病毒感染的实验室诊断技术
病毒感染实验诊断
病毒感染实验诊疗1.（ 1 ）一般原则是特异敏感、迅速和简易。
第一依据流行病学和临床特色，初步判断可能感染的病毒。
（2）而后依据可疑病毒的生物学特色、机体免疫应答和临床过程，以及病人目前所处的机遇，确立实验诊疗方法。
2.（1）对潜藏期短，发病时还没有抗体产生，可选择测定病毒颗粒、病毒抗原或核酸。
（2）对潜藏期超出十天的感染，可检测特异性的 IgM 抗体来进行早期迅速诊疗，及差别首次和再次感染。
（3 ）对可在体内形成连续感染或潜藏感染的病毒，可检测急性期和恢复期双份血清的IgG 抗体有无 4 倍以上涨高，或直接检测病毒核酸。
（4）对原由不明或有新病毒感染时，应收集标本进行病毒分别，同时应采纳双份血清以确认分其余病毒为病原体。
（5）对同一症状可有多种病毒惹起的状况，应同时检测几种有关病毒的病毒颗粒、抗原或抗体。
（6）对由多个型别构成的病毒可测定它们的共同抗原。
第一节标本收集与运送一、标本的收集1.采样时间：尽可能在发病的早期，急性期或患者人院的当日进行。
2.标本种类的选择：依据临床感染的症状及流行病学资料，判断可能感得病毒种类，选择相应部位采纳标本。
常有分别病毒标本的选择：3．常有标本的收集方法(1) 血液：以无菌取抗凝血10ml 。
抗凝采纳100n ／ ml 肝素钠。
用于分别CMV 、HSV ，、黄病毒、 EBV、 HIV-1及重生儿肠道病毒。
(2) 脑脊液：以无菌取脑脊液 1 ～ 2ml ，冰浴立刻送检。
在 4 ℃可寄存72h 。
用于分别柯萨奇病毒、 ECHO 病毒、肠道病毒、腮腺炎病毒。
(3) 宫颈或阴道拭子：采纳病灶部位分泌物，或将拭子伸人宫颈约lcm 逗留 5 秒拿出，冰浴立刻送检。
用于分别HSV 、 CMV 。
(4)粪便标本：取 2 ～4 ｇ粪便加 10ml 运送液立刻送检，用于分别腺病毒、肠道病毒和轮状病毒。
(5) 含漱液：用无菌生理盐水让患者含漱。
用于分别流感病毒、副流感病毒、鼻病毒、RSV 等。
甲型流感的分子诊断技术与实验室检测方法
甲型流感的分子诊断技术与实验室检测方法甲型流感是一种由甲型流感病毒引起的急性呼吸道传染病，其传播迅速且易感染大量人群。
为了准确诊断和及时干预，科学家们开发出了多种分子诊断技术和实验室检测方法。
本文将介绍几种常用的技术与方法，以提高对甲型流感的检测效率和诊断准确性。
一、聚合酶链式反应（PCR）技术PCR技术是一种灵敏度高、特异性强的分子诊断技术，已被广泛应用于甲型流感的检测中。
该技术通过放大甲型流感病毒基因组中特定的DNA片段，从而使其能够被检测到。
PCR技术可在短时间内，从患者的样本中检测到甲型流感病毒的存在，并确定其亚型。
此外，PCR 技术还能够对病毒的基因组进行序列分析，从而确定其突变情况和传播途径。
二、实时荧光定量PCR（qPCR）技术实时荧光定量PCR技术是PCR技术的一种改进版本，其主要优势在于可实现对病毒数量的精确测量和即时定量。
该技术结合了PCR和荧光探针技术，使得可以在PCR反应过程中实时监测目标序列的扩增情况。
实时荧光定量PCR技术能够快速检测出甲型流感病毒的数量，并对病毒载量进行准确测量，帮助医生判断病情的严重程度，指导治疗决策。
三、免疫荧光技术免疫荧光技术是一种通过特定的抗体和荧光探针对病毒进行检测的技术。
在甲型流感的实验室检测中，科学家们通常采用免疫荧光技术检测病毒的抗原。
该技术的原理是将含有甲型流感病毒的标本与特异性荧光标记的抗体结合，然后通过荧光显微镜观察是否有荧光信号出现。
免疫荧光技术能够准确、快速地检测出甲型流感病毒的存在，并且可以对其亚型进行鉴定。
四、核酸测序技术核酸测序技术是一种可以解析病毒基因组序列的方法，可以帮助科学家们了解甲型流感病毒的基因组结构和功能。
通过高通量测序技术，科学家们可以在较短的时间内获取大量的病毒基因组序列信息。
这些信息有助于了解甲型流感病毒的变异情况，筛选药物治疗靶点，并指导疫苗的设计与开发。
五、免疫学检测方法除了分子诊断技术，免疫学检测方法也发挥着重要作用。
EB病毒感染实验室检测方法
