黄芩苷提取和测定方法研究

１．１
黄芩，为唇形科植物黄芩（ＳＣｕｔｅｌｌａｒｉａｂａｉｃａｌｅｎｓｉｓＧｅｏｒｇｉ） 的干燥根，又名子芩、条芩、独尾芩、鼠尾芩、黄芩条等，是在 祖国医学的传统药用植物中应用最广泛、最受欢迎的一种， 其中以根人药的黄芩有滇黄芩、粘毛黄芩、甘肃黄芩、丽江黄 芩、川黄芩、大黄芩等。黄芩性寒味苦，具有清热泻火，解毒 消肿的作用，临床应用于肺炎、肾炎、肝炎、慢性支气管炎、高 血压、急性痢疾、化脓性感染等，黄芩中含有的成分主要有黄 酮类、甾醇类、氨基酸和糖类，在黄酮类中又以黄芩苷（ｂａｉｅａ－ ｌｉｎ）、黄芩苷元（ｂａｉｅａｌｅｉｎ）、汉黄芩素（ｗｏｇｏｎｉｎ）和汉黄芩苷 （ｗｏｇｏｎｏｓｉｄｅ）等为黄芩的特征化学成分，以黄芩苷的含量为 最高。现代医学研究表明，黄芩苷还具有降血压、降胆固醇 水平、抗癌、治疗慢性肝炎、降低转氨酶等作用。 要提高黄芩的疗效、扩大其应用范围，就要最大限度提 取有效成分，去除无效成分。因此黄芩苷作为黄芩的主要 成分之一，其提取就变得尤为重要。常用的提取方法，存在 着有效成分损失大、周期长、工序多、提取率不高等缺点，近 几年来很多新技术、新方法用于黄芩苷的提取，有些方法既 符合传统的中医药理论，又能达到有效成分的高收率和高 度纯化的目的。本文就黄芩苷的提取和测定方法的研究进 展做以下阐述。
学 刊
作者简介：赵世初（１９８０一），女，山东日照人，２００３级博士研究生，研究方向：医学信息与信息处理。
通讯作者：孟庆刚（１９６４一），男，辽宁海城人，教授、主任医师，博士研究生导师。
万方数据
中
医药
学刊
２００６年第２４卷
取，药物的粉碎度直接影响中药有效成分的溶出和起效速 度，超声粉碎可以提高药物的粉碎中心粒径从而提高药物 细胞的破壁率；另外，超声波的机械振动、乳化、扩散、化学 效应等也能加速欲提取成分的扩散释放并充分与溶剂混 合，利于提取。本法具有提取时间短、产率高、无需加热等 优点，因为不产生局部过热，粉碎速度快，因而药材中的生 物活性物质及各种有效成分可得以充分保留。 王佩琪等＂１用正交实验法优选超声提取黄芩苷的最 佳实验条件，得出结论：溶剂醇浓度对提取影响显著，反应 时间和颗粒数对提取影响不明显，并确定实验条件为 ８０ｍｅｓｈ黄芩粉末ｌＯｇ用６０％乙醇１００ｍＬ在２０ＫＨｚ频率的 超声下提取２次，每次３０ｒａｉｎ。郭孝武等¨１认为提取时间 以４０ｍｉｎ为宜，提取率随超声的频率增大而减少，２０ｋＨｚ为 宜，提取时应使酶失活以免黄芩苷被酶解成水不溶性的黄 芩素，且一次超声比三次超声黄芩苷的含量低４０％左 右”１，说明超声的次数和时间等因素对黄芩苷提取率有影
２．１．２
ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ＳＦＥ）
是一种近年来新兴的浸提方法。本法是利用超临界状 态下的流体为萃取剂，从液体或固体中萃取中药材中有效成
分并进行分离的方法。一般常用超临界ＣＯ，萃取法（ｓⅡＩ
ｃ０２），其原理是通过调控压力和温度，改变超临界ＣＯ：的密 度，从而改变其对物质的溶解能力，选择性地萃取中药中的 某些成分，使萃取到分离可一步完成，该法可在接近室温条 件下萃取，适用于热敏性成分的提取，无有机溶剂残留，产品 纯度高，操作简单，节能。ｓＦＥ—ｃ０２技术的局限性在于， ｃ０２因其非极性和分子质量较小的特点，对许多强极性和相 对分子质量大的物质缺乏足够的溶解性而提取率不高。 徐志宏等¨１用亚临界水提取（ｓｕｂｃｒｉｔｉｅａｌ
ｔｈｒｅｅ ｍｅｎｓｔｒｕａｔｉｏｎ ｐｅｒｉｏｄ，ｔｈｅｙ
ｇｒａｄｅｄ ａｆｔｅｒ
ｃａ－ຫໍສະໝຸດ Baidu
ｒｉｎｇ ｔｈｒｅｅ ｍｅｎｓｔｒｕａｔｉｏｎ
ａｃｃｏｒｄｉｎｇ
Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒｇｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ ａｎｄ
Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｍｅ出ｅｉｎｅ
溶出效率与溶剂的极性具有明显的相关性——极性大的溶
