生物安全实验室操作技术规范

非必需 禁用
工作台面和内壁要用消毒 剂进行擦拭 不要擦拭送风滤器的扩散 板！！！
第四节
实验室仪器设备的使用规范
仪器使用中的相关危险
皮下注射针头 离心机 意外接种 产生气溶胶或感染性物质溢出 产生气溶胶、溅出和管子破裂
超速离心机
水浴 干燥器 高速搅拌器，组织匀浆器 超声波破碎机、超声波清洁器 培养物搅拌器，混合器，搅拌器 冻干机（冷冻干燥机）
3.所有受到污染的材料、标本和培养物在废弃或清洁再利用之前， 必须先清除污染。
4. 感染性材料的包装和运输应遵循国家和∕或国际相关规定。 5. 如果窗户可以打开，则应安装防止节肢动物进入的纱窗。
（五）生物安全管理的指导原则
1. 实验室负责人负责制订和采用生物安全管理计划以及实验室 安全或/和操作手册。
实验室工作。
4. 应当制订节肢动物和啮齿动物的控制方案。 5. 应为所有实验室人员提供适宜的医学评估、监测和治疗， 并建立健康档案。实验室人员应接受与所操作生物因子或实 验室内潜在的因子相关的免疫接种或检测。
第三节
一. 操作准备
生物安全柜的使用规范
1. 每次使用前检查
2. 不打开观察窗 3. 列出工作所需物品的清单，以减少双臂进入破坏气流
5. 严禁穿着实验室防护服离开实验室工作区域。
6. 不得在实验室内穿露脚趾的鞋。 7. 禁止在实验室工作区域进食、饮水、吸烟、化妆和处理 隐形眼镜。 8. 禁止在实验室工作区域储存食品和饮料。 9. 在实验室内用过的防护服不得与日常服装放在同一柜子 内。
办公室
（三）有关操作的指导原则
1. 严禁用口吸移液管、将实验材料置于口内、或舔标签；
2. 实验室应能提供常规的实验室安全培训, 并建立制度。
3. 实验室负责人（或生物安全负责人）要将生物安全实验室的 特殊危害告知实验室人员，
-阅读生物安全或/和操作手册，并遵循标准的操作程序。
-实验室内应备有可供取阅的安全或/或操作手册。
- 所有实验室人员必须经过培训，了解所从事工作的危险、 掌握有关的管理规定和操作程序，通过考核后方可从事相关
-已知原因的实验室感染只占全部感染的18％； -不明原因的实验室感染却高达82％。
• 对不明原因的实验室感染的研究表明：
大多数可能是因病原微生物形成的感染性生物气溶胶在空 气扩散，实验室内工作人员吸入了污染的空气感染发病。
一. 实验室微生物气溶胶的种类
飞沫核气溶胶 粉尘气溶胶
分散相内含有微生物的气 溶胶称之为生物气溶胶
• 两类微生物气溶胶对实验室工作人员都具有严重的危害性， 其程度取决于微生物本身的毒力、气溶胶的浓度、气溶胶粒 子大小、以及当时实验室内的微小气候条件。 -粒径大于100m 沉降很快；（实验室感染的可能性小） -粒径小于 50m 在0.4s内就扩散开；
-粒径大于 5m 能够被呼吸道的粘膜捕获。
4. 打开风机5-10min
5. 窗式报警器、气流报警器 任何造成安全柜内气流紊乱的不良操作都会危及操作者 的安全
二. 物品摆放与污染措施 1. 尽量少放仪器和物品 2. 不要阻塞气口的空气流通 3. 废物容器/袋置安全柜内 密封 消毒
4. 安全柜内洁净物品/污染物品分开放置（消毒巾的垫置）
5. 操作尽量工作台中央，注意动作对定向气流的影响 6. 工作用纸不允许放在生物安全柜内
2. 所有的实验操作尽量减少气溶胶和微小液滴的形成；
3. 应限制使用注射针头和注射器。除了进行肠道外注用途； 4.实验室应制订并执行处理溢出物的标准操作程序。 - 出现溢出、事故以及明显或可能暴露于感染性物质时， 处理后，必须向实验室负责人报告； - 实验室应如实记录有关暴露和处理情况，保存相关记录；
离心管破裂
微生物生长，叠氮化钠和一些金属形成爆 炸复合物 爆裂、瓶子碎片和感染性物质飞出 飞沫、渗漏和容器破裂 产生气溶胶、听力受损、皮炎 产生气溶胶、喷溅和溢出 产生气溶胶、直接接触污染
一. 吸管和移液器的使用
1. 为防止感染，严禁用嘴吸液。应使用机械移液装置。