EB病毒感染实验室检测方法摘要本文档详细描述了EB病毒（Epstein-Barr virus，EBV）感染的实验室检测方法，包括病毒培养、血清学检测、核酸扩增和病毒载量测定等。
这些检测方法在临床诊断、流行病学研究以及疫苗研发等领域具有重要意义。
1. 病毒培养1.1 原理EBV属于疱疹病毒科，是一种专性细胞内寄生的DNA病毒。
病毒培养可以充分展示病毒的感染性、复制能力和生物学特性。
1.2 方法1. 选择合适的细胞系，如B95-8或Daudi细胞。
2. 将临床样本（如唾液、血液等）接种至细胞系。
3. 在适宜的条件下（如37°C、5% CO2）培养细胞，观察病毒复制和感染现象。
4. 定期观察细胞病变，如细胞增大、核固缩等。
5. 采用免疫荧光染色、电子显微镜等方法检测病毒颗粒。
2. 血清学检测2.1 原理血清学检测基于病毒感染后诱导的免疫反应，通过检测特异性抗体来诊断EBV感染。
2.2 方法1. 收集患者血清样本。
2. 使用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测EBV特异性抗体，如VCA-IgM、VCA-IgG、EA-IgG等。
3. 采用免疫荧光染色、免疫组化等方法进行抗体检测。
4. 根据抗体类型和滴度判断感染状态，如急性感染、慢性感染或回忆性感染。
3. 核酸扩增3.1 原理核酸扩增技术通过特异性引物和DNA聚合酶酶链反应（PCR）来检测EBV的DNA序列。
3.2 方法1. 提取临床样本的DNA。
2. 设计针对EBV DNA的特异性引物，进行巢式PCR或实时定量PCR（qPCR）。
3. 扩增EBV特异性基因，如EBNA1、EBNA2、LMP1等。
4. 分析扩增产物，判断病毒感染情况。
4. 病毒载量测定4.1 原理病毒载量测定通过检测病毒颗粒的数量来评估病毒感染的程度。
4.2 方法1. 提取临床样本的病毒颗粒。
2. 采用实时定量PCR、定量荧光显微镜等方法测定病毒载量。
3. 根据病毒载量判断感染程度，为临床治疗提供依据。
传染病实验：实验室诊断(一)
传染病实验：实验室诊断（一）引言概述传染病实验在保障公共卫生和疾病防控方面发挥着重要作用。
实验室诊断是确诊传染病的一种关键手段，它通过检测病原体的存在和数量，帮助医生了解疾病的种类、传播方式以及临床特征。
本文将深入探讨传染病实验中的实验室诊断方法，包括临床标本采集和处理、病原体检测技术、结果解读和质控等五个主要内容。
正文一、临床标本采集和处理1. 选择合适的标本类型：根据传染病特点和病原体种类，选择适宜的标本类型，如血液、尿液、呼吸道分泌物等。
2. 采集标本的时间和方法：根据传染病的特点和医学要求，选择合适的采集时间和方法，确保获得准确的标本。
3. 标本的保存和运输：在采集后，及时储存和运送标本，避免样本受到污染或失去活性。
4. 标本处理前的预处理：根据采集到的标本类型，进行相应的预处理步骤，如离心、滤液、血清分离等。
5. 标本的处理和保存：根据实验要求，对标本进行处理，并在适当的条件下保存，确保后续实验的可靠性。
二、病原体检测技术1. 传统检测方法：包括细菌培养、血清学检测、显微镜检查等，是传染病实验室诊断的基础技术。
2. 分子生物学技术：包括PCR、实时荧光定量PCR、核酸杂交等，能够快速、准确地检测出病原体的存在和数量。
3. 免疫学技术：包括ELISA、免疫荧光等，通过检测体液中的病原体抗体或抗原，确定患者是否感染。
4. 基因测序技术：通过测序病原体的基因组，确定其种属及相关特性，有助于诊断和流行病学研究。
5. 综合应用技术：将多种检测技术相结合，提高检测灵敏度和特异性，如微阵列技术、引物引入检测等。
三、结果解读1. 结果的准确性评估：对实验结果进行准确性评估，考虑结果的灵敏度、特异性及阳性预测值等指标。
2. 结果的解释和分析：根据实验结果，结合病原体的相关特征和临床表现，对结果进行解释和分析。
3. 结果与标准的比对：将实验结果与相关的标准比对，确定病人的感染状态或病因。
4. 结果的报告和记录：将实验结果及相关信息报告给临床医生或卫生部门，并妥善记录实验数据。
第五节 病毒病的实验室诊断方法.
