GABA受体激动剂对氧-葡萄糖剥夺诱导皮层神经元死亡的保护作用
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Ｊ ｕ ｎ ｌｏ ｔ ｅ ｔ ａ ｄｃｎ ｏ ｒ ａ ｆＭａｈ ｍａｉ ｌＭｅ ｉｉｅ ｃ
Ｖｏ． ３ １２
Ｎｏ ．３
２ １ ００
文章编号 ：０ ４４３ （０ ０ ０—２ ００ １ ０—３ ７ ２ １ ）３０７ —３
中图分 类号 ： ３ ８ ２ Ｒ ３ ．
文献标识码 ：Ａ
・基础 医学研 究 ・
Ｍｅｉ 重悬 ， ｄｕ ｍ 调整细胞 密度 为 ５ ０ ／ ， ×１ ５ｍｌ然后将 单细胞 悬 液接种至包被过 的 ４ 孔 板 ， 于 Ｃ ２培 养箱 内培养 （７２ ８ 置 Ｏ ３２、
５ Ｃ ，５ 空气 ） Ｏ２９ 。接种后 ３天 ， ２ ５ Ｍｏ／ 加 ． ￣ ｌＬ阿糖 胞苷 以
制谷氨酸在兴奋性毒性 ， 进而对神经元产生保护作用呢？
ＧＡ Ａ受体激动剂对氧一 Ｂ 葡萄糖剥夺诱导皮层 神经元死亡的保护作用△
吴翠莹 李树基 高天明
广州 ５０ １） １５５
（ 南方 医科 大学 神经生 物学教研 室
摘 要 ： 目的： 研究 Ｇ Ｂ Ａ Ａ受体激动剂对氧一 葡萄糖剥夺诱导皮层神经元死亡 的保护作用。方法 ： 培养 １ ｄ ２ 的皮层神经元更换
聚赖氨酸 、 阿糖胞 苷 、 谷氨酸 、 谷氨 酰胺 、 ｓｉ ｌｂ ｃ ｆｎ ｍｕｃ ｍｏ、ａｌ ｅ ｏ
分脑功能丧 失为主要 临床表 现的疾病 。在 中 国， 中风是威 脑
胁人们 的第 ２ 大死亡原 因， 每年有 １ ０万人 死于脑 中风 ， 活 ５ 存
均购 自 Ｓｇ 公司 ； 他试 剂为 国产分 析纯 。Ｃ ２细胞培 养 ｉｍａ 其 Ｏ
司）倒 置显微镜 （ 、 日本 Ｏ ｙ ｕ 公 司） ｌｍｐ ｓ 。 １ ２ 方法 ．
１ ２ １ 皮层神经 元 的培 养 用 多 聚赖 氨酸 （ ０ ｇ ｍ１包 板 ．． ５ｕ／ ） （８ ４ 孔板） 过夜 。将手术器械浸泡于 ７ 酒精 ３ Ｏ Ｏ分钟 ， １日 取
受到很 大的限制叫 。为了能够延长 时间窗和降低溶栓 后颅 内
・ 材 料和 方 法 １ １ 材料 ．
抑制胶质细胞增值 。之后 每隔 两天更换 培养基 ， 次更换 的 每
量 为 原
１． ２ ２．
’ 培
Ｅ ｓ （ Ｃ ． ８ ， Ｃ ． ４ ， ａ １ ２ Ｏ ． ２４ ， － Ｂ ＳＮａ １ ６ ｇ Ｋ １０ ０ ｇ Ｃ Ｃ２・ Ｈ２ ０ ０ ６ ｇ Ｍｇ ０
系统的多种生理活 动 中发挥 着举足轻 重 的作 用 ， 而脑卒 中时 释放大量谷氨酸 ， 引起钙超载 ， 产生兴奋 性毒性是造成 神经细
胞 损伤 的一个重要因素 。谷氨酸拮抗剂虽 然能够较好 的消
培养基终止消化 ， 入 Ｄ ｓ Ｉ（ ｏ ｈ ， ＯＴ１９ ２０ ２ ｕ／ 加 Ｎａｅ Ｒ ｃｅ Ｌ ０ ３ １０／ ｏ ５ ｕ）机械 吹打分 散 细胞 ， 成 单细 胞悬 液 。４ ０目筛 网过 ０ １， 制 ０
