植物病害检疫检验技术真菌汇总
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常规植物病理学方法
保湿萌芽检验的方法：
1、保湿培养检验 2、沙内萌芽检验 3、土内萌芽检验 4、试管幼苗症状测定
1．保湿培养检验 此法一般又分为：吸水纸法、冰冻吸水法和琼脂平皿法等。
(1) 吸水纸法 广泛用于各种类型的种子，包括禾谷类、豆类、麻类、
烟草、各种蔬菜、观赏植物和树木种子等种传真菌病害的检 验。
d．操作不够严格，会造成人为误差，以及制样中也会出现偏差。
（四）比重检验法
比重检验法一般用于检验种子、粮谷、豆类中的菌瘿、 菌核和病秕籽粒等。
原理：由于菌瘿、菌核、病秕粒，都要比健康籽粒轻。若 将其浸入一定浓度的食盐水（糖、泥土等）或其他溶液中 时，就会浮于液面。捞取浮物，结合解剖镜进行检验，即 可鉴定其种类。
N=n1×n2×n3/m 式中： N－－每克种子的孢子负荷量 n1－－每视野平均孢子数 n2－－盖玻片面积上的视野数 n3－－1ml水的滴数 m－－供试样品的重量（g）
如果镜检洗涤液时，没有检查到病菌孢子，则对同一 样品要重复几次取样洗涤，对每一洗涤液至少要镜检5张 玻片。当一个样品两次取样，洗涤检验的结果相差很大时， 则需要重复一次。
解剖检验主要采用徒手切片或切片机切片，经过染色， 制成玻片标本后，放在显微镜下观察鉴定。对于某些病害 或种子苗木及其产品，有时采用粗放的解剖方法也可进行 检查。
（七）保湿萌芽检验
原理：种子携带的真菌，无论外表黏附的还是潜伏种子内的， 在种子萌发阶段即可开始侵染，甚至有些在种子还未萌发时 就可长出病菌。 主要仪器及试剂：吸水纸、沙土、冰箱、培养箱等。
吸水纸法的特点：
优点:设备简单，应用范围广，操作方便；花费少，快 速准确，易于掌握；受检病症立体感强，容易鉴定和 便于制作标本等。
将送验样品分出一半试样，放在白纸或白色塘瓷盘中， 检出线虫瘿、麦角菌、黑粉菌球、菌核及病粒，称其重量， 计算病害感染率。
病害感染率 (%)=
病（粒）原体重量(g) 试样重量(g)
×100%
3、注意
➢ 无病征的种子不一定是无病的种子。
➢ 不同的病害可以表现类似的症状， ➢ 同一病害也可产生不同的症状。 ➢ 在确定某种病害时，须与其他方法配合使用。
腥黑穗病
小麦黑胚病粒
检查要求：
在检查时应先进行外表和周围的检查，然后，由表及里仔 细观察病害症状、菌瘿、菌核等病症。
对于苗木、接穗、插条等，应注意茎、叶、芽、根各部位， 并需检查粘着和夹带的土壤。
对块茎、块根以及鳞茎，应特别注意芽眼、凹陷处、伤口 和附着的土壤。
主要工具：放大镜或解剖镜。
2、检验方法：
第四章 植物病害检疫检验技术
第一节 植物检疫性真菌常见检疫检验技术
直接检验 比重检验 染色检验 洗涤检验 保湿萌芽检验 分离培养检验
（一）直接检验-----肉眼检验
1、适用范围 ➢ 混杂在种子间的较大病原体（线虫瘿、菌核）
➢ 污染大量病菌孢子的种子（小麦腥黑穗病） ➢ 种子带明显病症的病粒（小麦黑胚病）
吸水纸法的标准操作：
a 用三层无菌吸水纸，吸足无菌水后，滴掉多余的水，放人经消毒的培 养皿内，将种子排列在吸水纸上。
b 各粒种子间要保持一定距离，一般不得少于1-1.5cm，再将培养皿置于 适当温湿度的恒温箱培养。
c 在培养期间，每天用12h光照和黑暗交替处理，保持一定周期。 d 作物种子和病菌一般经2-10d培养，种子表面就会长出待检病菌，最后 进行镜检。
病原体含量(%)=
病原体重量(g) 试样重量(g)
×100
过筛检验主要用于检验粮谷、种子、油料、干果和生药材。
（三）洗涤检验 1、适用范围：种子表面带病而肉眼看不见的种子病害。 （附着在种子表面的病菌孢子）
小麦矮腥黑穗病菌
洗涤检验法原理：主要用于检查附着在种子表面的各种真 菌孢子。种子表面常附着真菌孢子，将一定量的样品放入 容器内，加一定量的无菌水，充分振荡，可使病菌孢子洗 涤下来，而后离心后，可沉淀，镜检沉淀物可确定其种类 和数量。
