肝糖原提取、鉴定与定量实验流程——生物化学实验
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肝糖原提取、鉴定实验流程吸取1ml量溶液时使用可调微量移液器,吸取1ml以上量溶液时使用刻度吸量管。
鸡肝约1.5 g,剪碎
+5%CCl3COOH 1 ml
研磨至乳状
+5%CCl3COOH 3 ml
研磨成肝匀浆
3分钟(4000 r / min)
上清(取3 ml)
+3ml 95%乙醇,混匀,静置10分钟
分钟(4000 r / min)
+蒸镏水1 ml
沸水浴2
糖原溶液1ml
+浓HCl 5滴
加碘试剂2沸水浴
糖原溶液2滴滴
呈色对比糖原水解液
+班氏试剂4滴
混匀
沸水浴2分钟,观察变化
肝糖原定量实验流程
鸡肝0.15 g
+30%KOH 1.5ml (用吸量管)
沸水浴15分钟
冷却,全部转入100 ml容量瓶中
加水至标线,仔细混匀,此为糖原提取液
取3支试管,按下表操作。
试剂(ml)空白管标准管样品管
蒸馏水 1.0 ——标准葡萄糖溶液— 1.0 —糖原提取液—— 1.0
0.2%蒽酮溶液
2.5 2.5 2.5
(用吸量管)
混匀,沸水浴10分钟,冷却c。在分光光度计620 nm波长处,用空白管溶液调零,测定各管溶液的吸光度(A)。
饱食鸡肝的肝糖原含量为:2~3g/100g肝组织