为 Ｅ ｒ＇平衡盐溶液（ ｒｅ ａａ ｃｄｓｌ Ｅ Ｓ ） ａｌｓ ｅ Ｅａｌｓ ｌｎｅ ａｔ Ｂ Ｓ 后置于 ３ ℃三气缺氧（ ： Ｏｚ０２ ９ ％： ： ） ｂ ｓ， ７ ＮｚＣ ： — ４ ５ １ 培养箱 内培养 ，ｈ后恢 复正 ４
常条件培养 ， 同时在培养液内加入 Ｇ Ｂ Ａ Ａ Ａ受体和 Ｂ受体激动剂作用 ２ ｈ 用 Ｈ０ｃｓ ３ ４ ／ Ｉ ４， ｅ ｔ ３ ２ Ｐ 的染色方法检测其死亡情况 。结果 ： ｈ３
滤 ，０ ｒｍｉ ９ ０／ ｎ室温离心 ６ ｎ 上清液弃去 ，加 Ｎｅｒｂ ｓｌ Ａ ｍｉ， ｕｏ ａａ－
除兴奋性毒性 ， 由于其药 代动力 学 问题 ， 但 易产 生幻 觉 ， 以及 对外周神经 系统 有毒 副作用 等 原 因［ 很 难在 临床 上 推广 。 ，
而Ｇ Ｂ Ａ Ａ作为一种抑制 性的神经递质 ， 其激动剂是否 可以抑
ＧＡ Ａ Ｂ Ａ受体激动剂 （ ｓｉ １和 ＧＡＢ ｍｕ ｃ ） ｍｏ Ａ Ｂ受体激动剂 （ａｌｆｎ 均分别能显著降低神经细胞死亡率 ４． 和 ３． 。 ｂ ｃ ｅ） ｏ ９９ ５ ３ 结论 ： ＧＡ—
Ｂ Ａ Ａ受体激动剂和 Ｂ受体激动剂对氧一 葡萄糖剥夺诱导的皮层神经元死亡均有显著的保护作用 。
出血的发病率 ， 使更 多的患者得到治疗 ， 脑保护剂 的研 究显得 极为迫切 。 我们知道 ， 谷氨酸是神经系统的一种兴奋性 递质 ， 在神经
龄Ｓ Ｄ大 鼠， ５ 乙醇 消毒 后 ， 离 头 皮 及 颅骨 ， ７ 剥 在冰 冻
Ｈａ ｋ 液 中取 出完整脑 组织 ， ｎｓ 钝性分 离皮层 并剔 除血 管及脑 膜， 将皮层剪成直径为 ０ ４ Ｍ 小块 ， ０ ２ （／） ． 经 ． ５ ｇ １胰蛋 白酶 ３ ℃作用 １ｍｉ ， ７ ０ ｎ后 加含 １ 胎 牛血清 的 Ｄ Ｍ／ １ Ｏ ＭＥ Ｆ ２完全
关键词 ： ＧＡＢ Ａ受体激动剂 ； Ｇ Ａ Ａ ＡＢ Ｂ受体激动剂 ； 皮层神经元 ； 氧一 葡萄糖剥夺
ｄｊ１ ． ９９ ．ｓｎ ０ ４４ ３ ． ０ ０ ０． ０ ｏ：０ ３ ６／ｊ ｉ ．１ ０ —３ ７ ２ １ ．３ ０ ５ ｓ
脑中风 （ ｔ ｋ ） Ｓｒ ｅ是一组 以百度文库部缺血或出血 型损 伤 ， ｏ 导致部
１ １ １ 实验 动 物 无 特异 病原 体 （ ｐ ｃｆ ａｈ ｇｎＦ ｅ ， ． ． Ｓ ｅｅ ｃｐ ｔｏ ｅ ｒｅ ｉ Ｓ Ｆ 级 １日龄 Ｓ ｒｇ ｅ ａ ｅ Ｐ） ｐａ ｕ－ ｗｌ Ｄ ｙ大 鼠， 雌雄 不拘 ， 由南方 医科
箱和三气培养箱（ 国 Ｆ ｒ 公 司）低速离心机（ 美 ｏｍａ ， 上海 飞鸽公
者 中也是致残率 极高 。而在 西方发达 国家 ， 中风是仅 次 于 脑 心脏疾病和癌症 ， ３大 的死 亡原 因。临 床上对 脑 中风的治 第
