅａｍｉｎｏｔｅｒｍｉｎａｌａｎｄＤＮＡｂｉｎｄｉｎｇ
ａｒｅａｏｆ邶ｇｅｎｅｉｎＢｅａｇｌｅｓ，ａｎｄｔｈｅｂｅｓｔｐｒｉｍｅｒｓｗｅｒｅｓｃｒｅｅｎｅｄａｓｔｈｅｐｒｉｍｅｒｓｔｏｂｅｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔＲＮＡｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅｅｆｆｅｃｔ