实验一 实验室环境和人体表面的微生物检查

实验1 实验室环境和人体表面的微生物检查

一、实验目的

1、证实实验室环境和人体表面存在微生物。

2、观察不同类群微生物的菌落形态特征。

3、比较不同场所与不同条件下细菌的数量和类型。

4、体会无菌操作的重要性。

二、基本原理

通过培养的方法使肉眼看不见的单个菌体在固体培养基上，经过生长繁殖形成几百万个聚集在一起的肉眼可见的菌落。平板培养基含有细菌生长所需要的营养成分，当取自不同来源的样品接种于培养基上，在37℃温度下培养，1—2天内每一菌体即能通过很多次细胞分裂而进行繁殖，形成一个可见的细胞群体的集落，称为菌落。每一种细菌所形成的菌落都有它自己的特点。因此，可通过平板培养来检查环境中细菌的数量和类型。

三、实验器材

1、培养基

牛肉膏蛋白胨培养基

2、溶液和试剂

无菌水

3、仪器和其他用品

平板，试管，灭菌棉签（装在试管内），试管架，漏斗，止水夹，煤气灯或酒精灯，记号笔，接种环，标签纸，废液缸等。

四、实验操作

1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备：

（1）称量：准确称取牛肉膏1.8克、蛋白胨6.0克、Nacl3.0克放入烧杯中。

（2）熔化：在上述烧杯中加入少于所需的水量（所需水量为600ml），用玻璃棒搅匀，补充水到所需的总体积600ml。

（3）调pH：用1mol/L NaOH和1mol/L HCl进行调节，直至溶液pH达到7.0~7.2。

（4）分装：将其中300ml溶液装入500ml三角瓶中，向三角瓶中加入6.0克琼脂，向烧杯剩余液体中加入6.0克琼脂，在石棉网上加热烧杯，使琼脂溶解，将烧杯中溶液分装到10支试管中，每支试管中加入体积为试管总体积的1/5左右。

（5）加塞：在三角瓶口上塞上棉塞，防止外界微生物进入造成污染。

（6）包扎：加塞后，在棉塞外包一层牛皮纸，将全部试管用麻绳捆好（还有一支装有无菌水的试管），同样的方法把三角瓶包好，扎好。用记号笔注明培养及名称、组别、配制日期。（7）灭菌：将上述培养基以0.1MPa，121℃，90min高压蒸汽灭菌。

（8）搁置斜面：将灭菌的试管培养基冷却至50℃左右，将试管口端搁在玻璃棒或其他合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管的总长的一般为宜。

2、倒平板：

点燃酒精灯，右手握住三角瓶底部，用左手小指将棉塞夹住，拔出，随之将瓶口边缘在火焰上过一下，杀死粘在瓶口外的杂菌。左手拿起一套平皿，用无名指和小指托住平皿底部，用中指和大拇指夹住皿盖并开启一缝，恰好能让三角瓶伸入，随后倒出培养基。倒入15~20ml 培养基，铺满整个皿底。盖上皿盖，置水平位置待凝。重复上述操作，共倒平皿18个。3、微生物采集：

（1）空气

将6个平板在实验室环境中移去皿盖，使琼脂培养基表面暴露在空气中。5min后，将其中三个盖上皿盖，分别贴上标签，注明日期、组别、样品来源、暴露时间和编号，10min后，将剩余三个盖上皿盖，分别贴上标签，注明日期、组别、样品来源、暴露时间和编号。（2）桌面

用无菌水湿润棉签，用棉签在实验台面擦拭约2cm2的范围，在火焰旁用左手拇指和中指将平皿开启成一缝，将棉签伸入，在琼脂表面接种，之后立即闭合皿盖。共做三套相同平皿，分别贴上标签，注明日期、组别、样品来源和编号。

（3）洗手前

用无菌水湿润棉签，用棉签在手表面擦拭，在火焰旁用左手拇指和中指将平皿开启成一缝，将棉签伸入，在琼脂表面接种，之后立即闭合皿盖。共做三套相同平皿，分别贴上标签，注明日期、组别、样品来源和编号。

（4）洗手后

用肥皂和刷子用力刷手，在水流中冲洗干净，干燥后用无菌水湿润棉签，用棉签在手表面擦拭，在火焰旁用左手拇指和中指将平皿开启成一缝，将棉签伸入，在琼脂表面接种，之后立即闭合皿盖。共做三套相同平皿，分别贴上标签，注明日期、组别、样品来源和编号。（5）硬币

用无菌水湿润棉签，用棉签擦拭硬币表面，在火焰旁用左手拇指和中指将平皿开启成一缝，将棉签伸入，在琼脂表面接种，之后立即闭合皿盖。共做三套相同平皿，分别贴上标签，注明日期、组别、样品来源和编号。

4、微生物培养：

将每一组（3个）中编号为1的平板放在28℃环境培养箱中培养，将编号为2和3的平板放在37℃的环境培养箱中培养，时间为一周。

5、菌落特征描述方法：

(a)大小：大、中、小、针尖状。可先将整个平板上的菌落粗略观察一下，再决定大、中、

小的标准，或由教师指出一个大小范围。

(b)颜色：黄色、金黄色、白色、乳白色、灰色、红色、粉红色等。

(c)干湿：干燥、湿润、粘稠。

(d)形态:圆形、不规则等。

(e)边缘：整齐、不整齐等。

(f)表面：高度扁平、隆起、凹下。

五、实验报告

1、结果

（1）菌落描述

样品①、③样品②、④样品⑤样品⑥

样品来源菌落描述菌落数记录人

①1-4-空10-3-37℃大、白、干、圆、整齐、扁平 3 李龙

②1-4-空5-2-37℃小、黄、干、圆、整齐、扁平 4 商倩倩

③1-4-空10-3-37℃中、淡黄、湿、圆、整齐、隆起 1 泮力菁

④1-4-空5-2-37℃大、乳白、湿、不规则、锯齿、扁平 1 汤艳楠

⑤1-4-手后-3-37℃小、白、湿、圆、整齐、外凸内凹 1 泮力菁

⑥1-4-手前-3-37℃小、乳白、湿、不规则、锯齿、隆起 1 吴彤（2）比较

1-4-空10-37℃1-4-空5-37℃1-4-洗手前—28℃1-4-洗手后—28℃样品来源菌落数量（总数）种类（形态不一致）1-4-空10-37℃22 6

1-4-空5-37℃15 6

1-4-洗手前—28℃12 4

1-4-洗手后—28℃9 6

（3）相似菌