疗方法最常用 的是溶栓疗 法 ， 是它有 严格 的时间窗 的限制 但 （ ＜３小时）并且可 能引发颅 内出血等 严重并发 症 ， ， 因此 应用
Ｖｏ． ３ １２
Ｎｏ ．３
２ １ ００
文章编号 ：０ ４４３ （０ ０ ０—２ ００ １ ０—３ ７ ２ １ ）３０７ —３
中图分 类号 ： ３ ８ ２ Ｒ ３ ．
文献标识码 ：Ａ
・基础 医学研 究 ・
Ｍｅｉ 重悬 ， ｄｕ ｍ 调整细胞 密度 为 ５ ０ ／ ， ×１ ５ｍｌ然后将 单细胞 悬 液接种至包被过 的 ４ 孔 板 ， 于 Ｃ ２培 养箱 内培养 （７２ ８ 置 Ｏ ３２、
５ Ｃ ，５ 空气 ） Ｏ２９ 。接种后 ３天 ， ２ ５ Ｍｏ／ 加 ． ￣ ｌＬ阿糖 胞苷 以
制谷氨酸在兴奋性毒性 ， 进而对神经元产生保护作用呢？
ＧＡ Ａ受体激动剂对氧一 Ｂ 葡萄糖剥夺诱导皮层 神经元死亡的保护作用△
吴翠莹 李树基 高天明
广州 ５０ １） １５５
（ 南方 医科 大学 神经生 物学教研 室
摘 要 ： 目的： 研究 Ｇ Ｂ Ａ Ａ受体激动剂对氧一 葡萄糖剥夺诱导皮层神经元死亡 的保护作用。方法 ： 培养 １ ｄ ２ 的皮层神经元更换
聚赖氨酸 、 阿糖胞 苷 、 谷氨酸 、 谷氨 酰胺 、 ｓｉ ｌｂ ｃ ｆｎ ｍｕｃ ｍｏ、ａｌ ｅ ｏ
分脑功能丧 失为主要 临床表 现的疾病 。在 中 国， 中风是威 脑
胁人们 的第 ２ 大死亡原 因， 每年有 １ ０万人 死于脑 中风 ， 活 ５ 存
均购 自 Ｓｇ 公司 ； 他试 剂为 国产分 析纯 。Ｃ ２细胞培 养 ｉｍａ 其 Ｏ
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１ ２ １ 皮层神经 元 的培 养 用 多 聚赖 氨酸 （ ０ ｇ ｍ１包 板 ．． ５ｕ／ ） （８ ４ 孔板） 过夜 。将手术器械浸泡于 ７ 酒精 ３ Ｏ Ｏ分钟 ， １日 取
受到很 大的限制叫 。为了能够延长 时间窗和降低溶栓 后颅 内
・ 材 料和 方 法 １ １ 材料 ．
抑制胶质细胞增值 。之后 每隔 两天更换 培养基 ， 次更换 的 每
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１． ２ ２．
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系统的多种生理活 动 中发挥 着举足轻 重 的作 用 ， 而脑卒 中时 释放大量谷氨酸 ， 引起钙超载 ， 产生兴奋 性毒性是造成 神经细
胞 损伤 的一个重要因素 。谷氨酸拮抗剂虽 然能够较好 的消
培养基终止消化 ， 入 Ｄ ｓ Ｉ（ ｏ ｈ ， ＯＴ１９ ２０ ２ ｕ／ 加 Ｎａｅ Ｒ ｃｅ Ｌ ０ ３ １０／ ｏ ５ ｕ）机械 吹打分 散 细胞 ， 成 单细 胞悬 液 。４ ０目筛 网过 ０ １， 制 ０