第二章病毒第五节病毒病的实验室诊断方法畜禽病毒性传染病是危害最严重的一类疫病，给畜牧业带来的经济损失最大。
除少数如绵羊痘等可根据临床症状、流行病学、病变作出诊断外，大多数病毒性传染病的确诊，必须在临床诊断的基础上进行实验室诊断，以确定病毒的存在或检出特异性抗体。
病毒病的实验室诊断和细菌病的实验室诊断一样，都需要在正确采集病料的基础上进行，常用的诊断方法有：包涵体检查、病毒的分离培养、病毒的血清学试验、动物接种试验、分子生物学的方法等。
一、病料的采集、保存和运送病毒病病料采集的原则、方法以及保存运送的方法与细菌病病料的采集、保存和运送方法基本是一致的，不同的是病毒材料的保存除可冷冻外，还可放在50%甘油磷酸盐缓冲液中保存，液体病料采集后可直接加入一定量的青、链霉素或其他抗生素以防细菌和霉菌的污染。
二、包涵体检查有些病毒能在易感细胞中形成包涵体。
将被检材料直接制成涂片、组织切片或冰冻切片，经特殊染色后，用普通光学显微镜检查。
这种方法对能形成包涵体的病毒性传染病，具有重要的诊断意义。
但包涵体的形成有个过程，出现率也不是100%，所以，在包涵体检查时应注意。
（能出现包涵体的重要畜禽病毒见表2-3）表2-3 能产生包涵体的畜禽常见病毒病毒名称感染范围包涵体类型及部位痘病毒类狂犬病病毒伪狂犬病病毒副流感病毒III型马鼻肺炎病毒鸡新城疫病毒传染性喉气管炎病毒人、马、牛、羊、猪、鸡等狼、马、牛、猪、人、猫、羊、禽等犬、猫、猪、牛、羊等牛、马、人马属动物鸡鸡嗜酸性，胞浆内，见于皮肤的棘层细胞中嗜酸性，胞浆内，见于神经原内及视网膜的神经节层的细胞中嗜酸性，核内，见于脑、脊椎旁神经节的神经原中嗜酸性，胞浆及胞核内均有，见于支气管炎、肺泡上皮细胞及肺的间隔细胞中嗜酸性，核内，见于支气管及肺泡上皮细胞、肺间隔细胞、肝细胞、淋巴结的网状细胞等嗜酸性，胞浆内，见于支气管上皮细胞中嗜酸性，核内，见于上呼吸道的上皮细胞中三、病毒的分离培养将采集的病料接种动物、禽胚或组织细胞，可进行病毒的分离培养。
病毒—病毒感染的检测方法(动物微生物课件)
病
毒
红
颗
细
粒
胞
（二）血凝抑制试验（HI）原理：
当病毒悬液（抗原）中加入特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗 粒的血凝素时，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或血凝素直接接触 。这时红细胞的凝集就被抑制，称为红细胞凝集抑制（HI）反应，也称血 凝抑制反应。
（1）免疫凝集电镜技术
抗原与抗体凝集反应后，可使标本中病毒颗粒聚集成 团，再经负染直接在电镜下观察，提高了敏感性，确 定病毒的血清学性质。
（2）免疫电镜定位技术
特异性抗体用电子致密物质，如铁蛋白、过氧化物酶等标 记后，使之与组织超薄切片中的抗原结合，在电镜下观察 到标记物所在位置，即为抗原抗体反应的部位。
++：约有半数红细胞凝集，凝集的红细胞在孔壁上铺成薄膜，面积较 小；未凝集的红细胞（约50%）沉积在孔底中心聚成小圆点。如第一排 第9孔。 +：只有少数红细胞凝集；未凝集的红细胞（约75%）沉积在孔底中心聚 集形成小圆盘状，凝集的红细胞在此小圆盘周围。如第一排第10孔。 -：红细胞不凝集，沉积于孔底，形成一圆盘状或钮扣状，边缘整齐。 如第12孔、11孔。
死体积 液样
活塞 套筒
吸嘴（一次性）
外置活塞式移液器
外置活塞式移液器
这种移液器是采用外置式活塞，活塞设计在吸 头内部，直接与液体接触，活塞与液体之间没 有空气段。
三、 电子显微镜检查
病毒的很多特征如大小、形态、结构等必须借助电 子显微镜进行检查。对于目前尚难培养而形态又非 常典型的病毒，可直接从感染组织或分泌液，或者 接种病料的鸡胚和细胞培养收获的材料作电子显微 镜检查，直接观察病毒粒子。
病毒感染的诊断新技术
病毒感染的诊断新技术
随着科技的不断进步，病毒感染的诊断技术也在不断升级，为临床诊断提供了更加快速准确的手段。
传统的病毒感染诊断方式主要依靠症状、临床表现和实验室检测，然而这些方法往往耗时且准确率有限。
因此，研究人员们不断探索创新，希望能够开发出更加高效的诊断技术。
一、核酸检测技术
核酸检测技术是当前用于病毒感染诊断的主流方法之一。
通过提取患者样本中的核酸，例如血液、唾液、尿液等，再检测其中是否含有特定病毒的遗传物质。
这种方法的优势在于高度准确和灵敏度高，能够及时发现病毒感染。
