肝糖原提取、鉴定与定量实验流程——生物化学实验

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肝糖原提取、鉴定实验流程吸取1ml量溶液时使用可调微量移液器,吸取1ml以上量溶液时使用刻度吸量管。

鸡肝约1.5 g,剪碎

+5%CCl3COOH 1 ml

研磨至乳状

+5%CCl3COOH 3 ml

研磨成肝匀浆

3分钟(4000 r / min)

上清(取3 ml)

+3ml 95%乙醇,混匀,静置10分钟

分钟(4000 r / min)

+蒸镏水1 ml

沸水浴2

糖原溶液1ml

+浓HCl 5滴

加碘试剂2沸水浴

糖原溶液2滴滴

呈色对比糖原水解液

+班氏试剂4滴

混匀

沸水浴2分钟,观察变化

肝糖原定量实验流程

鸡肝0.15 g

+30%KOH 1.5ml (用吸量管)

沸水浴15分钟

冷却,全部转入100 ml容量瓶中

加水至标线,仔细混匀,此为糖原提取液

取3支试管,按下表操作。

试剂(ml)空白管标准管样品管

蒸馏水 1.0 ——标准葡萄糖溶液— 1.0 —糖原提取液—— 1.0

0.2%蒽酮溶液

2.5 2.5 2.5

(用吸量管)

混匀,沸水浴10分钟,冷却c。在分光光度计620 nm波长处,用空白管溶液调零,测定各管溶液的吸光度(A)。

饱食鸡肝的肝糖原含量为:2~3g/100g肝组织

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