剂溶出效率高，极性小的溶剂溶出效率低。后来黎万寿 等【９０用醇提酸沉淀法代替传统的水提酸沉淀法，即在提取 时采用６０％乙醇作溶剂，与水作溶剂比较大大增加了溶 出率。 １．６超滤法 该法是一种分离精制的新方法，其原理是根据体系中 分子的大小和性状，通过膜的筛分作用在分子水平上进行 分离。该技术可起到分离、纯化、浓缩或脱盐作用，而在中 药制剂中的应用主要是滤除细菌、微粒、大分子杂质（胶 质、鞣质、蛋白质、多糖等）。超滤法制备中药注射液工艺 简单，具有提高中药注射剂澄明度，去除杂质和热原，保留 更多有效成分及部分脱色的特点。史国富等¨叫实验证明， 用超滤法提取黄芩苷得率高于常规法和醇提法，而三种提 取物的含量测定显示超滤法高于常规法且与醇提法相近， 另外，在外观颜色上超滤法明显浅于常规法且与醇提法相 近。 因此，运用了超滤法的提取工艺显著优于常规法和醇 洗法，超滤法既提高了收率，又可直接脱去色素，提纯产品， 同时，因其具有生产工艺简单，周期短，更适宜于大生产等 优势，使得提取成本降低，能带来显著的经济效益。 ２测定方法 黄芩苷的测定方法有很多，传统的测定方法有分光光 度法、薄层色谱扫描法、高级液相色谱法。现在已不局限于 某一种技术的单独使用，而是两种或多种技术的配合使用， 且在实践中取得了颇为满意的效果。
ｓｅｔｓ
ｉｎ Ａ
ｓｅｔ（ｃｕｒｅｄ
ＰｉＵ），２４
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ＮＥＩⅥＣｌｙｓｔｅｒ Ｌｉｑｕｉｄ）；１８
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ｉｎ
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ｂｙ
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ａｃｃｅｐｔｅｄ ｃｏｎｔｉｎｕｉｎｇ ｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ
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ｓｅｔ
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１１．１％，ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ
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ｗａｔｅｒ ｅｘｔｒａｃ一
中ｔｉｏｎ，ＳＢＷ）法对黄芩中的脂溶性成分（以黄芩苷为标志性
曼
４，３４
化合物）进行提取，并与有机溶剂回流提取法（ｏｒｇａｎｉｃｓ０１． 效果时，亚临界水提取法的提取时间及提取溶剂的消耗量 大大减少，避免了使用有机溶剂造成的污染，此法有望成为 从黄芩中提取黄芩苷的有效方法。 １．５溶剂提取法 早在１９９４年林秀英等喁。用薄层扫描法证明黄芩苷的
第２４卷第３期
２
中
ＣＨＩＮＥＳＥ ＡＲＣＨＩＶＥＳ
医药学刊
ＯＦ ＴＲＡＤＩＴＩＯＮＡＬ ＣＨＩＮＥＳＥ ＭＥＤＩＣＩＮＥ
Ｖ０１．２４ Ｎｏ．３
Ｍａｒ．２
０ ０
６年３月
００ ６
黄芩苷提取和测定方法研究
赵世初，王连心，洪志强，孟庆刚
（北京中医药大学，北京１０００２９） 摘要：黄芩苷为祖国医学中的一种传统药用植物，其主要作用成分黄芩苷已得到了国内外医疗界的广泛认 同和应用，由此黄芩苷的提取工艺和测定方法也就随之变得尤为重要，作者就目前较为主要的一些工艺方法的原 理和应用价值进行归纳和总结，以期从中青年得到某些有价值的信息，对今后发展趋势有所启发。 关键词：黄芩苷；提取工艺；测定方法 中图分类号：Ｒ２８４．２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００９—５２７６（２００６）０３一０４３３－０３ 利用了黄芩苷碱溶酸沉的化学特性，近年来人们针对此法 总结出了较为合理的工艺条件，但随着科学技术的发展，越 来越多的新技术和工艺应用于黄芩苷的提取，在粉碎、浸提 方面的有超声法、微波法、超临界流体萃取法、溶剂提取法， 在分离纯化方面的有超滤法等。
ｔｈｅ ｔｈｉｒｄ
ｓｃｈｏｌａｒｓｈｉｐ ｍｅｅｔｉｎｇ ｏｆ Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃｓ Ａｆｔｅｒ ｔｈｒｅｅ ｍｅｎｓｔｒｕａｔｉｏｎ ｐｅｆｉｏｄ。ｉｎ Ａ ｆｅｅｔｉｖｅ ｔｈｅ
ｒａｔｅ ｓｅｔ
Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｆｉｘｉｎｇ ｔｈｅ ｄｉａｇｎｏｓｉｓｅ ａｎｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｓｔａｎｄａｒｄ ｏｆ Ｅｎｄｏｍｅｔｒｉｏｓｉｓ．Ｒｅｓｕｌｔ：