近年来，一些快速核酸检测设备的出现更加方便了诊断工作，大大缩短了诊断的时间。
二、免疫学检测技术
免疫学检测技术在病毒感染的诊断中也扮演着重要角色。
这种方法利用人体免疫系统对病毒感染产生的抗体或抗原进行检测，从而确定患者是否感染了特定的病毒。
免疫学检测技术包括ELISA、免疫印迹等方法，其优势在于可以快速筛查大量样本，对于群体性的感染疫情具有重要意义。
三、基因测序技术
随着基因测序技术的不断发展，其在病毒感染诊断中的应用也日益广泛。
通过对病毒基因组的测序分析，可以快速确定感染病毒的种类和亚型，为病毒溯源和病毒演化提供重要信息。
基因测序技术不仅可以帮助医生更好地制定治疗方案，还能够为疫情防控提供科学依据。
综合以上几种新技术，可以看出病毒感染的诊断已经迈入了一个新的时代，诊断速度更快、准确度更高。
然而，我们也需要意识到新技术的应用仍然面临一些挑战，如设备成本高、技术人员需求等。
因此，未来的诊断技术发展仍需不断努力，以推动临床诊断水平的提升，为保障公共健康做出更大贡献。
病毒感染的实验诊断
病毒感染的实验诊断● 考点病毒的生物学性状病毒的实验室检查方法常见病毒的感染【内容讲解】第一节概述一类非细胞型微生物，个体极小，可通过细菌滤器，需用电子显微镜观察。
仅含一种核酸作为遗传物质，外被蛋白质衣壳或还有包膜。
病毒只能在活细胞内寄生，以复制的方式进行增殖。
在临床微生物感染中，近75%的传染病是由病毒引起的。
一、病毒的基本性状（一）形态结构1.大小和形状：大小：测量单位用纳米表示，一般在20-300nm之间。
形态大致可分为：球形或近似球形、杆状、弹形、砖形、蝌蚪形等。
2.结构（二）病毒的增殖病毒必须依赖宿主细胞，以特殊的自我复制方式进行增殖。
病毒的复制周期：吸附、穿入、脱壳、生物合成、组装与成熟、释放6个阶段。
异常增殖：顿挫感染：病毒进入细胞后的环境不利于它的复制，不能合成本身的成分或不能组装和释放有感染性的病毒颗粒。
缺陷病毒：由于病毒基因组不完整或基因位点改变而不能进行正常增殖的病毒。
干扰现象：当两种不同的病毒或两株性质不同的同种病毒，同时或先后感染同一细胞或机体时，可发生一种病毒抑制另一种病毒增殖的现象。
（三）噬菌体以细菌、真菌等为宿主，能引起细菌等裂解的病毒。
噬菌体特异性识别细菌表面受体，可用于进行细菌的鉴定与分型。
噬菌体感染细菌后产生两种后果：溶菌周期和溶源性周期。
（四）非寻常病毒比病毒更小更简单的致病因子，又称为亚病毒因子，包括类病毒、卫星病毒和朊粒等。
朊粒个体微小，不含核酸，其主要成分是一种蛋白酶抗性蛋白，对各种理化作用的抵抗力强，具有传染性，是引起传染性海绵状脑病的病原体。
朊粒致中枢神经系统退化性病变，引起牛海绵状脑病（疯牛病）。
克雅病（CJD）和Kuru病被认为与朊粒感染有关。
二、病毒的分类与命名科、属、种3级或科、亚科、属、种4级。
DNA病毒、RNA病毒、DNA和RNA逆转录病毒三大类。
按传播途径可分为呼吸道病毒、胃肠炎病毒、经性传播感染的病毒等。
按感染部位与症状特征可分为肝炎病毒、出血性热病毒、疱疹病毒等。
性病实验室诊断标准及应用
显微镜检查临床意义
淋菌培养临床意义
是临床诊断的金标准，是WHO推荐的淋病筛查的唯一方法 是判愈的指标 可以对疑似（或非生殖器部位标本）NG的菌株作进一步的鉴定 可进行NG耐药监测，PPNG、TRNG、QRNG 科研
性传播疾病实验室诊断标准及应用
常见性传播疾病的实验室诊断“金标准”
淋病 淋球菌培养 梅毒 暗视野检查+TPPA(FTA-ABS,WB) 沙眼衣原体 衣原体培养+核酸扩增技术 支原体感染 支原体培养 生殖器疱疹 病毒培养+核酸扩增技术 尖锐湿疣 核酸杂交和核酸扩增技术 HIV/艾滋病 蛋白印迹试验+HIV抗原检测 滴虫性阴道炎 湿片法+毛滴虫培养 细菌性阴道病 G染色查线索细胞 软下疳 细菌培养+核酸扩增技术 性病性淋巴肉芽肿 衣原体培养+核酸扩增技术
两类血清学方法临床意义的比较
RPR类： RPR等试验可用于大标本量的筛查？ RPR定量可排除生物学假阳性？ RPR是疗效判定的指标 RPR是疗后随访的指标 RPR用于判定是否血清复发
TPPA类： 是金标准 TPPA等试验是确诊指标 在HIV感染者中，血清学试验可发生难于解释的现象，若怀疑梅毒感染应作HIV检查
面对当前梅毒血清学检测存在的问题，即将有策略五…
梅毒孕产妇所生儿童随访与先天梅毒感染状态监测流程
梅毒产妇所生新生儿
不能开展暗视野、IgM
采静脉血、RPR定量