麦类赤霉病的检验：将病粒放在0.5-1%对硝基苯胺酒精溶液中，经2-3小时，受侵 染部分或有菌丝分布的部分呈现暗红色至咖啡色，而未受侵染部分为黄色，50℃ 温度下颜色更明显。
wenku.baidu.com （六）解剖检查法
有许多病害或一些病害初发生阶段，在种子、苗木及其 他植物产品表面没有明显的症状，诊断比较困难
有时为要了解病原物潜伏的场所，常常需要用解剖检验 进行鉴定，如散黑穗病菌以菌丝体在胚中越冬,有的果树 病害以菌丝体在花芽或鳞片中越冬。
（五）染色检验法
原理：某些植物或植物器官被病原感染后，或某些病原物 本身，常可用特殊的化学药品处理，使其染上特有的颜色， 帮助检出和区分病虫种类。这种方法即为染色检验法。
例如：马铃薯癌肿病（薯块上癌瘤不明显时，可做徒手切片，加1滴1％的“藏花 红”染色液，健康组织细胞壁呈亮红色，感病组织细胞壁呈暗红色。
主要仪器和试剂：振荡器、离心机、显微镜、0.1％吐温 溶液等
2、检验方法： ➢ 样品制备：取样(5g)2份于100ml三角瓶内，加蒸馏水10ml
（加0.1％吐温溶液），振荡5～10min， ➢ 显微计数：悬浮液2000～3000r/min离心5～15min，吸去上 清液，留1ml沉淀部分，滴于5个载玻片，加盖玻片镜检，每 片检查10个视野，并计算每视野平均孢子数
（二）过筛检验 1、适用范围 ➢ 检查混杂在种子内较大的病原体如菟丝子、菌核、线虫瘿
和杂草种子等。 ➢ 利用病原体与种子形状、大小的不同，通过一定的筛孔将
病原体筛出来，然后进行分类称重。
大豆菟丝子为害
2、检验方法 ➢ 将送验样品分出一半作为试样，用规定孔径的筛子过筛。
➢ 各层样品倒入白瓷盘内检查，最下层的杂质倒入黑玻璃盘 中用肉眼或放大镜检查。
检验结果有四个影响因素：
a．种子或其他粮谷类产品表面所粘附的病菌孢子，不一定能完全洗 涤下来。
b．在离心管内，悬浮液表面常形成一层极难沉降的孢子薄膜，而管壁 上也可能粘附着孢子，使检验结果很难代表实际情况，因而影响计算的准 确性； c．将悬浮液滴于玻片时，由于孢子迅速沉淀，造成一些视野间孢子分布 极不均匀，这也影响计数的准确性，都可能增加误差程度；
保湿萌芽检验的方法：
1、保湿培养检验 2、沙内萌芽检验 3、土内萌芽检验 4、试管幼苗症状测定
1．保湿培养检验 此法一般又分为：吸水纸法、冰冻吸水法和琼脂平皿法等。
(1) 吸水纸法 广泛用于各种类型的种子，包括禾谷类、豆类、麻类、
烟草、各种蔬菜、观赏植物和树木种子等种传真菌病害的检 验。
d．操作不够严格，会造成人为误差，以及制样中也会出现偏差。
（四）比重检验法
比重检验法一般用于检验种子、粮谷、豆类中的菌瘿、 菌核和病秕籽粒等。
原理：由于菌瘿、菌核、病秕粒，都要比健康籽粒轻。若 将其浸入一定浓度的食盐水（糖、泥土等）或其他溶液中 时，就会浮于液面。捞取浮物，结合解剖镜进行检验，即 可鉴定其种类。
N=n1×n2×n3/m 式中： N－－每克种子的孢子负荷量 n1－－每视野平均孢子数 n2－－盖玻片面积上的视野数 n3－－1ml水的滴数 m－－供试样品的重量（g）
如果镜检洗涤液时，没有检查到病菌孢子，则对同一 样品要重复几次取样洗涤，对每一洗涤液至少要镜检5张 玻片。当一个样品两次取样，洗涤检验的结果相差很大时， 则需要重复一次。
解剖检验主要采用徒手切片或切片机切片，经过染色， 制成玻片标本后，放在显微镜下观察鉴定。对于某些病害 或种子苗木及其产品，有时采用粗放的解剖方法也可进行 检查。
（七）保湿萌芽检验
原理：种子携带的真菌，无论外表黏附的还是潜伏种子内的， 在种子萌发阶段即可开始侵染，甚至有些在种子还未萌发时 就可长出病菌。 主要仪器及试剂：吸水纸、沙土、冰箱、培养箱等。
吸水纸法的特点：
优点:设备简单，应用范围广，操作方便；花费少，快 速准确，易于掌握；受检病症立体感强，容易鉴定和 便于制作标本等。
将送验样品分出一半试样，放在白纸或白色塘瓷盘中， 检出线虫瘿、麦角菌、黑粉菌球、菌核及病粒，称其重量， 计算病害感染率。
病害感染率 (%)=
病（粒）原体重量(g) 试样重量(g)
×100%
3、注意
