实验室生物安全标准操作规程(12.2)

实验室生物安全标准操作规程

HYEY-PGC-2016

（第三版）

2016年1月11日发布 2016年1月20日实施

怀远县第二人民医院

目录

HYEY-PGC01-2016 实验室人员进出实验室

HYEY-PGC02-2016 实验室检测样品采集

HYEY-PGC03-2016 实验室检测样品包装和运送HYEY-PGC04-2016 实验室检测样品接收

HYEY-PGC05-2016 样品检测操作规程

HYEY-PGC06-2016 电气设备操作规程

HYEY-PGC07-2016 实验室消毒剂配制标准操作规程HYEY-PGC08-2016 无菌间使用标准操作规程HYEY-PGC09-2016 实验室废弃物处理标准操作规程HYEY-PGC10-2016 实验室消毒标准操作程序HYEY-PGC11-2016 实验室意外事故处理

1 目的

制定检验科实验室人员进出的标准操作程序，保障实验室生物安全。

2 适用范围

适用于检验科实验室人员进出程序。

3 职责

实验室工作人员执行本程序的规定。实验室负责人负责监督执行。

4 规程要求

4.1进入程序

实验室人员需将外衣挂入（避免将外衣与工作服混放），穿上工作服，按要求戴手套、口罩等防护用品方可进入实验室。

4.2 退出程序

工作结束后，实验室人员在实验室将一次性口罩、手套、鞋套等放入指定容器。先用0.5%新洁尔灭对手进行消毒，再用消毒肥皂洗手。在指定区域脱下工作服，必要时进行紫外消毒。实验室人员退出实验室后，必须将实验室入口门关好，方可离开实验室。

1 目的

为保障检测实验的顺利进行，规范采样程序，防止病原微生物在实验室采样过程中产生污染。

2 适用范围

适用于实验室内采集、处理动物样品。

3 职责

3.1 采集检测样品的工作人员在采集过程中应当防止病原扩散，并对样本的来源、采集过程和处理方法等作详细记录。

3.2 检验人员必须严格按照本操作规程操作，不可擅自做出超出本规程的操作，所有实验人员对所从事的工作负相应的责任。

4 过程要求

4.1 工作条件

4.1.1 具有采集、处理样品所需要的生物安全防护设备；

4.1.2 具有掌握相关专业知识和操作技能的工作人员；

4.1.3 具有有效的防止病原扩散的措施；

4.1.4 具有保证检测样品质量的技术方法和手段。

4.2实验材料

准备灭菌的解剖器械（剪刀、镊子、手术刀、大刀、斧头等）、灭菌试管、平皿或自封袋、载玻片、棉签、营养肉汤、30%、50%甘油盐水缓冲液、加抗生素的PBS（病毒保存液）、50％甘油磷酸盐缓冲液、酒精灯、灭菌注射器、15mL的离心管、1.5mLEP 管、记号笔、签字笔、防护服、无粉乳胶手套、防护口罩、铅笔、空白标签纸、胶布、75%酒精棉球、碘酒棉球、冰袋、冷藏容器、消毒药品、采样单等。

4.3 活畜样品的采集

4.3.1 血清样品的采集

4.3.1.1 采血方法

对采血部位的皮肤先剃（拔）毛，碘酊消毒， 75%的酒精消毒，待干燥后采血。采血方法推行生猪站立式前腔静脉、牛羊站立式颈静脉、禽类翅静脉采血，采血过程严格无菌。

4.3.1.2 采血数量

单一病种抗体监测的每头（只）采集2～3mL全血，多病种抗体检测的每头（只）采集5～10mL全血。

4.3.1.3 全血保存

采集好的全血转入盛血试管，斜面存放，室温凝固后直接放在盛有冰块的保温箱，送实验室。从全血采出到血清分出的时间不超过10h。

4.3.1.4 血清分离

凝固全血在室温2～4h后，有血清析出时，用无菌针剥离血凝块，然后放入4℃冰箱4～8h后，待大量血清析出时，吸出血清。必要时经离心机3000rpm 、30min离心，吸出血清。分离的血清，一般不加防腐剂。血清若在1～2周内即可检验，可放在4℃冰箱内保存；如果保存时间较长，应放在-20℃～-80℃冰箱内保存。运送血清时可将血清放在盛有冰块的保温箱中运送。

4.3.2 全血样品的采集

全血采集后应直接注入盛有抗凝剂的试管中，立即摇动，充分混合。也可将全血液注入盛有玻璃珠的灭菌瓶中，立即连续振荡脱纤维蛋白。

4.4 活禽样品的采集

咽喉拭子的采集：将棉签插入喉头口及上颚裂处来回刮3～5次取咽喉分泌液，泄殖腔拭子的采集：将棉签插入取泄殖腔转2～3圈并沾取少量粪便，再将咽喉拭子、泄殖腔拭子一并放入盛有0.8～1.0mL加有抗生素PBS的EP管中，加盖，编号。

4.5 病死（屠宰）畜禽样品的采集

4.5.1 解剖前检查

急性死亡的牛、羊、猪、马等动物，解剖之前应作临床检查，疑似炭疽病的应采血、镜检，排除炭疽病时，方可解剖。动物死亡后应在6h内进行剖检。解剖人员要做好自我防护工作。

4.5.2 肝、脾、肾、淋巴结、肺和牛、马心脏样品的采集

在肝、脾、肾、淋巴结、肺和牛、马心脏有病变的部位各采取2～3cm3的小方块，分别置于灭菌的试管或平皿中。其他畜禽采集整个心脏，置于自封袋中。细菌分离样品的采集可用烧红的刀片烫烙脏器表面，在烧烙部位刺一孔，用灭菌后的铂金耳伸入孔内，取少量组织或液体，作涂片镜检或划线接种于适宜的培养基上。

4.5.3 脑、脊髓样品的采集

取脑、脊髓2～3cm3浸入50%甘油盐水中或将整个头部（猪、牛、马除外）割下，用消毒纱布包裹，置于不漏水的容器中。

4.5.4 肠、肠内容物及粪便样品的采集

肠样品的采集：选择病变最严重的部分，将其中的内容物弃去，用灭菌的生理盐水轻轻冲洗后，置于试管中。肠内容物样品的采集：烧烙肠壁表面，用吸管扎穿肠壁，从肠腔内吸取肠内容物，放入盛有30%甘油盐水中或者直接将带有粪便的肠管两端结扎，从两端剪断。粪便样品的采集：用棉签插到直肠黏膜表面采集粪便，然后将拭子放入盛有30%甘油盐水中。

4.5.5液体病料样品的采集

采集胆汁、脓、粘液、关节液、水泡液等样品时，用药物或烫烙法消毒采样部位，用灭菌吸管（毛细吸管、注射器）经消毒部位插入，吸取内部液体，然后将病料注入灭菌试管中，加盖。也可用接种环经消毒部位插入，提取病料直接接种在培养基上。

4.5.6 胎儿样品的采集

取流产后的整个胎儿，装入自封袋或不透水塑料薄膜中。

4.5.7 皮肤样品的采集

用清水清洗病变皮肤后，取病变皮肤3～5g放入灭菌小瓶中，加适量50％甘油磷