能开展暗视野、IgM
阴性
诊断先天梅毒感染
阳性
治疗、随访
18月TPPA
(医学微生物学)8微生物感染的实验室诊断
3
核酸检测
通过检测病原体的DNA或RNA来快速准确地诊断微生物感染。
常见的细菌感染诊断
革兰染色
通过染色的方法快速鉴定细菌的类型，例如革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌。
酶联免疫吸附法
利用抗体结合靶细胞表面的蛋白质，诊断细菌感染。
通过培养检测抗生素敏感性
将可疑的菌落放置在含有一系列抗生素的培养基上，以确定对哪种抗生素敏感，从而选择恰 当的治疗方案。
常见的真菌感染诊断
1
孢子培养
通过培养真菌孢子来鉴定真菌种类。
2ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
抗真菌药物敏感性测试
使用不同的真菌菌株检测哪种药物对该菌株敏感，用于治疗患者的真菌感染。
3
墨汁印迹
真菌孢子会在墨汁中留下一个特定的形状，可用来确定真菌属种。
病毒感染的实验室诊断方法
聚合酶链式反应
通过扩增病毒核酸来诊断病毒感 染。
电子显微镜
直接观察病毒颗粒，确认病毒感 染。
荧光显微镜
检测病毒抗原或通过标记病毒核 酸来诊断病毒感染。
实验室诊断技术的发展趋势
1 基于测序的新技术
通过高通量测序技术，大 规模测序微生物基因组， 促进对微生物的研究和进 一步的治疗。
2 微流控芯片技术
微小的流控芯片可用于诊 断多种疾病，特别适用于 早期诊断和治疗。
医学微生物学：8种微生 物感染的实验室诊断
微生物感染可导致许多疾病，而实验室诊断是及时准确地治疗这些疾病的关 键。
实验室诊断的重要性
提供快速检测
实验室诊断可以快速确定感染的病原体，为治疗提供关键信息。
避免误诊和漏诊
准确的实验室诊断可以避免不必要的治疗和患者进一步恶化。
微生物感染的常见病原体
实验室诊断技术在感染病诊治中的应用
实验室诊断技术在感染病诊治中的应用随着生命科学的飞速发展，实验室诊断技术在临床病诊治中得到了广泛的应用。
其中，感染病诊治是实验室诊断技术应用的重要领域之一。
实验室诊断技术能够从微观的角度对感染源进行判断，确定感染的致病菌，以及菌株的药敏性等信息，为感染病的诊治提供重要依据。
本文将从实验室诊断技术的原理、方法、优势等多个角度来阐述实验室诊断技术在感染病诊治中的应用。
实验室诊断技术的原理实验室诊断技术主要是利用微生物学、免疫学、生物化学、分子生物学等学科的知识和技术，通过扩增、检测致病微生物DNA 等手段，从感染源、病原体等微观层面利用专业设备和试剂迅速准确地检测出病原体及其相关信息，从而为医生的临床诊治提供了重要的依据。
实验室诊断技术的方法实验室诊断技术包括微生物学检测、免疫学检测、生物化学检测、分子生物学检测等多种检测方法。
其特点是快速准确、结果稳定、专业性强、对不同类型的感染病都有很好的适用性，可以提高感染病的诊断率和治疗效果。
微生物学检测是最常用的实验室检测方法之一。
它包括细菌、真菌、病毒等病原体的检测，主要应用于血液、尿液、各种体液等样本的检测。
其优点是能够快速地获得诊断结果，对抗生素治疗的指导有很大的帮助。
免疫学检测主要是通过检测机体内的抗体、抗原等免疫物质来对感染病的诊断和治疗提供帮助。
这种方法的优势是检测操作简单、快速、灵敏，而且适用于大批量样品检测。
生物化学检测主要是对感染病病原体内部代谢产物、细胞壁等分子结构进行检测，通过检测致病物质的分泌产物来确定病原体，从而为感染病的治疗提供重要依据。
分子生物学技术指通过扩增、检测细胞核酸来对感染病进行精准的诊断、治疗指导。
是目前最为先进、灵敏和特异的检测方法之一，可最大限度提高病原体的检测水平，从而提高了感染病的诊断准确度。
实验室诊断技术的优势实验室诊断技术在感染病诊治中的应用的优势主要体现在以下四个方面：一是提高了感染病的诊断准确度。
其快速检测和准确性，可以对感染病的抗生素使用提供有益的支持，提高感染病的治疗效果。
病毒的检测方法
病毒的检测方法病毒是一种微生物，它可以侵入人体或其他生物体内，引起疾病。
病毒的检测方法是非常重要的，可以帮助人们及时发现和诊断疾病，采取相应的治疗措施。
目前，有许多种病毒检测方法，包括传统的实验室检测方法和现代的分子生物学检测方法。
本文将介绍几种常见的病毒检测方法。
首先，传统的实验室检测方法包括病毒培养和病毒抗原检测。
病毒培养是将患者样本（如血液、唾液、尿液等）接种到适当的细胞培养物中，观察细胞是否发生变化，以确定是否存在病毒。