➢ 无病征的种子不一定是无病的种子。
➢ 不同的病害可以表现类似的症状， ➢ 同一病害也可产生不同的症状。 ➢ 在确定某种病害时，须与其他方法配合使用。
腥黑穗病
小麦黑胚病粒
检查要求：
在检查时应先进行外表和周围的检查，然后，由表及里仔 细观察病害症状、菌瘿、菌核等病症。
对于苗木、接穗、插条等，应注意茎、叶、芽、根各部位， 并需检查粘着和夹带的土壤。
对块茎、块根以及鳞茎，应特别注意芽眼、凹陷处、伤口 和附着的土壤。
主要工具：放大镜或解剖镜。
2、检验方法：
第四章 植物病害检疫检验技术
第一节 植物检疫性真菌常见检疫检验技术
直接检验 比重检验 染色检验 洗涤检验 保湿萌芽检验 分离培养检验
（一）直接检验-----肉眼检验
1、适用范围 ➢ 混杂在种子间的较大病原体（线虫瘿、菌核）
➢ 污染大量病菌孢子的种子（小麦腥黑穗病） ➢ 种子带明显病症的病粒（小麦黑胚病）
吸水纸法的标准操作：
a 用三层无菌吸水纸，吸足无菌水后，滴掉多余的水，放人经消毒的培 养皿内，将种子排列在吸水纸上。
b 各粒种子间要保持一定距离，一般不得少于1-1.5cm，再将培养皿置于 适当温湿度的恒温箱培养。
c 在培养期间，每天用12h光照和黑暗交替处理，保持一定周期。 d 作物种子和病菌一般经2-10d培养，种子表面就会长出待检病菌，最后 进行镜检。
病原体含量(%)=
病原体重量(g) 试样重量(g)
×100
过筛检验主要用于检验粮谷、种子、油料、干果和生药材。
（三）洗涤检验 1、适用范围：种子表面带病而肉眼看不见的种子病害。 （附着在种子表面的病菌孢子）
小麦矮腥黑穗病菌
洗涤检验法原理：主要用于检查附着在种子表面的各种真 菌孢子。种子表面常附着真菌孢子，将一定量的样品放入 容器内，加一定量的无菌水，充分振荡，可使病菌孢子洗 涤下来，而后离心后，可沉淀，镜检沉淀物可确定其种类 和数量。
麦类赤霉病的检验：将病粒放在0.5-1%对硝基苯胺酒精溶液中，经2-3小时，受侵 染部分或有菌丝分布的部分呈现暗红色至咖啡色，而未受侵染部分为黄色，50℃ 温度下颜色更明显。
wenku.baidu.com （六）解剖检查法
有许多病害或一些病害初发生阶段，在种子、苗木及其 他植物产品表面没有明显的症状，诊断比较困难
有时为要了解病原物潜伏的场所，常常需要用解剖检验 进行鉴定，如散黑穗病菌以菌丝体在胚中越冬,有的果树 病害以菌丝体在花芽或鳞片中越冬。
（五）染色检验法
原理：某些植物或植物器官被病原感染后，或某些病原物 本身，常可用特殊的化学药品处理，使其染上特有的颜色， 帮助检出和区分病虫种类。这种方法即为染色检验法。
例如：马铃薯癌肿病（薯块上癌瘤不明显时，可做徒手切片，加1滴1％的“藏花 红”染色液，健康组织细胞壁呈亮红色，感病组织细胞壁呈暗红色。
主要仪器和试剂：振荡器、离心机、显微镜、0.1％吐温 溶液等
2、检验方法： ➢ 样品制备：取样(5g)2份于100ml三角瓶内，加蒸馏水10ml
（加0.1％吐温溶液），振荡5～10min， ➢ 显微计数：悬浮液2000～3000r/min离心5～15min，吸去上 清液，留1ml沉淀部分，滴于5个载玻片，加盖玻片镜检，每 片检查10个视野，并计算每视野平均孢子数
（二）过筛检验 1、适用范围 ➢ 检查混杂在种子内较大的病原体如菟丝子、菌核、线虫瘿
和杂草种子等。 ➢ 利用病原体与种子形状、大小的不同，通过一定的筛孔将
病原体筛出来，然后进行分类称重。
大豆菟丝子为害
2、检验方法 ➢ 将送验样品分出一半作为试样，用规定孔径的筛子过筛。
➢ 各层样品倒入白瓷盘内检查，最下层的杂质倒入黑玻璃盘 中用肉眼或放大镜检查。
检验结果有四个影响因素：
a．种子或其他粮谷类产品表面所粘附的病菌孢子，不一定能完全洗 涤下来。
b．在离心管内，悬浮液表面常形成一层极难沉降的孢子薄膜，而管壁 上也可能粘附着孢子，使检验结果很难代表实际情况，因而影响计算的准 确性； c．将悬浮液滴于玻片时，由于孢子迅速沉淀，造成一些视野间孢子分布 极不均匀，这也影响计数的准确性，都可能增加误差程度；