2. 所有的吸管都应该有棉塞以减少对移液器或吸球的污染。建议使用带有滤 芯的吸头。在BSL-2及以上级别实验室中，最好避免使用玻璃吸管。 3. 对于感染性材料不能用吸管吹打来达到混匀的目的，操作时吸管应放入操 作液面下的三分之二处，以防止产生气泡和气溶胶。从吸管吹出液体时也 不要太用力，吸管内的液体应自动流出，不要强制性排出预留液。 4. 污染的吸管应立即浸没在含有适宜的消毒剂的防破碎的容器里。在处理之 前，应浸泡足够长的时间。 盛装废弃吸管的容器（不锈钢盒子）应放在生物安全柜里 5. 严禁用带有注射针头的注射器吸液 6. 为防止从吸管滴落的感染性物质发生扩散，工作台表面应放一块具有吸收 性能的材料，使用后应按感染性废弃物予以处理。
7. 尽量减少操作者背后人员的走动、快速开关实验室的门
（进入时，敲门提醒正在操作的人员） 8. 禁止使用本生灯/酒精灯，紫外灯不是必需的
洁净物与污染物分开放置
生物安全柜内感染性材料溢洒的处理
• 当发生少量溢洒时，应用吸收纸巾立即处理，并立即用浸
满消毒液的毛巾或纱布对生物安全柜及其内部的所以物品 进行擦洗。工作面消毒后应更换手套，不论是摘下手套还 是更换手套都要消毒洗手。 • 若发生大量溢洒，液体会通过生物安全柜前面或后面的格 栅流到下面去，生物安全柜内所有的物品都应该进行表面 消毒并拿出生物安全柜，在确保生物安全柜的排水阀被关 闭后，可将消毒液倒在工作台面上，使液体通过格栅流到 排水盘上。所有接触溢出物品的材料都要进行消毒和 /或高 压灭菌处理。
（二）工作人员的防护要求
1.在实验室工作时，必须穿着合适的工作服或防护服。
2.在进行可能接触到血液、体液以及其他具有潜在感染性的 材料或感染性动物的操作时，应戴上合适的手套/双层手
套。手套用完后，应先消毒再摘除，随后必须洗手。
3.在处理完感染性实验材料和动物后，以及在离开实验室工 作区域前，都必须洗手。 4.为了防止眼睛或面部受到喷溅物的污染、碰撞或人工紫外 线辐射的伤害，必须戴合适的安全眼镜、面罩（面具） 或其他防护设备。
二. 离心机的使用
离心分类
微速离心 低/ 高速离心 超速离心
转头转速（rpm ）
～15 ,00 0 2,000 ～20,000 ～120 ,000
离心可能造成的伤害途径
- 离心机机械故障 - 实验器材故障，如离心管等
- 产生气溶胶；
- 操作者失误。
三. 搅拌器、振荡器和混匀器的使用
1. 使用的管子、盖子、杯子或瓶子都应该保持完好，无裂隙、 无变形。盖子、垫圈应恰好配套，保持完好。
-根据国家对于各种微生物操作的危险等级划分和防护要求
以及危险评估的结果，制定全面、细致的标准操作规程和程 序文件，对于关键的危险步骤设计出可行的防护措施并掌握
其细节；
3. 熟悉各级生物安全实验室运行的一般规则，掌握各种仪器、 设备、装备的操作步骤和要点，对于各种可能的危害应非常
熟悉；
4. 掌握各种感染性物质操作的一般准则和技术要点。
（冻干培养物-80%）
-粒径小于 5m 吸入后，可到达肺深部的肺泡处；
(搅拌器粉碎器-98%、吹吸混匀、离心、超声粉碎、摔碎菌液瓶)
二. 各种实验操作造成实验室感染的危险性
表9-2 可产生各种严重程度微生物气溶胶的实验室操作(p. 80)
产生微生物气溶胶的其它因素
• 一些在自然环境中可以繁殖的微生物，一旦进入实验室 的空调或通风系统，污染空调冷却水，可形成更广泛的 微生物气溶胶污染。 • 患有呼吸道传染病或皮毛上染有病原微生物的实验动物 也可以产生微生物气溶胶。 • 微生物气溶胶在一个实验室内产生后，还可以通过气流 转移到同一建筑物的其他地方，甚至污染整个建筑物的 空气。
第二节
生物安全实验室的运行规范
需结合国家法规、要求和我国具体情况
WHO Laboratory Biosafety Manual