这种方法需要较长的培养时间，通常需要几天甚至几周才能得出结果。
而病毒抗原检测则是利用抗体与病毒抗原结合的原理，通过特定的试剂盒进行检测，可以在较短的时间内得出结果。
这两种方法都是传统的病毒检测方法，虽然时间较长，但在一定程度上仍然具有一定的准确性和可靠性。
其次，现代的分子生物学检测方法包括核酸检测和蛋白质检测。
核酸检测是通过提取样本中的核酸，利用PCR等技术对病毒的核酸进行扩增和检测，可以在短时间内得出高灵敏度和高特异性的结果。
这种方法已经成为当前病毒检测的主流方法，被广泛应用于临床诊断和疫情监测中。
而蛋白质检测则是通过检测样本中的病毒蛋白质，利用免疫学技术进行检测，可以快速、准确地判断是否存在病毒感染。
除了以上介绍的几种方法外，还有一些新型的病毒检测方法正在不断涌现，如纳米技术、光学技术等，这些新技术的出现将为病毒检测带来更多的可能性和发展空间。
总的来说，病毒的检测方法是多种多样的，每种方法都有其独特的优势和局限性。
在实际应用中，可以根据具体的情况选择合适的检测方法，以提高检测的准确性和可靠性。
随着科学技术的不断进步，相信病毒检测方法将会变得更加快速、准确和便捷，为人们的健康保驾护航。
病毒感染性疾病的实验室诊断
2. 鸡胚接种 鸡胚是用于分离粘病毒科、疱疹病毒、 痘类病毒的较为理想的材料。 （1） 常用接种部位和用途
38-39℃
卵黄囊接种 羊水腔接种
新鲜受精卵
5-13天
尿囊腔接种
绒毛尿囊膜接种
卵壳 气室 羊膜 尿囊
绒毛尿 囊膜
羊水囊
卵黄囊
卵白
① 卵黄囊接种：用于流行性脑炎病毒分 离 ② 羊水腔接种：用于流感病毒、副流感 病毒的初次分离 ③ 尿囊腔接种：用于流感病毒、腺病毒、 腮腺炎病毒分离 ④ 绒毛尿囊膜接种：用于痘病毒、疱疹 病毒分离
（1） 中和试验：是将病毒与特异性抗 体进行免疫反应，使病毒失去感染性， 在细胞培养和活的机体内不出现病变 的试验。常用细胞培养进行中和试验。
方 法：
①固定病毒（100TCID50），稀释血清，测Ab 效价。两次效价相差4倍以上有诊断意义。 TCID50：50%组织细胞感染的病毒剂量 (50%Tissue cell infective dose TCID50)
（4） 理化性质的测定 ① 病毒的大小和形态：可用电镜观察病毒 的大小和形态。 ② 核酸类型鉴别及序列测定：利用5-溴2-脱氧尿苷（BUDR）抑制DNA复制的 特性，在细胞培养液中加入该物质，可 抑制DNA病毒的复制和增殖，抑制细胞 病变的出现，但对RNA病毒无抑制作用， 以次判断病毒核酸类型。也可对病毒特 异序列或全序列的碱基排列测定或DNA 杂交、DNA-RNA杂交来鉴定病毒。
④ 干扰现象： 一种病毒感染细胞后，可以干扰以后 进入的病毒的增殖。利用此现象鉴定不 引起形态学变化的病毒。如某些型别的 鼻病毒能干扰以后进入的副流感Ⅰ型病 毒的增殖，从而阻抑后者的红细胞吸附 作用。
⑤ 红细胞吸附及吸附抑制试验： 红细胞吸附现象的产生是由于病毒在 细胞膜成熟时，将其血凝素插入细胞膜， 使受染细胞吸附红细胞，是病毒增殖的 指标。该现象可被相应的病毒特异性抗 体所抑制，称为红细胞吸附抑制试验， 可用来鉴定病毒。
病毒感染的基因检测及诊断
病毒感染的基因检测及诊断随着现代医学技术的不断发展，基因检测已经成为诊断疾病、预防疾病和制定个性化治疗方案的重要手段之一。
特别是在病毒感染方面，基因检测技术为医学专家提供了更准确、更快速和更便捷的诊断方法。
本文将从基因检测技术的原理、病毒感染的临床表现和诊断方法这三个方面来探讨病毒感染的基因检测及诊断。
一、基因检测技术的原理基因检测是指对DNA或RNA进行检测，旨在发现与疾病相关的基因突变或多态性。
基因检测可以通过一系列的实验室测试来确定人类遗传物质的变化。
基因检测可以分为两种类型：一种是直接检测某一具体基因是否有突变；另一种是采用全基因组扫描技术，检测所有基因中的突变。
基因检测技术的主要原理是PCR，即聚合酶链式反应。
PCR可以通过复制DNA使其放大，从而从微量样品中检测目标基因的存在。
PCR技术优点是快速、可靠和灵敏。
此外，新一代测序技术的引入，如灵敏性更高的NGS（下一代测序），使得基因检测更加灵活和高效。
二、病毒感染的临床表现病毒感染是由病毒通过进入宿主细胞体内对宿主细胞的生长影响而引起的。
病毒感染的临床表现多种多样，不同病毒感染对于患者的危害程度也不同。