ｗｉｔｈ ｓｉｎｇｌｅ ｂｌｉｎｄ ｌ＂ｅｓｅａｌ℃ｈ ｉｎ ｍａｃｈｉｎｅ ｍｅｔｈｏｄ， ｔｈｅ
提取方法 黄芩苷的提取方法最为传统的为酸沉淀法，该法主要
Ｍｅｔｈｏｄｓ：５８
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ｗｈｏ ｗｅｌ＇℃ｄｉａｇｎｏｓｉｚｅｄ Ｅｎｄｏｍｅｔｒｉｏｓｉｓ．ｗｅｒｅ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｔｈｒｅｅ ｂｙ ＮＥＩＹＩ
ｆｌｕｉｄ
分光光度法（ｓｐｅｅｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ） 其原理利用了不同中药所含成分的不饱和度有差异，
而致其紫外吸收曲线的形态、峰位、峰强度存在的差异。本 法主要又分为常规分光光度法、导数光谱法（一阶、二阶， 四阶）、多波长光谱法（双波长，三波长、多波长）、差示分光 法、正交函数光谱法。常规分光光度法主要是将待测物通 过在紫外灯下定位，然后经一定溶剂洗脱，在分光光度计上 测定吸收度来计算含量。现就目前较为常用的几种分光光 度法作以下简述。 ２．１．１导数广谱（ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓｐｅｃｔｒａ）微分光谱，属紫外吸 收光谱派生的分支之一，用于定性鉴别与定量测定，特别对 于混合物以及中药、中成药的分析，可排除杂质及复方药物 或分解产物的干扰，不经分离而直接测定。随阶数增加，分 辨率增加，灵敏度下降，通常一阶、二阶导数光谱应用较多。 有人¨刈用一阶导数光谱法测定消炎颗粒中黄芩苷的 含量，以２６２ｎｍ波长处的振幅作为定量信息，该法可不经 复杂的分离提取，同时能消除其它药物和辅料的影响。徐 氏等¨２１用二阶导数光谱法测定葛根芩连微丸中的黄芩苷 含量，以无水乙醇为溶剂，测定波长定为２７４ｎｍ，黄芩苷在 ５～１５１比ｇ／ｍＬ浓度范围内线性关系良好，其测定值与薄层 色谱扫描法、反相高级液相色谱法相近。本法快捷准确，且 元水乙醇廉价无毒。
２．１
响。但本技术对容器壁的厚度及容器放置位置要求较高，
且目前均为小规模实验研究，要大规模生产，还有待于进一 步解决有关工程设备的放大问题。 １．３微波提取法 其原理是微波是一种超高频电磁波，在微波场中，因吸 收微波能力的差异使萃取体系中的某些组分被选择性加 热，从而使得被萃取物质从体系中分离，进入到介电常数较 小、微波吸收能力相对差的萃取剂中。这样因微波具有特 殊的促进化学反应的特性，所以很大程度地促进了中药材 有效成分的浸出，且药材细粉在浸出过程中不会凝聚、焦 化。郭振库等拍。研究认为用微波提取黄芩苷，在０．１５ＭＰａ 压力下仅需３０ｓ，而且提取率比超声法高近１０％，重复性也 好于超声法。微波浸提法是一种设备简单、操作简便、适用 范围广、提取效率高、省时省料的提取中药活性成分的新方 法，值得推广应用。 １．４超临界流体萃取法（ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ
１
酸沉淀法 该法是一种较为传统的分离纯化方法，其原理为黄芩
苷溶于水，其化学结构中有葡萄糖醛酸，显弱酸性，溶于碱， 遇较强的无机酸易析出，本法即利用了其在碱性溶液中溶 解、在酸性溶液中析出的特性。其过程为水煎煮黄芩粗粉， 酸调、静置将沉淀物过滤，再碱调至溶解后，加入乙醇搅拌 过滤，最后再次酸调得黄芩苷结晶。此法已被广泛应用于 黄芩苷的提取，但本法的缺点在于耗能大、操作烦琐、成本 高等。近年来，国内学者¨、２１利用正交试验方法研究黄芩 苷的提取工艺，认为黄芩提取浓缩液在加酸沉淀过程中， ｐＨ值、加热温度、保温时间及静置时间对黄芩总苷收率的 影响极大，并证明酸沉淀反应的最佳工艺条件为ｐＨ值１．５ —２．０、加热温度７０℃～９０℃、保温时间３０—６０ｍｉｎ静置时 间１２～２４ｈ。 １．２超声法 本法主要是起到粉碎和浸提两方面的作用，其基本原 理是利用超声波的空化作用加速药物有效成分的浸出提取，
ｃｕｒｅ
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４３３
中 医 药
收稿日期：２００５一０９—２９ 基金项目：科技部基础专项资助项目（２００１ＤＥＡ２００１０），大连市科技局社会发展资助项目（２００５Ｅ１１ＳＦ２１５）