Biosafety: • Laboratory Biosafety Manual To promote the use of 3rd edition safe practices in the - lab commissioning and handling of certification pathogenic - lab biosecurity concepts microorganisms in the laboratory during transportation in field investigations 1983 1993 in manufacturing 2003 -facilities translated into F, S, P, Ch, Ru in health-care - available on web, CD-Rom, hard copies facilities
实验室的生物安全规范
• • • • 实验室的运行规范 仪器设备的使用规范 针对感染性材料的操作规范 个人防护用品的使用规范 ……
第一节 • • • • • •
病原微生物实验室的生物危险 微生物气溶胶吸入 刺伤、割伤 皮肤、黏膜污染 食入 感染的实验动物咬伤 ……
• 不明原因的实验室相关感染
• Pike等对3921例实验室相关感染统计分析：
☆ 在对目标生物体有效时，可以采用漂白剂溶液或70%酒 精来消毒。在使用如漂白剂等腐蚀性消毒剂后，还必须用 无菌水再次进行擦拭。
生物安全柜污染的清除（2）
☆研究试剂溢漏或泼洒后，立即清除污染物及污染的表面
☆在更换HEPA过滤器或内部维修之前，必须对已用于感染性 材料工作的生物安全柜进行消毒 ☆在生物安全柜维护、更换过滤器、以及性能测试或重新安 置之前，必需消毒 ☆最普通的气体消毒方法：甲醛熏蒸 ☆推荐将安全柜一直维持运行状态。如果要关闭的话，则应 在关机前运行5min以净化内部的气体。
生物安全柜污染的清除（1）
☆ 在实验结束时，包括仪器在内的生物安全柜里的所有物 品应清除表面污染后，才能移出安全柜；
☆ 在每次使用前后清除生物安全柜内表面的污染，工作台 面和内壁要用消毒剂进行擦拭（杀灭任何微生物），但不 包括送风滤器的扩散板； ☆ 在每天实验结束时，应擦拭生物安全柜的工作台面、四 周以及玻璃的内外侧等部位以清除表面的污染。
Laboratory Biosafe ty Manual 1st edition
2004
一. BSL-1和BSL-2实验室
（一）实验室的进入 • 未经批准，任何人不得进入实验室工作区域。儿 童不得进入实验室工作区域。可能增加获得性感 染的危险性或感染后可能引起严重后果的人员不 允许进入实验室或动物房。 • BSL-2实验室门上应标有国际通用的生物危害警告 标志，包括通用的生物危险性标志，标明传染因 子、实验室负责人或其他人姓名、电话、以及进 入实验室的特殊要求。 • 实验室的门应保持关闭。 • 工作人员进入动物房应当经过特别批准。 • 与实验室工作无关的动物不得带入实验室。
生物安全实验室操作技术规范
实验室感染传播链和预防措施
病原体
部分泄漏
生物安全防护实验室 硬件： 实验室的设计建造 设备的配置 个人防护装备 软件： 严格的管理规程 良好的操作规程
传播
侵入的途径/感染剂量 易感宿主 潜伏期
生物安全意识至关重要
1. 所有操作人员必须经过培训，通过考核，获得上岗证书；
2. 在开始相关工作之前， -对所从事的病原微生物及相关操作进行危险评估，
5. 污染的液体在排放到生活污水管道以前必须清除污染 （采用化学或物理学方法）。根据所处理的微生物因子 的危险度评估结果准备专门的污水处理系统。 6. 只有保证在实验室内没有受到污染的文件纸张才能带 出实验室
（四）实验室工作区的管理原则
1. 实验室应保持清洁整齐，严禁摆放和实验无关的物品。 2. 每天工作结束后应清除工作台面的污染。若发生具有潜在危 害性的材料溢出应立即清除污染。
2. 在混匀、振荡过程中，器皿内的压力会增大，含有感染性材
料的气溶胶可能会从容器和盖子间的空隙逸出。推荐使用塑 料的，特别是聚四氟乙烯（ PTFE ）器皿，因为玻璃可能会破 裂。