病毒感染可以引起一系列的症状，包括发热、咳嗽、流鼻涕、疼痛等。
此外，病毒感染也可能导致严重疾病，如艾滋病、克隆氏病毒病（EBV）和乙肝等，这些疾病甚至可能危及患者的生命。
三、病毒感染的诊断方法传统的病毒感染诊断方法主要依靠病毒培养、病毒抗体检测和核酸检测等。
尽管这些诊断方法在某些病毒感染的早期诊断中有一定的优势，但是它们也存在一些缺点，如低敏感度和低特异性等。
而基因检测可以通过检测病毒基因的存在和表达，快速、准确地诊断病毒感染。
目前，基因检测在病毒感染的准确诊断和治疗中发挥了重要作用。
例如，PCR技术已经成功应用于流感、人乳头瘤病毒、乙型肝炎等几乎所有常见病毒的检测。
同时，基因检测还是制定针对个体患者的治疗方案的必备手段之一。
例如，在艾滋病治疗中，通过检测HIV病毒中的基因突变，医生可以制定个性化治疗方案，将治疗效果最大化。
hiv感染实验室检测
特异性好、快速、简捷。
定量NASBA技术：
是由一对引物引导的，连续均一的体外特异核苷酸序列的 等温扩增的酶促反应过程。 优点：操作十分简单，只需将制备好的模板直接加到反应体
系中，恒温41℃培育1.5～2小时，即可将模板扩增109倍。 NASBA 反 应 体 系 包 括 AMV 反 转 录 酶 、 RNA 酶 H 、
through, FT)
免疫层析 （Immunochromatograpy, lateral
flow, IF)
快速检测试剂的应用
目前在国内批准注册的国外进口试剂有：Determine HIV1/2（ABBOTT，雅培）、Instant CHEK-HIV1+2 （EY）、麦美华、中新科炬
一般10-30min内出结果。 2003年国内已有产品被SFDA批准。有金豪、万泰、
②仅需少量标本或标本中仅含少量病毒也能检测；
③在病毒感染的急性期抗体尚未出现之前，病毒感染的诊断主 要依靠NAT，适用于早期诊断；
④可对病毒进行定量检测，有助于疗效监测； ⑤可对病毒基因进行基因分型，比血清分型更有价值； ⑥通过对病毒耐药基因的检测，可预测或发现病毒的耐药性；
⑦可用于先天性或围产期获得性病毒感染的诊断；
预约检测后咨询时间。
危险因素评估
1.性行为：具体的性活动方式、性伴数量、性活动频度、 使用安全套的情况和性伴感染的可能性。特别要注意某 些高危行为，如多性伴关系，无保护性交或肛交，性病 史。 2.吸毒行为：吸毒方式、注射器具消毒、共用注射器等。
3.其他接触血液的行为： 输血或血制品史，有无采供血（浆）史、器官移植史或 者被血液污染器具刺伤、纹身、穿耳等等；
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三、凝胶电泳技术 （一）基本原理 （二）常用方法
1．琼脂糖凝胶电泳 2．聚丙烯酰胺凝胶电泳
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第6节 病毒感染的快速诊断
一、形态学检查 二、病毒抗原的检测
（一）免疫荧光技术 （二）固相放射免疫测定 （三）酶免疫技术 （四）其他技术 三、早期抗体检测 四、病毒核酸检测
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7Hale Waihona Puke 二、病毒大小的测定（一）电子显微镜直接测量 （二）超过滤法 （三）超速离心法
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第三节 病毒的分离与鉴定
一、病毒分离和鉴定的一般程序
新生小鼠 观察发病
EM CPE
临床标本的收集 标本处理后接种
组织
红 空包
细 斑涵
胞 试体
吸 附
验
鸡胚
收获尿囊液、 羊膜腔液
红细胞凝集试验
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二、病毒的分离与鉴定
（一）病毒分离培养
（二）标本种类的选择
1.呼吸道感染 2.肠道感染 3.中枢神经系统感染 4.其他感染
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（三）常见标本的采集方法和用途
1．血液 2．粪便标本 3．尿道拭子及尿液标本 4．鼻拭子和咽拭子 5．喉拭子 6．含漱液标本
7．脑脊液标本 8．眼拭子标本 9．宫颈或阴道拭子 10．疱疹液标本 11．各种活检和尸检标本