为 Ｅ ｒ＇平衡盐溶液（ ｒｅ ａａ ｃｄｓｌ Ｅ Ｓ ） ａｌｓ ｅ Ｅａｌｓ ｌｎｅ ａｔ Ｂ Ｓ 后置于 ３ ℃三气缺氧（ ： Ｏｚ０２ ９ ％： ： ） ｂ ｓ， ７ ＮｚＣ ： — ４ ５ １ 培养箱 内培养 ，ｈ后恢 复正 ４
常条件培养 ， 同时在培养液内加入 Ｇ Ｂ Ａ Ａ Ａ受体和 Ｂ受体激动剂作用 ２ ｈ 用 Ｈ０ｃｓ ３ ４ ／ Ｉ ４， ｅ ｔ ３ ２ Ｐ 的染色方法检测其死亡情况 。结果 ： ｈ３
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除兴奋性毒性 ， 由于其药 代动力 学 问题 ， 但 易产 生幻 觉 ， 以及 对外周神经 系统 有毒 副作用 等 原 因［ 很 难在 临床 上 推广 。 ，
而Ｇ Ｂ Ａ Ａ作为一种抑制 性的神经递质 ， 其激动剂是否 可以抑
ＧＡ Ａ Ｂ Ａ受体激动剂 （ ｓｉ １和 ＧＡＢ ｍｕ ｃ ） ｍｏ Ａ Ｂ受体激动剂 （ａｌｆｎ 均分别能显著降低神经细胞死亡率 ４． 和 ３． 。 ｂ ｃ ｅ） ｏ ９９ ５ ３ 结论 ： ＧＡ—
Ｂ Ａ Ａ受体激动剂和 Ｂ受体激动剂对氧一 葡萄糖剥夺诱导的皮层神经元死亡均有显著的保护作用 。
出血的发病率 ， 使更 多的患者得到治疗 ， 脑保护剂 的研 究显得 极为迫切 。 我们知道 ， 谷氨酸是神经系统的一种兴奋性 递质 ， 在神经
龄Ｓ Ｄ大 鼠， ５ 乙醇 消毒 后 ， 离 头 皮 及 颅骨 ， ７ 剥 在冰 冻
Ｈａ ｋ 液 中取 出完整脑 组织 ， ｎｓ 钝性分 离皮层 并剔 除血 管及脑 膜， 将皮层剪成直径为 ０ ４ Ｍ 小块 ， ０ ２ （／） ． 经 ． ５ ｇ １胰蛋 白酶 ３ ℃作用 １ｍｉ ， ７ ０ ｎ后 加含 １ 胎 牛血清 的 Ｄ Ｍ／ １ Ｏ ＭＥ Ｆ ２完全
关键词 ： ＧＡＢ Ａ受体激动剂 ； Ｇ Ａ Ａ ＡＢ Ｂ受体激动剂 ； 皮层神经元 ； 氧一 葡萄糖剥夺
ｄｊ１ ． ９９ ．ｓｎ ０ ４４ ３ ． ０ ０ ０． ０ ｏ：０ ３ ６／ｊ ｉ ．１ ０ —３ ７ ２ １ ．３ ０ ５ ｓ
脑中风 （ ｔ ｋ ） Ｓｒ ｅ是一组 以百度文库部缺血或出血 型损 伤 ， ｏ 导致部
１ １ １ 实验 动 物 无 特异 病原 体 （ ｐ ｃｆ ａｈ ｇｎＦ ｅ ， ． ． Ｓ ｅｅ ｃｐ ｔｏ ｅ ｒｅ ｉ Ｓ Ｆ 级 １日龄 Ｓ ｒｇ ｅ ａ ｅ Ｐ） ｐａ ｕ－ ｗｌ Ｄ ｙ大 鼠， 雌雄 不拘 ， 由南方 医科
箱和三气培养箱（ 国 Ｆ ｒ 公 司）低速离心机（ 美 ｏｍａ ， 上海 飞鸽公
者 中也是致残率 极高 。而在 西方发达 国家 ， 中风是仅 次 于 脑 心脏疾病和癌症 ， ３大 的死 亡原 因。临 床上对 脑 中风的治 第
疗方法最常用 的是溶栓疗 法 ， 是它有 严格 的时间窗 的限制 但 （ ＜３小时）并且可 能引发颅 内出血等 严重并发 症 ， ， 因此 应用