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（四）标本的处理
1．血液标本 2．粪便标本 3．鼻、咽拭子标本 4．尿标本 5．疱疹液 6．脑脊液 7．组织标本
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二、标本的运送和保存
病毒的抵抗力通常较弱，在室温下很快灭活，标本采集后应 立即送到病毒实验室，如实验室距离较远或一时无法立即传送时， 应将标本放入装有冰块的冰壶内尽快送检。
大多数病毒对甘油有抵抗力，送检的组织、粪便标本等可置 于含抗生素的50%甘油缓冲盐水中，低温下保存送检。
2．50%感染量或50%组织感染量（ID50或TCID50）测定
（三）新分离病毒的鉴定
1．病毒核酸类型的测定 2．理化性状的检测：大小及结构、衣壳对称类型、有无包膜等 3．血清学鉴定
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第四节 病毒的血清学检测
（一）原理 （二）用途
一、中和试验
二、补体结合试验 （一）原理 （二）用途
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三、血凝及血凝抑制试验 （一）原理 （二）用途
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二、聚合酶链反应 （polymerase chain reaction, PCR）
（一）基本原理 （二）主要步骤
1.模板的制备 2.反应体系的组成：缓冲液、dNTPs、引物、TaqDNA聚合酶、模板 3．扩增： 变性→复性 →延伸 4．产物分析
（三）常用技术
巢式（nested）和半巢式（hemi-nested）PCR、原位PCR（site PCR）、逆转录PCR（revere transcriptive PCR, RT-PCR） 、多重PCR （multiple PCR）、RNA捕获PCR(RNA captured PCR)、免疫PCR （immune PCR）、定量PCR（ration PCR）
四、凝胶免疫扩散试验 （一）原理 （二）用途
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第五节 病毒的分子生物学检测
一、分子杂交技术 （一）基本原理 （二）主要步骤
样品处理、探针的制备 、预杂交 、杂交 、漂洗、检测
（三）常用的杂交方法
1．斑点杂交(spot b1ot hybridization) 2．固相杂交技术 3．原位分子杂交（in site hybridization） 4．Southern印迹和 Northern印迹法 5．分支DNA（branched DNA, bDNA）技术
1．动物接种
2．鸡胚培养
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3．组织培养
（1）原代和次代细胞培养 （2）二倍体细胞培养 （3）传代细胞培养 （4）病毒在培养细胞中增殖的指标
1）细胞病变 2）红细胞吸附（hemadsorption） 3）干扰现象 4）细胞代谢的改变
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（二）病毒的数量与感染性测定
1．蚀斑（plaque）测定 蚀斑形成单位（plaque forming unit, PFU）
最好在标本采取后1~2h内送到实验室，立即进行检查或分离 培养。暂时不能检查或分离培养时，应将标本放入冻存液并加入 甘油或二甲基亚砜（DMSO）以防止反复冻溶使病毒灭活，存放 在-70℃低温冰箱内保存。
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第二节 病毒形态学检查
一、形态学检查 （一）光学显微镜 （二）电子显微镜检查法
1、电镜直接检查法 2、免疫电镜检查法 （三）X线晶体衍射法
病毒感染的实验室诊断技术
内容
第一节 标本的采集、处理与运送 第二节 病毒形态学检查 第三节 病毒的分离与鉴定 第四节 病毒的血清学检测 第五节 病毒的分子生物学检测 第六节 病毒感染的快速诊断
THE EN2 D
第一节 标本的采集、处理与运送
一、标本的采集、处理
（一）采集样本的时间
在发病初期（急性期）采取较易检出病毒，越迟阳性率越低。